CN107259216B - 一种具有抗氧化功能的鱼类饲料调和油 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种具有抗氧化功能的鱼类饲料调和油，属于水产养殖技术领域。利用橡胶籽油部分取代大豆油或鱼油，添加番茄红素配制成饲料调和油，各种原料的重量百分比为：橡胶籽油23.7～67.7%、大豆油23.7～67.7%、大豆卵磷脂5.0～8.5%、番茄红素0.10～0.17%；本发明充分利用橡胶种植业中的副产物橡胶籽油，作为鱼类饲料中的脂肪源替代部分大豆油或鱼油，节约了大豆油或鱼油这一紧缺饲料油脂，降低鱼类饲料成本；且配制的饲料调和油中n‑3/n‑6不饱和脂肪酸比例适宜，满足鱼类对亚油酸和α‑亚麻酸等必需脂肪酸的需要，提高了水产品品质；并于饲料调和油中添加番茄红素作为天然抗氧化剂，既克服了橡胶籽油这一优质饲料脂肪源的缺点，又充分释放了番茄红素的生物抗氧化活性。

Description

一种具有抗氧化功能的鱼类饲料调和油
技术领域
本发明涉及一种饲料调和油，具体涉及一种具有抗氧化功能的鱼类饲料调和油，属于水产养殖技术领域。
背景技术
一般情况下，鱼类自身可合成n-7和n-9系列不饱和脂肪酸，但不能合成n-3和n-6系列不饱和脂肪酸。因此，n-3、n-6系列不饱和脂肪酸即为鱼类的必需脂肪酸；n-3系列不饱和脂肪酸以α-亚麻酸为代表，n-6系列不饱和脂肪酸以亚油酸为代表，这些不饱和脂肪酸鱼体自身不能合成，必需从饲料中摄取。α-亚麻酸在淡水鱼类体内可以衍生出二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)。
鱼油是水产饲料商品原料，也是淡水鱼饲料中常用的优质脂肪源。鱼油中n-6系列不饱和脂肪酸含量为10-20％，n-3系列不饱和脂肪酸35-45％，是一种典型的富含n-3不饱和脂肪酸的油脂。然而，随着水产养殖业和饲料工业的快速发展，鱼油消耗量日益剧增，价格大幅升高，其在水产饲料中的使用量逐渐受到了限制。此外，由于鱼油的原料主要来自于海洋鱼类，鱼体内可能会含有高浓度的重金属和有机污染物，所以鱼油原料安全性存在着一定的风险。因此，当前水产饲料中常用来源丰富且价格相对低廉的植物油来替代鱼油，其中以大豆油使用最为常见。大豆油中n-6系列不饱和脂肪酸(亚油酸)含量为50-60％，n-3系列不饱和脂肪酸(α-亚麻酸)5-9％，亚油酸含量远大于亚麻酸，是一种典型的富含n-6不饱和脂肪酸的油脂。近年来，大豆油消耗量日益剧增，价格大幅升高，其在水产饲料中的使用量逐渐受到了限制。因此，如何使用更加廉价、优质的油脂替代鱼油、大豆油已成为了水产饲料工业研究的热点之一。
橡胶籽是一种独特的木本油料，新鲜橡胶籽油脂含量约20％，橡胶籽仁油脂含量为46-50％，油脂不饱和脂肪酸含量高达80％以上。在橡胶籽油的脂肪酸组成中，n-3系列不饱和脂肪酸(α-亚麻酸)含量高达18-20％，是大豆油和菜籽油的3–4倍；n-6系列不饱和脂肪酸(亚油酸)含量为34-38％，n-3/n-6比值为1/2，是一种典型的富含n-3不饱和脂肪酸的木本油料(见表1)。橡胶籽在我国是一种资源量较大、种植面积和产量仅次于核桃和油茶籽的木本油料。2013年我国橡胶籽年产量约93万吨，云南省橡胶籽年产量约70万吨；同时，云南省所在的澜沧江-湄公河流域集中了全世界三分之二的资源，年产橡胶籽640万吨。与核桃相比，橡胶籽更适合深加工制油，而核桃多数直接食用，仅有少量用于制油；与油茶籽相比，橡胶籽资源更集中，更容易工业化、规模化加工利用。橡胶籽油既是世界上最丰富的n-3不饱和脂肪酸来源，也是世界上最廉价的n-3不饱和脂肪酸来源。因此，橡胶籽油是一种潜在的饲料脂肪源，可以考虑将其作为鱼油、大豆油的替代品。
表1、鱼油、大豆油、橡胶籽油主要脂肪酸组成
现有技术中，专利CN104719637A、CN104719678A、CN104719679A涉及利用橡胶籽油作为鱼类饲料的油脂原料。然而，橡胶籽油中富含不饱和脂肪酸，高含量橡胶籽油摄入易导致油脂/饲料氧化变质，产生醛、酮等有害物质。此外，氧化油脂/饲料饲喂鱼类，会阻碍鱼类生长；引起肌肉萎缩、肌纤维排列混乱，并发生透明和颗粒降解；降低生物膜的流动性，进而破坏细胞膜结构的完整性；引起肝脏肿大和肝细胞坏死。因此，一般在油脂/饲料中添加化学抗氧化剂(如乙氧基喹啉)以防止或减缓油脂的氧化反应。然而，研究证实乙氧基喹啉等化学抗氧化剂对鱼类免疫有一定副作用，长期使用含有乙氧基喹啉的饲料可使鱼体抗病力下降。此外，乙氧基喹啉可通过饲料进入动物体内，其代谢产物—乙氧基喹啉醌具有遗传毒性。因此，2017年2月6日，欧盟委员会发布通告，将实施条例草案暂停在所有动物饲料添加剂中使用乙氧基喹啉。因此，寻找安全可靠的天然抗氧化剂具有十分重要的意义。
发明内容
