CN107343865B - 一种复方挥发油及其制备方法、应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种复方挥发油,它是由以下中药材组合物提取得到的:连翘、青皮、陈皮、霍香、八角茴香、木香、丁香、小茴香、川芎、白芷。本发明复方挥发油具有多种优良品质,经过精心选材配制而成,复方挥发油的组合物具有良好的协同性,抑菌性能、抗病毒、防腐等表现优秀,具有巨大的应用潜力,可以作为挥发油花露水、新型抑菌洗手液应用,具有巨大的应用潜力。
Description
技术领域
本发明涉及一种复方挥发油及其制备方法、应用,具体涉及一种抑菌用中药组合物制成的复方挥发油,以及该复方挥发油制备的花露水产品。同时,还涉及到制备所述复方挥发油、挥发油花露水的工艺方法。
背景技术
挥发油,又名芳香油或植物精油,通常具有芳香气味,为植物次生代谢产物。许多文献证明某些中药挥发油具有抑制细菌、真菌、抗病毒,杀虫、防腐等作用。挥发油主要是萜类成分以及小分子脂肪族化合物、小分子芳香族化合物。挥发油的提取需要特定的条件下通过水蒸气提取,且工业应用容易损失,所以研究应用较少,特别是对于多组分的挥发油组合物的研究更少。因此,对于挥发油的应用研究相对较为缺乏,挥发油组合物的应用也相对较少,造成了中药材挥发油的利用率长时间偏低。
不同的中药原材料成分的性质不同,所能够发挥出的功效也不同,按照需要进行调配设计挥发油可以发挥出更好的中药挥发油组合物功效,对于提升中药材的价值具有重要意义。
生活环境改善、卫生意识提升,使得人们在日常生活中,经常洗手。用于洗手的清洁洗护用品包括香皂、肥皂和吸收液等,其中吸收液以其独特的优势尤为流行。相比于传统的固体状肥皂与香皂而言,洗手液多使用泵头喷嘴,使用便捷,并避免了肥皂、香皂在使用后沾染细菌而被污染的风险。
目前市面上销售的洗手液多使用邻苯基苯酚(OPP)、三氯羟基二苯醚(DP300)、三氯均二苯脲(TCC)等化学抑菌剂,而这些氯类和苯酚类化合物对人体皮肤和自然环境均有一定的危害性。
因此,含有天然提取物的洗手液,以其温和不刺激的特性及高效的杀菌作用受到消费者的青睐。如果使用中药抑菌挥发油作为洗手液的药效成分,不仅杀菌防腐作用显著,而且安全无毒无害,同时还兼具挥发油独特的香气。
花露水是我国特有的香水类产品,古代的达官贵人,家族里普遍使用花露水来掩盖身上的异味,同时也能愉悦人的心情。所以很多当时的丹药师,包括宫廷里的炼金术士,都在炼丹的过程中发现了这种神秘的物质,它不但气味清新好闻,而且还能预防文丛叮咬和一些伤口的消毒杀菌。
花露水的神奇功效被发现后,开始大面积的在各个领域使用,如老百姓洗澡作为沐浴露,家里也经常挥洒一些花露水能够很好的掩盖异味。军队中也随身携带,它不但可以在军队中驱逐一些蚊虫的叮咬,还能在士兵受了一些轻伤之后作为消毒水使用,能够很好的保护军队的战斗力。
皇宫贵族们则更喜欢用花露水来装扮自己,因为它气味很好闻,便于携带,是上好的香料,能很好的满足当时贵族们的消费需求。最早用玫瑰花作为主体香料,而70%浓度左右的酒精,会在人体用药处形成一个抑菌小环境,可以很好地抑制细菌的生长甚至杀死细菌,花露水也可作为有香味的消毒剂使用。
随着现代工艺技术的不断发展与完善,制备花露水的处方以及方法也在不断改变,比如现在保留花露水的主要配方基础上,又加入了一些具有清热凉血,止痛消肿,清凉皮肤等作用的物质,使花露水不再是仅仅具有香水作用的普通香料产品,更是具备常规的杀菌消炎,保护皮肤,清凉提神等作用。也是目前市面上最受欢迎夏天消暑必备的产品。现有的花露水的改进研究主要在于香料成分的添加,并没有将花露水的潜力完全发挥出来。而且应用的添加剂成分是化学合成的,具有一定的刺激性,使得花露水的传统优势丧失。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术中挥发油组合物研究应用较少的不足,提供一种具有优良抑菌作用的挥发油组合物(复方挥发油)。
为了实现上述发明目的,本发明提供一种技术方案:
一种复方挥发油,它是由以下中药材组合物提取得到的:连翘、青皮、陈皮、霍香、八角茴香、木香、丁香、小茴香、川芎、白芷。
进一步,复方挥发油的制备原料中药材组合物的配合比例是:连翘1-4份、青皮1-4份、陈皮6-14份、霍香1-4份、八角茴香6-14份、木香3-7份、丁香3-7份、小茴香1-4份、川芎3-7份、白芷3-7份
