CN106928231A - 一类新型的egfr野生型和突变型的激酶抑制剂 - Google Patents
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Abstract
本申请所描述的式I化合物是野生型EGFR和/或突变型EGFR的抑制剂，其可以通过单独使用或者与其它治疗剂联合使用的方式用于治疗非小细胞肺癌。本申请的式I化合物用于治疗携带野生型EGFR和/或EGFR T790M突变和/或EGFR L858R突变和/或EGFR delE746_A750突变的耐药性非小细胞肺癌患者。
Description
技术领域
本发明涉及一类新型的EGFR野生型和突变型的激酶抑制剂，及其治疗非小细胞肺癌，特别是携带EGFR T790M突变和/或EGFR L858R突变和/或EGFR delE746_A750突变的耐药性非小细胞肺癌的用途。
背景技术
肺癌是临床常见的肺部恶性肿瘤，一般分为小细胞肺癌(Small Cell LungCancer，SCLC)和非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC)两大类。非小细胞肺癌在全世界的发病率逐年上升，严重威胁着人类健康。非小细胞肺癌是美国、日本和西欧国家癌症致死的主要原因。对于晚期患者而言，化学疗法虽然在一定程度上改善生存率，但化疗药物对人体也有显著的毒性，因而非常需要能特异性地靶向与肿瘤生长有关的关键基因的治疗剂(Schiller JH等,N.Engl.J.Med.,346:92-98,2002)。
EGFR在NSCLCL中的基因突变主要发生在胞内TK区域前四个外显子之上(18～21)，目前报道发现的TK区域突变有30多种。主要的突变有：在外显子19处的缺失突变、在密码子719处的点突变(GT19X)、在外显子20处的插入突变、在外显子221-氨基甾体(aminosteroid)。而在外显子l9处的缺失突变包括从亮氨酸-747到谷氨酸-749，定位于酪氨酸激酶C螺旋区N端，该缺失约占44％。在外显子20处出现的突变约占5％，G719X占4％。在外显子21处的点突变是最常见的EGFRTK区点突变，约占41％。对收集到的31例晚期NSCLC患者的肿瘤组织标本，检测了EGFR酪氨酸激酶域基因突变，其结果表明共检测出12例基因突变，4例为19号染色体缺失突变，其中3例病例为2235～2249核苷酸缺失造成E746～A750氨基酸改变，1例病例为2240～2257核苷酸缺失，而造成了L747～P753insS(747位亮氨酸至第753位苯丙氨酸缺失，插入丝氨酸)氨基酸改变。8例病例为21号染色体错义突变，均为L858R(T＞G)变异，但18及20号染色体未见突变。Tokumo等报道，在120例外科手术切除的NSCLC样本的18～21外显子检测中发现大多数EGFR突变为19外显子缺失和21外显子的点突变(L858R)，这些突变可引起EGFR酪氨酸激酶的活性增强，同时启动不同的信号转导途径。研究表明EGFR在43％～89％的非小细胞肺癌(NSCLC)中表达为上调，其在肿瘤的形成及其介导瘤细胞的生物行为中发挥着重要的作用，是治疗NSCLC的重要靶点之一，因此，研究EGFR突变在NSCLC发病中的具体作用机制对EGFR-TKI的治疗、预后及生存期有至关重要的意义。
活化EGFR突变位于酪氨酸激酶域，可导致组成性的EGFR信号。EGFR突变激活的PI3K-AKT和RAS-MEK-ERK信号对癌细胞的生长、生存和迁移起至关重要的作用。最常见的激活突变是19号外显子的框内缺失(in-frame deletion)同突变和858密码子的一个错义突变(导致亮氨酸被精氨酸取代，L858R)。带有EGFR突变的肺癌对EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)高度敏感。当前，EGFR突变的基因型筛查常被用于筛选患有IV期NSCLC、一线治疗方案为接受EGFR TKIs治疗的患者。目前的研究重点集中在延长反应持续时间，找到有效的途径靶向在疾病进程中形成的耐药机制。最常见的耐药机制就是EGFR/T790M突变，其存在于约50％的耐药肿瘤中。此外还有一些其他的例如MET扩增，PIK3CA突变以及向SCLC转化也曾得到描述。
目前，以EGFR为靶点的酪氨酸激酶抑制剂(TKI)(例如易瑞沙(Gefitinib，吉非替尼)和特罗凯(Erlotinib，埃罗替尼))等药物已在非小细胞肺癌的临床治疗中获得巨大成功。然而，接受TKI抑制剂治疗的患者往往由于形成TKI耐药性而面临复发的困境。第二代EGFR非可逆抑制剂如卡奈替尼(Canertinib)、阿法替尼(Afatinib)、来那替尼(Neratinib)、培利替尼(Pelitinib)等已进入临床试验，但这些分子对EGFR突变体的选择性差，导致药物的临床耐受剂量较低。结果，在最大耐受剂量下，药物无法在体内达到有效浓度，因而对多数耐药病人无效。
另外，据研究，在使用吉非替尼或埃罗替尼治疗EGFR-TKI敏感型的非小细胞肺癌(NSCLC)时，患者往往在6～12个月后出现继发性耐药，其中约50％包含由外显子20编码的T790M突变。研究认为，T790M突变阻碍EGFR与EGFR小分子抑制剂(如吉非替尼和埃罗替尼)的结合或者增加EGFR与ATP的亲和力，因而导致耐药(Yun CH et al.,Proc Natl Acad SciU S A.2008Feb 12；105(6):2070-5)。
发明内容
本申请在一方面提供一种式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药，其具有以下结构：
其中，X选自C和N；
R1和R2各自独立地选自氢、卤素、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基、氰基、和杂环基羰基；
R3选自氢、卤素、芳基烷氧基、杂芳基烷氧基、杂环基烷基、杂环基羰基、或-CO-NH-(CH2)n-杂环基，其中n为0－3的整数，且R3可任选地被1－3个独立的R6取代；
R4选自
R5选自
R6独立地选自氢、卤素、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基、氰基、和甲磺酰基。
本发明还涉及包括以上化合物的药物组合物，以及该化合物在预防或治疗由酪氨酸激酶活性调节的或者受其影响的或者其中涉及酪氨酸激酶活性的疾病、障碍或病症、自身免疫性疾病中的方法和用途。
附图说明
图1为信号通路图，其示出化合物1、化合物29及化合物37在不同细胞(图1a：化合物1/PC-9细胞株；图1b：化合物1/H1975细胞株；图1c：化合物1/H3255细胞株；图1d：化合物1/HCC827细胞株；图1e：化合物1/A549细胞株；图1f：化合物29/H1975细胞株；图1g：化合物29/PC-9细胞株；图1h：化合物29/HCC827细胞株；图1i：化合物29/H3255细胞株；图1j：化合物37/H3255细胞株)中对不同信号通路相关蛋白的磷酸化的影响；
图2为细胞凋亡图，其示出化合物1在不同细胞(图2a：PC-9细胞株；图2b：H1975细胞株；图2c：H3255细胞株；图2d：HCC827细胞株；图2e：A549细胞株)中对与细胞凋亡密切相关的DNA修复酶聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶PARP、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase 3蛋白剪切的影响；
图3为细胞周期分布图，其示出不同浓度的化合物1和对照化合物对不同细胞(图3a：H3255细胞株；图3b：H1975细胞株；图3c：PC-9细胞株；图3d：HCC827细胞株；图3e：A549细胞株)的细胞周期分布的影响；
图4示出在非小细胞肺癌细胞PC-9的小鼠肿瘤模型中使用不同浓度的化合物1和溶媒对照处理得到的实验结果，其中图4a示出相对体重随时间的变化；图4b示出肿瘤相对大小随时间的变化；图4c示出21天后的肿瘤重量；图4d示出使用不同浓度的化合物1和溶媒处理小鼠21后拍摄的肿瘤照片；
图5示出在非小细胞肺癌细胞H1975的小鼠肿瘤模型中使用不同浓度的化合物1和溶媒对照处理得到的实验结果，其中图5a示出相对体重随时间的变化；图5b示出肿瘤相对大小随时间的变化；图5c示出21天后的肿瘤重量；图5d示出使用不同浓度的化合物1和溶媒对照处理小鼠21天后拍摄的肿瘤照片。
具体实施方式
术语
除非另外定义，所有本文使用的科技术语都具有与要求保护的主题所属领域的技术人员一般理解相同的含义。
除非另有说明，本发明采用本领域技术范围内的质谱、NMR、HPLC、蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药理学等常规方法。除非提供具体的定义，否则与本文描述的分析化学、合成有机化学、以及医学和药物化学等化学上相关的命名和实验室操作和技术，是本领域技术人员已知的。一般而言，前述技术和步骤可以通过本领域众所周知的和在各种一般文献和更具体文献中描述的常规方法来实施，这些文献在本说明书中被引用和讨论。
“烷基”是指脂肪族烃基团，可以是支链或直链的烷基。根据结构，烷基可以是单价基团或双价基团(即亚烷基)。在本发明中，烷基优选是具有1-8个碳原子的“低级烷基”，更优选具有1-6个碳原子的“低级烷基”，甚至更优选具有1-4个碳原子的“低级烷基”。典型的烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等。
“烷氧基”是指-O-烷基，其中烷基如本文中定义。典型的烷氧基包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基等。
