CN106963950A - 用于治疗肿瘤的联合用药物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于治疗肿瘤的联合用药物，具体涉及包含抗EGFR抗体和拓扑异构酶抑制剂的联合用药物及其用途。本发明提供的联合用药物显示出更好的协同增效作用，具有更强的抑制肿瘤的效果，为肿瘤的治疗提供了新的途径。

Description

用于治疗肿瘤的联合用药物
技术领域
本发明涉及用于治疗肿瘤的联合用药物，具体涉及包含抗EGFR抗体和拓扑异构酶抑制剂的联合用药物。
背景技术
表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR，也称为HER1,c－ErbB1)是表皮生长因子家族的细胞表面受体，是由1186个氨基酸残基构成，分子量为170kD的一种跨膜糖蛋白(Jorissen RN,Walker F,Pouliot N,et al.Epidermal growth factorreceptor：mechanisms of activation and signaling.Exp Cell Res,2003；284:31-53)。EGFR属于Ⅰ型酪氨酸激酶受体ErbB亚族(ErbB 1-4)，具有酪氨酸激酶的活性。EGFR稳定的表达于许多上皮组织，包括皮肤和毛囊。表皮生长因子受体异常表达或因受体突变而活化会导致癌变。有很多实体瘤发现高表达表皮生长因子受体，如结直肠癌、头颈部癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、膀胱癌和食管癌等(Olayioye MA,Neve RM,Lane HA,et al.The EerbBSignaling network:receptor heterodimerzation in development and cancer.TheEMBO J,2000；19：3159-3167)。转化生长因子α和表皮生长因子等生长因子是表皮生长因子受体的内源性配体。这些配体与表皮生长因子受体结合，激活受体胞内酪氨酸蛋白激酶的活性，启动下游多条信号转导途径，从而调节正常细胞的生长和分化，增加肿瘤细胞的侵袭力、促进血管生成、抑制肿瘤细胞的凋亡(Ciardiello F,Tortora G.A novel approach inthe treatment of cancer:targeting the epidermal growth factor receptor.ClinCancer Res,2001；7:2958-2970)。
表皮生长因子受体在肿瘤中的高度表达及其在肿瘤细胞生长、分化中起重要作用的这些特点，使表皮生长因子受体成为具有良好前景的肿瘤治疗靶点。人鼠嵌合抗体C225抗体(爱必妥，Erbitux或Cetuximab，ImClone(现在Eli Lilly)公司)可阻断EGF和TGFa等配体与表皮生长因子受体的结合，抑制其磷酸化和下游信号传导，从而抑制肿瘤细胞的生长，诱导凋亡，减少基质金属蛋白酶和血管上皮生长因子的产生。2004年美国FDA批准爱必妥治疗结直肠癌，2006批准治疗头颈部癌，目前有更多临床试验用于其它肿瘤适应症。
为了提高对难治性肿瘤的疗效，人们尝试将抑制细胞增殖的抗表皮生长因子或其受体的抑制剂与不同的癌症治疗方法(例如化学疗法和放射疗法)结合。例如，爱必妥已被批准与伊立替康联合用药以治疗表达表皮生长因子受体的、对基于伊立替康的化疗无效或不耐受的转移结直肠癌患者。
当不同的抗EGFR抗体与拓扑异构酶抑制剂(例如伊立替康)联合应用时，由于抗体的作用位点、亲和性和免疫原性等各方面的明显不同，可能会产生不同的协同增效作用。本领域一直致力于寻找具有更好的协同增效作用的联合用药物，以进一步提高癌症特别是难治性癌症的治疗效果。
发明内容
本发明的发明人出人意料地发现了具有更好的协同增效作用的联合用药物，由此完成了本发明。
本发明的第一方面涉及联合用药物，其包含治疗有效量的抗EGFR抗体或其抗原结合部分，以及治疗有效量的拓扑异构酶抑制剂，其中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合部分的重链可变区CDR1的序列如SEQ ID NO：3所示，CDR2的序列如SEQ ID NO：4的示，CDR3的序列如SEQ ID NO：5所示，其轻链可变区CDR1序列如SEQ ID NO：6所示，CDR2的序列如SEQ IDNO：7所示，CDR3的序列如SEQ ID NO：8所示。