针对上述问题，本发明提供了一种具有抗氧化功能的鱼类饲料调和油，本发明在一个合理的范围内，充分利用橡胶种植业中的副产物—橡胶籽油，作为鱼类饲料中的脂肪源替代部分大豆油、鱼油，节约了大豆油、鱼油这一紧缺饲料油脂，降低了鱼饲料成本；且配制的饲料调和油n-3/n-6不饱和脂肪酸比例适宜，既满足了鱼类对亚油酸和α-亚麻酸等必需脂肪酸的需要，又提高了水产品品质；并于饲料调和油中添加番茄红素作为天然抗氧化剂，克服了橡胶籽油这一优质饲料脂肪源的缺点，充分释放番茄红素的生物抗氧化活性，还增强了鱼的抗氧化能力和免疫力，进而提高了饲料性价比和养殖效益。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
利用橡胶籽油部分取代大豆油或鱼油并添加番茄红素配制成饲料调和油。
一种具有抗氧化功能的鱼类饲料调和油，包括橡胶籽油、大豆油、大豆卵磷脂、番茄红素，其中各种原料的重量百分比为：橡胶籽油23.7～67.7％、大豆油23.7～67.7％、大豆卵磷脂5.0～8.5％、番茄红素0.10～0.17％；所有调和油原料的重量百分比之和为100％，该饲料调和油中n-3:n-6不饱和脂肪酸比例为1:2.8～4.7。
番茄红素(Lycopene)又称ψ-胡萝卜素，属于异戊二烯类化合物，是天然抗氧化剂的一种。
番茄红素通过物理和化学方式猝灭单线态氧或捕捉过氧化自由基，番茄红素还能通过与其他形式的活性氧的化学反应消除氧化自由基(如过氧化氢、亚硝酸根等氧化自由基)。番茄红素清除自由基的功效远胜于其他类胡萝卜素和维生素E，其淬灭单线态氧速率常数是维生素E的100倍。目前，番茄红素是自然界植物中被发现的最强抗氧化剂之一，可应用于饲料添加剂中。
番茄红素是一种脂溶性物质，需要溶解在基础油中，其品质好坏直接关系到番茄红素的功效发挥和整体质量。
番茄红素可有效地清除动物体内的自由基，保持细胞正常代谢，提高动物的抗氧化能力和机体免疫力。
本发明的有益效果：
⑴充分利用橡胶种植业中的副产物—橡胶籽油，作为鱼类饲料中的脂肪源替代部分大豆油、鱼油，节约了大豆油或鱼油这一紧缺饲料油脂，降低了鱼类饲料成本；
⑵配制的饲料调和油n-3/n-6不饱和脂肪酸比例适宜，既满足了鱼类对亚油酸和α-亚麻酸等必需脂肪酸的需要，又提高了水产品品质；
⑶于调和油中添加番茄红素作为天然抗氧化剂，既克服了橡胶籽油这一优质饲料脂肪源的缺点，又充分释放了番茄红素的生物抗氧化活性，还增强了鱼类的抗氧化能力和免疫力，进而提高了饲料性价比和鱼类养殖效益。
具体实施方式
下面将结合具体实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一
以豆粕作为饲料蛋白源，大豆油、橡胶籽油、大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉配制的复合饲料调和油作为脂肪源，按照常规饲料配比方案，配制了6种等氮等能饲料(如表2所示)，其中，实例1饲料中未添加橡胶籽油，作为对照组；实例2～5饲料中橡胶籽油添加量为1.4～5.4％以替代大豆油，配制成含不同比例n-3/n-6不饱和脂肪酸的饲料调和油。实例1～5饲料中添加番茄红素作为抗氧化剂，实例6饲料中以乙氧基喹啉作为抗氧化剂。
表2、各实例饲料配方(％干物质基础)
注：矿物质预混料(g/kg)：MgSO4·7H2O，180；KI，1；FeSO4·H2O，260；ZnSO4·H2O，180；CuSO4·5H2O，25；Na2Se2O3，0.01；MnSO4·H2O，180；CoCl2·6H2O，0.75；维生素预混料(g/kg)：维生素A，2；维生素D3，0.03；维生素E，30；维生素K，3；盐酸硫胺，8；核黄素，11；盐酸吡哆醇，8；维生素B12，0.02；抗坏血酸，50；叶酸，1；生物素，0.1；烟酸，30；泛酸钙，32；肌醇，25。
所有饲料原料经过粉碎机粉碎，且全部过60目筛，将所有粉碎好的饲料原料按表2饲料配方将除大豆油、橡胶籽油、大豆卵磷脂和番茄红素配制的饲料调和油以外的其他原料混合均匀，然后加入大豆油、橡胶籽油、大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉(大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉先溶于大豆油/橡胶籽油中)，混合均匀，最后再加入大约30％蒸馏水使粉状饲料形成硬团，置于颗粒饲料机中将饲料挤压成直径1.0mm的条状，并在40℃鼓风烘箱中干燥12小时，使其水分含量降至12％以下。经检测，各实例饲料配方的营养成分如表3所示。
表3、各实例饲料营养成分
试验用草鱼为人工培育的同一批苗种，由本地某养殖场提供。试验前，草鱼先用商业饲料暂养2周以适应养殖环境。试验开始前草鱼禁食24h。选择大小均匀(约5.8g)、体格健壮的草鱼，随机分配于18个养殖桶(6个试验处理组，每组3个重复)，每桶40尾鱼。每天早晚投饵2次(07:00，18:00)，达饱食水平。养殖用水为曝气除氯的自来水，采用循环流水系统，循环系统采用机械和生物过滤介质，并用紫外灯消毒，水流速10L/min。试验共进行10周，整个养殖试验期间均采用24h连续充氧，自然光照，水温始终保持在22～26℃。