进一步,复方挥发油的制备原料中药材组合物的配合比例是:连翘2-3份、青皮2-3份、陈皮8-12份、霍香2-3份、八角茴香8-12份、木香4-6份、丁香4-6份、小茴香2-3份、川芎4-6份、白芷4-6份。
进一步,复方挥发油的制备原料中药材组合物的配合比例是:连翘1份、青皮1份、陈皮4份、霍香1份、八角茴香4份、木香2份、丁香2份、小茴香1份、川芎2份、白芷2份。
本发明另一目的是提供一种复方挥发油的制备方法,确保复方挥发油能够实现更加优秀和稳定的品质。
一种复方挥发油的制备方法,按照以下步骤进行提取制备:
S1、取连翘、青皮、陈皮、霍香、八角茴香、木香、丁香、小茴香、川芎和白芷的原药材,破碎,加入3-20倍的水,回流提取,得到挥发油粗品;
S2、将挥发油粗品加入有机溶剂,摇匀,分液,回收有机溶剂层;旋转蒸发浓缩5-40min,得到复方挥发油。优选地,所述有机溶剂是乙醚,对于挥发油选择性萃取效果好,旋转蒸发脱去速率快,所得挥发油品质好。
本发明复方挥发油先将中药材成分进行破碎,然后用水回流提取,挥发油得到充分提取,优选地,采用索氏提取器进行回流提取。水蒸气提取过程不引入有机试剂,挥发油品质好,不易引起产品带入有毒有害成分,确保复方挥发油纯天然属性。水蒸气挟挥发油蒸出,产物纯净度极佳,但根据提取时间长短不同,部分轻组分挥发油先挥发出来,重挥发油组分后挥发出来,所以产物挥发油粗品包括了轻组分和重组分。混合的挥发油成分经过有机溶剂的萃取处理,精选高品质的具有广泛适用性的挥发油成分。
进一步,原药材破碎成细粉。原药材经过处理后比表面积大幅度增加,挥发油萃取提取速度快。优选地,原药材破碎成细粉,过20-80目筛网。通过筛网控制药材的破碎大小,方便药物萃取提取其中的有效成分,并避免对于已经充分破碎的药材过度破碎引起成分损失。
本发明另一目的是提供一种复方挥发油的应用,充分将上述复方挥发油加以利用,发挥出传统中医药材提取物的应用价值。
复方挥发油的应用,所述复方挥发油应用于花露水、洗手液、蚊香、空气清新剂或灭蚊液中。
以下是关于复方挥发油的具体应用及应用方法方式的解释说明。
本发明另一目的是克服花露水添加化学成分,存在环境污染风险的不足,提供挥发油花露水及其制备工艺。充分发挥传统花露水的优势,实现传统工艺品质的花露水产品。挥发油花露水应用中药组合物的提取复方挥发油作为功效成分,发挥中药材独特保健优势,将其中的挥发油和花露水有机的结合在一起,得到保留传统工艺品质的高品质花露水。
一种挥发油花露水,以乙醇作为主要成分,乙醇在花露水中体积比例为60%-84%;
所述花露水中包括如权利要求1-3所述复方挥发油作为添加剂成分,其中挥发油的用量为0.1wt%-15wt%;
所述挥发油花露水中余量为水。
一种挥发油花露水,以乙醇作为主要成分,乙醇在花露水中体积比例为60%-84%。所述花露水中包括中药组合物挥发油作为添加剂成分,其中挥发油的用量为0.1wt%-15wt%。中药组合物挥发油是由以下中药材提取得到的:连翘、青皮、陈皮、霍香、八角茴香、川芎、白芷。所述挥发油花露水中余量为水。
本发明的挥发油花露水选用中药复方组合物提取挥发油作为功效,首先利用中药组合物成分相互之间密切配合作用,复方挥发油具有良好的协同促进作用。所得挥发油具有浓郁香气,并兼具良好的抗菌抑菌活性,使得花露水的整体香气浓郁、高效抑菌且驱虫效果极佳。由于复方挥发油品质非常好,其所具有的抑菌活性作用非常强大,并不依赖于高浓度的的添加应用,仅仅使用少量复方挥发油即可达到良好抑菌活性,同时散发出天然香味,无多余化学成分添加,是一种高品质的纯天然花露水产品。
进一步,所述挥发油花露水中不含麝香。
进一步,所述挥发油花露水中还含有薄荷脑。优选地,薄荷脑的用量为挥发油花露水的1%-4%。优选地,薄荷脑的用量可以为2%、2.5%、3%。本发明的挥发油花露水产品中添加一定量的薄荷脑,综合分析了薄荷脑和复方挥发油成分的相互协调性,使得挥发油花露水的品质更好。
进一步,所述挥发油花露水中还含有冰片。优选地,冰片的用量为挥发油花露水的1%-4%。优选地,冰片的用量可以为2%、2.5%、3%。冰片是易溶解于乙醇溶液中的具有引药上行的传统中药成分,添加冰片可以更好的促进本发明的挥发油花露水的除菌、防痱、止痒的功效。
本发明的另一目的是提供一种制备上述挥发油花露水的工艺方法,一方面确保中药复方成分得到充分的提取,使得复方挥发油的组分能够更好的符合设计要求,另一方面提高挥发油在花露水中的品质效果。