在本发明的一个实施方案中，其中所述的抗EGFR抗体或其抗原结合部分的重链可变区的序列如SEQ ID NO：1所示，其轻链可变区的序列如SEQ ID NO：2所示。
在本发明的一个实施方案中，其中所述的抗EGFR抗体或其抗原结合部分选自单链抗体(scFv)、嵌合抗体、双抗体、scFv-Fc二价分子、dAb和互补决定区(CDR)片段、Fab片段、Fab'片段、Fv或F(ab')2片段。
在本发明的一个实施方案中，其中所述的抗EGFR抗体或其抗原结合部分还包含人IgG1重链恒定区和人κ轻链恒定区。
在本发明的一个实施方案中，其中所述人重链恒定区IgG1的序列如SEQ ID NO:9所示。
在本发明的一个实施方案中，其中所述人κ轻链恒定区的序列如SEQ ID NO:10所示。
在本发明的一个具体实施方案中，其中所述的抗EGFR抗体为抗体JMT101。
在本发明的一个实施方案中，其中所述的拓扑异构酶抑制剂选自喜树碱或其衍生物(例如伊立替康、拓扑替康、10-羟基喜树碱等)、依托泊苷、以及它们的药学上可接受的盐、溶剂合物和前药。
在本发明的一个优选实施方案中，其中所述的拓扑异构酶抑制剂选自伊立替康、其药学上可接受的盐(例如盐酸伊立替康)及溶剂合物。
在本发明的一个具体实施方案中，其中所述的拓扑异构酶抑制剂为盐酸伊立替康。
在本发明的一个具体实施方案中，所述联合用药物含有抗体JMT101和盐酸伊立替康。
在本发明的一个实施方案中，其还含有药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明的第二方面涉及抗EGFR抗体或其抗原结合部分和拓扑异构酶抑制剂在制备治疗由于表皮生长因子过量表达或表皮生长因子受体过量表达而引起的疾病的联合用药物的用途，其中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合部分的重链可变区CDR1的序列如SEQ IDNO：3所示，CDR2的序列如SEQ ID NO：4的示，CDR3的序列如SEQ ID NO：5所示，其轻链可变区CDR1序列如SEQ ID NO：6所示，CDR2的序列如SEQ ID NO：7所示，CDR3的序列如SEQ ID NO：8所示。
在本发明的一个实施方案中，其中所述的由于表皮生长因子过量表达或表皮生长因子受体过量表达而引起的疾病是指肿瘤。
在本发明的一个具体实施方案中，其中所述的肿瘤包括但不限于结直肠癌、鼻咽癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、阴道癌、膀胱癌、食管癌、口腔癌、皮肤癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肾细胞癌、胶质母细胞瘤、头颈部肿瘤和脑的肿瘤。
在本发明的一个实施方案中，其中所述的抗EGFR抗体或其抗原结合部分的重链可变区的序列如SEQ ID NO：1所示，其轻链可变区的序列如SEQ ID NO：2所示。
在本发明的一个实施方案中，其中所述的抗EGFR抗体或其抗原结合部分选自单链抗体(scFv)、嵌合抗体、双抗体、scFv-Fc二价分子、dAb和互补决定区(CDR)片段、Fab片段、Fab'片段、Fv或F(ab')2片段。
在本发明的一个实施方案中，其中所述的抗EGFR抗体或其抗原结合部分还包含人IgG1重链恒定区和人κ轻链恒定区。
在本发明的一个实施方案中，其中所述人重链恒定区IgG1的序列如SEQ ID NO:9所示。
在本发明的一个实施方案中，其中所述人κ轻链恒定区的序列如SEQ ID NO:10所示。
在本发明的一个具体实施方案中，其中所述的抗EGFR抗体为抗体JMT101。
在本发明的一个实施方案中，其中所述的拓扑异构酶抑制剂选自喜树碱或其衍生物(例如伊立替康、拓扑替康、10-羟基喜树碱等)、依托泊苷、以及它们的药学上可接受的盐、溶剂合物和前药。
在本发明的一个优选实施方案中，其中所述的拓扑异构酶抑制剂选自伊立替康、其药学上可接受的盐(例如盐酸伊立替康)及溶剂合物。
在本发明的一个具体实施方案中，其中所述的拓扑异构酶抑制剂为盐酸伊立替康。
在本发明的一个具体实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合部分和拓扑异构酶抑制剂为抗体JMT101和盐酸伊立替康。