养殖试验结束后，停止喂食24h，称量每桶鱼体总重并记录鱼体个数，计算草鱼生长率和成活率。此外，采集草鱼血液、肠道和肝脏等组织样品，并分析测定消化酶、抗氧化力和免疫力等指标。各指标的分析测试均采用国内外研究中使用的成熟方法。所有数值均表示为平均值±标准误采用单因素方差分析(ANOVA)，当处理组之间存在显著性差异(P<0.05)时，用Tukey’s检验进行多重比较分析(实例1～5)。采用T检验比较分析抗氧化剂组间差异。
表4～6为试验数据和试验结果。
表4、各实例草鱼生长性能结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(P<0.05)；表示实例3与实例6组间T检验差异显著。
由表4可知：使用实例1～3饲料饲喂的草鱼，其末重、体增重和日增重系数均无显著性差异；使用实例2饲料饲喂的草鱼，其饲料系数显著低于实例3～5饲料饲喂组；使用实例1～2饲料饲喂的草鱼，其蛋白质效率显著高于实例3～5饲料饲喂组。饲料中添加1.4～2.7％橡胶籽油对草鱼生长性能和饲料利用率无明显负面影响。
再次对比实例1～5饲料饲喂的草鱼数据，可以发现实例2饲料饲喂组饲料系数和蛋白质效率明显优于其他实例饲料饲喂组。当橡胶籽油添加量为1.4％时(n-3:n-6不饱和脂肪酸＝1:4.3)，效果最佳。
此外，由表4可知，使用实例3饲料饲喂的草鱼，其末重、体增重、日增重系数和摄食率均显著高于实例6饲料饲喂组。番茄红素作为饲料调和油的抗氧化剂，其改善草鱼生长性能效果明显优于乙氧基喹啉。
表5、各实例草鱼肠道消化酶活性结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(P<0.05)；表示实例3与实例6组间T检验差异显著。
由表5可知：随着饲料中橡胶籽油替代大豆油比例的提高，草鱼肠道胰蛋白酶和脂肪酶活性均呈先上升后下降的趋势；使用实例2～4饲料饲喂的草鱼，其肠道胰蛋白酶活性均明显高于实例1饲料饲喂组，其中以实例3饲料饲喂组最高；使用实例1～3饲料饲喂的草鱼，其肠道脂肪酶活性明显高于实例4～5饲料饲喂组，其中以实例2饲料饲喂组最高。使用实例1饲料饲喂的草鱼，其小肠淀粉酶和二糖酶活性显著高于实例2～5饲料饲喂组。饲料中添加1.4～2.7％橡胶籽油对草鱼肠道胰蛋白酶和脂肪酶活性无明显负面影响；但当添加量达到5.4％时，草鱼肠道消化酶活性均受到一定的抑制。
再次对比实例1～3饲料饲喂的草鱼数据，可以发现实例2～3饲料饲喂组肠道胰蛋白酶活性明显高于实例1饲料饲喂组；实例2饲料饲喂组肠道脂肪酶活性明显高于实例1饲料饲喂组。当橡胶籽油添加量为1.4％～2.7％时(n-3:n-6不饱和脂肪酸＝1:3.2～4.3)，草鱼肠道胰蛋白酶和脂肪酶活性最高。
此外，由表5可知，使用实例3饲料饲喂的草鱼，其肠道胰蛋白酶和脂肪酶活性显著高于实例6饲料饲喂组；肠道二糖酶活性明显高于实例6饲料饲喂组。番茄红素作为饲料调和油的抗氧化剂，其改善草鱼肠道消化酶活性效果明显优于乙氧基喹啉。
表6、各实例草鱼血浆抗氧化能力指标结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(P<0.05)；表示实例3与实例6组间T检验差异显著。
由表6可知：随着饲料中橡胶籽油替代大豆油比例的提高，草鱼血浆IgM水平及过氧化物酶和总抗氧化力活性呈逐渐上升的趋势；其中，实例4～5饲料饲喂的草鱼，其血浆IgM水平及过氧化物酶和总抗氧化力活性显著高于实例1饲料饲喂组。实例3和5饲料饲喂的草鱼，其血浆过氧化物活性显著高于实例1、2和4饲料饲喂组。反之，实例1饲料饲喂的草鱼，其血浆谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于其他实例饲料饲喂组。除血浆谷胱甘肽过氧化物酶以外，饲料中添加1.4～5.4％橡胶籽油对草鱼抗氧化力和免疫力均无明显负面影响。
再次对比实例1～5饲料饲喂的草鱼数据，可以发现实例2～5饲料饲喂组血浆IgM水平及血浆过氧化物酶、过氧化氢酶和总抗氧化力活性均明显高于实例1饲料饲喂组。当橡胶籽油添加量为1.4％～5.4％时(n-3:n-6不饱和脂肪酸＝1:2.4～4.3)，草鱼抗氧化力和免疫力明显提高。
此外，由表6可知，使用实例3饲料饲喂的草鱼，其血浆IgM含量及过氧化氢酶、过氧化物酶和总抗氧化力活性显著高于实例6饲料饲喂组。番茄红素作为饲料调和油的抗氧化剂，其改善草鱼抗氧化能力效果明显优于乙氧基喹啉。