术语“芳香基”是指平面环具有离域的π电子系统并且含有4n+2个π电子，其中n是整数。芳香基环可以由五、六、七、八、九或多于九个原子构成。芳香基可以是任选取代的。术语“芳香基”包括碳环芳基(例如苯基)和杂环芳基(或“杂芳基”或“杂芳香基”)基团(例如吡啶)。该术语包括单环或稠环多环(即共用相邻的碳原子对的环)基团。
本文使用的术语“芳基”是指芳香基环中每一个构成环的原子都是碳原子。芳基环可以由五、六、七、八、九或多于九个原子构成。芳基可以是任选取代的。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、菲基、蒽基、芴基和茚基。根据结构，芳基可以是单价基团或双价基团(即亚芳基)。
术语“杂芳基”是指芳基中包括一个或多个选自氮、氧和硫的环杂原子。含N“杂芳基”部分是指芳香基中环上至少有一个骨架原子是氮原子。根据结构，杂芳基可以是单价基团或双价基团(即亚杂芳基)。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、噻二唑基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、萘啶基和呋喃并吡啶基等。
本文使用的术语“杂环基”是指非芳香基环中一个或多个构成环的原子是选自氮、氧和硫的杂原子。杂环基环可以由三、四、五、六、七、八、九或多于九个原子构成。杂环基环可以是任选取代的。杂环基的实例包括但不限于内酰胺、内酯、环亚胶、环硫代亚胺、环氨基甲酸酯、四氢噻喃、4H-吡喃、四氢吡喃、哌啶、1,3-二噁英、1,3-二噁烷、1,4-二噁英、1,4-二噁烷、哌嗪、1,3-氧硫杂环己烷、1,4-氧硫杂环己二烯、1,4-氧硫杂环己烷、四氢-1,4-噻嗪、2H-1,2-噁嗪、马来酰亚胺、琥珀酰亚胺、巴比妥酸、硫代巴比妥酸、二氧代哌嗪、乙内酰脲、二氢尿嘧啶、吗啉、三噁烷、六氢-1,3,5-三嗪、四氢噻吩、四氢呋喃、吡咯啉、吡咯烷、咪唑烷，吡咯烷酮、吡唑啉、吡唑烷、咪唑啉、咪唑烷、1,3-二氧杂环戊烯、1,3-二氧杂环戊烷、1,3-二硫杂环戊烯、1,3-二硫杂环戊烷、异噁唑啉、异噁唑烷、噁唑啉、噁唑烷、噁唑烷酮、噻唑啉、噻唑烷和1,3-氧硫杂环戊烷。根据结构，杂环基可以是单价基团或双价基团(即亚杂环基)。
术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
术语“卤代烷基”和“卤代烷氧基”包括烷基、或烷氧基的结构，其中至少一个氢被卤原子置换。在某些实施方式中，如果两个或更多氢原子被卤原子置换，所述卤原子彼此相同或不同。
本文使用的术语“氰基”是指式-CN基团。
术语“任选取代的”或“取代的”是指所提及的基团可以被一个或多个额外的基团取代，所述额外的基团各自并且独立地选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、羟基、烷氧基、氰基、卤素、酰胺基、硝基、卤代烷基、氨基、甲磺酰基等。
本文使用的术语“酪氨酸蛋白激酶(tyrosine protein kinase，TPK)”是一类催化ATP上γ-磷酸转移到蛋白酪氨酸残基上的激酶，能催化多种底物蛋白质酪氨酸残基磷酸化，在细胞生长、增殖、分化中具有重要作用。
本文使用的术语激酶的“抑制”、“抑制的”或“抑制剂”，是指磷酸转移酶活性被抑制。
本文公开的化合物的“代谢物”是当该化合物被代谢时形成的化合物的衍生物。术语“活性代谢物”是指当该化合物被代谢时形成的化合物的生物活性衍生物。本文使用的术语“被代谢”，是指特定物质被生物体改变的过程总和(包括但不限于水解反应和由酶催化的反应，例如氧化反应)。例如，细胞色素P450催化各种氧化和还原反应，同时二磷酸葡萄糖甘酸基转移酶催化活化的葡萄糖醛酸分子至芳香醇、脂肪族醇、羧酸、胺和游离的巯基的转化。新陈代谢的进一步的信息可以从《The Pharmacological Basis of Therapeutics》，第九版，McGraw-Hill(1996)获得。本文公开的化合物的代谢物可以通过将化合物给予宿主并分析来自该宿主的组织样品、或通过将化合物与肝细胞在体外孵育并且分析所得化合物来鉴别。这两种方法都是本领域已知的。在一些实施方式中，化合物的代谢物是通过氧化过程形成并与相应的含羟基化合物对应。在一些实施方式中，化合物被代谢为药物活性代谢物。本文使用的术语“调节”，是指直接或间接与靶标相互作用，以改变靶标的活性，仅仅举例来说，包括增强靶标的活性、抑制靶标的活性、限制靶标的活性或者延长靶标的活性。
本文使用的术语“靶蛋白”是指能被选择性结合化合物所结合的蛋白质分子或部分蛋白质。在某些实施方式中，靶蛋白是酪氨酸激酶EGFR(野生型或各种突变或其组合)、ALK(野生型或各种突变或其组合)、KIT(野生型或各种突变或其组合)、ABL(野生型或各种突变或其组合)、FLT3(野生型或各种突变或其组合)、BLK(野生型或各种突变或其组合)、BTK(野生型或各种突变或其组合)、BMX(野生型或各种突变或其组合)、VEGFR(野生型或各种突变或其组合)、RET(野生型或各种突变或其组合)、PDGFR(野生型或各种突变或其组合)、MEK(野生型或各种突变或其组合)、BCR/ABL(野生型或各种突变或其组合)、JAK(野生型或各种突变或其组合)、BRAF(野生型或各种突变或其组合)、MET(野生型或各种突变或其组合)。
本文使用的GI50是指使50％细胞生长被抑制所需的药物浓度，即药物使50％细胞(如癌细胞)的生长得到抑制或控制时的药物浓度。
本文使用的IC50是指在测量某种效应的分析中获得最大效应的50％抑制时特定测试化合物的量、浓度或剂量。
一种式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药，其具有以下结构：
其中，X选自C和N；
R1和R2各自独立地选自氢、卤素、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基、氰基、和杂环基羰基；
R3选自氢、卤素、芳基烷氧基、杂芳基烷氧基、杂环基烷基、杂环基羰基、或-CO-NH-(CH2)n-杂环基，其中n为0－3的整数，且R3可任选地被1－3个独立的R6取代；
R4选自
R5选自
R6独立地选自氢、卤素、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基、氰基、和甲磺酰基。
优选地，在式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药中，R1和R2各自独立地选自氢、氟、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基、氰基、和
另外优选地，R3选自：氢；氟、氯；任选取代的芳基甲氧基，例如苯甲氧基(特别是苯甲氧基和间氟苯甲氧基、邻氟苯甲氧基、对氟苯甲氧基、3,4-二氟苯甲氧基、2,5-二氟苯甲氧基、间甲磺酰基苯甲氧基)；任选取代的杂芳基甲氧基，例如任选取代的吡啶甲氧基(特别是吡啶-2-基甲氧基、6-甲基吡啶-2-基甲氧基、4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基甲氧基、6-甲基吡啶-3-基甲氧基)、任选取代的噻吩甲氧基(特别是噻吩-2-基甲氧基)、任选取代的噻唑甲氧基(特别是噻唑-2-基甲氧基、(4-甲基噻唑-5-基)甲氧基、(2,4-二甲基噻唑-5-基)甲氧基)、任选取代的呋喃甲氧基(特别是呋喃-2-基甲氧基)、任选取代的异噁唑甲氧基(特别是5-甲基异噁唑-3-基甲氧基)、任选取代的吲哚甲氧基(特别是吲哚-3-基甲氧基、N-甲基吲哚-3-基甲氧基)、任选取代的咪唑甲氧基(特别是咪唑-2-基甲氧基、(1-甲基-1H-咪唑-2-基)甲氧基)、任选取代的吲唑甲氧基(特别是吲唑-3-基甲氧基、(1-甲基-1H-吲唑-3-基)甲氧基)、任选取代的吡唑甲氧基(特别是(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)甲氧基、(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-基)甲氧基)；任选取代的哌嗪基甲基(特别是N-甲基-哌嗪-N-甲基)；任选取代的吗啉基羰基(特别是吗啉-4-基羰基)；和任选取代的-CO-NH-(CH2)n-吗啉基(特别是-CO-NH-吗啉基、-CO-NH-(CH2)2-吗啉基)。
更优选地，X是C，R1和R2中一个是氢，另一个是氯，且氯取代基在X处取代。
又优选地，R3选自间氟苯甲氧基、吡啶-2-基甲氧基、和6-甲基吡啶-2-基甲氧基。
进一步优选地，R4选自且R5选自
本发明所涉及带有手性的化合物，其构型可以是任意构型或者混合的外消旋体。
本文描述的是新型的激酶抑制剂。本文也描述了此化合物的药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、药物活性代谢物和前药。
在另外的或进一步的实施方式中，将本文描述的化合物给予有需要的生物体后在其体内代谢产生代谢物，所产生的代谢物然后用于产生期望的效果，包括期望的治疗效果。