本发明还涉及治疗由于表皮生长因子过量表达或表皮生长因子受体过量表达而引起的疾病的方法，所述方法包括给予有需要的受试者治疗有效量的抗EGFR抗体或其抗原结合部分和拓扑异构酶抑制剂的步骤，其中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合部分的重链可变区CDR1的序列如SEQ ID NO：3所示，CDR2的序列如SEQ ID NO：4的示，CDR3的序列如SEQID NO：5所示，其轻链可变区CDR1序列如SEQ ID NO：6所示，CDR2的序列如SEQ ID NO：7所示，CDR3的序列如SEQ ID NO：8所示。
在本发明的一个实施方案中，其中所述的由于表皮生长因子过量表达或表皮生长因子受体过量表达而引起的疾病是指肿瘤。
在本发明的一个具体实施方案中，其中所述的肿瘤包括但不限于结直肠癌、鼻咽癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、阴道癌、膀胱癌、食管癌、口腔癌、皮肤癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肾细胞癌、胶质母细胞瘤、头颈部肿瘤和脑的肿瘤。
在本发明的一个实施方案中，其中所述的抗EGFR抗体或其抗原结合部分的重链可变区的序列如SEQ ID NO：1所示，其轻链可变区的序列如SEQ ID NO：2所示。
在本发明的一个实施方案中，其中所述的抗EGFR抗体或其抗原结合部分选自单链抗体(scFv)、嵌合抗体、双抗体、scFv-Fc二价分子、dAb和互补决定区(CDR)片段、Fab片段、Fab'片段、Fv或F(ab')2片段。
在本发明的一个实施方案中，其中所述的抗EGFR抗体或其抗原结合部分还包含人IgG1重链恒定区和人κ轻链恒定区。
在本发明的一个实施方案中，其中所述人重链恒定区IgG1的序列如SEQ ID NO:9所示。
在本发明的一个实施方案中，其中所述人κ轻链恒定区的序列如SEQ ID NO:10所示。
在本发明的一个具体实施方案中，其中所述的抗EGFR抗体为抗体JMT101。
在本发明的一个实施方案中，其中所述的拓扑异构酶抑制剂选自喜树碱或其衍生物(例如伊立替康、拓扑替康、10-羟基喜树碱等)、依托泊苷、以及它们的药学上可接受的盐、溶剂合物和前药。
在本发明的一个优选实施方案中，其中所述的拓扑异构酶抑制剂选自伊立替康、其药学上可接受的盐(例如盐酸伊立替康)及溶剂合物。
在本发明的一个具体实施方案中，其中所述的拓扑异构酶抑制剂为盐酸伊立替康。
在本发明的一个具体实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合部分和拓扑异构酶抑制剂为抗体JMT101和盐酸伊立替康。
以下对本发明做进一步描述。
在本发明中，“抗体”是指通常由两对相同的多肽链(每对具有一条“轻”(L)链和一条“重”(H)链)组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为κ和λ轻链。重链可分类为μ、δ、γ、α或ε，并且分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“J”区连接，重链还包含大约3个或更多个氨基酸的“D”区。各重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区由3个结构域(CH1、CH2和CH3)组成。各轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)的结合。VH和VL区还可被细分为具有高变性的区域(称为互补决定区(CDR))，其间散布有较保守的称为构架区(FR)的区域。各VH和VL由按下列顺序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4个FR组成。各重链/轻链对的可变区(VH和VL)分别形成抗体结合部位。氨基酸至各区域或结构域的分配遵循Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.(1987and1991))，或Chothia&Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917；Chothia等人(1989)Nature 342:878-883的定义。术语“抗体”不受任何特定的产生抗体的方法限制。例如，其包括，特别地，重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4亚型)，IgA1，IgA2，IgD，IgE或IgM抗体。
