CN107211994A - 一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法 - Google Patents

一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法；它包括(1)准备工作、(2)野外采精、(3)精液冷却平衡、(4)精液冷冻四步；本发明在精液冷冻过程中加入了精液冷却平衡这一步骤，该步骤将稀释后的精液逐步降温至0‑5℃，同时让冷冻保护剂充分渗透进精子内，以达到抗冻保护作用的过程。精子经过低温平衡后可增强其耐冻能力，减轻冷冻过程中冰晶化对精子的伤害。本发明先将平衡后的精液在液氮表面进行逐步熏蒸，使精液逐步平衡后再埋入液氮中进行冷冻，提高大熊猫精液的冷冻质量。

Description

一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法
技术领域
本发明涉及大熊猫繁殖领域，更具体的说是涉及一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法。
背景技术
大熊猫是世界上极其宝贵的自然历史遗产，具有重要的学术研究价值，其生存和保护现状，为世人所关注。保护大熊猫的根本措施是保护大熊猫的栖息地，促进野外和饲养大熊猫的繁殖，完善和强化管理手段，采取科学的方法，为大熊猫的生存创造必需的条件，稳定进而发展大熊猫种群数量，发展和恢复大熊猫的潜在栖息。
因此采用人工繁殖大熊猫是目前大熊猫繁殖的必不可少的手段，在大熊猫人工繁殖的过程中，大熊猫精液的冷冻与储存是至关重要的，野生的雄性大熊猫各方面的抵抗能力及身体素质高于圈养大熊猫，因此采用野生雄性大熊猫的精液进行人工繁殖能够提高大熊猫人工繁殖的成功率，同时也能提高小熊猫的存活率。
因此怎样在野外进行采精并进行精液冷冻，保证精液质量是亟待解决的问题。
发明内容
本发明克服了现有技术的不足，提供一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法，极大的提高了大熊猫精液的冷冻质量，提高了大熊猫精液解冻后的活性，提高了大熊猫人工繁殖的成功率。
为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法，它包括以下步骤：
(1)准备工作：准备好移动电源、电刺激采精仪、平衡箱、精液冷冻保温箱，并对上述仪器进行检测，确保其能正常工作；
(2)野外采精：寻找到雄性熊猫个体，进行采精，并将精液进行稀释保存处理；
(3)精液冷却平衡：将步骤(2)中稀释好的精液放置于0-5℃的平衡箱中进行平衡；
(4)精液冷冻：将平衡好后的精液装入精液细管中，将精液细管放入精液冷冻保温箱中，在精液冷冻保温箱中完成精液在液氮面上的熏蒸和冷冻即可。
优选的，所述的步骤(1)中的平衡箱为车载恒温箱或含冰块泡沫箱。
优选的，所述的步骤(2)中精液的稀释倍数为2-5倍。
优选的，所述的步骤(2)中精液和稀释液的温度为30-33℃；对精液进行稀释时候，将稀释液逐滴缓慢添加至精液中。
优选的，所述的步骤(2)中的稀释液为Test Yolk Buffer with Gentamicin液。
优选的，所述的步骤(1)中的精液冷冻保温箱包括保温箱盖和保温箱体，所述保温箱盖与保温箱体通过合页、锁扣连接；所述保温箱盖的上端设置有驱动电机，所述驱动电机的转轴穿过保温箱盖连接有转接卡槽；所述保温箱体内设置有螺纹升降装置，所述螺纹升降装置的上端设置有转接卡头；保温箱盖与保温箱体闭合时，转接卡头与转接卡槽匹配安装。
优选的，所述的螺纹升降装置包括螺纹升降杆、上固定器、下固定座、辅助杆及升降托盘组成；所述螺纹升降杆上设置有螺纹环，所述升降托盘与螺纹环固定连接；所述升降托盘上设置有辅助孔，所述辅助杆的上端通过钢板固定在保温箱体的箱壁上，所述辅助杆的下端穿过升降托盘上的辅助孔与保温箱体内壁固定连接。