本文描述的化合物可以被制成和/或被用作药学可接受的盐。药学可接受的盐的类型包括但不限于：(1)酸加成盐、通过将化合物的游离碱形式与药学可接受的无机酸反应形成，所述无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、偏磷酸等；或与有机酸反应形成，所述有机酸如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、马来酸、酒石酸、反丁烯二酸、三氟乙酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、1，2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、4-甲基双环-[2.2.2]辛-2-烯-1-甲酸、2-萘磺酸、叔丁基乙酸、葡庚糖酸、4,4'-亚甲基双-(3-羟基-2-烯-1-甲酸)、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、水杨酸、羟基萘酸、硬脂酸、粘康酸等；(2)碱加成盐，其在母体化合物中的酸性质子被金属离子置换时形成，例如碱金属离子(例如锂、钠、钾)、碱土金属离子(例如镁或钙)或铝离子；或与有机碱配位。可接受的有机碱包括乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、三甲胺、N-甲基葡萄糖胺，等等。可接受的无机碱包括氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠、氢氧化钠等。
药学可接受的盐的相应的平衡离子可以使用各种方法分析和鉴定，所述方法包括但不限于离子交换色谱、离子色谱、毛细管电泳、电感耦合等离子体、原子吸收光谱、质谱或它们的任何组合。
使用以下技术的至少一种回收所述盐：过滤、用非溶剂沉淀接着过滤、溶剂蒸发，或水溶液的情况下使用冻干法。
筛选和表征药学可接受的盐、多晶型和/或溶剂化物可以使用多种技术完成，所述技术包括但不限于热分析、X射线衍射、光谱、显微镜方法、元素分析。使用的各种光谱技术包括但不限于Raman、FTIR、UVIS和NMR(液体和固体状态)。各种显微镜技术包括但不限于IR显微镜检术和拉曼(Raman)显微镜检术。
本发明的药物组合物
本申请还提供药物组合物，其包含至少一种式(I)的化合物或所述化合物的药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、药物活性代谢物或前药，以及药学可接受的载体或赋形剂，以及者任选的其它治疗剂。
在治疗过程中，可以根据情况单独或与一种或多种其它的治疗剂组合使用。可以通过注射、口服、吸入、直肠和经皮施用中的至少一种将包含本发明化合物的药物施用给患者。
在本发明的实施方式中，在根据本发明对患者进行治疗时，给定药物的量取决于诸多因素，如具体的给药方案、疾病或病症类型及其严重性、需要治疗的受治疗者或宿主的独特性(例如体重)，但是，根据特定的周围情况，包括例如已采用的具体药物、给药途径、治疗的病症、以及治疗的受治疗者或宿主，施用剂量可由本领域已知的方法常规决定。通常，就成人治疗使用的剂量而言，施用剂量典型地在0.02-5000mg/天，例如约1-1500mg/天的范围。该所需剂量可以方便地被表现为一剂、或同时给药的(或在短时间内)或在适当的间隔的分剂量，例如每天二、三、四剂或更多分剂。本领域技术人员可以理解的是，尽管给出了上述剂量范围，但具体的有效量可根据患者的情况并结合医师诊断而适当调节。
本发明的药物的用途
式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前药、或包含其的药物组合物可用于抑制选自以下物质中的一种或多种的活性：酪氨酸激酶EGFR(野生型或各种突变或其组合)、ALK(野生型或各种突变或其组合)、KIT(野生型或各种突变或其组合)、ABL(野生型或各种突变或其组合)、FLT3(野生型或各种突变或其组合)、BLK(野生型或各种突变或其组合)、BTK(野生型或各种突变或其组合)、BMX(野生型或各种突变或其组合)、VEGFR(野生型或各种突变或其组合)、RET(野生型或各种突变或其组合)、PDGFR(野生型或各种突变或其组合)、MEK(野生型或各种突变或其组合)、BCR/ABL(野生型或各种突变或其组合)、JAK(野生型或各种突变或其组合)、BRAF(野生型或各种突变或其组合)、MET(野生型或各种突变或其组合)。式(I)所述化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前药，以及药学上可接受的载体或赋形剂可用于治疗一种或多种选自下组的疾病或者可制备用于治疗一种或多种选自下组的疾病的药物：非小细胞肺癌，小细胞肺癌，肺腺癌，肺鳞癌，胰腺癌，前列腺癌，膀胱癌，肝癌，皮肤癌，神经胶质瘤，乳腺癌，黑色素瘤，恶性胶质瘤，横纹肌肉瘤，卵巢癌，星形细胞瘤，尤因氏肉瘤，成视网膜细胞瘤，上皮细胞癌，结肠癌，肾癌，胃肠间质瘤，白血病，组织细胞性淋巴癌，鼻咽癌。
本发明的式(I)化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前药、或包含其的药物组合物特别适用于治疗非小细胞肺癌，尤其是携带野生型EGFR和/或EGFRT790M突变和/或EGFR L858R突变和/或EGFR delE746_A750突变的耐药性非小细胞肺癌。
化合物的制备
使用本领域技术人员已知的标准合成技术或使用本领域已知的方法与本文描述的方法组合，可以合成式(I)的化合物。另外，本文给出的溶剂、温度和其它反应条件可以根据本领域技术而改变。作为进一步的指导，也可以利用以下的合成方法。
所述反应可以按顺序使用，以提供本文描述的化合物；或它们可以用于合成片段，所述片段通过本文描述的方法和/或本领域已知的方法随后加入。
在某些实施方式中，本文提供的是本文描述的酪氨酸激酶抑制剂化合物的制备方法及其使用方法。在某些实施方式中，本文描述的化合物可以使用以下合成的方案合成。可以使用与下述类似的方法，通过使用适当的可选择的起始原料，合成化合物。
用于合成本文描述的化合物的起始原料可以被合成或可以从商业来源获得。本文描述的化合物和其它相关具有不同取代基的化合物可以使用本领域技术人员已知的技术和原料合成。制备本文公开的化合物的一般方法可以来自本领域已知的反应，并且该反应可以通过由本领域技术人员所认为适当的试剂和条件修改，以引入本文提供的分子中的各种部分。
如果需要，反应产物可以使用常规技术分离和纯化，包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱等方法。这些产物可以使用常规方法表征，包括物理常数和图谱数据。
实施例
以下具体的非限制性实施例将被解释为仅仅是说明性的，并不以任何方式限制本公开。虽然无需进一步详细描述，但是可以相信本领域技术人员能基于本文的描述，完全利用本公开。
本发明化合物以及中间体的合成
实施例1
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮1的合成
步骤1化合物c的合成：
化合物2-氯-4-溴苯酚a(2g,1eq)，2-溴甲基吡啶b(0.83g,1eq)和Na2CO3(4g,2eq)混合加入N,N-二甲酰胺DMF，于50℃搅拌5h。冷却后用乙酸乙酯稀释，水洗3次，饱和食盐水洗后浓缩，直接用于下一步。
步骤2化合物d的合成：
化合物c(2g,1eq)，联硼酸频哪醇酯(2g,1.2eq)，醋酸甲KOAc(1.3g,2eq)，Pd(dppf)Cl2(0.27g,0.02eq)混合加入1,4-二氧六环，于氮气下100℃搅拌过夜，后浓缩柱层析得固体1.5g。
步骤3化合物h的合成：
化合物g(10,1eq)，NIS(25g,2.5eq)和N,N-二甲酰胺DMF(100mL)混合于氮气下80℃搅拌过夜，后冷却，倒入水(500mL)中，固体过滤，依次用饱和亚硫酸氢钠(50mL)洗，水(100mL)洗，后于50℃真空干燥10h，得固体16g。
步骤4化合物i的合成：
化合物三苯基膦(7g,3.5eq)，THF(100mL)混合于氮气保护下0℃滴加偶氮二甲酸二异丙酯DIAD(5mL,3.5eq)，后加入(S)-1-叔丁氧羰基-3-羟基哌啶(3g,2eq)，化合物h(1g,1eq)，室温搅拌过夜，后浓缩柱层析得固体1.5g。
步骤5化合物e的合成：
化合物d(0.9g,1.2eq)，化合物i(0.1g,1eq)，Pd(PPh3)4(0.013g,0.05eq)，K2CO3(0.062g,2eq)，1,4-二氧六环/H2O(12mL,5/1)，混合于氮气100℃搅拌过夜，后浓缩直接过柱得固体0.1g。
步骤6化合物f的合成：
化合物e(0.1g,1eq)溶于乙酸乙酯(1mL)中，加入4N盐酸的乙酸乙酯(5mL)，室温搅拌0.5h，后浓缩得固体0.12g。
步骤7(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((吡啶-2-基甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物1的合成
化合物f(0.12g,1eq)，磷酸二异戊酯DIAP(0.17g,5eq)，DCM混合，冰浴下滴加丙烯酰氯(0.027g,1.1ed)，滴毕甲醇淬灭，浓缩过柱得固体0.03g。
Exact Mass(计算值):489.17；MS(ESI)m/z(M+1)+:490.1722。
实施例2
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((3-氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物2的合成
化合物2的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):506.16；MS(ESI)m/z(M+1)+:507.1758。
实施例3
N-(4-氨基-3-(3-氯-4-((3-氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)丙烯酰胺化合物3的合成
化合物3的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):520.18；MS(ESI)m/z(M+1)+:521.1878。