综上所述，饲料中添加1.4～2.7％橡胶籽油对草鱼生长性能、饲料利用率、肠道消化酶活性、血浆抗氧化力和免疫力指标无明显不良影响；且当添加量为1.4～2.7％时，草鱼肠道胰蛋白酶和脂肪酶活性、血浆抗氧化力和免疫力指标得以改善；但当添加量达到5.4％时，草鱼生长性能、饲料利用率和肠道消化酶活性明显下降。因此，草鱼饲料中橡胶籽油适宜添加量为1.4～2.7％，草鱼饲料调和油中n-3:n-6不饱和脂肪酸比例为1:3.2～4.3。相对于乙氧基喹啉，于草鱼饲料调和油中添加番茄红素作为抗氧化剂，草鱼生长性能、肠道消化酶活性、血浆抗氧化力和免疫力得以明显改善。
结合草鱼生理特性，针对草鱼生长性能、饲料利用率、肠道消化酶活性、血浆抗氧化力和免疫力进行设计，利用橡胶籽油部分取代大豆油并添加番茄红素配制成一种具有抗氧化功能的草鱼饲料调和油。能够充分利用橡胶种植业中的副产物—橡胶籽油，作为草鱼饲料中的脂肪源替代部分大豆油，节约了大豆油这一紧缺饲料油脂，降低了草鱼饲料成本。同时，本发明配制的饲料调和油中n-3/n-6不饱和脂肪酸比例适宜，既满足了草鱼对亚油酸和α-亚麻酸等必需脂肪酸的需要，又提高了水产品品质。于调和油中添加番茄红素作为天然抗氧化剂，既克服了橡胶籽油这一优质饲料脂肪源的缺点，又充分释放了番茄红素的生物抗氧化活性，还增强了草鱼的抗氧化能力和免疫力，进而提高了饲料性价比和草鱼养殖效益。
实施例二
以鱼粉、玉米蛋白粉、豆粕、菜籽粕作为饲料蛋白源，鱼油、橡胶籽油、大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉配制的复合饲料调和油作为脂肪源，按照常规饲料配比方案，配制了6种等氮等能饲料(如表7所示)，其中，实例1饲料中未添加橡胶籽油，作为对照组；实例2～5饲料中橡胶籽油添加量为1.3～5.2％以替代鱼油，配制成含不同比例n-3/n-6不饱和脂肪酸的饲料调和油。实例1～5饲料中添加番茄红素作为抗氧化剂，实例6饲料中以乙氧基喹啉作为抗氧化剂。
表7、各实例饲料配方(％干物质基础)
注：矿物质预混料(g/kg)：MgSO4·7H2O，180；KI，1；FeSO4·H2O，260；ZnSO4·H2O，180；CuSO4·5H2O，25；Na2Se2O3，0.01；MnSO4·H2O，180；CoCl2·6H2O，0.75；维生素预混料(g/kg)：维生素A，2；维生素D3，0.03；维生素E，30；维生素K，3；盐酸硫胺，8；核黄素，11；盐酸吡哆醇，8；维生素B12，0.02；抗坏血酸，50；叶酸，1；生物素，0.1；烟酸，30；泛酸钙，32；肌醇，25。
所有饲料原料经过粉碎机粉碎，且全部过60目筛，将所有粉碎好的饲料原料按表7饲料配方将除鱼油、橡胶籽油、大豆卵磷脂和番茄红素配制的饲料调和油以外的其他原料混合均匀，然后加入鱼油、橡胶籽油、大豆卵磷脂和番茄红素/(大豆卵磷脂和番茄红素先溶于鱼油/橡胶籽油中)，混合均匀，最后再加入大约30％蒸馏水使粉状饲料形成硬团，置于颗粒饲料机中将饲料挤压成直径1.0mm的条状，并在40℃鼓风烘箱中干燥12小时，使其水分含量降至12％以下。经检测，各实例饲料配方的营养成分如表8所示。
表8、各实例饲料营养成分
试验用罗非鱼为人工培育的同一批苗种，由本地某养殖场提供。试验前，罗非鱼先用商业饲料暂养2周以适应养殖环境。试验开始前罗非鱼禁食24h。选择大小均匀(约1.9g)、体格健壮的罗非鱼，随机分配于18个养殖桶(6个试验处理组，每组3个重复)，每桶30尾鱼。每天早晚投饵2次(07:00，18:00)，达饱食水平。养殖用水为曝气除氯的自来水，采用循环过滤系统，循环系统采用机械和生物过滤介质。试验共进行8周，整个养殖试验期间均采用24h连续充氧，自然光照，水温始终保持在27～29℃。
养殖试验结束后，停止喂食24h，称量每桶鱼体总重并记录鱼体个数，计算罗非鱼生长率和成活率。此外，采集罗非鱼血液、肠道和肝脏等组织样品，并分析测定消化酶、抗氧化力和免疫力等指标。各指标的分析测试均采用国内外研究中使用的成熟方法。所有数值均表示为平均值±标准误采用单因素方差分析(ANOVA)，当处理组之间存在显著性差异(P<0.05)时，用Tukey’s检验进行多重比较分析。采用T检验比较分析抗氧化剂组间差异。
表9～11为试验数据和试验结果。
表9、各实例罗非鱼生长性能结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(P<0.05)；表示实例3与实例6组间T检验差异显著。
由表9可知：使用实例1～5饲料饲喂的罗非鱼，其末重、体增重、日增重系数、摄食率、饲料系数和蛋白质效率均无显著性差异。饲料中添加1.3～5.2％橡胶籽油对罗非鱼生长性能和饲料利用率无明显负面影响。
再次对比实例1～5饲料饲喂的罗非鱼数据，可以发现实例2饲料饲喂组罗非鱼末重、体增重、日增重系数和蛋白质效率明显高于实例1饲料饲喂组；实例2饲料饲喂组饲料系数明显低于实例1饲料饲喂组。由此可见：当橡胶籽油添加量为1.3％时(n-3:n-6不饱和脂肪酸＝1:0.52)，效果最佳。
