CN107034224A - 一种几丁质代谢调控基因、编码蛋白、载体、工程菌及其应用 - Google Patents

一种几丁质代谢调控基因、编码蛋白、载体、工程菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107034224A
CN107034224A CN201710318497.5A CN201710318497A CN107034224A CN 107034224 A CN107034224 A CN 107034224A CN 201710318497 A CN201710318497 A CN 201710318497A CN 107034224 A CN107034224 A CN 107034224A
Authority
CN
China
Prior art keywords
chitin
gene expression
leu
asp
ser
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710318497.5A
Other languages
English (en)
Inventor
张露
陈坚毅
王莎莎
赵丽娜
唐斌
王世贵
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hangzhou Normal University
Original Assignee
Hangzhou Normal University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hangzhou Normal University filed Critical Hangzhou Normal University
Priority to CN201710318497.5A priority Critical patent/CN107034224A/zh
Publication of CN107034224A publication Critical patent/CN107034224A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N57/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds
    • A01N57/10—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds having phosphorus-to-oxygen bonds or phosphorus-to-sulfur bonds
    • A01N57/16—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds having phosphorus-to-oxygen bonds or phosphorus-to-sulfur bonds containing heterocyclic radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01028—Alpha,alpha-trehalase (3.2.1.28)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种几丁质代谢调控基因、编码蛋白、载体、工程菌及其应用，所述基因核苷酸序列为a、SEQ.ID.NO.1所示的核苷酸序列；b、与SEQ.ID.NO.1所示的核苷酸序列互补的序列；本发明NlTRE1‑2能够调控昆虫几丁质酶及几丁质合成酶在mRNA水平上的表达以及虫体几丁质的含量，从而调控昆虫几丁质代谢，导致昆虫畸形甚至死亡。

Description

一种几丁质代谢调控基因、编码蛋白、载体、工程菌及其应用
(一)技术领域
本发明涉及一种昆虫几丁质代谢调控基因及其应用，特别涉及一种昆虫几丁质代谢调控基因NlTRE1-2(褐飞虱海藻糖酶：Trehalase)及其应用。
(二)背景技术
我国是世界上农作物有害生物发生最为严重的国家之一。农作物生物灾害发生频繁、为害严重、损失巨大。害虫一直严重威胁全球农作物的安全生产(植物保护工程建设规划(2006-2010年)，据报道全球约有植物重要害虫6000多种，其中，在我国有发生的比例达到30％，为1800多种。据估计，全球每年仅害虫危害造成的产量损失已达总产量的18％，经济损失达1000亿美元，其中仅每年用于植食性害虫防治的费用就达75.6亿美元。且目前至少有30种农作物害虫对40种杀虫剂产生了不同程度的抗药性，采用传统的单一农药控制害虫的为害将会越来越困难。由此，害虫防治的指导思想也已从“杀死害虫”转变为“调控害虫”。通过调控害虫的生长发育将成为害虫控制的重要手段，找到能够起调控作用的靶标基因对农业生产中害虫的防治具有重大意义。