实施例4
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((3-氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物4的合成
化合物4的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):492.15；MS(ESI)m/z(M+1)+:493.1575。
实施例5
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物5的合成
化合物5的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):475.15；MS(ESI)m/z(M+1)+:476.1685。
实施例6
(R,E)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯-1-酮化合物6的合成
化合物6的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):546.23；MS(ESI)m/z(M+1)+:547.2335。
实施例7
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(4-(苄氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物7的合成
化合物7的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):454.21；MS(ESI)m/z(M+1)+:456.2246。
实施例8
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((3-氟苄基)氧基)-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物8的合成
化合物8的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):502.21；MS(ESI)m/z(M+1)+:503.2236。
实施例9
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-甲基-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物9的合成
化合物9的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):466.22；MS(ESI)m/z(M+1)+:470.2326。
实施例10
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-甲氧基-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物10的合成
化合物10的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):485.22；MS(ESI)m/z(M+1)+:486.2214。
实施例11
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氰基-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物11的合成
化合物11的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):480.20；MS(ESI)m/z(M+1)+:481.2113。
实施例12
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(4-(苄氧基)-3-氟苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物12的合成
化合物12的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):472.20；MS(ESI)m/z(M+1)+:473.2112。
实施例13
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氟-4-((3-氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物13的合成
化合物13的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):490.19；MS(ESI)m/z(M+1)+:491.2011。
实施例14
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-甲基-4-((3-氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物14的合成
化合物14的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):486.22；MS(ESI)m/z(M+1)+:487.2231。
实施例15
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(4-(苄氧基)-3-氯苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物15的合成
化合物15的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):488.17；MS(ESI)m/z(M+1)+:489.1816。
实施例16
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氰基-4-((3-氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物16的合成
化合物16的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):497.20；MS(ESI)m/z(M+1)+:498.2018。
实施例17
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氟-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物17的合成
化合物17的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):473.20；MS(ESI)m/z(M+1)+:474.2017。
实施例18
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((2-氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物18的合成
化合物18的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):506.16；MS(ESI)m/z(M+1)+:507.1711。
实施例19
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(6-((3-氟苄基)氧基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物19的合成
化合物19的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):473.20；MS(ESI)m/z(M+1)+:474.2016。
实施例20
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(4-((甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物20的合成
化合物20的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):460.27；MS(ESI)m/z(M+1)+:461.2713。
实施例21
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((4-氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物21的合成
化合物21的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):506.16；MS(ESI)m/z(M+1)+:507.1711。
实施例22
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((3,4-二氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物22的合成
化合物22的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):524.15；MS(ESI)m/z(M+1)+:525.1608。
实施例23
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((2,5-二氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物23的合成
