CN107349335A - 一种载药羊膜片及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种载药羊膜片及其制备方法和用途。具体地，载药羊膜片包含经干燥的羊膜，所述羊膜的基底膜面及羊膜中负载有白及5‑30份、熟石膏10‑30份、乳香3‑25份、没药3‑25份、苍术10‑30份、人工麝香0.5‑5份、冰片1‑15份、红花2‑30份。本发明还公开了载药羊膜片的制备方法，以及其在制备用于治疗皮肤溃疡性疾病的医疗材料中的用途。本发明的载药羊膜片速释与缓释作用相结合，具有维持创面局部环境的有效药物浓度的优势。
Description
技术领域
本发明涉及医疗用载药生物羊膜敷料领域，具体涉及载药羊膜片及其制备方法，以及该载药羊膜片在制备用于治疗皮肤溃疡性疾病的医疗材料中的用途。
背景技术
人羊膜是胎盘的最内层，来源丰富、取材方便，是一种理想的生物修复材料，在产妇分娩时随胎盘排出体外，是一种医疗废弃物，研究和应用不会涉及伦理道德问题。其主要包括单层羊膜上皮细胞、厚基底膜以及无血管基质层，羊膜基底膜作为人体最厚基底膜，其成分与皮肤以及角膜的基底膜成分类似，主要是Ⅳ、Ⅶ型胶原以及层粘连蛋白等[1]。
羊膜是一种具有弹性的半透明膜，具有抗黏附能力，组织相容性好，其基质中含有大量的胶原、纤粘连蛋白和层粘连蛋白等成分，羊膜可分泌诸多生物活性物质，如表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子、血小板源性生长因子、转化生长因子等，以及含有人β防御素、α-1抗胰蛋白酶、α-2巨球蛋白、α-2抗糜蛋白酶、多种白细胞介素(interleukin，IL)、前列腺素E、乙酰胆碱、儿茶酚胺、多巴胺、神经营养因子等，其主要通过加速上皮化、促进创面新生血管化和肉芽组织形成，减轻炎症反应、抑制瘢痕形成和抗菌等作用促进创面愈合[2-4]。
美国FDA发布的《烧伤创面和慢性皮肤溃疡治疗药物临床研究指导原则》将“慢性皮肤溃疡”定义为即使通过及时给予整套治疗措施，仍不能产生结构、功能和美观上的永久闭合的创面。慢性皮肤溃疡的三个主要分类为糖尿病性溃疡、静脉瘀滞性溃疡和褥疮。慢性皮肤溃疡标准治疗措施需考虑的参数包括清楚坏死和感染组织、局部减压、建立适当的血液循环、保持创面环境湿度、控制创面感染、创面清洁、营养支持。
慢性皮肤溃疡又称难治性皮肤溃疡，是一种常见难治性疾病，具有病因复杂、病程长和反复发作特点，可引起皮肤表皮和部分真皮甚至皮下脂肪缺损。致病因素包括糖尿病、外伤、压迫和感染等[5]。
褥疮主要是因为局部组织受到长期压迫，导致持续缺血、缺氧以及营养不良的发生，引起组织溃烂坏死。临床主要采用常规清创、冲洗，去除坏死组织、外敷各种褥疮膏等方法治疗，但是治疗周期往往较长且效果不显著，因此，亟需开发一种新的治疗皮肤溃疡性疾病的药物。
发明内容
基于上述问题，在一方面，提供一种载药羊膜片，其包含经干燥的羊膜，所述经干燥的羊膜的基底膜面及所述经干燥的羊膜中负载有白及5-30份、熟石膏10-30份、乳香3-25份、没药3-25份、苍术10-30份、人工麝香0.5-5份、冰片1-15份、红花2-30份。
在具体的实施方案中，每平方厘米的载药羊膜片负载有以下药材的药材浓缩液80-120μL：白及5-30g、熟石膏10-30g、乳香3-25g、没药3-25g、苍术10-30g、人工麝香0.5-5g、冰片1-15g、红花2-30g，其中经药材比水的重量体积比8-12的水浸泡、煎煮药材后浓缩50-120倍获得药材浓缩液。
在具体的实施方案中，所述羊膜为哺乳动物的羊膜，优选所述哺乳动物是人。
在另一方面，本发明提供了一种载药羊膜片的制备方法，其包括以下步骤：
1)、足月健康产妇分娩后胎盘经钝性剥离获得羊膜，用生理盐水洗涤羊膜；
2)、采用冷冻干燥的方法或晾干的方法，去除羊膜中的水分至含水量在20％以下；