海藻糖为一种非还原性双糖，其不但是昆虫血淋巴中的重要能量物质，而且由于其在昆虫的生长、发育、蜕皮变态过程中具有重要的作用，被成为昆虫的“血糖”。海藻糖酶为昆虫几丁质合成途径的第一个酶，在几丁质合成通路中有着重要的功能。同样，不仅昆虫的表皮由几丁质组成，而且气管及中肠围食膜等结构的重要组成部分也是由几丁质构成。几丁质合成酶(Chitin synthase，简称CHS)等几丁质合成通路相关基因及几丁质酶(Chitinase，简称Cht)的表达在蜕皮激素和保幼激素的调控作用下使昆虫体内的几丁质处于一个动态平衡。
(三)发明内容
本发明目的是提供一种能够调控几丁质代谢表达的NlTRE1-2基因，其mRNA表达被抑制后，能够调控几丁质合成酶及几丁质酶在mRNA水平上的表达以及整虫几丁质含量，该基因还能应用于农业生产中害虫的防治。
本发明采用的技术方案是：
本发明提供一种几丁质代谢调控基因NlTRE1-2(褐飞虱海藻糖酶：Trehalase)，所述基因核苷酸序列为下列之一：a、SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；b、与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列互补的序列；本发明也不排除对上述a或b所述序列进行一个或多个碱基的取代、缺失或修饰的核苷酸序列；或与上述a或b所述序列具有至少90％同源性的核苷酸序列。
进一步，所述的几丁质代谢调控基因NlTRE1-2核苷酸序列优选为SEQ ID NO.1(NlTRE1-2)所示。
本发明还提供一种几丁质代谢调控基因NlTRE1-2编码蛋白，所述的蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。
本发明涉及一种由所述几丁质代谢调控基因NlTRE1-2构建的重组载体，及所述重组载体构建的重组基因工程菌，优选大肠杆菌DH5α。
本发明还涉及一种所述几丁质代谢调控基因NlTRE1-2在制备几丁质代谢酶活性抑制剂中的应用，所述几丁质代谢酶为几丁质酶或几丁质合成酶。
本发明还涉及一种所述几丁质代谢调控基因NlTRE1-2在制备防治害虫药物中的应用，所述药物为防治褐飞虱(Nilaparvata lugens)药物，具体所述的应用为：利用RNAi的方法抑制NlTRE1-2的表达(以SEQ ID NO.1所示序列为模板，合成dsRNA，显微注射褐飞虱)，导致昆虫出现一定的死亡率和畸形率，畸形形态主要包括蜕皮困难、蜕皮困难且翅型异常以及翅型异常三种。同时NlTRE1-2的表达被抑制后还会导致褐飞虱体内几丁质合成酶以及几丁质酶在mRNA水平上的表达下降，此外还伴随着整虫几丁质含量的降低。
本发明利用同源克隆和RACE技术获得褐飞虱NlTRE1-2中间序列及全长cDNA序列，具体方法如下：提取褐飞虱RNA，反转录合成cDNA，设计引物，引物序列如下：
NlTRE1-2-F：5’-ATGTCGATTA GTAATTTAGT-3’
NlTRE1-2-R：5’-GCGAATCAACTGA-3’
利用上述引物进行常规聚合酶链式反应(PCR)。将PCR产物与克隆载体(PMD18-T)连接转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，然后筛选阳性重组子，进行测序，得到长度为1083bp的NLTRE1-2序列。
该NLTRE1-2序列SEQ ID NO.1信息如下：
长度：1083bp
类型：核酸
链型：双链
来源：褐飞虱
本发明所述几丁质代谢调控基因NlTRE1-2编码蛋白质的氨基酸序列SEQ.ID.NO.2信息如下：
长度：600
类型：氨基酸
来源：褐飞虱
NlTRE1-2序列SEQ ID NO.1起始密码子和终止密码子用下划线标记。
与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了一种几丁质代谢调控基因NlTRE1-2，其表达被抑制后，能够调控几丁质合成酶及几丁质酶在mRNA水平上的表达；对褐飞虱进行NlTRE1-2干扰后，NlTRE1-2的表达被抑制，褐飞虱表现出一定的畸形率(蜕皮困难、蜕皮失败且翅型异常、翅型异常)和死亡率，并且整体几丁质含量下降，该基因还能应用于农业生产中害虫的防治。
(四)附图说明
图1 dsTRE1-2注射后被干扰基因相对表达量，图中数据为平均数±标准差，对照组为dsGFP注射组；*代表P<0.05，差异显著，**代表P<0.01，差异极显著，下同；
图2 dsTRE1-2注射后褐飞虱的变态发育情况：A表示dsTRE1-2注射后飞虱的畸形形态，B表示dsTRE1-2注射后褐飞虱的死亡率和畸形率，C表示dsTRE1-2注射后褐飞虱三种畸形百分比；