化合物23的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):524.15；MS(ESI)m/z(M+1)+:525.1607。
实施例24
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(2-氟-4-((3-氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物24的合成
化合物24的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):490.19；MS(ESI)m/z(M+1)+:491.2013。
实施例25
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3,6-二氯-4-((3-氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物25的合成
化合物25的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):540.12；MS(ESI)m/z(M+1)+:541.1315。
实施例26
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(2-氯-4-((3-氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物26的合成
化合物26的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):506.16；MS(ESI)m/z(M+1)+:507.1720。
实施例27
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(2-甲基-4-((3-氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物27的合成
化合物27的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):486.22；MS(ESI)m/z(M+1)+:487.2224。
实施例28
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-(噻唑-2-基甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮2化合物8的合成
化合物28的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):495.12；MS(ESI)m/z(M+1)+:496.1313。
实施例29
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((6-甲基吡啶-2基)甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物29的合成
化合物29的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):503.18；MS(ESI)m/z(M+1)+:504.1911。
实施例30
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((6-甲基吡啶-3基)甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物30的合成
化合物30的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):503.18；MS(ESI)m/z(M+1)+:504.1915。
实施例31
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-氟苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物31的合成
化合物31的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):400.12；MS(ESI)m/z(M+1)+:401.1217。
实施例32
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-氟苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯-1-酮化合物32的合成
化合物32的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):457.18；MS(ESI)m/z(M+1)+:458.1820。
实施例33
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-(呋喃-2-基甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物33的合成
化合物33的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):478.15；MS(ESI)m/z(M+1)+:479.1621。
实施例34
1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((3-氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)苯基)丙烯酰胺化合物34的合成
化合物34的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):514.13；MS(ESI)m/z(M+1)+:515.1418。
实施例35
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-三氟甲基-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物35的合成
化合物35的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):523.19；MS(ESI)m/z(M+1)+:524.2012。
实施例36
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物36的合成
化合物36的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):547.21；MS(ESI)m/z(M+1)+:548.2125。
实施例37
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((1-甲基-1H-咪唑-2-基)甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物37的合成
化合物37的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):492.18；MS(ESI)m/z(M+1)+:493.1835。
实施例38
N-(5-((4-氨基-3-(3-氯-4-氟苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2-氟苯基)丙烯酰氯化合物38的合成
化合物38的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):440.10；MS(ESI)m/z(M+1)+:441.1056。
实施例39
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((1-甲基-1H-吲唑-3-基)甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物39的合成
化合物39的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):542.19；MS(ESI)m/z(M+1)+:543.2023。
实施例40
N-(5-((4-氨基-3-(3-氯-4-氟苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-2-((2-二甲基氨基)乙基(甲基)氨基)苯基)丙烯酰氯化合物40的合成
化合物40的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):522.21；MS(ESI)m/z(M+1)+:523.2128。
实施例41
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((1-甲基-1H-吲哚-3-基)甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物41的合成
化合物41的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):541.20；MS(ESI)m/z(M+1)+:542.2031。
实施例42
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-(噻吩-2-基)甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物42的合成