3)、将白及5-30份、熟石膏10-30份、乳香3-25份、没药3-25份、苍术10-30份、人工麝香0.5-5份、冰片1-15份、红花2-30份经水浸泡、煎煮，并浓缩后添加到步骤2)中获得的羊膜上，浸泡1-8小时；
4)、将步骤3)处理后的羊膜进行冷冻干燥，获得载药羊膜片。
在一个可选的实施方案中，在步骤1)和步骤2)之间，还包括使用消化液消化羊膜以去除上皮层细胞的步骤。所述消化液为0.1％-0.5％的胰蛋白酶，优选是0.25％胰蛋白酶。所述消化在37℃下进行20-90min，优选进行40min。优选地，每平方厘米面积的羊膜加入0.25％胰蛋白酶1-2ml，优选1.5ml。
在一个可选的实施方案中，在消化后，还包括使用细胞刮刀剥离消化的上皮层细胞，以及加入生理盐水洗涤羊膜的步骤。
在一个可选的实施方案中，在步骤1)和步骤2)之间，还包括使用甘油-水溶液浸泡羊膜的步骤，浸泡时间为10-100min，甘油-水溶液的浓度为5％-100％(体积比)，优选为10％-50％的甘油-水溶液，更优选为20％的甘油-水溶液。经过甘油浸泡处理充分保持羊膜的韧性，避免干燥后羊膜变脆、易断裂。
在一个可选的实施方案中，在步骤1)中，所述生理盐水中还添加有20-150U/ml青霉素、10-200μg/ml链霉素、0.5-2.5μg/ml两性霉素、20-200U/ml庆大霉素中的一种或多种。在一个优选的实施方案中，所述生理盐水中还添加有20-150U/ml青霉素、10-200μg/ml链霉素、0.5-2.5μg/ml两性霉素和20-200U/ml庆大霉素。在一个优选的实施方案中，所述生理盐水中还添加有100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、2.5μg/ml两性霉素和100U/ml庆大霉素。
在具体的实施方案中，所述羊膜为哺乳动物的羊膜，优选所述哺乳动物是人。
在一个优选的实施方案中，在步骤2)中所述冷冻干燥的方法为：4℃预冷1h，-5℃预冻1h，-10℃预冻1h，-30℃预冻2h，-25℃升华1h，-15℃升华2h，0℃升华1h，10℃升华2h，15℃升华2h，设置-25℃时开启真空泵开始升华干燥。经过该冷冻干燥工艺后，羊膜的含水量在10％以下。
具体地，在-25℃升华1h这一阶段开启真空泵，也就是说经过-30℃冷冻2h后，仪器自动升温到-25℃，一到-25℃，真空泵就自动开启了，-25℃升华1h为真空升华过程，仪器干燥室处于真空状态，真空度为1.1Pa。
在具体的实施方案中，在步骤3)中，将白及5-30份、熟石膏10-30份、乳香3-25份、没药3-25份、苍术10-30份、人工麝香0.5-5份、冰片1-15份、红花2-30份放置于陶瓷锅中，按照重量体积比进行加水，可选地，加入5-7倍量的水浸泡10-60min，再加入3-5倍量的水煎煮。先大火煮沸，再文火煎煮30-90min，过滤，除去药渣，水煎液倒入烧杯中，文火浓缩，直至浓缩液的体积为总加水体积的1/50至1/120。可选地，浸泡加水和最后加水煎煮，一共加入8-12倍量体积的水，优选10倍体积的水。
在具体的实施方案中，在步骤3)中，针对每平方厘米的羊膜，使用白及5-30g、熟石膏10-30g、乳香3-25g、没药3-25g、苍术10-30g、人工麝香0.5-5g、冰片1-15g、红花2-30g放置于陶瓷锅中，按照重量体积比进行加水，可选地，加入5-7倍量的水浸泡10-60min，再加入3-5倍量的水，先大火煮沸，再文火煎煮30-90min，过滤，除去药渣，水煎液倒入烧杯中，文火浓缩，直至浓缩液的体积为总加水体积的1/50至1/120，每平方厘米的羊膜负载上述药材提取浓缩液80-120μL。可选地，浸泡加水和最后加水煎煮，一共加入8-12倍量体积的水，优选10倍体积的水。
在具体的实施方案中，在步骤3)中，经水煎煮，并浓缩后的药材浸泡羊膜，所述羊膜吸收一部分药材的浓缩液，药材的浓缩液的剩余部分滞留在羊膜的基底膜面即粗糙面，经步骤4)进行的冷冻干燥，使得在羊膜的基底膜面形成一层药膜。