图3 dsTRE1-2注射后翅基和表皮内几丁质合成酶的相对表达情况，A：NlCHS1基因分别在翅基和表皮中表达量；B：NlCHS1a基因分别在翅基和表皮中表达量；C：NlCHS1b基因分别在翅基和表皮中表达量；
图4 dsTRE1-2注射后几丁质酶的相对表达情况：10个几丁质酶基因的相对表达量(A：NlCht1基因分别在翅基和表皮中表达量；B：NlCht2基因分别在翅基和表皮中表达量；C：NlCht3基因分别在翅基和表皮中表达量；D：NlCht4基因分别在翅基和表皮中表达量；E：NlCht5基因分别在翅基和表皮中表达量；F：NlCht6基因分别在翅基和表皮中表达量；G：NlCht7基因分别在翅基和表皮中表达量；H：NlCht8基因分别在翅基和表皮中表达量；I：NlCht9基因分别在翅基和表皮中表达量；J：NlCht10基因分别在翅基和表皮中表达量；。
图5 dsTRE1-2注射后整体几丁质含量变化。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
褐飞虱是水稻上的重要害虫，全世界各地都有分布，该虫具有繁殖速度快、生命周期短、内禀增长率高、环境适应性强等特点，在外界环境适宜时极易暴发成灾，给水稻生产造成巨大的损失。在下述实施例中以褐飞虱为例对本发明进行了详细说明。
氨苄LB固体培养基、LB固体培养基均为公知常识。
实施例1：昆虫几丁质代谢相关基因NlTRE1-2的获取
1.RNA提取：
利用Trizol法提取室内饲养的褐飞虱(饲养条件：温度25±1℃，湿度70％，光照比16L：8D)的RNA，作为模板RNA。
cDNA单链合成：取1μg模板RNA，利用AMV反转录试剂盒(Takara，大连宝生)合成单链cDNA，作为扩增中间片段序列的模板。
2.NlTPS基因中间片段序列扩增
根据褐飞虱cDNA序列设计引物，引物序列如下：
NlTRE1-2-F：5’-AGATGAAGGCATGTGGTTCG-3’
NlTRE1-2-R：5’-CATCGATTCGCCAACTGGTAAGC-3’
利用上述引物进行PCR扩增，体系如下：10×Buffer 5μL，10mmoL/L dNTP 2μL，PCR引物各25pmol，cDNA模板1μL(约200ng)，Taq酶2U，加灭菌双蒸水至50μL。PCR反应步骤为：95℃预变性5min；95℃变性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸90sec，循环30次；最后72℃延伸10min。1％琼脂糖凝胶电泳，利用胶回收试剂盒(TransGen，Beijing)回收片段，将所得片段连入PMD18-T载体(Takara)，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞(TransGen，Beijing)，然后利用氨苄LB固体培养基筛选阳性重组子，并进行PCR鉴定，然后进行测序，获得1803bp的几丁质代谢调控基因NlTRE1-2(核苷酸序列为SEQ ID NO.1，氨基酸序列为SEQ ID NO.2)。
实施例2：NlTPS在害虫防治中的应用
1.dsRNA的合成：以实施例1方法进行TRE1-2和GFP(绿色荧光蛋白：GreenFluorescent Protein)中间片段的扩增、胶回收、连接、转化，并进行PCR鉴定，然后进行测序，将测序正确转化子转到含Amp+(100μg/ml)的LB液体培养基中，250rpm、37℃震荡培养过夜，利用质粒抽提试剂盒进行质粒的抽提。然后利用T7Express RNAi System试剂盒(Promega)合成dsTRE1-2以及dsGFP，具体操作参照T7RiboMAX Express RNAiSystem试剂盒说明书，所用的引物序列如下：
DSNLTRE1-2-F：5-AGATGAAGGCATGTGGTTCG-3
DSNLTRE1-2-R：5-CATCGATTCGCCAACTGGTAAGC-3
DSNLGFP-F：5-AAGGGCGAGGAGCTGTTCACCG-3
DSNLGFP-R：5-CAGCAGGACCATGTGATCGCGC-3
dsTRE1-2合成的模板为SEQ ID NO.1所示的序列，dsGFP合成的模板为公知序列。
2.dsRNA的显微注射：将步骤1合成的dsRNA(即dsTRE1-2和dsGFP)用适量的DEPC水溶解，注射前首先用标准毛细管定量注射器每次泵出的dsRNA的体积，并通过调整氮气压来调整dsRNA的体积使其符合注射量。将5龄第一天活体褐飞虱用CO2麻醉后放至注射盘上，使其腹部朝上，注射腹面口器，注射量为200ng/头，注射后将其放至装有新鲜水稻的试管中，于注射后48h取材。
3.dsRNA注射后被干扰基因的相对定量表达情况