化合物42的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):494.13；MS(ESI)m/z(M+1)+:495.1384。
实施例43
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((5-甲基异恶唑-3-基)甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物43的合成
化合物43的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):493.16；MS(ESI)m/z(M+1)+:494.1711。
实施例44
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-甲基-4-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物44的合成
化合物44的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):527.26；MS(ESI)m/z(M+1)+:528.2719。
实施例45
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((3-(甲基磺酰基)苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物45的合成
化合物45的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):566.15；MS(ESI)m/z(M+1)+:567.1523。
实施例46
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-3-(吗啉-4-基羰基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物46的合成
化合物46的合成通过使用类似于实施例1和以下实施例48中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):495.18；MS(ESI)m/z(M+1)+:496.1840。
实施例47
(R)-1-(3-(3-(4-((1H-咪唑-2-基)甲氧基)-3-氯苯基)-4-氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物47的合成
化合物47的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):478.16；MS(ESI)m/z(M+1)+:479.1724。
实施例48
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-(吗啉-4-基羰基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮化合物48的合成
化合物j的合成：
3-氯-5-溴苯甲酸(2g,1eq)，吗啉(0.73g,1eq)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯HATU(3.8g,1.2eq)，N,N-二异丙基乙胺DIEA(1.4g,1.3eq)和N,N-二甲酰胺DMF(5mL)混合室温搅拌1h，后用乙酸乙酯(100mL)稀释，用水(20mL×3)洗，饱和食盐水洗，干燥后浓缩得固体3g。
化合物48的后几步合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):495.18；MS(ESI)m/z(M+1)+:496.1836。
实施例49
(R)-4-(1-(1-丙烯哌啶-3-基)-4-氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)-2-氯-N-吗啉苯甲酰胺化合物49的合成
化合物49的合成通过使用类似于实施例48和1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):510.19；MS(ESI)m/z(M+1)+:511.1942。
实施例50
(R)-4-(1-(1-丙烯哌啶-3-基)-4-氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)-2-氯-N-(2-吗啉乙基)苯甲酰胺50的合成
化合物50的合成通过使用类似于实施例48和1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):538.22；MS(ESI)m/z(M+1)+:5539.2248。
实施例51
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((3-氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-1-酮51的合成
化合物51的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):508.18；MS(ESI)m/z(M+1)+:509.1834。
实施例52
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-1-酮52的合成
化合物52的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):491.18；MS(ESI)m/z(M+1)+:492.1916。
实施例53
(S)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((3-氟苄基)氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮53的合成
化合物53的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):506.16；MS(ESI)m/z(M+1)+:507.1711。
实施例54
(S)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮54的合成
化合物54的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):489.17；MS(ESI)m/z(M+1)+:490.1713。
实施例55
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(6-(吡啶-2-基甲氧基)吡啶-3-基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-1-酮55的合成
化合物55的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):456.20；MS(ESI)m/z(M+1)+:457.2122。
实施例56
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-甲基-4-((6-甲基吡啶-2基)甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮56的合成
化合物56的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):483.24；MS(ESI)m/z(M+1)+:484.2436。
实施例57
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮57的合成
化合物57的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):506.19；MS(ESI)m/z(M+1)+:507.2016。
实施例58
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((1,3-二甲基-1H-吡唑-5-基)甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮58的合成
化合物58的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):506.19；MS(ESI)m/z(M+1)+:507.2021。
实施例59
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((4-甲基噻唑-5-基)甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮59的合成
化合物59的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):509.14；MS(ESI)m/z(M+1)+:510.1485。
实施例60
(R)-1-(3-(4-氨基-3-(3-氯-4-((2,4-二甲基噻唑-5-基)甲氧基)苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮60的合成
化合物60的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):523.16；MS(ESI)m/z(M+1)+:524.1677。
实施例61.新型激酶抑制剂对癌细胞生长的影响