一种制备上述挥发油花露水的方法,包括以下步骤:
按重量份比例:取复方挥发油0.1-15份、薄荷脑1-3份g、冰片1-3份g、苯甲酸0.01-0.2份,溶解于60-84份乙醇,加入香精1-3份,加水定容至100份,即得挥发油花露水。
经过预处理准备的复方挥发油和其余多种原料成分混合在一起,配制成了挥发油花露水产品,
进一步,步骤1中,原药材破碎成细粉。优选,破碎后能通过40目筛网。
进一步,步骤2中,乙醇的用量为65-78份。
本发明另一目的是提供一种复方挥发油作为功效成分的洗手液。改变现有洗手液多使用化学试剂,存在多种环境污染风险的缺陷。采用复方挥发油作为洗手液的功效成分,可以发挥出良好的抑菌、去污功效,并且洗手液整体成分温和、舒适,对于洗手液的品质、观感、使用体验等提升显著。
一种挥发油洗手液,每100mL洗手液包括上述复方挥发油0.5-2.0mL作为功效成分。
进一步,所述发油洗手液,每100mL洗手液还包括以下成分制成:柠檬酸0.4g、柠檬酸钠2.4g、羧甲基纤维素1.0g、琼脂1.0g、十二烷基硫酸钠4.0g、乙氧基化烷基硫酸钠3.0g、甘油2.0g、柠檬香精1.0mL、水余量。
本发明的挥发油洗手液采用符合国标的原料成分进行混合配制,配制得到的挥发油洗手液由于成分筛选适宜,其最终品质显示pH值为6左右,呈微酸性,实际洗手应用的效果极佳,清洁效果好,抑菌作用强。
本发明与现有技术相比,具有如下的优点和有益效果:
1.本发明复方挥发油具有多种优良品质,经过精心选材配制而成,复方挥发油的组合物具有良好的协同性,抑菌性能、抗病毒、防腐等表现优秀,具有巨大的应用潜力。
2.本发明复方挥发油的制备方法采用水蒸气提取法进行制备,制备过程基本不使用有机溶剂,所以制备得到的挥发油产物中有机试剂成分的引入量极少,挥发油可以更加安全可靠的使用。
3.本发明挥发油花露水为全新设计添加复方挥发油作为功效成分,具有浓郁香气、抑菌效果突出、驱虫作用显著,可以代替现有化学成分花露水添加剂应用,具有纯天然、安全、无污染的优点。
4.本发明设计全新的洗手液,将复方法挥发油作为功效成分进行添加,不再使用现有的化学抑菌试剂成分,避免了化学抑菌剂的环境污染风险,同时经过试验研究表现当采用适宜浓度的复方挥发油作为抑菌试剂功效成分的时候,试剂的抑菌作用显著。
5.本发明复方挥发油的制备原料均为普通中药材,容易获得且成本较低;同时其加工工艺也较为简单易行,成本低廉,对于挥发油的推广利用具有优势,能够促进市场竞争,加速相关产品升级换代。
附图说明:
图1是挥发油花露水抗金色葡萄球菌的效果图,左上为添加0mL挥发油的花露水抗金色葡萄球菌对照组,右上为添加2mL挥发油的花露水抗金色葡萄球菌,左下为添加4mL挥发油的花露水抗金色葡萄球菌。
图2是挥发油花露水抗枯草杆菌效果图,左上为空白枯草杆菌培养照片,右上为添加0mL挥发油花露水抗枯草杆菌,左下为添加2mL挥发油的花露水抗枯草杆菌,右下为添加4mL挥发油的花露水抗枯草杆菌。
图3是挥发油花露水抗大肠杆菌效果图,左上为空白大肠杆菌培养照片,右上为添加0mL挥发油花露水大肠杆菌,左下为添加2mL挥发油的花露水抗大肠杆菌,右下为添加4mL挥发油的花露水抗大肠杆菌。
图4是实施例8-10洗手液泡沫高度实验照片结果。
图5是各种洗手液抑菌结果(大肠杆菌)。
图6是各种洗手液抑菌结果(金黄色葡萄球菌)。
图7是各种洗手液抑菌结果(枯草芽孢杆菌抑菌)。
具体实施方式
下面结合试验例及具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例,凡基于本发明内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[实施例1]
挥发油的提取及纯化
取连翘50克、青皮50克、陈皮200克、霍香50克、八角茴香200克、木香100克、丁香100克、小茴香50克、川芎100克、白芷100克,中药药材成分共计1kg,碾成细粉,加入到20L的烧瓶中,加入10L蒸馏水,混合均匀。采用索氏提取器与球形冷凝管相连,采用电加热套对烧瓶进行加热,使水沸腾,水蒸气挟挥发油蒸出,于索氏提取器中回流提取,直至无油,提取近3日。先挥发而出的是白色的清油,后随着时间的延长,颜色加深,直至深黄色,即重油。提取完毕后,将得到的挥发油提取液置于分液漏斗中,加入适量的乙醚,朝无人方向缓慢振摇,适时放气,最后分液,挥发油溶于乙醚中。将溶有挥发油的乙醚置于250mL的烧瓶中,使用旋转蒸发仪进行浓缩30min,最终提取轻油重油合计60mL左右。