对步骤2取材的褐飞虱组织进行液氮研磨，抽提RNA，取总量1μg的RNA进行cDNA单链合成，取反转录产物1μl用于qRT-PCR的模板。qRT-PCR反应体系为20μl，具体如下：正、反向引物各1μl，cDNA1μl，SYBR Premix ExTaq(Takara)10μl，灭菌超纯水补至20μl，引物序列如下：
RTNLTRE1-2-F：5’-GATCGCACGGATGTTTA-3’
RTNLTRE1-2-R：5’-AATGGCGTTCAAGTCAA-3’
采用方法和STATISTICA 6.0中的ANOVA进行数据分析，结果如图1所示。
4.dsRNA注射后褐飞虱的变态发育情况：
利用超微量显微注射技术分别对5龄褐飞虱若虫进行dsTRE1-2注射，dsGFP注射作为对照，注射方法同步骤2，于注射后48h后观察褐飞虱的畸形形态，并统计畸形率和死亡率，结果如图2所示。
5.几丁质合成酶以及几丁质酶基因的相对定量表达
利用步骤3方法对褐飞虱几丁质合成酶以及几丁质酶基因进行qRT-PCR检测，引物序列如下：
18SF：5’-CGCTACTACCGATTGAA-3’
18SR：5’-GGAAACCTTGTTACGACTT-3’
CHS1F：5’-CCGCAAACGATTCCTACAGA-3’
CHS1R：5’-AGGTCCTTGACGCTCATTCC-3’
CHS1aF：5’-TGTTCTTGCTACAACTCAATAAA-3’
CHS1aR：5’-ACACCAATCCGATAGGCTC-3’
CHS1bF：5’-GCTGTCTTTGCTTTCTTCAT-3’
CHS1bR：5’-ACACCAATCCGATAGGCTC-3’
Cht1F：5’-AGGTGGTTAGGGACGAGGAG-3’
Cht1R：5’-TGCGCTTGACATAGTTGGACT-3’
Cht2F：5’-GCAGATTTCTGGACAGGGAA-3’
Cht2R：5’-TGACGCACAAGCGGGAAG-3’
Cht3F：5’-CTACACCTCTGGCTAAACTCGG-3’
Cht3R：5’-AACTTGTCCTTGCGGCTGAT-3’
Cht4F：5’-TTGAGGAGGTTCACGGGTCT-3’
Cht4R：5’-CCTTACTGGAAACGAGGTTGG-3’
Cht5F：5’-AAAGCGTTCGTGATGAAATAGC-3’
Cht5R：5’-GATCCTTTGCCTCAATCCAAT-3’
Cht6F：5’-GCTGGTAAGGAGATGCTATTCG-3’
Cht6R：5’-GTGGTTCTAAGGCTGGCTGTC-3’
Cht7F：5’-CTACTCTGCCATCCCATTCCT-3’
Cht7R：5’-GTCTGGGTTTCTTCACTTCCTG-3’
Cht8F：5’-GAACAAAGTGCAAACTCAGTCC-3’
Cht8R：5’-CACCTTCTGTGGCTTCTGG-3’
Cht9F：5’-GTGCGGTATTGGTTGAAGAGG-3’
Cht9R：5’-GGTATAACGTGATTCCGAGCC-3’
Cht10F：5-CAAGCCAATACCCAACAAAC-3’
Cht10R：5’-ACAGCAAATCCATAGAGCACA-3’
采用方法和STATISTICA 6.0中的ANOVA进行数据分析，结果如图3和图4所示。
图1的结果表明，TRE1-2在dsTRE1-2注射组翅基和表皮表达水平都有明显降低，保证了dsRNA干扰的有效性。图2的结果表明，NlTRE1-2的表达被抑制后，褐飞虱表现出一定的畸形率和死亡率。对褐飞虱进行NlTRE1-2干扰后出现3种主要畸形：蜕皮困难、蜕皮失败且翅型异常、翅型异常。翅型异常在dsTRE1-2注射组的百分比为49.28％，蜕皮失败且翅型异常的百分比为7.74％，蜕皮困难的百分比为42.98％。TRE1-2表达被抑制后所致的畸形率为24.36％，死亡率为14.16％，均显著高于对照组。图3和图4的结果表明，dsTRE1-2注射48后翅基和表皮CHS1及其两个可变剪接体CHS1a和CHS1b的表达均出现异常，呈上升趋势，10个几丁质酶的表达也出现异常，Cht2、Cht4、Cht5、Cht7、Cht9在翅基和表皮中的表达量均增加。dsTRE1-2注射48h后Cht8于翅基和表皮内在mRNA水平的表达均下降。同时在dsTRE1-2注射后，整虫几丁质含量显著下降。NlTRE1-2基因能够调控昆虫几丁质代谢，该基因可作为靶标基因应用于农业生产中的害虫防治。
SEQUENCE LISTING
<110> 杭州师范大学
<120> 一种几丁质代谢调控基因、编码蛋白、载体、工程菌及其应用
<130>
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1803
<212> DNA
<213> unknown
<220>
<223> 人工序列
<400> 1