通过测试新型激酶抑制剂对癌细胞的增殖的影响，我们进一步评估了本发明的化合物抑制癌细胞增殖的选择性。实施例中我们选用了人非小细胞肺癌细胞NCI-H1975(表达EGFR L858R/T790M双突变型基因)、人源非小细胞肺癌细胞PC-9(表达EGFR delE746_A750突变型基因)、人源非小细胞肺癌细胞HCC827(表达突变型EGFR delE746_A750突变型基因)、人肺腺癌细胞HCC4006(表达突变型EGFR delE746_A750突变型基因)、人非小细胞肺癌细胞NCI-H3255(表达EGFR L858R突变型基因)、人皮肤鳞癌细胞A431(表达野生型EGFR基因)、人非小细胞肺癌细胞A549(表达野生型EGFR基因)、人非小细胞肺癌细胞NCI-H460(表达野生型EGFR基因)、人非小细胞肺癌细胞NCI-H358(表达野生型EGFR基因)、人非小细胞肺癌细胞NCI-H23(表达野生型EGFR基因)、人非小细胞肺癌细胞NCI-H2122(表达野生型EGFR基因)、中国仓鼠卵巢细胞CHO(Cricetulus griseus，hamster，Chinese，ovary)、中国仓鼠肺细胞CHL、小鼠原B细胞BaF3，上述细胞均购自ATCC(美国)。
此外，本实施例还选用了小鼠BaF3-TEL-EGFR(稳定表达野生型EGFR激酶)、小鼠BaF3-TEL-WT-EGFR-C797S(稳定表达EGFR C797S突变型激酶)、小鼠TEL-EGFR-L858R/T790M-BaF3(稳定表达EGFR L858R/T790M突变型激酶)、小鼠BaF3-TEL-EGFR-L858R(稳定表达EGFR L858R突变型激酶)、小鼠BaF3-TEL-EGFR-L858R-C797S(稳定表达EGFR L858R/C797S突变型激酶)、小鼠BaF3-TEL-EGFR-T790M(稳定表达EGFR T790M突变型激酶)、小鼠BaF3-TEL-EGFR-T790M-C797S(稳定表达EGFR T790M/C797S突变型激酶)、小鼠BaF3-TEL-EGFR-T790M-L858R-C797S(稳定表达EGFR T790M/L858R/C797S突变型激酶)、小鼠BaF3-FL-EGFR-Del19(稳定表达EGFR delE746_A750突变型激酶)、小鼠BaF3-FL-EGFR-Del19-T790M(稳定表达EGFR delE746_A750/T790M突变型激酶)、小鼠BaF3-FL-EGFR-Del19-T790M-C797S(稳定表达EGFR delE746_A750/T790M/C797S突变型激酶)、小鼠BaF3-FL-EGFR-T790M-L858R(稳定表达EGFR T790M/L858R突变型激酶)、小鼠BaF3-FL-EGFR-T790M-L858R-C797S(稳定表达EGFR T790M/L858R/C797S突变型激酶)、小鼠BaF3/P210(稳定表达bcr/abl～(P210)突变型激酶)、小鼠BaF3-TEL-ABL-T315I(稳定表达ABLT315I突变型激酶)、小鼠BaF3-FLT3-ITD(稳定表达FLT3/ITD突变的激酶)、小鼠BaF3-TEL-JAK2(稳定表达JAK2激酶)、小鼠BaF3-TEL-JAK3(稳定表达JAK3激酶)、小鼠BaF3-TPR-MET(稳定表达MET激酶)、小鼠BaF3-TEL-BLK(稳定表达BLK激酶)、小鼠BaF3-TEL-ABL(稳定表达ABL激酶)、小鼠BaF3-TEL-BMX(稳定表达BMX激酶)、小鼠BaF3-TEL-ALK(稳定表达ALK激酶)。上述细胞株均由本实验室构建，构建方法为：PCR分别扩增人类EGFR、EGFR C797S、EGFR L858、EGFR L858R/T790M、EGFR L858/C797S、EGFR T790M、EGFR T790M/C797S、EGFR T790M/L858R、EGFRT790M/L858R/C797S、EGFR delE746_A750、EGFR delE746_A750/T790M、EGFR delE746_A750/T790M/C797S/、bcr/abl～(P210)、ABL T315I、FLT3/ITD、JAK2、JAK3、MET、BLK、ABL、BMX、ALK激酶区序列，并分别插入到带有N端TEL片段和/或者NPM片段和/或者TPR片段的MSCV-Puro载体(Clontech)，通过逆转录病毒方法，稳定转入小鼠BaF3细胞，并且撤除IL-3生长因子，最终得到依赖EGFR、EGFR C797S、EGFR L858、EGFR L858R/T790M、EGFR L858/C797S、EGFR T790M、EGFR T790M/C797S、EGFR T790M/L858R、EGFR T790M/L858R/C797S、EGFR delE746_A750、EGFR delE746_A750/T790M、EGFR delE746_A750/T790M/C797S、bcr/abl～(P210)、ABL T315I、FLT3/ITD、JAK2、JAK3、MET、BLK、ABL、BMX、ALK转入蛋白的细胞系。
在实施例中将不同浓度(0.000508μM、0.00152μM、0.00457μM、0.0137μM、0.0411μM、0.123μM、0.370μM、1.11μM、3.33μM、10μM)的化合物及对照化合物AZD9291(第三代口服、不可逆的选择性EGFR突变抑制剂，购自Haoyuan Chemexpress Co.,Ltd.)、CO-1686(第三代口服、不可逆的选择性EGFR突变抑制剂，购自Haoyuan Chemexpress Co.,Ltd)、BIBW2992(不可逆的EGFR抑制剂，购自Haoyuan Chemexpress Co.,Ltd)分别加入到上述细胞中，并孵育72小时，用Cell(Promega，美国)化学自发光法细胞活力检测试剂盒，用酶标仪读数来进行定量测定来检测活细胞数目。测试结果如表1所示。
表1.新型激酶抑制剂对癌细胞生长的影响(结果表示为GI50值，单位为μM)
续表1.新型激酶抑制剂对癌细胞生长的影响(结果表示为GI50值，单位为μM)
续表1.新型激酶抑制剂对癌细胞生长的影响(结果表示为GI50值，单位为μM)
续表1.新型激酶抑制剂对癌细胞生长的影响(结果表示为GI50值，单位为μM)
续表1.新型激酶抑制剂对癌细胞生长的影响(结果表示为GI50值，单位为μM)
续表1.新型激酶抑制剂对癌细胞生长的影响(结果表示为GI50值，单位为μM)
续表1.新型激酶抑制剂对癌细胞生长的影响(结果表示为GI50值，单位为μM)
续表1.新型激酶抑制剂对癌细胞生长的影响(结果表示为GI50值，单位为μM)
实施例62.新型激酶抑制剂对细胞信号通路的影响
在人非小细胞肺癌A549(表达野生型EGFR基因)细胞株、人非小细胞肺癌H1975(表达EGFR L858R/T790M双重突变基因)细胞株、人非小细胞肺癌PC-9(表达EGFR delE746_A750突变型基因)细胞株、人非小细胞肺癌H3255(表达EGFR L858R突变基因)细胞株、以及人非小细胞肺癌HCC827(表达EGFR delE746_A750突变型基因)五株细胞(以上细胞均购自美国ATCC)中，通过测定许多细胞生物化学终点和功能性终点，评估了化合物1、化合物29及化合物37对细胞中EGFR及与它信号通路相关的其他蛋白激酶(如：Stat3、AKT、ErK、eIF4E、4EBP1、P70S6K等)的影响。用不同浓度0μM、0.01μM、0.03μM、0.1μM、0.3μM、1μM、3μM的化合物1、化合物29、化合物37以及1μM的对照化合物AZD9291(第三代口服、不可逆的选择性EGFR突变抑制剂)、1μM的对照化合物Gefitinib(EGFR抑制剂)、1μM的对照化合物CO-1686(第三代口服、不可逆的选择性EGFR突变抑制剂)分别处理上述五株细胞4小时后，收集样品。测定化合物1、化合物29及化合物37对这些细胞株中的Stat3Y705、AKT T308、AKT S473、Erk T202/204、EGFR Y1068、P70S6K Thr389、eIF4E Ser209、4EBP1(Thr37/46)磷酸化的影响(图1)。
实验结果表明：在人非小细胞肺癌A549(表达野生型EGFR基因)细胞株、人非小细胞肺癌H1975(表达EGFRL858R/T790M双重突变基因)细胞株、人非小细胞肺癌PC-9(表达EGFR19delE746_A750突变型基因)细胞株及人非小细胞肺癌H3255(表达EGFR L858R突变基因)细胞株以及人非小细胞肺癌HCC827(表达EGFR delE746_A750突变型基因)细胞中，化合物1和/或化合物29和/或化合物37均能很强的抑制EGFR蛋白的磷酸化，同时对EGFR下游AKT308、eIF4E、P70S6K、ERK等蛋白的磷酸化也有明显的影响。同样的实验中，对照AZD9291、CO-1686、Gefitinib在浓度为1μM时的表现相似。
实施例63.新型激酶抑制剂对细胞凋亡的影响
