CN107287298A - 一种基于微间隙阵列电极/滚环扩增技术检测dna损伤的电化学传感方法 - Google Patents

一种基于微间隙阵列电极/滚环扩增技术检测dna损伤的电化学传感方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种基于微间隙阵列电极/滚环扩增技术检测DNA损伤的电化学传感方法。将引物与连接探针溶液进行连接反应，使酶失活，然后加入外切酶I，外切酶III，通过消解剩余的单链和双链DNA获得滚环模板；在phi29 DNA聚合酶和dNTPs的存在下，DNA引物与环状模板结合，触发RCA反应以产生具有重复序列的DNA长单链结构；利用捕获探针2修饰微间隙阵列电极，并加入滚环模板溶液与滚环扩增反应液，制备RCA/CP/HS‑P/MGESA电极并构建MWCNTs/RCA/CP/HS‑P/MGESA电化学传感平台。本方法具有高通量、高灵敏的优点，可以同时测定96个样品。摘要附图为96孔MGESA金电极板照片和电极单个孔的SEM照片。

Description

一种基于微间隙阵列电极/滚环扩增技术检测DNA损伤的电化 学传感方法
技术领域
本发明属于环境分析检测技术领域，具体涉及一种基于微间隙阵列电极/滚环扩增技术检测DNA损伤的电化学传感方法。
背景技术
脱氧核糖核苷酸（Deoxyribonucleic acid，DNA）是一种能够储存、复制并传递遗传信息的重要物质。自由基与生命和疾病具有非常紧密的关系，是DNA损伤的重要致病因素之一。生物体和各种环境因素都可能引起DNA损伤和破坏，是诱发自由基损伤DNA的重要来源。环境因素主要包括化学因素、生物因素和物理因素。其中，化学因素（包括活性氧、卤代醌、二氧化氮和重金属等典型环境污染物）是DNA损伤的重要来源(Yin R, Zhang D, SongY, et al. Potent DNA damage by polyhalogenated quinones and H2O2 via a metal-independent and Intercalation-enhanced oxidation mechanism. ScientificReports, 2013, 3(7436): 1269.)；生物因素主要有病毒、细菌、真菌以及代谢过程中产生的自由基等；物理因素包括紫外辐射和电离辐射（如x-射线、α-射线、β-射线和γ-射线等），碱基在辐射条件下失去一个电子形成碱基自由基正离子并得到次级电子，电子加成到碱基上引起碱基脱落或断链等DNA损伤(Sandrini J Z, Trindade G S, Nery L E M, et al.Time-course Expression of DNA Repair-related Genes in Hepatocytes ofZebrafish ( Danio rerio ) After UV-B Exposure. Photochemistry & Photobiology,2009, 85(1): 220–6.)。同时，辐射也会诱导产生ROS，引发DNA损伤(Dizdaroglu M,Jaruga P. Mechanisms of free radical-induced damage to DNA. Free RadicalResearch, 2012, 46(4): 382-419.)。
OS主要类型包括羟基自由基（hydroxyl radical，·OH），超氧阴离子（superoxideanion，O2－）和过氧化氢(Hemnani T, Parihar M S. Reactive oxygen species andoxidative DNA damage. Indian Journal of Physiology & Pharmacology, 1998, 42(4): 440.)。其中，·OH是目前所知的化学性质最活泼、生物体毒最强、危害最大的一种自由基，可以通过发生电子转移，夺取氢原子和羟基化反应等方式与几乎所有的细胞成分（如核酸、糖、蛋白质等）发生反应(Mello L D, Hernandez S, Marrazza G, et al.Investigations of the antioxidant properties of plant extracts using a DNA-electrochemical biosensor. Biosensors & Bioelectronics, 2006, 21(7): 1374-82.)。·OH能从DNA分子的碱基上提取氢，具有脱嘌呤和脱嘧啶的作用，产生8-羟基-脱氧鸟嘌呤核苷（8-OHdG），该产物可致鸟嘌呤突变成胸腺嘧啶，并可以使周围的嘧啶碱基发生损伤，从而造成多种不同类型的错读和突变(Nowicka A M, Kowalczyk A, Sek S, et al.Oxidation of DNA Followed by Conformational Change after OH Radical Attack.Analytical Chemistry, 2013, 85(1): 355.)。此外，·OH易与碱基共价结合，使碱基发生修饰，导致氢键断裂，甚至单链或者双链都能够发生断裂，改变核苷酸的结构和排列，破坏其遗传信息，引起细胞突变。