在本发明中，抗体的“抗原结合部分”是指全长抗体的一个或多个部分，所述部分保持结合抗体所结合的相同抗原(例如，ERCC1)的能力，与完整抗体竞争对抗原的特异性结合。通常参见，Fundamental Immunology,Ch.7(Paul,W.,ed.,第2版，Raven Press,N.Y.(1989)，其以其全文通过引用合并入本文，用于所有目的。可通过重组DNA技术或通过完整抗体的酶促或化学断裂产生抗原结合部分。在一些情况下，抗原结合部分包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb和互补决定区(CDR)片段、单链抗体(例如，scFv)、嵌合抗体、双抗体(diabody)和这样的多肽，其包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体的至少一部分。
在本发明中，“Fd片段”意指由VH和CH1结构域组成的抗体片段；“Fv片段”意指由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的抗体片段；“dAb片段”意指由VH结构域组成的抗体片段(Ward等人,Nature341:544-546(1989))；“Fab片段”意指由VL、VH、CL和CH1结构域组成的抗体片段；“F(ab')2片段”意指包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个Fab片段的抗体片段。
在一些情况下，抗体的抗原结合部分是单链抗体(例如,scFv)，其中VL和VH结构域通过使其能够产生为单个多肽链的连接体配对形成单价分子(参见，例如,Bird等人,Science 242:423-426(1988)和Huston等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883(1988))。此类scFv分子可具有一般结构：NH2-VL-接头-VH-COOH或NH2-VH-接头-VL-COOH。合适的现有技术接头由重复的GGGGS氨基酸序列或其变体组成。例如，可使用具有氨基酸序列(GGGGS)4的接头，但也可使用其变体(Holliger等人(1993)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448)。可用于本发明的其他接头由Alfthan等人(1995)，Protein Eng.8:725-731，Choi等人(2001)，Eur.J.Immunol.31:94-106，Hu等人(1996)，Cancer Res.56:3055-3061，Kipriyanov等人(1999)，J.Mol.Biol.293:41-56和Roovers等人(2001)，Cancer Immunol.描述。
在一些情况下，抗体是双抗体，即，双价抗体，其中VH和VL结构域在单个多肽链上表达，但使用太短的连接体以致不允许在相同链的两个结构域之间配对，从而迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并且产生两个抗原结合部位(参见，例如,Holliger P.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)，和Poljak R.J.等人,Structure2:1121-1123(1994))。
在本发明中，“衍生序列”是指与本发明的抗体或抗原结合部分相应片段的序列高度同源且仍保留与本发明的抗体或抗原结合部分相应片段具有相似的EGFR结合活性和免疫原性的序列。
可使用本领域技术人员已知的常规技术(例如，重组DNA技术或酶促或化学断裂法)从给定的抗体(例如单克隆抗体JMT101)获得抗体的抗原结合部分(例如，上述抗体片段)，并且以与对于完整抗体的方式相同的方式就特异性筛选抗体的抗原结合部分。
在本发明中，20种常规氨基酸和其缩写遵从常规用法。参见Immunology-ASynthesis(第2版,E.S.Golub和D.R.Gren,Eds.,Sinauer Associates,Sunderland,Mass.(1991)),其通过引用合并入本文。
在本发明的一个实施方案中，所述肿瘤为原发性肿瘤。在本发明的一个实施方案中，所述肿瘤为转移性肿瘤。在本发明的一个实施方案中，所述肿瘤为对化疗方案耐药的肿瘤，例如对拓扑异构酶抑制剂耐药的肿瘤。在本发明的一个实施方案中，所述肿瘤为难治性肿瘤。
在本发明中，所述受试者为哺乳动物，例如人，牛科动物，马科动物，猫科动物，犬科动物，啮齿类动物或灵长类动物，特别优选地，受试者为人。应当强调的是，本发明不限于任何具体的给药方法和途径。
在本发明中，可以通过任何可达到应用效果的方法将抗EGFR抗体和拓扑异构酶抑制剂导入受试者，例如可以通过静脉、口服、皮下、腹膜内或肌肉内给药，优选静脉给药。