经过上述方法制备的载药羊膜片中还包含表皮细胞生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、人血管生成素I(Ang-I)、肝细胞生长因子(HGF)、血小板源性生长因子(PDGF)。
在一个优选的实施方案中，在步骤4)中，所述的冷冻干燥为：4℃预冷1h，-5℃预冻1h，-10℃预冻1h，-30℃预冻2h，-40℃预冻2h，-35℃升华1h，-25℃升华2h，-15℃升华2h，0℃升华2h，15℃升华2h，25℃升华1h，设置-35℃时开启真空泵开始升华干燥。经过该冷冻干燥工艺后，羊膜的含水量在1％以下。
在一个具体的实施方案中，制备载药羊膜片的方法包括以下步骤：
1)、足月健康产妇分娩后胎盘经钝性剥离获得羊膜，用无菌扁平镊子自羊膜与绒毛膜之间的空隙进行钝性剥离，去除绒毛膜层，用添加抗生素的生理盐水洗涤；
2)、将羊膜的上皮层向上，将羊膜平铺于不锈钢方盒中，倒入适量消化液进行脱上皮细胞消化处理，所述消化液为0.1％-0.5％的胰蛋白酶，每1cm×1cm面积的羊膜加入胰蛋白酶1-2ml，置于37℃，消化，20-90min；
3)、将步骤2)消化后的羊膜取出，用细胞刮刀刮去消化掉的上皮细胞，加入生理盐水洗涤，除去细胞；将脱细胞后的羊膜浸润到5-100％的甘油水溶液中，浸泡10-100min；
4)、将步骤3)中处理过的羊膜裁剪成一定规格的正方形或长方形，将羊膜上皮层向下，四边缘紧贴在塑料支架上，然后，将不锈钢盒子放在冷冻室的隔板上，进行冷冻干燥，使羊膜的含水量低于20％，其中所述冷冻干燥为：4℃预冷1h，-5℃预冻1h，-10℃预冻1h，-30℃预冻2h，-25℃升华1h，-15℃升华2h，0℃升华1h，10℃升华2h，15℃升华2h，设置-25℃时开启真空泵开始升华干燥；
5)、将白及5-30份、熟石膏10-30份、乳香3-25份、没药3-25份、苍术10-30份、人工麝香0.5-5份、冰片1-15份、红花2-30份置于陶瓷锅中，按照重量体积比进行加水，加入7倍量水浸泡10-60min，再加入3倍量的水，先大火煮沸，再文火煎煮30-90min，滤过，除去药渣，水煎液倒入烧杯中，文火浓缩，直至浓缩液的体积为总加水体积的1/50至1/120。
6)、将步骤5)中浓缩液加到步骤4)过程干燥后的羊膜表面及浸润四周帖壁的羊膜边缘，浸泡1-8h；羊膜吸收一部分药材浓缩液，不能吸收的部分滞留羊膜的基底膜面，直接进行冷冻干燥，使得在羊膜的基底膜面形成一层药膜，其中所述冷冻干燥为：4℃预冷1h，-5℃预冻1h，-10℃预冻1h，-30℃预冻2h，-40℃预冻2h，-35℃升华1h，-25℃升华2h，-15℃升华2h，0℃升华2h，15℃升华2h，25℃升华1h，设置-35℃时开启真空泵开始升华干燥。
在可选的实施方案中，其中步骤4)所用的塑料支架为耐低温、性质稳定的塑料材质。优选地，所述塑料支架为利用矿泉水瓶自制的支架。
在可选的实施方案中，其中步骤5)所用的煎药器是陶瓷锅，所用烧杯是500ml和100ml烧杯。
在具体的实施方案中，上述的载药羊膜片、或通过上述的载药羊膜片的制备方法获得的载药羊膜片的使用方法，包括将药膜面即基底膜面贴敷在皮肤溃疡性疾病患处，例如褥疮溃疡面；用无菌注射器滴加少量溶媒；使干燥的羊膜复水。其中所述溶媒为含透明质酸0.05％-0.4％、甘油0.5％-5％、水溶性月桂氮酮0.5％-2.5％、丙二醇1％-5％的水溶液。
或者，在具体的实施方案中，上述的载药羊膜片、或通过上述的载药羊膜片的制备方法获得的载药羊膜片的使用方法，包括在皮肤溃疡性疾病患处，例如褥疮溃疡面涂抹少量溶媒；将载药羊膜片的药膜面即基底膜面，也就是羊膜的粗糙面，贴在患处。如果患处有组织液渗出，预先用生理盐水清洁患处，再将载药羊膜贴在患处。其中所述溶媒为含透明质酸0.05％-0.4％、甘油0.5％-5％、水溶性月桂氮酮0.5％-2.5％、丙二醇1％-5％的水溶液。