目前，常用DNA损伤的常用检测方法有色谱法、光谱法、电泳等方法(Tarun M,Bajrami B, Rusling J F. Genotoxicity screening using biocatalyst/DNA filmsand capillary LC-MS/MS. Analytical Chemistry, 2006, 78(2): 624-7.)。气相色谱-质谱联用法虽具有灵敏度高、可同时测定多种目标物的特点，此方法存在水解不完全以及衍生化过程产生假阳性的缺点，影响测试结果的准确性。如中国专利申请号CN104569216A公布了实时在线检测卷烟侧流烟气对DNA损伤的装置，该方法需要使用磁性材料试剂盒提供的洗脱液将DNA磁珠从集气瓶壁上洗脱，使暴露后损伤的DNA与磁珠分离，得到的溶剂为已经损伤的DNA，加热30min后送入液相色谱串联质谱仪中扫描。该方法前处理会引起额外的DNA损伤产物，同时加热过程过长容易引起DNA变性。光谱法如荧光定量PCR法可检测碱基损伤及DNA链断裂，特异性高，但这种方法操作难度大，需要大型仪器如荧光定量PCR仪，成本过高(Chen et al. , DNA supercoilingsuppressesreal-time PCR：anewapproachtothequantificationofmitochondrial DNA damageandrepair,NucleicAcids Research,2007,35(4):1377-1388)。电泳法可以定量地检测单细胞单链DNA和双链DNA损伤，无需放射性物质标记，且可区分细胞之间的异质性，灵敏度高，可视性好，但这种方法操作过于复杂，如中国专利申请号CN106018529A公布了一种单细胞凝胶电泳检测细胞DNA损伤的试剂盒及方法，虽然相比传统的凝胶电泳技术在样品制备上有所改进，但是整体实验过程依然十分繁琐，包括铺胶、裂解等一系列步骤，不利于普及。
滚环扩增技术(Rolling Circle Amplification，RCA)是以环状DNA为模板，在DNA或RNA聚合酶作用下，以一段短的DNA或RNA引物等温扩增出长单链DNA或RNA的技术，作为用于分子扩增的方法，RCA具有以下几个优势：（1）相比于目前最常用的聚合酶链反应（PCR），RCA是利用等温性phi 29 DNA聚合酶，其催化DNA聚合在恒定的温度（在30°C或室温度）即可完成反应，对实验条件要求较低，无需复杂仪器也可完成。（2）由于RCA只在特定的引物和模板启动下才会进行反应，延伸出数百倍以上引物长度的DNA，RCA体系具有高灵敏度和高特异性的特点。（3）RCA可在界面上操作，适用于微阵列平台进行高通量分析，RCA在核酸诊断上应用十分广泛。Christian等利用滚环扩增对固定的细胞在原位进行基因拷贝数目的检测和单碱基突变的检测，效率可达到 90%以上（Christian A T, Pattee M S, Attix C M,et al. Detection of DNA point mutations and mRNA expression levels by rollingcircle amplification in individual cells. Proceedings of the National Academyof Sciences of the United States of America, 2002, 98(25): 14238-43.）。
本发明利用RCA高灵敏、易操作的特性，扩增出长度为数十微米具有重复序列的DNA 单链，并利用碳纳米管的优异电化学性能，与电极表面固定的DNA形成交互连接的DNA-MWCNTs网络，实现了DNA损伤高灵敏检测，可检测最低1.04 pM由∙OH诱发的DNA损伤。本发明引入了微间隙阵列电极，实现了高通量检测，是一种新型高灵敏高通量电化学传感方法。截至目前，向电极表面引入碳纳米管并用其与DNA形成的电化学平台检测DNA损伤的方法还未见报道。