atgtcgatta gtaatttagt cgcttcggtt tctgaatatg tccaatgtgc cattcacaga 60
ttgaaaattg tgtggactga gagttcccag cataacatat actgcgaagg agacttactg 120
aatgacgtgc aactcggcca gttgtacgag gattcaaaga cttttgttga tctgaaacta 180
agatatcctg aggacaaagt catcgaaaaa tatgcggcgt tcaagaagca gcactcgggc 240
aatgtgccgg tggacgcact gcgtcagttt gtggcggaca acttcgaggc agtggacgag 300
ttggagccgt ggatgccacc cgatctcagc gataggccgg ccattgtgga cagggtgcgc 360
gaccccgtct acaagcagtg gatgatcgac ctcaacgacg tgtggcgggt gctcgcgagg 420
cgggtcaagg atgatgtctt cgacaaccct cggctctatt cgttcatacc ggtgcctaat 480
ggatttgtgg tgccaggcgg tcgcttccgc gagttgtact actgggacac gtactggata 540
gtgaacggcc tgctgctgtg cgacatgcac agcacggcgc gtggtgtcct cgagaacatg 600
gtctcactgg tcaagcggtt cggcttcgtg cccaacggaa gtcgcaagta ctacctgaat 660
cgatcgcagc ccccgcttct catccaaatg gttgacagct atctcaaaat gactggtgac 720
tggacgtttg taagggaaaa cattaagtat ttggagagtg agttcatgta ctggatgagg 780
ttcaagatgg tctcggtgcg tagtaaaaat ggaaatacat atcaactggc tagatacttc 840
tgttattcca gaagtccgag acccgaatca tacagggagg attatatcag tgcaagcgta 900
ttcgaggacg aagaacagag aaccgacttc tacataaaaa tcaaatcggc tgctgagtct 960
ggcatggact ttagttcgag atggtttgtc aaggatggac aaaacaaagg aaatctgtca 1020
gacatcgcag cacctcaaat aattccagtt gatctgaatg cattcctaca agccaatgca 1080
aaaattttga gcaattggtt cttggaaatg ggaaactatg ccaaggcaaa aacgtacgct 1140
gaccacgcag tagcactaca tgatgcaatc aaggaggtgt tatggcatga ggatgtgggc 1200
acttggctgg actacgacat tgtttcgaaa aagcggcgaa actacttcta catttcgaat 1260
ttgactccga tttggacggg cagctatgac tcgagttgga cccagcaaca gttgtcggac 1320
cgtgtgctcg gttacatcaa gagtacgggc atcacacagt tcgttggtgg tgtgccaata 1380
tcactagaac aatcgggtga acagtgggac ttccccaacg catgggcgcc ctaccaggcg 1440
atgttcgttc aaggcctgga ccgcatcggc acagtcgagg cccgcaacaa ggccttcgag 1500
ttggccgacc tctggatcaa gtccaactac aagggcttcc aggagacgca ggccatgttt 1560
gaaaagtacg atgttctaag gccgggcaca aacggaggtg gaggtgaata cgtgtctcaa 1620
acgggattcg gatggacgaa cggagtcgtg tttgagttct tcgatcgatg gggcacccaa 1680
ctcaaatcca gtcaaaccaa ggacgatgac atattcttga atggtcagca caatactctt 1740
ttagattcct attataatat tggctcgcat tgcatgagta aacgagcttt gcgaatcaac 1800