此外，由表9可知，使用实例3饲料饲喂的罗非鱼，其末重、体增重、日增重系数和蛋白质效率均显著高于实例6饲料饲喂组；反之，实例3饲料饲喂组饲料系数显著低于实例6饲料饲喂组。番茄红素作为饲料调和油的抗氧化剂，其改善罗非鱼生长性能效果明显优于乙氧基喹啉。
表10、各实例罗非鱼肠道消化酶活性结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(P<0.05)；表示实例3与实例6组间T检验差异显著。
由表10可知：随着饲料中橡胶籽油替代鱼油比例的提高，罗非鱼肠道胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和二糖酶活性整体呈先上升后下降的趋势；使用实例1饲料饲喂的罗非鱼，其肠道胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性与实例3～5饲料饲喂组相比无显著差异；其肠道二糖酶活性显著高于实例3～5饲料饲喂组。饲料中添加1.3～5.2％橡胶籽油对罗非鱼肠道胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性无明显负面影响。
再次对比实例1～5饲料饲喂的罗非鱼数据，可以发现实例2饲料饲喂组肠道胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性明显高于实例1饲料饲喂组。当橡胶籽油添加量为1.3％时(n-3:n-6不饱和脂肪酸＝1:0.52)，罗非鱼肠道胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性最高。
此外，由表10可知，使用实例3饲料饲喂的罗非鱼，其肠道胰蛋白酶和脂肪酶活性显著高于实例6饲料饲喂组。番茄红素作为饲料调和油的抗氧化剂，其改善罗非鱼肠道消化酶活性效果明显优于乙氧基喹啉。
表11、各实例罗非鱼血浆抗氧化能力指标结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(P<0.05)；表示实例3与实例6组间T检验差异显著。
由表11可知：使用实例1～5饲料饲喂的罗非鱼，其血浆IgM、过氧化氢酶、过氧化物酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性均无显著性差异。实例1饲料饲喂的罗非鱼，其血浆谷胱甘肽还原酶活性显著高于其他实施例饲料饲喂组。随着饲料中橡胶籽油替代鱼油比例的提高，血浆一氧化氮和丙二醛含量均呈先下降后上升的趋势；其中，实例3饲料饲喂的罗非鱼，其血浆一氧化氮水平最低；实例2饲料饲喂的罗非鱼，其血浆丙二醛含量最低。
使用实例1～5饲料饲喂的罗非鱼，其肝脏过氧化氢酶和过氧化物酶活性及丙二醛含量均无显著性差异。随着饲料中橡胶籽油替代鱼油比例的提高，肝脏谷胱甘肽还原酶活性呈逐渐下降的趋势。实例1～4饲料饲喂的罗非鱼，其肝脏总抗氧化力活性显著低于实例5饲料饲喂组。饲料中添加1.3～3.9％橡胶籽油对罗非鱼抗氧化力和免疫力均无明显负面影响；但添加5.2％橡胶籽油明显抑制了罗非鱼的抗氧化力和免疫力。
再次对比实例1～5饲料饲喂的罗非鱼数据，可以发现实例2～3饲料饲喂组血浆一氧化氮和丙二醛含量明显低于实施例1饲料饲喂组。当橡胶籽油添加量为1.3％～2.6％时(n-3:n-6不饱和脂肪酸＝1:0.52～0.75)，罗非鱼抗氧化力和免疫力所有提高。
此外，由表11可知，使用实例3饲料饲喂的罗非鱼，其血浆一氧化氮和丙二醛含量显著低于实例6饲料饲喂组；反之，实例3饲料饲喂组肝脏谷胱甘肽还原酶和总抗氧化力活性显著高于实例6饲料饲喂组。番茄红素作为饲料调和油的抗氧化剂，其改善罗非鱼抗氧化能力效果明显优于乙氧基喹啉。
综上所述，饲料中添加1.3～2.6％橡胶籽油对罗非鱼生长性能、饲料利用率、肠道消化酶活性、血浆抗氧化力和免疫力指标无明显不良影响；且当添加量为1.3％时，罗非鱼生长性能、饲料利用率、肠道胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性、血浆抗氧化力指标得以改善；但当添加量达到5.2％时，罗非鱼总抗氧化能力明显下降。因此，罗非鱼饲料中橡胶籽油适宜添加量为1.3～2.6％，罗非鱼饲料调和油中n-3:n-6不饱和脂肪酸比例为1:0.52～0.75。相对于乙氧基喹啉，于罗非鱼饲料调和油中添加番茄红素作为抗氧化剂，罗非鱼生长性能、肠道消化酶活性、抗氧化功能得以明显改善。
实施例三
以鱼粉、豆粕和菜籽粕作为饲料蛋白源，鱼油、橡胶籽油、大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉配制的复合饲料调和油作为脂肪源，按照常规饲料配比方案，配制了6种等氮等能饲料(如表12所示)，其中，实例1饲料中未添加橡胶籽油，作为对照组；实例2～5饲料中橡胶籽油添加量为2.68～10.72％以替代鱼油，配制成含不同比例n-3/n-6不饱和脂肪酸的饲料调和油。实例1～5饲料中添加番茄红素作为抗氧化剂，实例6饲料中以乙氧基喹啉作为抗氧化剂。
