CN106943203A - 一种用于睾丸输出管注射的注射针制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种注射针的制备方法,尤其是涉及一种用于睾丸输出管注射的注射针制备方法,为将外径为1mm的薄玻璃管,首先用Sutter P‑1000拉针仪拉制成内径为1‑3um的注射针,再用MF‑900煅针仪将针尖在5um处切断,用EG‑400磨针仪磨制针尖角度为30度,最后用MF‑900煅针仪将斜面拉尖即可;该方法简单、独特,而且用本方法制成的注射针非常容易插入睾丸输出管,样品渗漏少,提高注射效率,还能减少输出管的损伤,提高制备转基因动物的成功率、减少或避免动物死亡。
Description
技术领域
本发明涉及一种注射针的制备方法,尤其是涉及一种用于睾丸输出管注射的注射针制备方法。
背景技术
转基因小鼠已是医学和生命科学研究重要的研究工具。原核显微注射法制备转基因小鼠是传统经典方法,但是其操作比较繁琐,技术要求高。精子介导法制备转基因小鼠是一种新思路,该方法成本低、操作简便、周期短。睾丸注射是精子介导制备转基因小鼠的重要方法。目前,利用该方法已成功制备了小鼠、大鼠及兔等实验动物。通过睾丸注射法,可以有效地解决当前制备转基因小鼠操作复杂、成本高和效率低等问题,将会推动转基因动物在人类疾病建模的应用。另外,睾丸注射也是曲细精管内干细胞移植的重要方法,为研究精子发生过程和男性不育发治疗提供了新思路。
睾丸输出管注射是睾丸注射的重要方法。该注射方法是将外源基因通过游离的、韧性强的输出小管注射到睾丸曲细精管内,进而转染生精细胞建立转基因精子。该注射方法操作简便可靠,而且不需要昂贵的仪器就能完成,只需要玻璃针就可以完成注射。注射针的质量对注射效率影响非常大。好的注射针不但能提高注射效率,还能减少输出管的损伤,提高制备转基因动物的成功率。所以,注射针的制备非常重要,但是目前还没有成熟的制备睾丸输出管注射针的方法。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足,提供一种制备方法简单、独特,而且用本方法制成的注射针非常容易插入睾丸输出管,样品渗漏少,提高注射效率,还能减少输出管的损伤,提高制备转基因动物的成功率、减少或避免动物死亡的一种用于睾丸输出管注射的注射针制备方法。
本发明通过如下方式实现:
一种用于睾丸输出管注射的注射针制备方法,其特征在于:该方法为将外径为1mm的薄玻璃管,首先用Sutter P-1000拉针仪拉制成内径为1-3um的注射针,再用MF-900煅针仪将针尖在5um处切断,用EG-400磨针仪磨制针尖角度为30度,最后用MF-900煅针仪将斜面拉尖即可;
所述薄玻璃管是外径为1mm,内径为0.58mm,长10cm,内径含玻璃丝的玻璃管;
所述拉针仪具体参数如下:Heat:Ramp+30;Pull:10;Velocit:120;Time:0;Pressure:200;
所述针尖的磨制为将针内径5μm部位与玻璃珠刚好接触,踩下脚控开关加热,当看到玻璃针与玻璃珠刚好粘在一起时,松开脚控开关,玻璃珠即可断开玻璃管的尖端,得到内径在5μm的平口针,将得到的平口针再用EG-400磨针仪将针尖磨制成30度的斜面,将注射针固定在持针器上,并调整持针器与磨石的夹角为30度,磨削速度选择为1000r/min,显微镜下仔细观察,直到磨制出30度斜面,且边缘整齐;
所述针尖的拉尖为用MF-900将注射针头的斜面做成1-2μm的尖头,将上述注射针安装在煅针仪上,调节针尖位于玻璃珠上方,踩下脚控开关,当发现针尖端有粘在玻璃珠的迹象时,快速拉开玻璃针,并松开脚控开关。
本发明具有如下效果:
1)方法简单独特:本发明提供的方法为该方法为将外径为1mm的薄玻璃管,首先用Sutter P-1000拉针仪拉制成内径为1-3um的注射针,再用MF-900煅针仪将针尖在5um处切断,用EG-400磨针仪磨制针尖角度为30度,最后用MF-900煅针仪将斜面拉尖即可。