在本发明中，抗EGFR抗体和拓扑异构酶抑制剂以足以预防、抑制或降低肿瘤的进展的量给药。所述进展例如包括，肿瘤的生长、浸润、转移和/或复发。能够达到这些目的的合适剂量被定义为治疗有效量。使用的有效量取决于疾病的严重程度和病人免疫系统的一般状况，用药计划也将随疾病程度和病人的状况而变化，通常可以在每天单一剂量用药或持续滴注到多次给药(如每4－6小时)的范围内变化，或者根据医生和病人的情况而定。应当注意的是，本发明不限于任何特殊剂量。
在本发明中，两种药物的施用方式可以是，抗EGFR抗体在给予拓扑异构酶抑制剂的之前、之中或之后给药，也可以是上述几种方式的联合，即在给予拓扑异构酶抑制剂治疗的之前和之中，之前和之后，之中和之后，或之前、之中和之后。在本发明的一个实施方案中，抗EGFR抗体和拓扑异构酶抑制剂同时给药。在本发明的一个实施方案中，抗EGFR抗体在给予拓扑异构酶抑制剂之前给药。
在本发明中，所述联合用药物中还可以含有药学上可接受的载体或赋形剂，以促进对受试者的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。它们所采用的剂量和浓度对暴露于其的细胞或哺乳动物是无毒的。药学上可接受的载体的例子包括但不限于缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖醇，诸如甘露醇或山梨醇；成盐反荷离子，诸如钠；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM。所述赋形剂例如包括片剂中的黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂，液体制剂中的防腐剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂等。
在本发明中，所述联合用药物中的抗EGFR抗体和拓扑异构酶抑制剂可以以各自的剂型分别存在。
发明的有益效果
本发明提供的联合用药物显示出比爱必妥和伊立替康联用更好的协同增效作用，具有更强的抑制肿瘤的效果，特别是在抑瘤率和肿瘤部分缓解率上显著优于爱必妥和伊立替康联用，取得了预料不到的协同增效作用，为肿瘤的治疗提供了新的途径。
附图说明
图1 JMT101、单用或与CPT-11合用对人结肠癌DiFi裸小鼠皮下移植瘤的疗效
图2 JMT101、单用或与CPT-11合用对荷瘤裸小鼠体重的影响
图3 JMT101、单用或与CPT-11合用治疗人结肠癌DiFi裸小鼠皮下移植瘤的肿瘤照片，其中第一排和第二排为溶剂对照组，第三排为JMT101组(0.5mg/kg)，第四排为JMT101+CPT-11组(0.5mg/kg+25mg/kg)，第五排为爱必妥组(0.5mg/kg)，第六排为爱必妥+CPT-11组(0.5mg/kg+25mg/kg)，第六排为CPT-11组(25mg/kg)。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1抗体JMT101的制备
抗体JMT101的序列信息及制备方法可参考中国专利CN103772504A中公开的抗体BA03。具体如下：
抗体JMT101的重链可变区序列为:
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLSNYDVHWVRQAPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARALDYYDYEFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：1)
其中，CDR1的序列为N Y D V H(SEQ ID NO：3)，CDR2的序列为VIWSGGNTDYNTPFTS(SEQ ID NO：4)，CDR3的序列为A L D Y Y D Y E F A Y(SEQ ID NO：5)。
抗体JMT101的轻链可变区序列为:
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSIGTNIHWYQQKPDQSPKLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQNNEWPTSFGQGTKLEIK(SEQ ID NO：2)
其中，CDR1的序列为RASQSIGTNIH(SEQ ID NO：6)，CDR2的序列为YASESIS(SEQ IDNO：7)，CDR3的序列为Q Q N N E W P T S(SEQ ID NO：8)。