优选的，所述的升降托盘上设置有温度传感器加持装置，所述保温箱盖上设置有温度传感线通孔。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、本发明在精液冷冻过程中加入了精液冷却平衡这一步骤，该步骤将稀释后的精液逐步降温至0-5℃左右，同时让冷冻保护剂充分渗透进精子内，以达到抗冻保护作用的过程。精子经过低温平衡后可增强其耐冻能力，减轻冷冻过程中冰晶化对精子的伤害。提高大熊猫精液的冷冻质量。
2、本发明先将平衡后的精夜在液氮表面进行逐步熏蒸，使精液逐步平衡后再埋入液氮中进行冷冻，这样进一步减轻冷冻过程中冰晶化对精子的伤害，提高大熊猫精液的冷冻质量。
3、本发明采用的精液冷冻保温箱能在外部对位于箱体内部的精液细管的高度进行调节，通过调节精液细管距离液氮表面的温度来调节精液细管周围环境的温度从而使得精液细管里的精液的冷冻质量更好，方便使用。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
图1为本发明精液冷冻保温箱结构示意图。
图2为本发明实施例2中步骤(3)中精液冷却平衡时间温度曲线(纵坐标表示温度，单位为℃；横坐标表示时间，单位为min)。
图3为本发明实施例2中步骤(4)中精液冷冻时间温度曲线；其中a曲线表示的是精液细管的时间温度曲线，b曲线表示的是温度传感器检测的精液细管环境的时间温度曲线(纵坐标表示温度，单位为℃；横坐标表示时间，单位为S)。
图中的标号为：1、保温箱盖；2、保温箱体；3、驱动电机；4、转接卡槽；5、螺纹升降装置；51、螺纹升降杆；511、螺纹环；52、上固定器；53、下固定座；54、辅助杆；55、升降托盘；551、搁精架；552、温度传感器加持装置；6、转接卡头；7、充电电源。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作进一步的说明。本发明的实施方式包括但不限于下列实施例。
[实施例1]
一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法，它包括以下步骤：
(1)准备工作：准备好移动电源、电刺激采精仪、平衡箱、精液冷冻保温箱，并对上述仪器进行检测，确保其能正常工作；
(2)野外采精：寻找到雄性熊猫个体，进行采精，并将精液用Test Yolk Bufferwith Gentamicin液进行稀释处理，稀释2倍，稀释时保持精液和稀释液的温度为30℃；稀释时，将稀释液逐滴缓慢添加至精液中，切勿倒置；
(3)精液冷却平衡：将步骤(2)中稀释好的精液放置于0℃的平衡箱中进行平衡；
(4)精液冷冻：将平衡好后的精液装入精液细管中，将精液细管放入精液冷冻保温箱中，在精液冷冻保温箱中完成精液在液氮面上的熏蒸和冷冻即可。
[实施例2]
一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法，它包括以下步骤：
(1)准备工作：准备好移动电源、电刺激采精仪、平衡箱、精液冷冻保温箱，并对上述仪器进行检测，确保其能正常工作；
(2)野外采精：寻找到雄性熊猫个体，进行采精，并将精液用Test Yolk Bufferwith Gentamicin液进行稀释处理，稀释5倍，稀释时保持精液和稀释液的温度为33℃；稀释时，将稀释液逐滴缓慢添加至精液中，切勿倒置；
(3)精液冷却平衡：将步骤(2)中稀释好的精液放置于5℃的平衡箱中进行平衡；
(4)精液冷冻：将平衡好后的精液装入精液细管中，将精液细管放入精液冷冻保温箱中，在精液冷冻保温箱中完成精液在液氮面上的熏蒸和冷冻即可。
[实施例3]
一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法，它包括以下步骤：
(1)准备工作：准备好移动电源、电刺激采精仪、平衡箱、精液冷冻保温箱，并对上述仪器进行检测，确保其能正常工作；
(2)野外采精：寻找到雄性熊猫个体，进行采精，并将精液用Test Yolk Bufferwith Gentamicin液进行稀释处理，稀释3.5倍，稀释时保持精液的温度为33℃、稀释液的温度为30℃；稀释时，将稀释液逐滴缓慢添加至精液中，切勿倒置；