发明内容
本发明提供一种基于微间隙阵列电极/滚环扩增技术检测DNA损伤的电化学传感方法。为实现上述目的，我们设计了一种基于MWCNTs / RCA / CP / HS-P / MGESA的电化学传感平台，通过运用滚环扩增技术和碳纳米管材料连通微间隙电极，从而构建一种用于检测DNA损伤的电化学传感方法。
本发明提出的一种基于微间隙阵列电极/滚环扩增技术检测DNA损伤的电化学传感方法，具体步骤如下：
（1）将捕获探针（HS-P）滴加在微间隙阵列电极（MGESA）上，待修饰好后依次加入滚环模板CP和RCA反应液，RCA反应液通过DNA引物与环状模板结合触发，制备RCA/CP/HS-P/MGESA电极；
（1.1）将捕获探针HS-P滴加在MGESA上，控制HS-P浓度为10-6mol/L-10-5mol/L，置于4℃冰箱中8-10小时，修饰后将DNA溶液吸出，洗涤几次后，浸泡15-60min；
（1.2）向步骤（1.1）制备的MGESA电极上加入滚环模板CP，杂交反应1-5h；
（1.3）向步骤（1.2）所得产物中加入RCA反应液，加超纯水补足到设定体积，在30℃恒温条件下反应1-5h，即得RCA/CP/HS-P/MGESA电极；所述RCA反应液包括：phi 29 DNA聚合酶1-10μL，phi29聚合酶缓冲溶液4-20μL，BSA0.8-4μL，dNTPs0.8-4μL；
（2）通过RCA扩增形成DNA长链，与碳纳米管连接形成导电纳米线网络MGESA-RCA-MWCNTs，实现微间隙阵列电极的导通并产生信号；
（2.1）将1mg多壁碳纳米管（MWCNTs，30-50μm）分散在10mL含有一定量聚乙二醇十八烷基醚（PEG）的PBS缓冲溶液中，超声处理后，得到均一稳定的黑色分散液，以相同方式处理1-100μm长度的MWCNTs，将两种MWCNTs分散液稀释至相同浓度，按体积比1：1混合后，超声处理待用；
（2.2）将制备的RCA / CP / HS-P / MGESA电极与步骤（2.1）制备的MWCNTs溶液在室温下温育2-3 h，然后用PBS溶液洗涤以终止反应，即得MWCNTs / RCA / CP / HS-P / MGESA电化学传感平台；
（3）用不同浓度的Fenton溶液产生·OH对DNA进行损伤，导致DNA-MWCNTs结构被破坏，使原本导通的电极不同程度断开，在电化学阻抗测量中显示明显的电信号响应减小；
（4）通过电化学阻抗法进行·OH引起的DNA损伤测试。
本发明中，步骤（4）中检测·OH引起的DNA损伤方法如下：
（4.1）采用∙OH来诱导DNA损伤，∙OH的来源为Fenton试剂。向构建的MWCNTS/RCA/HS-P/MGESA修饰电极加入由H2O2和Fe2+配制而成的Fenton溶液，在37°C下温育30-60 min；
（4.2）通过电化学阻抗法（EIS）对不同浓度Fenton反应诱导·OH损伤的DNA序列进行电化学测试。·OH浓度范围为2.5x10-12mol/L-1x10-10mol/L；
（4.3）根据电化学交流阻抗法的原理，阻抗增大表明电极的连通受到了一定干扰，并体现为电荷转移电阻（Rct）值增大。因此当·OH浓度增大，通过电化学阻抗法测定DNA链损伤的能斯特曲线逐渐升高，并且·OH浓度与DNA损伤程度在一定范围内呈现较好的线性关系（R = 2997.76549 ln (c)- 4402.421，R2 = 0.991；其中，R为电荷转移电阻，c为·OH浓度），据此实现对DNA损伤的检测。
本发明的有益效果在于：本发明基于滚环扩增技术，构建了基于MWCNTs / RCA /CP / HS-P / MGESA的电化学传感平台的检测方法，通过EIS电化学表征，研究了Fenton反应产生的∙OH对DNA的损伤程度。数据分析结果表明：Fenton溶液浓度与DNA损伤程度在一定范围内呈现较好的线性关系，线性范围2.5×10-12mol/L-1×10-10mol/L，检测限1.04×10- 12mol/L，是一种新型高灵敏高通量电化学传感方法，为DNA诱导损伤的检测提供了一种新的思路和方法。
附图说明
图1是不同电极在 [Fe(CN)6]3-/4-溶液中进行EIS测试。其中：A）（a）未修饰的MGESA，（b）HS-P/MGESA，（c）RCA/HS-P/MGESA，（d）MWCNTS/RCA/HS-P/MGESA。B）（d）MWCNTS/RCA/HS-P/MGESA放大图。
图2是不同RCA反应时间下电极在[Fe(CN)6]3-/4-溶液中进行EIS测试。在不同的RCA反应时间: 0.5 h，1 h，1.5 h，2 h，2.5 h，3 h下，电极在 [Fe(CN)6]3-/4-溶液中EIS响应阻抗。