(1)根据抗体的重链可变区序列和轻链可变区序列,分别设计并合成编码重链和轻链可变区序列的PCR引物寡核苷酸片段，合成时引入需要的酶切位点。PCR引物寡核苷酸片段一般长约54个碱基，相邻寡核苷酸片段约有18个碱基重叠。混合同等量的各个PCR引物片段，进行重叠延伸PCR反应。
PCR反应体系：dNTPs 0.2μM(最终浓度)；每个PCR引物片段1μl；10×buffer 3μl；cloned pfu(Invitrogen)1μl；加水至30μl。
PCR反应条件：94℃3min→(94℃30s→56℃30s→72℃1min)×30→72℃10min
PCR产物经1％琼脂糖凝胶电泳分离后回收纯化目的片段，经EcoRI酶切后，将抗体重链可变区序列和轻链可变区序列分别克隆到pCR-BluntII-TOPO(Invitrogen)载体中，转化到大肠杆菌TOP10(Invitrogen)后在LB/Kanamycin平板上进行筛选，取10个白色菌斑接种于含有Kanamycin的LB液体培养液中培养，用QIAGEN质粒提取试剂盒(QIAquick PCRpurification kit)提取质粒并进行测序，确定重链和轻链可变区序列。
(2)构建表达载体
从正常人B细胞分离RNA，用RT-PCR方法获得人IgG1重链恒定区IgG1Fc片段和轻链恒定区κ片段，在RT-PCR时引入需要的酶切位点，并将其预先构建到pcDNA3.1(Invitrogen)表达载体中，分别得到pcDNA3.1–Fc和pcDNA3.1-κ表达载体，经DH5细菌转化，质粒提取和测序确定阳性克隆。
抗体的重链可变区由Eco47III/NheI从pCR-BluntII-TOPO的阳性克隆切下，克隆连入pcDNA3.1-Fc表达载体中，使重链可变区与恒定区连接。抗体的轻链可变区由AscI/BsiWI从pCR-BluntII-TOPO的阳性克隆切下，克隆连入pcDNA3.1-κ表达载体中，使轻链可变区与恒定区连接(可参考文献Morrison SL.Cloning,expression,and modification ofantibody V regions.Curr Protoc Immunol.2002May；Chapter 2:Unit2.12.)。再次经过DH5细菌转化，质粒提取和测序确定阳性克隆。测序结果与记录的抗体的编码序列一致，即分别得到抗体重链和轻链的表达载体。
其中，人IgG1重链恒定区的序列为：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：9)
人κ轻链恒定区的序列为：
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：10)
(3)转染CHO细胞及特异抗体表达
细胞系及培养条件：CHO-S细胞(购自Invitrogen)培养条件为1×CD-CHO(购自GIBCO)，1×HT(购自GIBCO)，8mM谷氨酰胺(购自GIBCO)，培养于37℃,8％CO2温箱。将步骤(2)获得的抗体重链表达载体和轻链表达载体共转染CHO-S细胞，采用DMRIE-C转染试剂盒(购自Invitrogen)，按照试剂盒说明书操作。转染后的第三天，细胞培养于上述的培养液并加有500μg/ml G418(购自GIBCO)和12.5μg/ml嘌呤霉素(购自Sigma)进行加压筛选。加压约14天后，挑选出的阳性多克隆培养于六孔板中，并用直接ELISA的方法(包被EGFR-Fc来自表达的293T细胞中)检测特异抗体表达量。挑选出表达率最高的阳性多克隆，大批量培养7天后，离心收集培养上清，采用蛋白A的亲和层析柱(购自GE)纯化后，透析至PBS,并经过0.22μm膜过滤后，即得到纯化的抗体JMT101，用于以下实施例。
实施例2JMT101与伊立替康(CPT-11)合用对人结肠癌DiFi裸小鼠皮下移植瘤的疗效
1)受试药物
药物名称和批号：重组人源化抗表皮生长因子受体单克隆抗体JMT101，按照实施例1方法制备，批号20140101；(西妥昔单抗注射液)为无色透明液体，规格100mg/20ml/瓶，批号162831。盐酸伊立替康(CPT-11)为白色粉末，批号030101，含量>99.0％。
提供单位：购自德国默克公司(Merck KGaA)；CPT-11由江苏恒瑞医药股份有限公司提供。
配制方法：JMT101、均用含0.1％BSA生理盐水配制；CPT-11用生理盐水配制。
2)实验动物