[实施例2]
挥发油的提取及纯化
取连翘4克、青皮3克、陈皮10克、霍香4克、八角茴香14克、木香7克、丁香6克、小茴香4克、川芎6克、白芷7克等中药药材成分,共计65g,碾成细粉,加入到1000mL烧瓶中,加入500mL蒸馏水,混合均匀。采用索氏提取器与球形冷凝管相连,采用电加热套对烧瓶进行加热,使水沸腾,水蒸气挟挥发油蒸出,于索氏提取器中回流提取,直至无油。提取完毕后,将得到的挥发油提取液置于分液漏斗中,加入适量的乙醚,朝无人方向缓慢振摇,适时放气,最后分液,挥发油溶于乙醚中。将溶有挥发油的乙醚置于100mL的烧瓶中,使用旋转蒸发仪进行浓缩10min,最终提取轻油重油合计约5mL。
[对比例1]
挥发油的提取及纯化
取连翘、青皮、陈皮、霍香、八角茴香、木香、丁香、小茴香、川芎、白芷各20g,分别加入100mL烧瓶中,然后分别加入50mL蒸馏水,提取挥发油,具体提取过程同实施例2。最终,各个原药材提取轻油重油量如下:连翘0.3mL、青皮0.4mL、陈皮0.3mL、霍香0.3mL、八角茴香0.25mL、木香0.3mL、丁香0.25mL、小茴香0.25mL、川芎0.25mL、白芷0.2mL。合并各个原药材分别提取得到的挥发油,总挥发油量为2.8mL,和实施例1-2相比,分别提取挥发油的方法导致原药材中的挥发油提取效率反而降低了,既增加了挥发油提取过程的能耗,也减少了产物的萃取效率。所以,优先考虑将多种原药材成分混合在一起进行提取处理,得到品质更加优秀的组合物挥发油。
[实施例3]
挥发油的提取及纯化
取连翘、青皮、陈皮、霍香、八角茴香、木香、丁香、小茴香、川芎、白芷等中药药材各7g,共计70g,碾成细粉,加入到1L的烧瓶中,加入600mL蒸馏水,混合均匀。采用索氏提取器与球形冷凝管相连,采用电加热套对烧瓶进行加热,使水沸腾,水蒸气挟挥发油蒸出,于索氏提取器中回流提取,直至无油。提取完毕后,将得到的挥发油提取液置于分液漏斗中,加入适量的乙醚,朝无人方向缓慢振摇,适时放气,最后分液,挥发油溶于乙醚中。将溶有挥发油的乙醚置于250mL的烧瓶中,使用旋转蒸发仪进行浓缩12min,最终提取轻油重油合计约6mL。
[实施例4]
制备挥发油花露水
挥发油花露水原料配方如下:薄荷脑2.5g、冰片2g、苯甲酸0.1g、无水乙醇75mL、柠檬香精2mL、甜橙香精1mL、挥发油(实施例1制备的挥发油原料)1-15mL、蒸馏水22-7mL。其中蒸馏水的用量为余量,最终定容至100g。
根据挥发油的添加量(mL)进行编号分类:对照品不添加挥发油,其他标记1号、2号、3号、4号、5号、6号、7号,分别依次加入1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、10mL、15mL挥发油。
使用分析天平对所需材料进行精准的陈取,在每次使用分析天平过程中,都要重新使用称量纸,避免出现较大误差,影响实验结果。
混合:在所有材料称量完成后,将其倒入250mL烧杯中,将烧杯置于50℃恒温水浴锅中进行溶解,用玻璃棒进行充分搅拌,是其中的溶质得到充分溶解(注意在搅拌过程中,不用用力过猛,以免导致其溢出烧杯)。
静置:混合溶解均匀之后,标记每个烧杯(对照瓶,1号瓶,2号瓶,3好瓶,4号瓶,5号瓶,6号瓶,7号瓶),用保鲜膜封存,置于阴凉干燥处,静置7天。
pH:测定溶液pH值
制备得到的多份挥发油花露水的整体pH属性差异不大,挥发油复配以后的花露水整体稳定性不受影响。
[实施例5]
制备挥发油花露水
制备挥发油花露水过程同实施例4,挥发油花露水配方如下:薄荷脑2g、冰片2.8g、苯甲酸0.1g、无水乙醇78mL、柠檬香精1mL、甜橙香精1mL、挥发油(实施例1制备的挥发油原料)6.5mL、蒸馏水定容至100g。
[实施例6]
制备挥发油花露水
制备挥发油花露水过程同实施例4,挥发油花露水配方如下:薄荷脑1g、冰片2.5g、苯甲酸0.1g、无水乙醇77mL、柠檬香精2mL、挥发油(实施例1制备的挥发油原料)8mL、蒸馏水定容至100g。
[实施例7]
制备挥发油花露水
制备挥发油花露水过程同实施例4,挥发油花露水配方如下:薄荷脑3g、冰片2g、苯甲酸0.1g、无水乙醇72mL、柠檬香精2mL、甜橙香精1mL、挥发油(实施例1制备的挥发油原料)5mL、蒸馏水定容至100g。
[实施例8]
制备挥发油洗手液