为了证明用药以后细胞的死亡是通过凋亡还是坏死，在非小细胞肺癌A549(表达野生型EGFR基因)细胞株、非小细胞肺癌H1975(表达EGFR L858R/T790M双重突变基因)细胞株、非小细胞肺癌PC-9(表达EGFR delE746_A750突变型基因)细胞株、非小细胞肺癌H3255(表达EGFR L858R突变基因)细胞株、以及非小细胞肺癌HCC827(表达EGFR delE746_A750突变型基因)五株细胞(均购自ATCC)上，检测了化合物1在细胞中对与细胞凋亡密切相关的DNA修复酶聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶PARP、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase 3蛋白剪切的影响。用不同浓度0μM、0.01μM、0.03μM、0.1μM、0.3μM、1μM、3μM的化合物1以及1μM的AZD9291、CO-1686分别处理处理不同的非小细胞肺癌细胞，然后分别在48或者72小时后收集细胞。用Western Blot检测不同浓度的药在不同时间段对DNA修复酶聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶PARP和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase 3的剪切蛋白的影响。
实验结果如图2所示：在非小细胞肺癌细胞A549(表达野生型EGFR基因)中，作用72小时后，并没有看到有部分DNA修复酶聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶PARP或者PARP的下游Caspase 3的剪切。这证明了化合物1在非小细胞肺癌细胞A549(表达野生型EGFR基因)中不能够引起细胞的凋亡。然而在非小细胞肺癌H1975(表达EGFR L858R/T790M双重突变基因)细胞株、非小细胞肺癌PC-9(表达EGFR delE746_A750突变型基因)细胞株、非小细胞肺癌HCC827(表达EGFR delE746_A750突变型基因)细胞株及非小细胞肺癌H3255(表达EGFRL858R突变基因)细胞株中，在用药浓度为0.03μM给药48小时后均能够看到明显的DNA修复酶聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶PARP的剪切，而且还能够看到PARP的下游Caspase 3的剪切。这证明了化合物1能够引起非小细胞肺癌H1975(表达EGFR L858R/T790M双重突变基因)细胞株、非小细胞肺癌PC-9(表达EGFR delE746_A750突变型基因)细胞株、非小细胞肺癌H3255(表达EGFR L858R突变基因)细胞株、以及非小细胞肺癌HCC827(表达EGFR delE746_A750突变型基因)的凋亡。
实施例64.新型激酶抑制剂对细胞周期的影响
为了研究用药后细胞被阻止在哪个生长周期，非小细胞肺癌A549(表达野生型EGFR基因)细胞株、非小细胞肺癌H1975(表达EGFR L858R/T790M双重突变基因)细胞株、非小细胞肺癌PC-9(表达EGFR delE746_A750突变型基因)细胞株、非小细胞肺癌H3255(表达EGFR L858R突变基因)细胞株、以及非小细胞肺癌HCC827(表达EGFR delE746_A750突变型基因)五株细胞，测试了化合物1对这些细胞株的细胞周期分布的影响。用不同浓度的0μM、0.3μM、1μM(于DMSO中)的化合物1，1μM(于DMSO中)的对照化合物AZD9291(第三代口服、不可逆的选择性EGFR突变抑制剂)、1μM(于DMSO中)的对照化合物CO-1686(第三代口服、不可逆的选择性EGFR突变抑制剂)作用于上述五株细胞作用24小时后，收集细胞，用1X PBS缓冲液洗涤两次，将其用75％的乙醇于-20℃固定24小时，用1X PBS缓冲液再洗涤两次，加0.5mL1X PBS缓冲液和0.5mL的PI染色液(购自美国BD Bioscience)到细胞中并将细胞放置于黑暗避光37℃染色15分钟，用流式细胞仪(BD FACS Calibur)检测细胞周期分布。结果参见图3。
实验结果如图3所示：在非小细胞肺癌A549(表达野生型EGFR基因)细胞株中作用24小时后，化合物1对非小细胞肺癌A549(表达野生型EGFR基因)细胞株的细胞周期几乎没有影响。而在其它四株细胞中，细胞周期显著地被阻止在G0-G1期。
实施例65.化合物1在人的非小细胞肺癌细胞PC-9以及人非小细胞肺癌细胞H1975
小鼠模型中的实验结果
1.从上海斯莱克实验动物有限责任公司购买27只饲养4-6周龄的Balb/c雌性小鼠，饲养于SPF级实验室中，饮水及垫料均经高压消毒无菌处理，有关小鼠的所有操作均在无菌条件下进行；
2.第0天分别在所有小鼠左侧背部皮下注入5×106个人非小细胞肺癌细胞PC-9或人非小细胞肺癌细胞H1975(购自ATCC)；
3.第15天开始，每天向对应小鼠口服给药甲基纤维素(HKI)溶剂(6只小鼠)；剂量为25mg/kg鼠重的化合物1(7只小鼠)；剂量为50mg/kg鼠重的化合物1(7只小鼠)；剂量为100mg/kg鼠重的化合物1(7只小鼠)；
4.第15天开始，每天用游标卡尺测量皮下肿瘤的长/宽，并每天记录小鼠体重，观察化合物1对小鼠体重的影响；
5.第36天处死小鼠，取出皮下肿瘤，将肿瘤称重比较；
6.将肿瘤样品组织制备出蛋白裂解液样品待用；
7.统计16-36天内皮下肿瘤生长趋势，肿瘤体积计算方法：长×宽×宽/2mm3。
实验表明，如图4所示，在非小细胞肺癌细胞PC-9的小鼠肿瘤模型中，化合物1用药剂量在25mg/kg时，用药四天效果非常显著，肿瘤受到抑制，并且体重没有下降；用药剂量在50mg/kg时，用药四天效果非常显著，肿瘤抑制明显，并且体重没有下降，在第21天抑瘤率达28％；用药剂量在100mg/kg时，用药第二天效果非常显著，肿瘤抑制增强，并且体重没有下降，在第21天抑瘤率高达50％。
此外，实验还表明，如图5所示，在非小细胞肺癌细胞H1975的小鼠肿瘤模型中，化合物1的用药剂量在25mg/kg时，效果非常显著，且体重没有下降，在第21天抑瘤率达21％；化合物1的用药剂量在50mg/kg时，用药第四天效果非常显著，肿瘤得到明显抑制，且体重没有下降，在第21天抑瘤率高达39％；用药剂量在100mg/kg时，用药四天效果非常显著，肿瘤得到明显抑制，并且体重没有下降，在第21天抑瘤率高达46％。
Claims (10)
1.一种式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药，其具有以下结构：
其中，X选自C和N；
R1和R2各自独立地选自氢、卤素、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基、氰基、和杂环基羰基；
R3选自氢、卤素、芳基烷氧基、杂芳基烷氧基、杂环基烷基、杂环基羰基、和-CO-NH-(CH2)n-杂环基，其中n为0－3的整数，且R3可任选地被1－3个独立的R6取代；
R4选自
R5选自
R6独立地选自氢、卤素、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基、氰基、和甲磺酰基。
2.根据权利要求1所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药，其中
X是C，R1和R2中一个是氢，另一个是氯，且氯取代基在X处取代。
3.根据权利要求1或2所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药，其中
R4选自且R5选自
4.如权利要求1所述的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药，其选自以下化合物：
5.如权利要求1－4中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药在制备用于抑制酪氨酸激酶活性的药物中的用途，所述酪氨酸激酶选自野生型或各种突变或其组合的EGFR、野生型或各种突变或其组合的ALK、野生型或各种突变或其组合的KIT、野生型或各种突变或其组合的ABL、野生型或各种突变或其组合的FLT3、野生型或各种突变或其组合的BLK、野生型或各种突变或其组合的BMX、野生型或各种突变或其组合的BTK、野生型或各种突变或其组合的VEGFR、野生型或各种突变或其组合的RET、野生型或各种突变或其组合的PDGFR、野生型或各种突变或其组合的MEK、野生型或各种突变或其组合的MET、野生型或各种突变或其组合的BCR/ABL、野生型或各种突变或其组合的JAK、和野生型或各种突变或其组合的BRAF。
6.如权利要求1－4中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药在制备用于治疗、预防或改善由酪氨酸激酶活性调节的或者受其影响的或者其中涉及酪氨酸激酶活性的疾病、障碍或病症的受试者的药物中的用途。
7.如权利要求6所述的用途，其中所述疾病、障碍或病症为选自非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、肝癌、皮肤癌、神经胶质瘤、乳腺癌、黑色素瘤、恶性胶质瘤、横纹肌肉瘤、卵巢癌、星形细胞瘤、尤因氏肉瘤、成视网膜细胞瘤、上皮细胞癌、结肠癌、肾癌、胃肠间质瘤、白血病、组织细胞性淋巴癌、鼻咽癌中的至少一种增殖性疾病或其组合。
8.如权利要求7所述的用途，其中所述非小细胞肺癌是指携带野生型EGFR和/或EGFRT790M突变和/或EGFR L858R突变和/或EGFRdelE746_A750突变的耐药性非小细胞肺癌患者。
9.一种用于抑制EGFR酪氨酸激酶活性的方法，包括对受试者施用如权利要求1－4中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前体药物。
10.一种药物组合物，包括如权利要求1－4中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前体药物和药学上可接受的载体或助剂，以及任选的一种或多种其它治疗剂。
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