图3是用不同浓度的Fenton溶液产生·OH对DNA进行损伤，测试的Rct阻抗值和·OH浓度之间的关系。
图4是用不同浓度的Fenton溶液产生·OH对DNA进行损伤，测试的Rct阻抗值和·OH浓度之间的线性拟合图。其中I是在HCR/MCH/CP-I/Au电极上获得的[Fe(CN)6]3-/4-电化学探针的峰电流响应，I0是用不同浓度的Fenton溶液处理的HCR/MCH/CP-I/Au电极后获得的[Fe(CN)6]3-/4-电化学探针的峰电流响应。
具体实施方式
为了更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。应当理解，本文所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。下面实施例中，未注明具体条件和环境的实验方法，通常按照常规条件，或制造厂商所建议的条件。
实施例1
为了证明该方法具有良好的电化学信号，在5x10-3mol/L[Fe(CN)6]3-/4-溶液中分别用EIS表征：（a）未修饰的MGESA，（b）在电极上修饰巯基末端的DNA引物（HS-P）HS-P/MGESA，（c）向电极体系加入CP，启动RCA反应后的RCA/HS-P/MGESA，（d）引入碳纳米管材料的MWCNTS/RCA/HS-P/MGESA。EIS测试频率在10kHz-0.1Hz，扰动电压50 mV。EIS的表征结果显示阻抗显著减小，验证了MWCNTS/RCA/HS-P/MGESA电化学平台能够成功检测·OH损伤DNA链，参见图1。
实施例2
为了得到高灵敏度的检测方法，分别研究不同滚环扩增反应时间，滚环模板浓度，碳纳米管浓度以及反应时间等影响该修饰电极性能的关键因素。按照实施例1中的条件测试了RCA反应时间为0.5 h，1 h，1.5 h，2 h，2.5 h和3 h的微间隙阵列电极的阻抗。随着反应时间的延长，滚环扩增的拷贝数增加，DNA链相应延长，电极测试的EIS阻抗减小。当RCA反应时间为2 h时，阻抗达到最小值，当反应时间继续增加，电极体系的阻抗未表现出阻抗随之减小的趋势，体系阻抗值随RCA反应时间延长而轻微增长。因此，建议选取2 h为RCA最佳反应时间，参见图2。
实施例3
本实施例提供一种基于微间隙阵列电极/滚环扩增技术检测∙OH诱导DNA损伤的电化学传感方法。包括如下步骤：
（1）∙OH的来源为Fenton试剂。向构建的MWCNTS/RCA/HS-P/MGESA修饰电极加入由H2O2和Fe2+（PBS溶液，Fe2+与H2O2摩尔比1：4，pH 4.0）配制而成的Fenton溶液，在37°C下温育30min，用超纯水润洗电极。
（2）在5x10-3mol/L[Fe(CN)6]3-/4- 溶液中记录电极在不同浓度Fenton溶液处理下的EIS电化学数据。Fenton溶液H2O2的浓度为1x10-11-4x10-10mol/L，所有实验均重复三次。信号采集完毕后通过origin软件对数据进行处理，Rct和·OH浓度的自然对数具有良好的线性关系，验证该平台对于·OH诱导的DNA损伤具有良好的特异性和检测能力。参见图3和图4。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (2)

1.一种基于微间隙阵列电极/滚环扩增技术检测DNA损伤的电化学传感方法，其特征在于具体步骤如下：
（1）将捕获探针（HS-P）滴加在微间隙阵列电极（MGESA）上，待修饰好后依次加入滚环模板CP和RCA反应液，RCA反应液通过DNA引物与环状模板结合触发，制备RCA/CP/HS-P/MGESA电极；
（1.1）将捕获探针HS-P滴加在MGESA上，控制HS-P浓度为1×10-6mol/L-1×10-5mol/L，置于4℃冰箱中8-10小时，修饰后将DNA溶液吸出，洗涤几次后，浸泡15-60min；
（1.2）向步骤（1.1）制备的MGESA电极上加入滚环模板CP，杂交反应1-5h；其中：滚环模板CP的浓度为1×10-7mol/L-5×10-5mol/L；
（1.3）向步骤（1.2）所得产物中加入RCA反应液，加超纯水补足到设定体积，在30℃恒温条件下反应1-5h，即得RCA/CP/HS-P/MGESA电极；所述RCA反应液包括：phi 29 DNA聚合酶1-10μL，phi29聚合酶缓冲溶液4-20μL，BSA0.8-4μL，dNTPs0.8-4μL；
（2）通过RCA扩增形成DNA长链，与碳纳米管连接形成MGESA-RCA-MWCNTs，实现微间隙阵列电极的导通并产生信号；