取复方挥发油0.5mL、柠檬酸0.4g、柠檬酸钠2.4g、羧甲基纤维素1.0g、琼脂1.0g、十二烷基硫酸钠4.0g、乙氧基化烷基硫酸钠3.0g、甘油2.0g、柠檬香精1.0mL、水定容至100mL,即为挥发油洗手液。
[实施例9]
制备挥发油洗手液
取复方挥发油1mL、柠檬酸0.4g、柠檬酸钠2.4g、羧甲基纤维素1.0g、琼脂1.0g、十二烷基硫酸钠4.0g、乙氧基化烷基硫酸钠3.0g、甘油2.0g、柠檬香精1.0mL、水定容至100mL,即为挥发油洗手液。
[实施例10]
制备挥发油洗手液
取复方挥发油2mL、柠檬酸0.4g、柠檬酸钠2.4g、羧甲基纤维素1.0g、琼脂1.0g、十二烷基硫酸钠4.0g、乙氧基化烷基硫酸钠3.0g、甘油2.0g、柠檬香精1.0mL、水定容至100mL,即为挥发油洗手液。
实施例8-10制备出添加应用不同浓度比例的挥发油(0.5mL、1mL、2mL)的洗手液产品,方便后续分析比较不同添加量的挥发油使得洗手液产品的品质差异。
[试验例1]
挥发油花露水的初步抗菌检测
1.配制LB培养基
LB培养基是微生物学实验中最常用的培养基,用于培养大肠杆菌等细菌,其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。
配方如下:胰蛋白胨(tryptone)10g;酵母提取物(yeast extract)5g;氯化钠(NaCl)10g;固体培养基另加琼脂粉15-20g;加双蒸水至1000mL,用5mol/L NaOH(约0.2mL)调pH至7.2,121℃灭菌30min;
配制方法:
(1)称量分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl,置于烧杯中。
(2)溶化加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中,用玻棒搅拌,使药品全部溶化。
(3)调pH用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。
(4)定容将溶液倒入量筒中,加水至所需体积。
(5)加琼脂加入所需量琼脂,加热融化,补足失水。
(6)分装、加塞、包扎。
(7)高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min,得到LB培养基。
2.接种并活化细菌
仪器:接种环,酒精灯,试管,培养基,锥形瓶,30.0℃恒温箱。
选取三种检验菌,包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草杆菌。取少量菌种于LB培养基中。放入37℃恒温箱中恒温振荡活化一天。
操作步骤:在开始之前,必须用消毒液充分消毒仪器,并带上灭菌手套,点燃酒精灯,先将接种环置于火焰上,灼烧至发红,冷却,再将接种环伸入细菌培养试管中,轻轻擦拭试管壁上细菌,然后拿出接种环,伸入培养基中,搅拌混合均匀,盖上塞子,将装有细菌的锥形瓶放入培养震荡箱中,等待18h。
3抑菌实验及结果
3.1消毒:在操作开始之前,现将所有需要用到的操作工具放在无菌操作台上,打开紫外灯,等待20分钟,让他们充分消毒杀菌。
3.2高压蒸汽灭菌:将7个培养皿,培养基放入高压蒸汽灭菌锅中,调试好机器,运行30分钟,时间到了之后,先打开放气阀,让其中的蒸汽充分释放,以免出现事故,待得蒸汽已放充分后,再打开锅盖,带上保护手套,将其中已经灭过菌的实验仪器小心拿出。放在无菌操作台上。
3.3稀释菌液:在无菌台上,向两个干净消毒过的试管中,移液枪取菌液100μL于干净消过毒,加入900μL生理盐水,再用同样的方法稀释10倍。
3.4.操作:将七个培养皿分别编号,一个空白(不加花露水),3个品牌的花露水,分别为市售产品A、市售产品B、市售产品C(为避免冲突,市售花露水产品不记载具体名称,以代码ABC代替),另外三个本次实验的花露水分别为0mL对照(不加挥发油,只加了其余成分的),2mL(加了2mL挥发油的花露水),4mL(加了4mL挥发油的花露水)。上述花露水为实施例4制备的2号(添加2mL挥发油)、4号(添加4mL挥发油)挥发油花露水产品,以及不含挥发油成分的对照瓶(添加0mL挥发油)。
用移液枪头取100μL 100倍菌液稀释液,均匀涂板在所有培养皿上,再依次向七个培养皿中加入等量且适量的培养基,待冷却凝固后倒置培养皿;空白组不加洗手液,只加入15mL50℃微热的培养基,配上标签以便识别。