在另一方面，本发明还涉及上述的载药羊膜片、或者通过上述的载药羊膜片的制备方法获得的载药羊膜片在制备用于治疗皮肤溃疡性疾病的医疗材料中的用途。
在具体的实施方案中，所述皮肤溃疡性疾病包括但不局限于褥疮、糖尿病足病、烧伤、烫伤、难愈合创面、难愈性手术切口，优选褥疮。
在具体的实施方案中，使用所述医疗材料时，将所述载药羊膜片表面加溶媒使载药羊膜片复水。
在具体的实施方案中，所述溶媒为含透明质酸0.05％-0.4％、甘油0.5％-5％、水溶性月桂氮酮0.5％-2.5％、丙二醇1％-5％的水溶液。
在一个具体的实施方案中，制备溶媒的方法包括以下步骤：
1)、量取1000ml注射用水，按照重量体积比，称量透明质酸(分子量80万)0.5-4g倒入注射用水中，摇动1min，置于室温条件下过夜；
2)、再量取甘油5-50ml、水溶性月桂氮酮5-25ml、丙二醇10-50ml加入到步骤1)获得的溶液中，摇匀，再进行0.2μm过滤，随机取10ml进行无菌检测；
3)、按照1ml-10ml/瓶进行分装到无菌西林瓶中，压盖，即获得溶媒。
在另一方面，本发明还提供了一种用于治疗皮肤溃疡性疾病的试剂盒，上述载药羊膜片或上述方法制备的载药羊膜片，以及溶媒。
在具体的实施方案中，所述皮肤溃疡性疾病包括但不局限于褥疮、糖尿病足病、烧伤、烫伤、难愈合创面、难愈性手术切口，优选褥疮。
在具体的实施方案中，所述溶媒为含透明质酸0.05％-0.4％、甘油0.5％-5％、水溶性月桂氮酮0.5％-2.5％、丙二醇1％-5％的水溶液。
本发明中采用白及、熟石膏、乳香、没药等中药材提取液浸润干燥羊膜的方式，使羊膜作为一种缓释载体，将药物缓慢释放，同时，未被吸收的药液经冷冻干燥后在羊膜表面形成一膜层，直接发挥作用，促进褥疮愈合，达到速释与缓释作用相结合，维持创面局部环境的有效药物浓度，既不造成药物的浪费，又能延长药物的作用时间。而且，羊膜自身包含大量生长因子，这些因子也产生了良好的组织再生营养作用，搭配使用的溶媒添加的高效透皮吸收促进剂有利于羊膜中各种生长因子和药物有效成分充分被溃疡面皮肤组织吸收，发挥药物及其因子的促修复作用，另外，溶媒中添加的保湿因子，可有效保持湿润环境，保护载药羊膜处于湿润状态，使其载入的药物、自身生长因子持续释放，总之，本发明专利的优势是将药物与羊膜有机结合，发挥药物持续缓慢释放作用，同时充分利用羊膜生长因子促进肉芽组织新生以及抵抗黏连，减轻疼痛，减少换药次数，促进创伤修复。
附图说明
图1：脱细胞后的新鲜羊膜；
图2：载药前的新鲜羊膜；
图3：载药后经冷冻干燥的羊膜；
图4：配制的溶媒。
具体实施方式
以下结合附图，通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。以下提供了本发明实施方案中所使用的具体材料及其来源。但是，应当理解的是，这些仅仅是示例性的，并不意图限制本发明，与如下试剂和仪器的类型、型号、品质、性质或功能相同或相似的材料均可以用于实施本发明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1：载药羊膜片的制备
1、试剂与耗材：参见表1。
表1
2、设备：
冷冻干燥机(LGJ-10F真空冷冻干燥机；北京松源华兴科技发展有限公司)；水分仪(VM-210便携式化工原料水分仪；泰州市维科特仪器仪表有限公司)。
3、方法：
(1)羊膜的获得
经产妇(来自吉林省四平市中心市人民医院)知情同意，产前进行乙肝病毒、丙肝病毒、人类免疫缺陷病毒、梅毒、巨细胞病毒、EB病毒、人类T淋巴细胞白血病病毒、支原体、衣原体检查，检查结果均为阴性。取健康产妇足月分娩后胎盘组织，撕取羊膜组织，用无菌扁平镊子钝性剥离绒毛膜层，弃去，将羊膜剪裁成8cm×8cm，浸入含抗生素(100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、2.5μg/ml两性霉素、100U/ml庆大霉素)的无菌生理盐水中，洗涤5次，60ml/次，完全洗去羊膜表面的血渍，再将羊膜平铺于不锈钢托盘中，上皮层向上放置，按照1cm×1cm面积加入0.25％胰蛋白酶1.5ml的比例，面积为8cm×8cm羊膜加入0.25％胰蛋白酶(胰蛋白酶稀释于PBS中)12ml，置于37℃，消化40min，倒掉消化液，用细胞刮刀轻轻刮羊膜上皮层，剥离消化掉的上皮层细胞，加入60ml生理盐水洗涤羊膜3次(参见图1)。