tga 1803
<210> 2
<211> 600
<212> PRT
<213> unknown
<220>
<223> 人工序列
<400> 2
Met Ser Ile Ser Asn Leu Val Ala Ser Val Ser Glu Tyr Val Gln Cys
1 5 10 15
Ala Ile His Arg Leu Lys Ile Val Trp Thr Glu Ser Ser Gln His Asn
20 25 30
Ile Tyr Cys Glu Gly Asp Leu Leu Asn Asp Val Gln Leu Gly Gln Leu
35 40 45
Tyr Glu Asp Ser Lys Thr Phe Val Asp Leu Lys Leu Arg Tyr Pro Glu
50 55 60
Asp Lys Val Ile Glu Lys Tyr Ala Ala Phe Lys Lys Gln His Ser Gly
65 70 75 80
Asn Val Pro Val Asp Ala Leu Arg Gln Phe Val Ala Asp Asn Phe Glu
85 90 95
Ala Val Asp Glu Leu Glu Pro Trp Met Pro Pro Asp Leu Ser Asp Arg
100 105 110
Pro Ala Ile Val Asp Arg Val Arg Asp Pro Val Tyr Lys Gln Trp Met
115 120 125
Ile Asp Leu Asn Asp Val Trp Arg Val Leu Ala Arg Arg Val Lys Asp
130 135 140
Asp Val Phe Asp Asn Pro Arg Leu Tyr Ser Phe Ile Pro Val Pro Asn
145 150 155 160
Gly Phe Val Val Pro Gly Gly Arg Phe Arg Glu Leu Tyr Tyr Trp Asp
165 170 175
Thr Tyr Trp Ile Val Asn Gly Leu Leu Leu Cys Asp Met His Ser Thr
180 185 190
Ala Arg Gly Val Leu Glu Asn Met Val Ser Leu Val Lys Arg Phe Gly
195 200 205
Phe Val Pro Asn Gly Ser Arg Lys Tyr Tyr Leu Asn Arg Ser Gln Pro
210 215 220
Pro Leu Leu Ile Gln Met Val Asp Ser Tyr Leu Lys Met Thr Gly Asp
225 230 235 240
Trp Thr Phe Val Arg Glu Asn Ile Lys Tyr Leu Glu Ser Glu Phe Met
245 250 255
Tyr Trp Met Arg Phe Lys Met Val Ser Val Arg Ser Lys Asn Gly Asn
260 265 270
Thr Tyr Gln Leu Ala Arg Tyr Phe Cys Tyr Ser Arg Ser Pro Arg Pro
275 280 285
Glu Ser Tyr Arg Glu Asp Tyr Ile Ser Ala Ser Val Phe Glu Asp Glu
290 295 300
Glu Gln Arg Thr Asp Phe Tyr Ile Lys Ile Lys Ser Ala Ala Glu Ser
305 310 315 320
Gly Met Asp Phe Ser Ser Arg Trp Phe Val Lys Asp Gly Gln Asn Lys
325 330 335
Gly Asn Leu Ser Asp Ile Ala Ala Pro Gln Ile Ile Pro Val Asp Leu
340 345 350
Asn Ala Phe Leu Gln Ala Asn Ala Lys Ile Leu Ser Asn Trp Phe Leu
355 360 365
Glu Met Gly Asn Tyr Ala Lys Ala Lys Thr Tyr Ala Asp His Ala Val
370 375 380
Ala Leu His Asp Ala Ile Lys Glu Val Leu Trp His Glu Asp Val Gly
385 390 395 400
Thr Trp Leu Asp Tyr Asp Ile Val Ser Lys Lys Arg Arg Asn Tyr Phe
405 410 415