3.5.放置:再将七个培养皿放在37℃的恒温箱中,18h后,观察并记录各培养皿中细菌的生长状况。
3.6.将最后培养基中细菌生长状况记录并制成表格:
表格1
其中,A、B、C对应市售产品A、B、C,0mL、2mL、4mL对应挥发油添加量的花露水产品。“+++++”表示完全抑制,“+++”表示部分抑制,“-”表示无抑制作用。由表格可以看出本发明的挥发油产品的应用添加量对于实现挥发油花露水的抑菌功效具有显著作用,在较低添加量的情况下就可以发挥出良好的抑菌功效,和市售产品达到了一致的效果。未添加挥发油的空白对照组的表现较差,只能部分实现抑菌作用,表明微量添加的挥发油成分对于提升挥发油花露水的品质具有重要意义。
细菌培养实验的结果如图1-3所示,图1是挥发油花露水抗金色葡萄球菌的效果图,左上为添加0mL挥发油的花露水抗金色葡萄球菌对照组,右上为添加2mL挥发油的花露水抗金色葡萄球菌,左下为添加4mL挥发油的花露水抗金色葡萄球菌。
图2是挥发油花露水抗枯草杆菌效果图,左上为空白枯草杆菌培养照片,右上为添加0mL挥发油花露水抗枯草杆菌,左下为添加2mL挥发油的花露水抗枯草杆菌,右下为添加4mL挥发油的花露水抗枯草杆菌。
图3是挥发油花露水抗大肠杆菌效果图,左上为空白大肠杆菌培养照片,右上为添加0mL挥发油花露水大肠杆菌,左下为添加2mL挥发油的花露水抗大肠杆菌,右下为添加4mL挥发油的花露水抗大肠杆菌。
由图1-3细菌培养基的抑菌实验结果可以看出本发明制备的挥发油花露水对于抑制细菌生长均良好的功效,特别是当挥发油的添加量达到一定的浓度以后,抑菌效果得到凸显,多种成分相互协同配合的抑菌作用表现突出。
4.结果讨论:传统花露水的功效与应用
现今市售主要添加物有薄荷脑,麝香草酚,水杨酸,冰片,驱蚊酯,金属离子螯合剂,pH调节剂及色素香精。
4.1.抑菌消炎:传统花露水中主要添加的是麝香草酚与乙醇,70%浓度的乙醇溶液很容易渗入人体皮肤内部,使得花露水中的麝香草酚能够充分的进入人体内,而乙醇和麝香草酚混合又具有协同的杀菌作用,能够杀灭大部分细菌,是人体免受这些细菌的侵扰,这些中药成分与溶液相互混合,一起形成了具有稳定性质的花露水,同时发挥功效。
4.2.驱蚊:现今市售的花露水中,添加的驱蚊剂主要是一些农药化学物质,对人体有些许刺激性。它能够阻断蚊子以及羌虫对气味以及新鲜血液的追踪,使得人体免受夏天天一些有害昆虫的叮咬,同时还能保护人体免受阳光的过分直射,让皮肤一直处于比较舒适湿润的状态。
4.3.提神醒脑:冰片等一些成分加入溶液中,混合均匀,将花露水涂抹于人体太阳穴或者腋窝等部位,使其在这些部位迅速被皮肤吸收,薄荷、冰片及乙醇等物质进入人体内快速起效,从而达到清凉学位,提神醒脑的功效。另外,薄荷脑与冰片作用于大脑产生清凉或灼热的皮肤感觉欺骗,也能使皮肤上原本不舒服的感觉得到好转,同时避免用手去抓,以免抓破皮肤造成二次感染。
[试验例2]
挥发油洗手液理化性质测试
1.外观
取适量样品于透明干净的培养皿上,在非直射光线环境下观察。实施例8-10制备的洗手液产品,内含物分布均匀,不分层,既无悬浮物也无沉淀,外观形貌合格。
2.气味
实施例8-10三种自制洗手液,均散发出一股淡淡的柠檬香气,实施例10制备的2.0%挥发油的洗手液会闻到一股不刺鼻的挥发油香气,符合规定香型。
3.pH值
取1mL洗手液,将其溶于9mL蒸馏水中,混合均匀,得到其十倍稀释液(国标中规定洗手液的十倍稀释液pH为4.0~10.0),用RPB20型笔式pH计测定其稀释液的pH值。
注:pH计的使用:使用前需将pH计在蒸馏水中设为7.01,滤纸擦干后,再用于洗手液pH值的测定。
实施例8-10制备的洗手液pH值分别为:实施例8,pH=5.57;实施例9,pH=5.65;实施例10,pH=5.39。均符合国标规定。
4.泡沫高度
用移液枪取0.1mL洗手液于50mL烧杯中,加蒸馏水使之完全溶解,转移至100mL容量瓶中并定容至100mL,制得1/1000稀释量的洗手液。量取其稀释液80mL,加入蒸馏水20mL,混合均匀。量取上液50mL于100mL量筒中(内径27mm),用保鲜膜捂住量筒上口,均匀振摇三次,记录稀释液稳定时的泡沫高度。国家质量标准规定泡沫高度应大于100mm。
实施例8-10制备的洗手液泡沫测试结果如图4所示,图中从左到右ABC分别对应实施例8-10,可见三种洗手液均能产生大量泡沫。具体泡沫高度分别为:实施例8,129mm;实施例9,109mm;实施例10,121mm。实施例8-10的洗手液泡沫含量丰富,大于100mm,均符合国标规定。