2)提高注射成功率高,进而减少或避免动物的死亡:动物的睾丸输出管有一定的韧性和游离性,普通注射针需要反复穿刺才能刺入睾丸输出管,对输出管造成严重损伤,导致样品渗漏,严重时会导致注射失败和动物死亡。本申请提供的方法将针尖磨制成30度的斜面,并将斜面拉尖,可以一次性刺入睾丸输出管,大大减少对输出管的损伤和样品渗漏,提高注射成功率高,进而减少或避免动物的死亡。
3)制备方法简单、成本低,有利于商业化生产:目前,国内外还未见有同类产品的生产制造。本方法不需要特殊材料,而且原材料玻璃管来源方便,只需要几分钱,成本低。另外,本方法使用仪器制备注射针,并提供了仪器的所有制备参数,保证了制备针的一致性,有利于商业化生产。
具体实施方式
一种用于睾丸输出管注射的注射针制备方法,该方法为如下步骤:
a.玻璃管的选择:选择外径为1mm,内径为0.58mm,长10cm的薄玻璃管,玻璃管内径应含细玻璃丝,可以通过毛吸作用使液体充满注射针管。玻璃管应注意防尘,避免用手直接触摸玻璃管,也不要用带有滑石粉的手套操作玻璃管。
b.玻璃管的拉制:用Sutter P-1000拉针仪将上述玻璃管拉制成内径为1-3um的注射针。拉针仪具体参数如下:Heat:Ramp+30;Pull:10;Velocit:120;Time:0;Pressure:200。
c.针尖的磨制:先用MF-900煅针仪将针尖在5um处切断。将针内径5μm部位与玻璃珠刚好接触。踩下脚控开关加热,当看到玻璃针与玻璃珠刚好粘在一起时,松开脚控开光,玻璃珠即可断开玻璃管的尖端,得到内径在5μm的平口针。将得到的平口针再用EG-400磨针仪将针尖磨制成30度的斜面。将注射针固定在持针器上,并调整持针器与磨石的夹角为30度。磨削速度选择为1000r/min,太快或太慢均不利于针的制备。显微镜下仔细观察,直到磨制出30度斜面,且边缘整齐。
d.针尖的拉尖:用MF-900将注射针头的斜面做成1-2μm的尖头。将上述注射针安装在煅针仪上,调节针尖位于玻璃珠上方,踩下脚控开关,当发现针尖端有粘在玻璃珠的迹象时,快速拉开玻璃针,并松开脚控开关。拉尖的针非常锋利,有利于刺入游离的输出管。
本发明提供的注射针应为一次产品,而且注射针如果有玻璃碎片,应淘汰。在睾丸输出管注射时,应平行进针,缓慢增加注射压力,使注射样品逐渐充满曲精细管。用本方法制成的注射针非常容易插入睾丸输出管,样品渗漏少,注射成功率高,而且可以大大减少对输出管的损失,减少或避免动物的死亡。
Claims (5)
1.一种用于睾丸输出管注射的注射针制备方法,其特征在于:该方法为将外径为1mm的薄玻璃管,首先用Sutter P-1000拉针仪拉制成内径为1-3um的注射针,再用MF-900煅针仪将针尖在5um处切断,用EG-400磨针仪磨制针尖角度为30度,最后用MF-900煅针仪将斜面拉尖即可。
2.如权利要求1所述的一种用于睾丸输出管注射的注射针制备方法,其特征在于:所述薄玻璃管是外径为1mm,内径为0.58mm,长10cm,内径含玻璃丝的玻璃管。
3.如权利要求1所述的一种用于睾丸输出管注射的注射针制备方法,其特征在于:所述拉针仪具体参数如下:Heat:Ramp+30;Pull:10;Velocit:120;Time:0;Pressure:200。
4.如权利要求1所述的一种用于睾丸输出管注射的注射针制备方法,其特征在于:所述针尖的磨制为将针内径5μm部位与玻璃珠刚好接触,踩下脚控开关加热,当看到玻璃针与玻璃珠刚好粘在一起时,松开脚控开关,玻璃珠即可断开玻璃管的尖端,得到内径在5μm的平口针,将得到的平口针再用EG-400磨针仪将针尖磨制成30度的斜面,将注射针固定在持针器上,并调整持针器与磨石的夹角为30度,磨削速度选择为1000r/min,显微镜下仔细观察,直到磨制出30度斜面,且边缘整齐。
5.如权利要求1所述的一种用于睾丸输出管注射的注射针制备方法,其特征在于:所述针尖的拉尖为用MF-900将注射针头的斜面做成1-2μm的尖头,将上述注射针安装在煅针仪上,调节针尖位于玻璃珠上方,踩下脚控开关,当发现针尖端有粘在玻璃珠的迹象时,快速拉开玻璃针,并松开脚控开关。
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