(2)羊膜干燥
将经过步骤(1)中的方法处理后的羊膜，浸泡在20％的甘油-水溶液10min，再将羊膜上皮层向下，四边缘紧贴在塑料支架上(塑料支架为利用矿泉水瓶自制，矿泉水瓶剪取一个支架，高度为2cm)，基底膜面向上，放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥去除大部分水分，冷冻干燥工艺为4℃预冷1h，-5℃预冻1h，-10℃预冻1h，-30℃预冻2h，-25℃升华1h，-15℃升华2h，0℃升华1h，10℃升华2h，15℃升华2h，设置-25℃时开启真空泵开始升华干燥，经过该冷冻干燥工艺后，利用水分仪进行检测，测定含水量，羊膜的含水量在10％以下(参见图2)。
(3)药材提取
白及15克、熟石膏20克、乳香18克、没药18克、苍术15克、人工麝香3克、冰片10克、红花10克药材放置于陶瓷锅中，按照药材-水的重量体积比10倍量进行加水，先加水800ml浸泡30min，再加入290ml水，先大火煮沸，在文火煎煮50min，纱布过滤，除去药渣，水煎液倒入烧杯中，文火浓缩，直至浓缩液的体积为10ml，3000r/min离心10min，收集上清液，弃去沉淀物，上清液趁热经0.22μm滤膜过滤除菌。
(4)载药羊膜片的制备
将步骤(3)中药物提取浓缩液加到步骤(2)处理后的羊膜表面，具体操作是，按照载药量与羊膜面积的比为100μl/cm2进行加药材浓缩液，针对8cm×8cm的羊膜，使用微量移液器吸取800μl的药材浓缩液，用巴氏滴管吸取药物浓缩液，均匀加到干燥后的羊膜基底膜面，放置2h，再一次吸取浓缩液滴加到羊膜表面，未被吸收的药液直接均匀地加到羊膜表面，放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥处理，工艺为4℃预冷1h，-5℃预冻1h，-10℃预冻1h，-30℃预冻2h，-40℃预冻2h，-35℃升华1h，-25℃升华2h，-15℃升华2h，0℃升华2h，15℃升华2h，25℃升华1h设置-35℃时开启真空泵开始升华干燥，经过该冷冻干燥工艺后，羊膜的含水量在1％以下，羊膜基底膜面上形成一层药液干燥膜层，即获得基底膜面及羊膜中负载有药材的载药羊膜片(参见图3)。
(5)溶媒的制备
用500ml玻璃量筒量取900ml灭菌注射用水加入到2000ml锥形瓶中，称量1g透明质酸(分子量为80万，终浓度为0.1％)加入到锥形瓶中，摇动1min，用锡纸包上瓶口，置于室温条件下放置过夜，于第二天，再量取甘油30ml(终浓度为3％)、水溶性月桂氮酮15ml(终浓度为1.5％)、丙二醇20ml(终浓度为2％)，依次加入到锥形瓶中，摇匀，再将液体倒入1000ml容量瓶中，加水定容至1000ml，摇匀，过0.2抽取10ml，进行无菌检测，经检测合格后，按照1ml/瓶分装到西林瓶中，压盖，即制备专用溶媒液。
实施例2：载药羊膜片的测试
1、无菌检测
将实施例1中制备的载药羊膜片，用无菌眼科直剪子剪取面积为2cm×2cm的载药羊膜片于无菌平皿中，加入1.5ml无菌注射用水，眼科剪子剪碎羊膜成泥装，巴氏滴管吸取组织液于5ml离心管中，800r/min，离心，5min，取20μL上清液用接种环取液涂抹在哥伦比亚血琼脂平板上，于37℃恒温箱中培养72h，观察是否有菌落出现，培养结果显示无菌落生长，无菌检测结果为阴性。
将实施例1中制备的溶媒，随机抽取10ml，用接种环取液涂抹在哥伦比亚血琼脂平板上，于37℃恒温箱中培养72h，观察是否有菌落出现，培养结果显示无菌落生长，无菌检测结果为阴性。