5.固含物含量
使用分析天平称取洗手液m=0.2g,置于50mL小烧杯中,转移至烘箱中,于105℃的温度下灼烧3h,取出后冷却至室温,称重。称完后,再次转移至烘箱中进行2或3次灼烧,直至最后称量的重量不再增加,或者连续两次的称量差值不大于4mg,记录最后的固含物质量m',样品固含量%=(m'/m)×100%。
表3-4固含量相关值
由表可知,m1<m2,是由于烧杯敞口,在转移和称量烧杯时,有少量空气中或烘箱中杂质的干扰,同时证明3h时,水分也已蒸干,因此样品固含量/%的计算应以m1为准。明显可以看出,1%挥发油洗手液的固含量高于剩余两种洗手液,固含量稍微偏高。
6.总活性成分含量
洗手液中总活性成分即发挥去污、乳化作用的活性成分,该总活性成分含量的计算用如下公式表示:总活性成分含量%=(MAES+MSDS)/M总×100%,国家标准中规定总活性成分的含量应大于9%。
表3-5总活性成分相关值
洗手液的总活性成分应大于9%,洗手液的总活性成分含量符合国标规定。
[试验例3]
挥发油洗手液抑菌作用实验
抑菌实验
(1)为了检测自制洗手液的抑菌效果,设定8个实验组,包含三个含挥发油0.5%、1.0%、2.0%的自制洗手液,蓝月亮、舒肤佳、拉芳三种品牌的洗手液,一种试剂空白对照(不添加任何洗手液)和一种不添加任何菌液和洗手液的空白对照组。
(2)实验前,洗手液、培养基、培养皿应灭菌处理。实验时,应在无菌室中操作。用无菌1mL针筒取10倍稀释的洗手液1mL于培养皿上,加入50℃微热的培养基15mL,轻轻搅拌混合均匀,空白组不加洗手液,只加入15mL50℃微热的培养基,配上标签以便识别。待培养基冷却之后,翻转培养皿,防止冷凝水的污染。
(3)选取三种检验菌,包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌。取少量菌种于LB培养基中在37℃条件下恒温振荡活化一天[8],LB培养基配方见表2-7。在无菌台上,移液枪取菌液100uL于试管中,加入900uL生理盐水,再用同样的方法稀释100倍。最后用移液枪头取100uL1000倍稀释的菌液,均匀涂板在所有培养皿上。于37℃恒温箱中培养24h后,取出培养皿记录细菌数。
表2-7LB培养基配方
注:LB培养基的配制:现加1000mL蒸馏水于1000ml大烧杯中,分别缓慢加入表2-7配方中的其余成分,边加边搅拌,直至培养基呈金黄色透明液体。LB培养基使用前应于121℃下高压蒸汽灭菌30min。
抑菌效果
培养皿菌落数的情况汇总如表3-6所示,图5-7为大肠杆菌组各培养皿的俯视图,依次为空白、0.5%挥发油、1.0%挥发油、2.0%挥发油、市售产品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。图5-7是洗手液抑菌实验的结果照片。其中图5是大肠杆菌抑菌结果。图5A对应空白对照组组、图5B对应0.5mL组(即实施例8)、图5C对应1mL组(即实施例9)、图5D对应2mL组(即实施例10)、图5E对应市售洗手液Ⅰ、图5F对应市售洗手液Ⅱ、图5G对应市售洗手液Ⅲ。图6是金黄色葡萄球菌抑菌结果,图7是枯草芽孢杆菌抑菌结果,其中A-G的对应关系同图5中一样。
表3-6各洗手液抑菌结果(菌落数)
通过对含挥发油0.5%、1.0%、2.0%的三种自制洗手液(实施例8-10)关于外观、气味、pH值、泡沫高度、固含量、总活性成分及抑菌效果的测定,可以得出这三种样品均符合QB 2654-2004。
通过对试验例2-3的结果,结合附图4-7,可以看出含挥发油0.5%、1.0%、2.0%的三种自制洗手液和市面上销售的市售产品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌均具有同等抑菌效果。其中,又以含挥发油2.0%的实施例10制备的洗手液的抑菌效果最佳,强于含挥发油0.5%、1.0%的(实施例8-9)制备的洗手液,抑菌作用几乎甚至优于市售产品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,为全试验组最佳效果。