表12、实施例饲料配方(％干物质基础)
注：矿物质预混料(g/kg)：MgSO4·7H2O，180；KI，1；FeSO4·H2O，260；ZnSO4·H2O，180；CuSO4·5H2O，25；Na2Se2O3，0.01；MnSO4·H2O，180；CoCl2·6H2O，0.75；维生素预混料(g/kg)：维生素A，2；维生素D3，0.03；维生素E，30；维生素K，3；盐酸硫胺，8；核黄素，11；盐酸吡哆醇，8；维生素B12，0.02；抗坏血酸，50；叶酸，1；生物素，0.1；烟酸，30；泛酸钙，32；肌醇，25。
所有饲料原料经过粉碎机粉碎，且全部过60目筛，将所有粉碎好的饲料原料按表12饲料配方将除鱼油、橡胶籽油、大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉配制的饲料调和油以外的其他原料混合均匀，然后加入鱼油、橡胶籽油、大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉(大豆卵磷脂和番茄红素/乙氧基喹啉先溶于鱼油/橡胶籽油中)，混合均匀，最后再加入大约30％蒸馏水使粉状饲料形成硬团，置于颗粒饲料机中将饲料挤压成直径1.0mm的条状，并在40℃鼓风烘箱中干燥12小时，使其水分含量降至12％以下。经检测，各实例饲料配方的营养成分如表13所示。
表13、各实例饲料营养成分
试验用丝尾鳠为人工培育的同一批苗种，由本地某养殖场提供。试验前，丝尾鳠先用商业饲料暂养2周以适应养殖环境。试验开始前丝尾鳠禁食24h。选择大小均匀(约2.14g)、体格健壮的丝尾鳠，随机分配于18个养殖桶(6个试验处理组，每组3个重复)，每桶40尾鱼。每天早晚投饵2次(07:00，18:00)，达饱食水平。养殖用水为曝气除氯的自来水，采用循环流水系统，循环系统采用机械和生物过滤介质，并用紫外灯消毒，水流速10L/min。试验共进行10周，整个养殖试验期间均采用24h连续充氧，自然光照，水温始终保持在27～29℃。
养殖试验结束后，停止喂食24h，称量每桶鱼体总重并记录鱼体个数，计算丝尾鳠生长率和成活率。此外，采集丝尾鳠肠道和肝脏等组织样品，并分析测定消化酶和抗氧化力等指标。各指标的分析测试均采用国内外研究中使用的成熟方法。所有数值均表示为平均值±标准误采用单因素方差分析(ANOVA)，当处理组之间存在显著性差异(P<0.05)时，用Tukey’s检验进行多重比较分析。采用T检验比较分析抗氧化剂组间差异。
表14～16为试验数据和试验结果。
表14、各实例丝尾鳠生长性能结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(P<0.05)；表示实例3与实例6组间T检验差异显著。
由表14可知：使用实例2饲料饲喂的丝尾鳠，其末重、体增重和日增重系数显著高于其他实例饲料饲喂组；使用实例1～5饲料饲喂的丝尾鳠，其摄食率、饲料系数和蛋白质效率均无显著性差异。饲料中添加2.68～10.72％橡胶籽油对丝尾鳠生长性能和饲料利用率无负面影响；且当橡胶籽油添加量为2.68％时(n-3:n-6不饱和脂肪酸＝2.2:1)，效果最佳。
此外，由表14可知，使用实例3饲料饲喂的丝尾鳠，其末重、体增重和日增重系数均显著高于实例6饲料饲喂组。番茄红素作为饲料调和油的抗氧化剂，其改善丝尾鳠生长性能效果明显优于乙氧基喹啉。
表15、各实例丝尾鳠肠道消化酶活性结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(P<0.05)；表示实例3与实例6组间T检验差异显著。
由表15可知：随着饲料中橡胶籽油替代鱼油比例的提高，丝尾鳠肠道亮氨酸氨肽酶活性呈先上升后下降的趋势；其中，使用实例2～4饲料饲喂的丝尾鳠，其肠道亮氨酸氨肽酶活性均明显高于实例1饲料饲喂组。使用实例1～5饲料饲喂的丝尾鳠，其肠道胰蛋白酶、淀粉酶和二糖酶活性均无显著性差异。饲料中添加2.68～10.72％橡胶籽油对丝尾鳠肠道消化酶活性无明显负面影响。
再次对比实例1～5饲料饲喂的丝尾鳠数据，可以发现实例2～4饲料饲喂组肠道消化酶活性明显高于实例1饲料饲喂组。当橡胶籽油添加量为2.68～8.04％时(n-3:n-6不饱和脂肪酸＝1.1～2.2:1)，丝尾鳠肠道消化酶活性最高。
此外，由表15可知，使用实例3饲料饲喂的丝尾鳠，其肠道胰蛋白酶和亮氨酸氨肽酶活性显著高于实例6饲料饲喂组。番茄红素作为饲料调和油的抗氧化剂，其改善丝尾鳠肠道消化酶活性效果明显优于乙氧基喹啉。