BALB/cA-nude裸小鼠，6-7周，♀，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。生产许可证号：SCXK(沪)2012－0002；合格证编号：2007000576366。饲养环境：SPF级。
3)实验步骤
裸小鼠皮下接种人结肠癌DiFi细胞，待肿瘤生长至100-200mm3后，将动物随机分组(D0)、JMT101静脉滴注给药，CPT－11腹腔注射给药(JMT101滴注完成1小时后腹腔注射CPT-11)。分组方案、给药剂量和给药方案见表1，溶剂对照组注射生理盐水。每周测2－3次瘤体积，称鼠重，记录数据，表1中为给药后21天数据。
4)实验结果
、JMT101(0.5mg/kg,IV,D0)明显抑制高表达EGFR人结肠癌DiFi裸小鼠皮下移植瘤的生长，抑瘤率分别为59％和74％。在抗EGFR抗体与CPT-11联合用药中，CPT-11采用了25mg/kg,IP,D0,7的给药方式，对DiFi的抑瘤率为7％。、JMT101分别与CPT-11合用，均出现明显的抑瘤协同效应，抑瘤率分别提高到90％和121％，相对于抗EGFR抗体与CPT-11抑瘤率的简单叠加(CPT-11+：66％，CPT-11+JMT101:81％)，CPT-11联合的抑瘤率进一步提升了24％，CPT-11联合JMT101的抑瘤率则更进一步提升了40％。
对比JMT101与，本实验证实单用JMT101比单用的抑瘤率提高了74％-59％＝15％。而令人惊讶的是，当这两种抗EGFR抗体与CPT-11联用时，CPT-11联合JMT101组的抑瘤率比联合 组大幅提高了121％-90％＝31％，为单用抗体15％抑瘤率提升幅度的2倍；从联合用药组肿瘤部分消退情况也可以看出，联合组中有2只实验小鼠肿瘤部分消退，部分缓解率仅为33％，而联合JMT101组则有4只实验小鼠肿瘤部分消退，部分缓解率达到67％。无论从抑瘤率的提升幅度还是肿瘤部分缓解率来看，JMT101联合CPT-11均大幅优于联合CPT-11。不仅如此，所有实验组荷瘤小鼠均能很好耐受，JMT101联合CPT-11并未导致毒性增加。具体结果参见表1、图1、图2和图3。
表1.JMT101、单用或与CPT-11合用对人结肠癌DiFi裸小鼠皮下移植瘤的疗效
D0:第一次给药时间；P值指与溶剂相比；aP<0.05,与JMT1010.5mg/kg组比较；bP<0.05,与0.5mg/kg组比较；cP<0.01,与CPT-1125mg/kg组比较；dP<0.05,与0.5mg/kg+CPT-1125mg/kg组比较；均采用Student’s t检验。实验开始时小鼠数目：对照组n＝12，治疗组n＝6。IV：静脉注射，IP：腹腔注射。
5)结论
JMT101、(0.5mg/kg,IV,D0)明显抑制高表达EGFR人结肠癌DiFi裸小鼠皮下移植瘤的生长；CPT-11(25mg/kg,IP,D0,7)对DiFi无明显疗效；JMT101、均明显增效CPT-11的疗效；并且JMT101与CPT-11合用时，其增效作用明显强于与CPT-11合用。荷瘤小鼠对以上药物均能很好耐受。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims (15)

1.联合用药物，其包含治疗有效量的抗EGFR抗体或其抗原结合部分，以及治疗有效量的拓扑异构酶抑制剂，其中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合部分的重链可变区CDR1的序列如SEQ ID NO：3所示，CDR2的序列如SEQ ID NO：4的示，CDR3的序列如SEQ ID NO：5所示，其轻链可变区CDR1序列如SEQ ID NO：6所示，CDR2的序列如SEQ ID NO：7所示，CDR3的序列如SEQ ID NO：8所示。
2.权利要求1的联合用药物，其中所述的抗EGFR抗体或其抗原结合部分的重链可变区的序列如SEQ ID NO：1所示，其轻链可变区的序列如SEQ ID NO：2所示。
3.权利要求1或2的联合用药物，其中所述的抗EGFR抗体或其抗原结合部分选自单链抗体(scFv)、嵌合抗体、双抗体、scFv-Fc二价分子、dAb和互补决定区(CDR)片段、Fab片段、Fab'片段、Fv或F(ab')2片段。
4.权利要求1或2的联合用药物，其中所述的抗EGFR抗体或其抗原结合部分还包含人IgG1重链恒定区和人κ轻链恒定区。
5.权利要求1或2的联合用药物，其中所述的拓扑异构酶抑制剂选自喜树碱或其衍生物(例如伊立替康、拓扑替康、10-羟基喜树碱等)、依托泊苷、以及它们的药学上可接受的盐、溶剂合物和前药。