2、生长因子检测
将实施例1中制备的载药羊膜片，用无菌眼科直剪子剪取面积为8cm×8cm的载药羊膜片于无菌平皿中，称重，加入0.5ml生理盐水使干燥的羊膜复水，将复水后的羊膜组织剪碎，将剪碎的羊膜组织与对应体积的生理盐水(按照重量体积比为1:5的比例加入生理盐水)加入到5ml玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨，再将匀浆液于5000r/min，离心，10min，取上清液进行ELISA(各种生长因子的ELISA检测试剂盒购自Peprotech和arigo)检测，结果见下表2。
表2：载药羊膜片中生长因子的含量
| 名称 | EGF | bFGF | HGF | VEGF | PDGF | Ang-1 |
| 含量(pg/ml) | 96.01 | 120.50 | 6677.5 | 88.17 | 110.03 | 67.14 |
3、褥疮的治疗
治疗前，预先向患者及家属介绍载药羊膜片治疗褥疮的作用及方法，征求同意后，签定知情同意书。患者来自四平市中心人民医院，共5例患者。
先用碘伏消毒，再用生理盐水清洁患者褥疮面，适度清除坏死组织，修整创缘，再将载药羊膜片从塑料支架上撕下，基底膜面向下，使基底膜面即粗糙的药膜层直接接触褥疮溃疡面，将边缘多余的羊膜减去，尽量保留羊膜面略大于创缘1.5cm，使载药羊膜片与创面紧贴，向羊膜片上滴加溶媒，使膜片完全复水，膜片处于湿润状态，再用无菌透气贴膜贴敷。
治疗后3天，无新生坏死组织生成，创缘无扩大，创面血运良好，红润。
治疗后7天，创缘少量新鲜肉芽组织生成。治疗后14天，创缘大量新鲜肉芽组织生成。治疗后21天，创面基本愈合。
治疗过程中，每24h换药一次，更换载药羊膜片，进行二次处理。
生理盐水浸泡创面及边缘后，小心揭除第一次覆盖羊膜，大量生理盐水冲洗创面，自然干燥5分钟，再次覆盖载药羊膜片，如治疗期间羊膜溶解及时更换。
4、传统疗法
疗法1：皮肤生长因子外涂，每24h创面喷药一次。治疗后7天，无新生坏死组织生成，创缘无扩大，创面血运良好，红润。治疗后14天，创缘少量新鲜肉芽组织生成。治疗后30天，创缘大量新鲜肉芽组织生成。治疗后40天，创缘面部分愈合。
疗法2：臭氧盐水溶液外敷，每24h换药一次。治疗后15天，无新生坏死组织生成，创缘无扩大，创面血运良好，红润。治疗后30天，创缘少量新鲜肉芽组织生成。后续治疗创面无明显愈合征象。
与传统疗法相比，本发明载药羊膜搭配溶媒使用治疗褥疮具有明显促修复、缩短愈合时间的优势。
本发明中采用白及、熟石膏、乳香、没药等中药材提取液浸润干燥羊膜的方式，使羊膜作为一种缓释载体，将药物缓慢释放，同时，未被吸收的药液经冷冻干燥后在羊膜表面形成一膜层，直接发挥作用，促进褥疮愈合，达到速释与缓释作用相结合，维持创面局部环境的有效药物浓度，既不造成药物的浪费，又能延长药物的作用时间，而且，羊膜覆盖在褥疮面上，形成一种物理屏障，有效防止细菌、病原体在受损部位黏附及入侵，降低感染的风险，还可提供有助于伤口愈合的湿润环境，2000年，美国食品与药品管理局(FDA)颁布的伤口医疗用品(包括外用药与敷料)行业指南中指出，伤口始终处于湿润环境是标准处理过程，而羊膜敷料恰恰具有这一优良特性。另外，羊膜分泌的诸多营养因子也产生了良好的组织再生营养作用，总之，本发明专利的优势是将药物与羊膜有机结合，发挥药物持续缓慢释放作用，同时充分利用羊膜生长因子促进肉芽组织新生以及抵抗黏连、抑制瘢痕形成、减轻炎症反应、减轻疼痛、缩短创面愈合时间。
参考文献
[1]Riau A K,Beuerman R W,Lim L S,et al.Preservation,sterilization anddeepithelialization of human amniotic membrane for use in ocular surfacereconstruction[J].Biomaterials,2010,31(2):216-25.