（2.1）将1mg多壁碳纳米管（MWCNTs，30-50μm）分散在10mL含有聚乙二醇十八烷基醚（PEG）的PBS缓冲溶液中，超声处理后，得到均一稳定的黑色分散液，以相同方式处理1-100μm长度的MWCNTs，将两种MWCNTs分散液稀释至相同浓度，按体积比1：1混合后，超声处理待用；
（2.2）将制备的RCA / CP / HS-P / MGESA电极与步骤（2.1）制备的MWCNTs溶液在室温下温育2-3 h，然后用PBS溶液洗涤以终止反应，即得MWCNTs / RCA / CP / HS-P / MGESA电化学传感平台；
（3）用不同浓度的Fenton溶液产生·OH对DNA进行损伤，导致DNA-MWCNTs结构被破坏，使原本导通的电极不同程度断开，在电化学阻抗测量中显示明显的电信号响应减小；
（4）通过电化学阻抗法进行·OH引起的DNA损伤测试。
2.根据权利要求1所述的一种基于微间隙阵列电极/滚环扩增技术检测DNA损伤的电化学传感方法，其特征在于步骤（4）中检测·OH引起的DNA损伤方法如下：
（4.1）采用∙OH来诱导DNA损伤，∙OH的来源为Fenton试剂，向构建的MWCNTS/RCA/HS-P/MGESA修饰电极加入由H2O2和Fe2+配制而成的Fenton溶液，在37°C下温育30-60 min；
（4.2）通过电化学阻抗法（EIS）对不同浓度Fenton反应诱导·OH损伤的DNA序列进行电化学测试，·OH浓度范围为2.5x10-12mol/L-1x10-10mol/L；
（4.3）根据电化学交流阻抗法的原理，阻抗增大表明电极的连通受到了一定干扰，并体现为电荷转移电阻（Rct）值增大；因此当·OH浓度增大，通过电化学阻抗法测定DNA链损伤的能斯特曲线逐渐升高，并且·OH浓度与DNA损伤程度在一定范围内呈现较好的线性关系，即R = 2997.76549 ln (c)- 4402.421，R2 = 0.991；其中，R为电荷转移电阻，c为·OH浓度），据此实现对DNA损伤的检测。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022261874A1 (zh) * 2021-06-16 2022-12-22 深圳华大生命科学研究院 一种通过单链滚环扩增获得双链序列的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103630598A (zh) * 2013-12-10 2014-03-12 重庆医科大学 基于滚环扩增和超分子适体对可卡因电化学检测的方法
CN104152449A (zh) * 2014-08-18 2014-11-19 中国人民解放军第三军医大学第二附属医院 miRNA捕获探针及其修饰电极与捕获探针互补链及其修饰碳纳米管-金磁纳米粒复合物

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103630598A (zh) * 2013-12-10 2014-03-12 重庆医科大学 基于滚环扩增和超分子适体对可卡因电化学检测的方法
CN104152449A (zh) * 2014-08-18 2014-11-19 中国人民解放军第三军医大学第二附属医院 miRNA捕获探针及其修饰电极与捕获探针互补链及其修饰碳纳米管-金磁纳米粒复合物

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANDREA HÁJKOVÁ等: "Electrochemical DNA biosensor for detection of DNA damage induced by hydroxyl radicals", 《BIOELECTROCHEMISTRY》 *
NINGNING ZHU等: "Label-free and sequence-specifific DNA detection down to a picomolar level with carbon nanotubes as support for probe DNA", 《ANALYTICA CHIMICA ACTA》 *
张斌: "基于滚环扩增技术的核酸分析", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022261874A1 (zh) * 2021-06-16 2022-12-22 深圳华大生命科学研究院 一种通过单链滚环扩增获得双链序列的方法

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