Tyr Ile Ser Asn Leu Thr Pro Ile Trp Thr Gly Ser Tyr Asp Ser Ser
420 425 430
Trp Thr Gln Gln Gln Leu Ser Asp Arg Val Leu Gly Tyr Ile Lys Ser
435 440 445
Thr Gly Ile Thr Gln Phe Val Gly Gly Val Pro Ile Ser Leu Glu Gln
450 455 460
Ser Gly Glu Gln Trp Asp Phe Pro Asn Ala Trp Ala Pro Tyr Gln Ala
465 470 475 480
Met Phe Val Gln Gly Leu Asp Arg Ile Gly Thr Val Glu Ala Arg Asn
485 490 495
Lys Ala Phe Glu Leu Ala Asp Leu Trp Ile Lys Ser Asn Tyr Lys Gly
500 505 510
Phe Gln Glu Thr Gln Ala Met Phe Glu Lys Tyr Asp Val Leu Arg Pro
515 520 525
Gly Thr Asn Gly Gly Gly Gly Glu Tyr Val Ser Gln Thr Gly Phe Gly
530 535 540
Trp Thr Asn Gly Val Val Phe Glu Phe Phe Asp Arg Trp Gly Thr Gln
545 550 555 560
Leu Lys Ser Ser Gln Thr Lys Asp Asp Asp Ile Phe Leu Asn Gly Gln
565 570 575
His Asn Thr Leu Leu Asp Ser Tyr Tyr Asn Ile Gly Ser His Cys Met
580 585 590
Ser Lys Arg Ala Leu Arg Ile Asn
595 600

Claims (10)

1.一种几丁质代谢调控基因，其特征在于所述基因核苷酸序列为下列之一：a、SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列；b、与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列互补的序列。
2.如权利要求1所述的几丁质代谢调控基因，其特征在于所述基因核苷酸序列为SEQID NO.1所示。
3.一种权利要求1所述几丁质代谢调控基因编码蛋白。
4.如权利要求3所述几丁质代谢调控基因编码蛋白，其特征在于所述蛋白氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。
5.一种由权利要求1所述几丁质代谢调控基因构建的重组载体。
6.一种由权利要求5所述重组载体构建的重组基因工程菌。
7.一种权利要求1所述几丁质代谢调控基因在制备几丁质代谢酶活性抑制剂中的应用。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于所述几丁质代谢酶为几丁质酶或几丁质合成酶。
9.一种权利要求1所述几丁质代谢调控基因在制备防治害虫药物中的应用。
10.如权利要求9所述应用，其特征在于所述药物为防治褐飞虱药物。
CN201710318497.5A 2017-05-08 2017-05-08 一种几丁质代谢调控基因、编码蛋白、载体、工程菌及其应用 Pending CN107034224A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710318497.5A CN107034224A (zh) 2017-05-08 2017-05-08 一种几丁质代谢调控基因、编码蛋白、载体、工程菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710318497.5A CN107034224A (zh) 2017-05-08 2017-05-08 一种几丁质代谢调控基因、编码蛋白、载体、工程菌及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107034224A true CN107034224A (zh) 2017-08-11

Family

ID=59538377