[2]Fairbairn N G,Randolph M A,Redmond R W.The clinical applicationsof human amnion in plastic surgery[J].J Plast Reconstr Aesthet Surg,2014,67(5):662-75.
[3]Kesting M R,Wolff K D,Hohlweg-Majert B,et al.The role of allogenicamniotic membrane in burn treatment[J].J Burn Care Res,2008,29(6):907-16.
[4]Faulk W P,Matthews R,Stevens P J,et al.Human amnion as an adjunctin wound healing[J].Lancet,1980,1(8179):1156-8.
[5]Jiang Y，Huang S，Fu X，et al.Epidemiology of chronic cutaneouswounds in China[J].Wound Repair Regen，2011，19(2):181-188.
Claims (12)
1.一种载药羊膜片，其包含经干燥的羊膜，所述经干燥的羊膜的基底膜面及所述经干燥的羊膜中负载有白及5-30份、熟石膏10-30份、乳香3-25份、没药3-25份、苍术10-30份、人工麝香0.5-5份、冰片1-15份、红花2-30份。
2.根据权利要求1所述的载药羊膜片，其中，每平方厘米的载药羊膜片负载有以下药材的药材浓缩液80-120μL：白及5-30g、熟石膏10-30g、乳香3-25g、没药3-25g、苍术10-30g、人工麝香0.5-5g、冰片1-15g、红花2-30g，其中经药材比水的重量体积比为8-12的水浸泡、煎煮药材后浓缩50-120倍获得药材浓缩液。
3.根据权利要求1或2所述的载药羊膜片，其中所述羊膜为哺乳动物的羊膜，优选所述哺乳动物是人。
4.一种制备如权利要求1所述的载药羊膜片的方法，其包括以下步骤：
1)、足月健康产妇分娩后胎盘经钝性剥离获得羊膜，用生理盐水洗涤羊膜；
2)、采用冷冻干燥的方法或晾干的方法，去除羊膜中的水分至含水量在20％以下；
3)、将白及5-30份、熟石膏10-30份、乳香3-25份、没药3-25份、苍术10-30份、人工麝香0.5-5份、冰片1-15份、红花2-30份经水浸泡、煎煮，并浓缩后添加到步骤2)中获得的羊膜上，浸泡1-8小时；
4)、将步骤3)处理后的羊膜进行冷冻干燥，获得载药羊膜片。
5.根据权利要求4所述的方法，其中在步骤1)和步骤2)之间，还包括使用消化液消化羊膜以去除上皮层细胞的步骤，在消化后使用细胞刮刀剥离消化的羊膜的上皮层细胞，并加入生理盐水洗涤羊膜。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其中在步骤1)和步骤2)之间，还包括使用甘油-水溶液浸泡羊膜的步骤，甘油-水溶液的浓度为5％-100％，浸泡时间为10-100min。
7.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，其中在步骤2)中的冷冻干燥的方法为：4℃预冷1h，-5℃预冻1h，-10℃预冻1h，-30℃预冻2h，-25℃升华1h，-15℃升华2h，0℃升华1h，10℃升华2h，15℃升华2h，设置-25℃时开启真空泵开始升华干燥；在步骤4)中，所述的冷冻干燥为：4℃预冷1h，-5℃预冻1h，-10℃预冻1h，-30℃预冻2h，-40℃预冻2h，-35℃升华1h，-25℃升华2h，-15℃升华2h，0℃升华2h，15℃升华2h，25℃升华1h，设置-35℃时开启真空泵开始升华干燥。
8.根据权利要求4至7中任一项所述的方法，其中在步骤3)中，经水煎煮，并浓缩后的药材浓缩液浸泡羊膜，所述羊膜吸收一部分药材浓缩液，药材浓缩液的剩余部分滞留在羊膜的基底膜面，经步骤4)进行的冷冻干燥，使得在羊膜的基底膜面形成一层药膜。
9.根据权利要求4至8中任一项所述的方法，其中，每平方厘米的载药羊膜片负载以下药材的药材浓缩液80-120μL：白及5-30g、熟石膏10-30g、乳香3-25g、没药3-25g、苍术10-30g、人工麝香0.5-5g、冰片1-15g、红花2-30g，其中经药材比水的重量体积比为8-12的水浸泡、煎煮药材后浓缩50-120倍获得药材浓缩液。
10.根据权利要求4至9中任一项所述的方法，其中所述羊膜为哺乳动物的羊膜，优选所述哺乳动物是人。
11.权利要求1至3中任一项所述的载药羊膜片、或权利要求4至10中任一项所述的方法制备的载药羊膜片在制备用于治疗皮肤溃疡性疾病的医疗材料中的用途；