本次实验还发现,热销的市售产品Ⅱ洗手液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有一定的抑菌作用,但对于枯草芽孢杆菌的抑制作用远不如另外两种市售产品洗手液产品的强烈,也不如含挥发油0.5%、1.0%、2.0%的三种自制洗手液。本发明的含挥发油洗手液与市售产品Ⅱ相比具有明显优势,且抑菌强弱与挥发油的比例有一定关系,即挥发油含量越高,抑菌作用越强。
实验证明含挥发油2.0%的自制洗手液的抑菌效果与市面上销售的洗手液相差无几,甚至比某些品牌效果更佳。含挥发油2.0%的自制洗手液的成本较低,而抑菌效果为最佳。
[试验例4]
挥发油抑菌性质对比分析
将实施例1-4制备的挥发油,进行抑菌性能对比试验,选用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌作为抑菌实验的标准细菌。在培养基上添加3%的挥发油作为抑制细菌生产的抑菌剂,连续培养3天观察细菌增殖情况。同时设计两个比较方案,采用对比例1分别提取的挥发油进行拆分组合,比较方案1组合应用对比例1分别提取的连翘、青皮、陈皮、霍香和八角茴香的挥发油进行混合;比较方案2应用对比例1分别提取的木香、丁香、小茴香、川芎和白芷的挥发油进行混合,混合后的比较方案1-2按照3%的比例添加到培养基中作为抑菌剂。实验结果根据抑菌作用的强烈分为五级,1级为最弱,5级为完全抑菌作用,实验结果如下表。
各实施例和对比例挥发油抑菌作用实验结果
大肠杆菌 | 金黄色葡萄球菌 | 枯草芽孢杆菌 | |
实施例1 | 5 | 5 | 5 |
实施例2 | 5 | 4 | 5 |
实施例3 | 4 | 5 | 4 |
实施例4 | 4 | 4 | 5 |
比较方案1 | 3 | 4 | 2 |
比较方案2 | 3 | 2 | 4 |
由上表可以看出采用不同的配方原料制备得到的挥发油对于三种常见的细菌的抑菌作用差异极大。实施例1制备的挥发油组合物成分配合最全,比例范围最佳,所具有的抑菌作用也最为优秀。实施例2-4制备的挥发油组合物配方全面,比例配合关系不及实施例1,但依然具有较好的抑菌作用。比较方案1-2对于细菌的抑制作用并不全面,对于某些细菌具有良好的抑制作用,但对于其他细菌的抑制作用大幅度落后,应用效果并不全面。
以上所述的具体实施方式,对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明,所应理解的是,以上所述仅为本发明的具体实施方式而已,并不用于限定本发明的保护范围,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种复方挥发油,它是由以下配合比例的中药材组合物提取得到的:连翘1-4份、青皮1-4份、陈皮6-14份、霍香1-4份、八角茴香6-14份、木香3-7份、丁香3-7份、小茴香1- 4份、川芎3-7份、白芷3-7份;
复方挥发油按照以下步骤进行提取制备:
(1)取连翘、青皮、陈皮、霍香、八角茴香、木香、丁香、小茴香、川芎和白芷的原药材,破碎, 加入3-20倍的水,回流提取,得到挥发油粗品;
(2)将挥发油粗品加入乙醚,摇匀,分液,回收有机溶剂层;旋转蒸发浓缩5-40min,得到复方挥发油。
2.如权利要求1所述复方挥发油,其特征在于,中药材组合物的配合比例是:连翘2-3份、青皮2-3份、陈皮8-12份、霍香2-3份、八角茴香8-12份、木香4-6份、丁香4-6份、小茴香2-3份、川芎4-6份、白芷4-6份。
3.如权利要求1所述复方挥发油,其特征在于,制备步骤(1)中,原药材破碎成细粉。
4.一种权利要求1-2所述复方挥发油的应用,其特征在于,所述复方挥发油应用于花露水、洗手液、蚊香、空气清新剂或灭蚊液中。
5.一种挥发油花露水,挥发油花露水原料配方如下:薄荷脑2.5g、冰片2g、苯甲酸0.1g、无水乙醇75mL、柠檬香精2mL、甜橙香精1mL、如权利要求1-2所述复方挥发油1-15mL、余量为蒸馏水,最终定容至100g。
6.一种挥发油洗手液,其特征在于,每100mL洗手液包括如权利要求1-2任一所述复方挥发油0.5-2.0mL作为功效成分。
7.如权利要求6所述挥发油洗手液,其特征在于,每100mL洗手液还包括以下成分制成:柠檬酸0.4g、柠檬酸钠2.4g、羧甲基纤维素1.0g、琼脂1.0g、十二烷基硫酸钠4.0g、乙氧基化烷基硫酸钠3.0g、甘油2.0g、柠檬香精1.0mL、水余量。
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