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710318497.5A Pending CN107034224A (zh) 2017-05-08 2017-05-08 一种几丁质代谢调控基因、编码蛋白、载体、工程菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107034224A (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105925592A (zh) * 2016-05-11 2016-09-07 杭州师范大学 一种几丁质代谢调控基因NlTPS、编码蛋白、载体、工程菌及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105925592A (zh) * 2016-05-11 2016-09-07 杭州师范大学 一种几丁质代谢调控基因NlTPS、编码蛋白、载体、工程菌及其应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FJ790319.1: "Nilaparvata lugens soluble trehalase (Tre1)", 《GENBANK》 *
ZHAO L等: "Functional characterization of three trehalase genes regulating the chitin metabolism pathway in rice brown planthopper using RNA interference", 《SCIENTIFIC REPORTS》 *
唐斌等: "昆虫海藻糖及其合成酶基因的特性与功能", 《应用昆虫学报》 *
杨萌萌: "海藻糖酶及其抑制剂（Validamvcin）对褐飞虱海藻糖和几丁质代谢的调控研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110066798B (zh) 褐飞虱NlInR基因作为靶点在制备防治褐飞虱药物中的应用
CN105874083A (zh) 微肽及其用于调节基因表达的用途
CN110791523A (zh) 一种棉花抗旱相关基因GhRCHY1及其应用
CN106754948B (zh) 褐飞虱NlMLP基因、编码蛋白及其应用
US20100169991A1 (en) Biopesticide comprising insect belonging to family coccinellidae
CN101698848B (zh) 金鱼自主转座子基因gfTol2、该基因编码的转座酶及该基因的用途
CN111944824B (zh) 美国白蛾速激肽受体基因及dsRNA和防治美国白蛾中应用
CN114478735B (zh) 蚜虫的高致死dsRNA及其在蚜虫防治中的应用
CN104593391B (zh) 褐飞虱生存及生长发育相关的NlPIK3R1基因、编码蛋白及其应用
CN106220719B (zh) 一种青蒿bHLH类转录因子编码序列及克隆方法与应用
WO2019219015A1 (zh) 对蚜虫高效致死的RNAi靶标基因及其应用
CN105925592B (zh) 一种几丁质代谢调控基因NlTPS、编码蛋白、载体、工程菌及其应用
CN104861054B (zh) 一种褐虱蛋白翻译延伸因子NlEF1γ、编码蛋白及其应用
CN106047895B (zh) 一种青蒿bZIP类转录因子编码序列及克隆方法与应用
CN105685092B (zh) 一种几丁质合成抑制类杀虫剂及其制备方法及应用
CN107034224A (zh) 一种几丁质代谢调控基因、编码蛋白、载体、工程菌及其应用
CN110295169A (zh) 一种miRNA及其用于杀灭褐飞虱的应用
CN111004803A (zh) 褐飞虱NlStit基因作为靶点在制备防治褐飞虱药物中的应用
CN106518996B (zh) 来源于禾谷孢囊线虫的Ha-18764蛋白及其编码基因和应用
CN106047897B (zh) 一种青蒿bHLH类转录因子编码序列及克隆方法与应用
CN112695045B (zh) 一种鳞翅目昆虫Hpx12基因及应用
Wang et al. Molecular characterization, expression analysis and RNAi knock-down of elongation factor 1α and 1γ from Nilaparvata lugens and its yeast-like symbiont
CN109456977B (zh) 舞毒蛾BURS基因、其编码蛋白及其dsRNA在害虫防治中的应用
CN101225385B (zh) 茶尺蠖卵黄蛋白原基因vtg及其应用
US11937604B2 (en) PIGM gene related to nilaparvata lugens (StÅl) reproduction and application thereof

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170811