(3)精液冷却平衡：将步骤(2)中稀释好的精液放置于2.5℃的平衡箱中进行平衡；
(4)精液冷冻：将平衡好后的精液装入精液细管中，将精液细管放入精液冷冻保温箱中，在精液冷冻保温箱中完成精液在液氮面上的熏蒸和冷冻即可。
在1-3任意一个实施例中的步骤(1)的精液冷冻保温箱包括保温箱盖1和保温箱体2，所述保温箱盖1与保温箱体2通过合页、锁扣连接；所述保温箱盖1的上端设置有驱动电机3，所述驱动电机3的转轴穿过保温箱盖1连接有转接卡槽4；所述保温箱体2内设置有螺纹升降装置5，所述螺纹升降装置5的上端设置有转接卡头6；保温箱盖1与保温箱体2闭合时，转接卡头6与转接卡槽4匹配安装。
所述的螺纹升降装置5包括螺纹升降杆51、上固定器52、下固定座53、辅助杆54及升降托盘55组成；所述螺纹升降杆51上设置有螺纹环511，所述升降托盘55与螺纹环511固定连接；所述升降托盘55上设置有辅助孔，所述辅助杆54的上端通过钢板固定在保温箱体2的箱壁上，所述辅助杆54的下端穿过升降托盘55上的辅助孔与保温箱体2内壁固定连接。
所述的升降托盘55上设置有温度传感器加持装置552，所述保温箱盖1上设置有温度传感线通孔。
将平衡好后的精液装入精液细管中，放在螺纹升降装置5上，然后在保温箱体2内装入液氮，接着将保温箱盖1和保温箱体2闭合，将驱动电机3接通电源，驱动电机3驱动螺纹升降装置5运动，可带动放置于螺纹升降装置5上的精液细管上下移动，因为距离液氮表面的高度不同，温度也不同，本发明的实施例通过调节精液细管距离液氮表面的温度来调节精液细管周围环境的温度。从而使得精液细管里的精液的冷冻质量更好。所述保温箱盖1的上端还设置有充电电源7。充电电源7的设置使得本实施例在野外也可以进行精液细管与液氮表面的距离调节，方便使用。
在1-3任意一个实施例中的步骤(2)中的大熊猫电刺激采精由以下步骤组成：
①麻醉
由兽医根据大熊猫的体质状况来选择麻醉剂和麻醉剂量。一般采用盐酸氯胺酮肌肉注射给药，首次给药剂量一般为5-10mg/kg体重。采精过程中采用吸入麻醉。
②采精体位调整
经兽医确认已经对大熊猫成功实施麻醉后，由工作人员对大熊猫进行保定。大熊猫的采精体位分仰卧和侧卧位两种。根据采精实践发现，大熊猫侧卧时采精效果好于仰卧位。
③睾丸测量
对大熊猫睾丸的硬度进行评估，用游标卡尺测量睾丸长度和宽度，并将上述信息记录在案。
④灌肠
清理大熊猫直肠内的粪便，对于位置较深而难以清理的粪便，则将近体温的肥皂水通过胶皮软管灌注到大熊猫的直肠内进行清除，以便于插入电极棒，同时也可确保电极棒与直肠粘膜接触良好。
⑤清洁
用接近体温的生理盐水冲洗大熊猫的阴茎及包皮，必要时需剪去包皮周围被毛，防止污染精液。
⑥电刺激采精
连接电刺激采精仪和电极棒，再用石蜡油润滑电极棒，然后缓慢将电极棒插入大熊猫直肠，打开电刺激采精仪，开始进行电刺激。采精过程中需密切注视大熊猫对电刺激强度的反应，适时对电极棒的深度和电极的位置进行微调。一般采用1-3个刺激系列，电刺激强度由低到高，其刺激程序如下所示：
第1系列：2V，10次；3V，10次；4V，10次；5V，10次。
第2系列：3V，10次；4V，10次；5V，10次；6V，10次。
第3系列：4V，10次；5V，10次；6V，10次。
在每个刺激系列之间，需间隔数分钟，让动物稍事休息后再刺激。一般情况下在三个系列内可采集到精液。
在1-3任意一个实施例中的步骤(3)中精液冷却平衡的过程就是将稀释后的精液逐步降温至0-5℃的过程，同时也是让冷冻保护剂充分渗透进精子内，以达到抗冻保护作用的过程。本实施例使用的办法是将烧杯中盛入与保存精液相同温度的水，然后将盛有精液的试管放入，再置于0-5℃冰箱内平衡4个小时。精子经过低温平衡后可增强其耐冻能力，减轻冷冻过程中冰晶化对精子的伤害。提高大熊猫精液的冷冻质量。
在1-3任意一个实施例中的步骤(4)中精液冷冻的具体步骤如下：