表16、各实例丝尾鳠血浆抗氧化能力指标结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(P<0.05)；表示实例3与实例6组间T检验差异显著。
由表16可知：随着饲料中橡胶籽油替代鱼油比例的提高，丝尾鳠肝脏碱性磷酸酶、谷胱甘肽过氧化物酶和总抗氧化力活性均呈先上升后下降的趋势；其中，实例2～3饲料饲喂的丝尾鳠，其肝脏碱性磷酸酶活性显著高于实例1、4和5饲料饲喂组；实例2饲料饲喂的丝尾鳠，其肝脏谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于实例1、4和5饲料饲喂组；实例4饲料饲喂的丝尾鳠，其肝脏总抗氧化力活性显著高于实例1和2饲料饲喂组。随着饲料中橡胶籽油替代鱼粉比例的提高，丝尾鳠肝脏过氧化氢酶和过氧化物酶活性均呈逐渐上升的趋势；其中，实例1饲料饲喂的丝尾鳠，其肝脏过氧化氢酶和过氧化物酶活性显著低于实例1～3饲料饲喂组。使用实例1～5饲料饲喂的丝尾鳠，其肝脏超氧化物歧化酶和谷胱甘肽还原酶活性均无显著性差异。由此可见：饲料中添加2.68～10.72％橡胶籽油对丝尾鳠抗氧化力无明显负面影响。
再次对比实例1～5饲料饲喂的丝尾鳠数据，可以发现实例2～4饲料饲喂组肝脏抗氧化力指标明显高于实例1饲料饲喂组。当橡胶籽油添加量为2.68～8.04％时(n-3:n-6不饱和脂肪酸＝1.1～2.2:1)，丝尾鳠抗氧化力明显提高。
此外，由表16可知，使用实例3饲料饲喂的丝尾鳠，其血浆过氧化氢酶、过氧化物酶、谷胱甘肽过氧化物酶和总抗氧化力活性显著高于实例6饲料饲喂组。番茄红素作为饲料调和油的抗氧化剂，其改善丝尾鳠抗氧化能力效果明显优于乙氧基喹啉。
综上所述，饲料中添加2.68～10.72％橡胶籽油对丝尾鳠生长性能、饲料利用率、肠道消化酶活性和肝脏抗氧化力指标无明显不良影响；且当添加量为2.68～8.04％时，丝尾鳠生长性能、肠道消化酶活性和肝脏抗氧化力指标得以改善。因此，丝尾鳠饲料中橡胶籽油适宜添加量为2.68～8.04％，丝尾鳠饲料调和油中n-3:n-6不饱和脂肪酸比例为1.1～2.2:1。相对于乙氧基喹啉，于丝尾鳠饲料调和油中添加番茄红素作为抗氧化剂，丝尾鳠生长性能、肠道消化酶活性、抗氧化功能得以明显改善。
实施例四
以鱼粉、豆粕、大豆浓缩蛋白、菜籽粕、棉籽粕和橡胶籽饼作为饲料蛋白源，鱼油/橡胶籽油、大豆卵磷脂、乙氧基喹啉/番茄红素配制的复合饲料调和油作为脂肪源，按照常规饲料配比方案，配制了6种等氮等能饲料(如表17所示)，其中，实例1～3饲料以鱼油作为主要脂肪源；实例4～6饲料以橡胶籽油作为主要脂肪源；实例1和4中未添加抗氧化剂，作为对照组；实例2和5饲料中添加乙氧基喹啉作为抗氧化剂；实例3和6饲料中添加番茄红素作为抗氧化剂。
表17、实例饲料配方(％干物质基础)
注：矿物质预混料(g/kg)：MgSO4·7H2O，180；KI，1；FeSO4·H2O，260；ZnSO4·H2O，180；CuSO4·5H2O，25；Na2Se2O3，0.01；MnSO4·H2O，180；CoCl2·6H2O，0.75；维生素预混料(g/kg)：维生素A，2；维生素D3，0.03；维生素E，30；维生素K，3；盐酸硫胺，8；核黄素，11；盐酸吡哆醇，8；维生素B12，0.02；抗坏血酸，50；叶酸，1；生物素，0.1；烟酸，30；泛酸钙，32；肌醇，25。
所有饲料原料经过粉碎机粉碎，且全部过60目筛，将所有粉碎好的饲料原料按表17饲料配方将除鱼油/橡胶籽油、大豆卵磷脂、乙氧基喹啉/番茄红素配制的饲料调和油以外的其他原料混合均匀，然后加入鱼油/橡胶籽油、大豆卵磷脂、乙氧基喹啉/番茄红素(大豆卵磷脂、乙氧基喹啉/番茄红素先溶于鱼油/橡胶籽油中)，混合均匀，最后再加入大约30％蒸馏水使粉状饲料形成硬团，置于颗粒饲料机中将饲料挤压成直径2.0mm的条状，并在40℃鼓风烘箱中干燥12小时，使其水分含量降至12％以下。经检测，各实例饲料配方的营养成分如表18所示。
表18、各实例饲料营养成分
试验用虹鳟为人工培育的同一批苗种，由本地某养殖场提供。试验前，虹鳟先用商业饲料暂养2周以适应养殖环境。试验开始前虹鳟禁食24h。选择大小均匀(约29.4g)、体格健壮的虹鳟，随机分配于18个养殖网箱(6个试验处理组，每组3个重复)，每网箱30尾鱼。每天早晚投饵2次(07:00，18:00)，达饱食水平。养殖用水为曝气除氯的自来水，采用循环过滤系统，循环系统采用机械和生物过滤介质。试验共进行10周，整个养殖试验期间均采用24h连续充氧，自然光照，水温始终保持在16～18℃。
养殖试验结束后，停止喂食24h，称量每桶鱼体总重并记录鱼体个数，计算虹鳟生长率和成活率。此外，采集虹鳟血液、肠道和肝脏等组织样品，并分析测定消化酶、抗氧化力和免疫力等指标。各指标的分析测试均采用国内外研究中使用的成熟方法。所有数值均表示为平均值±标准误采用单因素方差分析(ANOVA)，当处理组之间存在显著性差异(P<0.05)时，用Tukey’s检验进行多重比较分析。