6.权利要求5的联合用药物，其中所述的拓扑异构酶抑制剂选自伊立替康、其药学上可接受的盐(例如盐酸伊立替康)及溶剂合物。
7.权利要求1-6任一项的联合用药物，其还含有药学上可接受的载体或赋形剂。
8.抗EGFR抗体或其抗原结合部分和拓扑异构酶抑制剂在制备治疗由于表皮生长因子过量表达或表皮生长因子受体过量表达而引起的疾病的联合用药物的用途，其中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合部分的重链可变区CDR1的序列如SEQ ID NO：3所示，CDR2的序列如SEQ ID NO：4的示，CDR3的序列如SEQ ID NO：5所示，其轻链可变区CDR1序列如SEQ ID NO：6所示，CDR2的序列如SEQ ID NO：7所示，CDR3的序列如SEQ ID NO：8所示。
9.权利要求8的用途，其中所述的由于表皮生长因子过量表达或表皮生长因子受体过量表达而引起的疾病是指肿瘤。
10.权利要求9的用途，其中所述的肿瘤选自结直肠癌、鼻咽癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、阴道癌、膀胱癌、食管癌、口腔癌、皮肤癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肾细胞癌、胶质母细胞瘤、头颈部肿瘤和脑的肿瘤。
11.权利要求8的用途，其中所述的抗EGFR抗体或其抗原结合部分的重链可变区的序列如SEQ ID NO：1所示，其轻链可变区的序列如SEQ ID NO：2所示。
12.权利要求8的用途，其中所述的抗EGFR抗体或其抗原结合部分选自单链抗体(scFv)、嵌合抗体、双抗体、scFv-Fc二价分子、dAb和互补决定区(CDR)片段、Fab片段、Fab'片段、Fv或F(ab')2片段。
13.权利要求8的用途，其中所述的抗EGFR抗体或其抗原结合部分还包含人IgG1重链恒定区和人κ轻链恒定区。
14.权利要求8的用途，其中所述的拓扑异构酶抑制剂选自喜树碱或其衍生物(例如伊立替康、拓扑替康、10-羟基喜树碱等)、依托泊苷、以及它们的药学上可接受的盐、溶剂合物和前药。
15.权利要求8的用途，其中所述的拓扑异构酶抑制剂选自伊立替康、其药学上可接受的盐(例如盐酸伊立替康)及溶剂合物。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021013207A1 (zh) * 2019-07-24 2021-01-28 神州细胞工程有限公司 用于治疗egfr高表达的癌症的多变剂量方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007064957A1 (en) * 2005-11-30 2007-06-07 University Of Southern California FCγ POLYMORPHISMS FOR PREDICTING DISEASE AND TREATMENT OUTCOME
CN103772504A (zh) * 2012-10-17 2014-05-07 上海津曼特生物科技有限公司 人源化抗表皮生长因子受体抗体及其用途
CN103189073B (zh) * 2010-05-04 2015-08-12 梅里麦克制药股份有限公司 抗表皮生长因子受体(egfr)的抗体及其用途

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007064957A1 (en) * 2005-11-30 2007-06-07 University Of Southern California FCγ POLYMORPHISMS FOR PREDICTING DISEASE AND TREATMENT OUTCOME
CN103189073B (zh) * 2010-05-04 2015-08-12 梅里麦克制药股份有限公司 抗表皮生长因子受体(egfr)的抗体及其用途
CN103772504A (zh) * 2012-10-17 2014-05-07 上海津曼特生物科技有限公司 人源化抗表皮生长因子受体抗体及其用途

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021013207A1 (zh) * 2019-07-24 2021-01-28 神州细胞工程有限公司 用于治疗egfr高表达的癌症的多变剂量方法

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