(a)标记：首先根据已稀释好的精液量计算出需制作细管冻精的数量，然后用记号笔或专用标签打印设备在细管上标注或打印采精公兽的呼名、谱系号以及采精日期，最后将细管放置于平衡精液用的冰箱内做同温处理。
(b)用0.25mL细管将精液分装并封口，封口可采用热封、封口粉或封口胶封口，本实施例优选为封口胶进行封口。
(c)将液氮装入精液冷冻保温箱内，然后将将细管放置在预冷好的搁精架551上，且搁精架551距液氮面7.5cm，放置1分钟。
(d)然后将搁精架移到距液氮面2.5cm，放置1分钟，最后将细管直接投入液氮完成冷冻过程。
经过本实施例冷冻后的精液解冻后，精液的活性为50％以上,传统未经过精液冷却平衡且直接放入液氮中进行冷却的精液的活性为30％-50％；由此说明，本实施例的野外采精及冷冻的方法大大提高了精液的冷冻质量，提高了精液解冻后的活性。
上述各实施例的冷冻方法操作简单、快捷、冻精质量高，极大的提高了大熊猫的人工繁殖的成功率。
如上所述即为本发明的实施例。本发明不局限于上述实施方式，任何人应该得知在本发明的启示下做出的结构变化，凡是与本发明具有相同或相近的技术方案，均落入本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法，其特征在于，它包括以下步骤：
(1)准备工作：准备好移动电源、电刺激采精仪、平衡箱、精液冷冻保温箱，并对上述仪器进行检测，确保其能正常工作；
(2)野外采精：寻找到雄性熊猫个体，进行采精，并将精液进行稀释保存处理；
(3)精液冷却平衡：将步骤(2)中稀释好的精液放置于0-5℃的平衡箱中进行平衡；
(4)精液冷冻：将平衡好后的精液装入精液细管中，将精液细管放入精液冷冻保温箱中，在精液冷冻保温箱中完成精液在液氮面上的熏蒸和冷冻即可。
2.根据权利要求1所述的一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法，其特征在于，所述的步骤(1)中的平衡箱为车载恒温箱或含冰块泡沫箱。
3.根据权利要求1所述的一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中精液的稀释倍数为2-5倍。
4.根据权利要求1所述的一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中精液和稀释液的温度为30-33℃；对精液进行稀释时候，将稀释液逐滴缓慢添加至精液中。
5.根据权利要求1所述的一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中的稀释液为Test Yolk Buffer with Gentamicin液。
6.根据权利要求1所述的一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法，其特征在于，所述的步骤(1)中的精液冷冻保温箱包括保温箱盖和保温箱体，所述保温箱盖与保温箱体通过合页、锁扣连接；所述保温箱盖的上端设置有驱动电机，所述驱动电机的转轴穿过保温箱盖连接有转接卡槽；所述保温箱体内设置有螺纹升降装置，所述螺纹升降装置的上端设置有转接卡头；保温箱盖与保温箱体闭合时，转接卡头与转接卡槽匹配安装。
7.根据权利要求6所述的一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法，其特征在于，所述的螺纹升降装置包括螺纹升降杆、上固定器、下固定座、辅助杆及升降托盘组成；所述螺纹升降杆上设置有螺纹环，所述升降托盘与螺纹环固定连接；所述升降托盘上设置有辅助孔，所述辅助杆的上端通过钢板固定在保温箱体的箱壁上，所述辅助杆的下端穿过升降托盘上的辅助孔与保温箱体内壁固定连接。
8.根据权利要求6所述的一种大熊猫野外采精及精液冷冻的方法，其特征在于，所述的升降托盘上设置有温度传感器加持装置，所述保温箱盖上设置有温度传感线通孔。
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