表19～21为试验数据和试验结果。
表19、各实例虹鳟生长性能结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(P<0.05)。
由表19可知：使用实例1～2饲料饲喂的虹鳟，其末重、体增重和日增重系数均无显著性差异；实例3饲料饲喂组虹鳟末重、体增重和日增重系数明显高于实例1饲料饲喂组；实例2～3饲料饲喂组饲料系数和蛋白质效率显著优于实例1饲料饲喂组；使用实例4～6饲料饲喂的虹鳟，其末重、体增重和日增重系数均无显著性差异；实例5～6饲料饲喂组饲料系数和蛋白质效率明显优于实例4饲料饲喂组。饲料中添加抗氧化剂有利于改善饲料利用率，且添加番茄红素效果明显优于乙氧基喹啉。
再次对比实例1～6饲料饲喂的虹鳟数据，可以发现实例3饲料饲喂组虹鳟末重、体增重、日增重系数、饲料系数和蛋白质效率明显高于实例2饲料饲喂组；实例6饲料饲喂组虹鳟末重、体增重、日增重系数、饲料系数和蛋白质效率明显高于实例5饲料饲喂组。番茄红素改善虹鳟生长性能和饲料利用率效果明显优于乙氧基喹啉。
表20、各实例虹鳟肠道消化酶活性结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(P<0.05)。
由表20可知：使用实例1～3饲料饲喂的虹鳟，其胃蛋白酶和肠脂肪酶活性均无显著性差异；实例1饲料饲喂组虹鳟肠道淀粉酶和二糖酶活性明显高于实例2～3饲料组；使用实例4～6饲料饲喂的虹鳟，其肠脂肪酶和二糖酶活性均无显著性差异；实例6饲料饲喂组虹鳟胃蛋白酶和淀粉酶活性明显高于实例4～5饲料组。橡胶籽油饲料中添加番茄红素明显改善了虹鳟肠道消化酶活性。
表21、各实例虹鳟血浆抗氧化能力指标结果
注：同行肩注不同字母者，差异显著(P<0.05)。
由表21可知：使用实例1～3饲料饲喂的虹鳟，其血浆溶菌酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶和总抗氧化力活性及一氧化氮含量活性均无显著性差异；实例1饲料饲喂组虹鳟血浆过氧化物酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性显著低于实例2～3饲料饲喂组；实例1～2饲料饲喂组虹鳟血浆谷胱甘肽还原酶活性显著低于实例3饲料饲喂组；实例1～2饲料饲喂组虹鳟血浆丙二醛含量显著高于实例3饲料饲喂组。使用实例4～6饲料饲喂的虹鳟，其血浆超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、碱性磷酸酶和乳酸脱氢酶活性及一氧化氮含量活性均无显著性差异；实例4饲料饲喂组虹鳟血浆溶菌酶、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶和总抗氧化力活性略低于实例5饲料饲喂组，但显著低于实例6饲料饲喂组；实例4饲料饲喂组虹鳟血浆丙二醛含量略高于实例5饲料饲喂组，但显著高于实例6饲料饲喂组。
使用实例1～3饲料饲喂的虹鳟，其肝脏过氧化氢酶、过氧化物酶、乳酸脱氢酶和总抗氧化力活性活性均无显著性差异；实例1～2饲料饲喂组虹鳟肝脏溶菌酶和谷胱甘肽还原酶活性明显低于实例3饲料饲喂组；实例2饲料饲喂组肝脏谷胱甘肽过氧化物酶和碱性磷酸酶活性显著高于实例1和3饲料饲喂组；使用实例4～6饲料饲喂的虹鳟，其肝脏过氧化物酶、谷胱甘肽过氧化物酶、碱性磷酸酶和总抗氧化力活性活性均无显著性差异；实例4～5饲料饲喂组虹鳟肝脏溶菌酶和谷胱甘肽还原酶活性明显低于实例6饲料饲喂组；实例5饲料饲喂组肝脏过氧化氢酶和乳酸脱氢酶活性明显高于实例4和6饲料饲喂组。饲料中添加抗氧化剂(乙氧基喹啉或番茄红素)均有利于提高虹鳟抗氧化力和免疫力；且番茄红素改善虹鳟抗氧化力和免疫力效果明显优于乙氧基喹啉。
综上所述，饲料中添加0.02％抗氧化剂(乙氧基喹啉或番茄红素)有利于改善虹鳟生长性能、饲料利用率、抗氧化力和免疫力；且生物抗氧化剂—番茄红素改善效果明显优于化学抗氧化剂—乙氧基喹啉。因此，虹鳟饲料(无论以鱼油或以橡胶籽油作为脂肪源)中添加0.02％番茄红素明显有利于改善虹鳟生长性能、饲料利用率、肠道消化酶活性和抗氧化力。
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (1)

1.一种具有抗氧化功能的鱼类饲料调和油，其特征在于：所述的具有抗氧化功能的鱼类饲料调和油包括橡胶籽油、大豆油、大豆卵磷脂、番茄红素，其中各种原料的重量百分比为：橡胶籽油23.7～67.7%、大豆油23.7～67.7%、大豆卵磷脂5.0～8.5%、番茄红素0.10～0.17%；所有调和油原料的重量百分比之和为100%，该饲料调和油中n-3：n-6不饱和脂肪酸比例为1:2.8～4.7。
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