任选地，所述皮肤溃疡性疾病包括但不局限于褥疮、糖尿病足病、烧伤、烫伤、难愈合创面、难愈性手术切口，优选褥疮；
任选地，使用所述医疗材料时，将所述载药羊膜片的表面加溶媒使载药羊膜片复水；
优选地，所述溶媒为含透明质酸0.05％-0.4％、甘油0.5％-5％、水溶性月桂氮酮0.5％-2.5％、丙二醇1％-5％的水溶液。
12.一种用于治疗皮肤溃疡性疾病的试剂盒，其包含权利要求1-3中任一项所述的载药羊膜片或权利要求4-10中任一项所述的方法制备的载药羊膜片，以及溶媒；
任选地，所述皮肤溃疡性疾病包括但不局限于褥疮、糖尿病足病、烧伤、烫伤、难愈合创面、难愈性手术切口，优选褥疮；
优选地，所述溶媒为含透明质酸0.05％-0.4％、甘油0.5％-5％、水溶性月桂氮酮0.5％-2.5％、丙二醇1％-5％的水溶液。
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|---|---|
| CN (1) | CN107349335A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109045143A (zh) * | 2018-10-17 | 2018-12-21 | 佛山市妇幼保健院 | 一种中药会阴冰敷垫的制造方法 |
| CN112263570A (zh) * | 2020-10-21 | 2021-01-26 | 钛盾生物(南京)有限公司 | 一种浸润式药物复合羊膜及其制备方法与使用方法 |
| CN115337326A (zh) * | 2022-08-22 | 2022-11-15 | 赛克赛斯生物科技股份有限公司 | 一种载药羊膜、其制备方法及在制备眼科疾病医用材料方面的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106138569A (zh) * | 2016-08-10 | 2016-11-23 | 上海市杨浦区市东医院 | 一种治疗慢性创面的中药组合及其应用 |
| CN106729935A (zh) * | 2015-08-03 | 2017-05-31 | 罗静峰 | 一种使用安全的杀菌止血医用敷料的制备方法 |
-
2017
- 2017-06-13 CN CN201710441821.2A patent/CN107349335A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106729935A (zh) * | 2015-08-03 | 2017-05-31 | 罗静峰 | 一种使用安全的杀菌止血医用敷料的制备方法 |
| CN106138569A (zh) * | 2016-08-10 | 2016-11-23 | 上海市杨浦区市东医院 | 一种治疗慢性创面的中药组合及其应用 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| ESKANDARLOU M: "The Healing Effect of Amniotic Membrane in Burn Patients", 《WORLD J PLAST SURG》 * |
| 张冰: "《临床中药学》", 30 September 2012, 中国中医药出版社 * |
| 旁国胜等: "《偏方治大病小绝招》", 31 May 2014, 中国医药科技出版社 * |
| 李飞: "《中医临床基本处方手册》", 30 November 1996, 福建科学技术出版社 * |
| 梁婧等: "人羊膜对创面愈合的促进作用", 《中国美容医学》 * |
| 许利平: "《实用中成药手册》", 31 October 2010, 中国中医药出版社 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109045143A (zh) * | 2018-10-17 | 2018-12-21 | 佛山市妇幼保健院 | 一种中药会阴冰敷垫的制造方法 |
| CN112263570A (zh) * | 2020-10-21 | 2021-01-26 | 钛盾生物(南京)有限公司 | 一种浸润式药物复合羊膜及其制备方法与使用方法 |
| CN115337326A (zh) * | 2022-08-22 | 2022-11-15 | 赛克赛斯生物科技股份有限公司 | 一种载药羊膜、其制备方法及在制备眼科疾病医用材料方面的应用 |
| CN115337326B (zh) * | 2022-08-22 | 2023-10-27 | 赛克赛斯生物科技股份有限公司 | 一种载药羊膜、其制备方法及在制备眼科疾病医用材料方面的应用 |
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