CN106883293A - 一种快速分离抗冻蛋白的方法 - Google Patents

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于淑惠
杨璞
郭丽红
王定康
银立新
韩丽
陈泽斌
李艳琼
任禛
刘贺
劲松
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants

Abstract

本发明的快速分离抗冻蛋白的方法为改进的冰吸附方法，具体步骤为：在底部封闭的漏斗(1)中加入液氮使其形成冰手指，并将形成冰手指的漏斗(1)通过铁架台(2)固定且置于底部放有磁珠(5)的烧杯(3)中,固定高度以离烧杯(3)底部1厘米为宜；烧杯(3)放置在磁力搅拌器(4)上。将要分离的组织匀浆溶液过滤后倒入烧杯(3)中，打开磁力搅拌器(4)，组织匀浆溶液在烧杯中旋转，并在形成冰手指的漏斗(1)周围结冰并吸附抗冻蛋白；经过3‑5分钟的吸附，取出漏斗(1)，放在一容器中，使吸附在漏斗(1)周围的抗冻蛋白融化；再重复吸附一次，经两轮吸附后富集出抗冻蛋白。本发明的优点在于：简洁快速、成本低、效率高、适用范围广。

Description

一种快速分离抗冻蛋白的方法
技术领域：
本发明涉一种快速分离抗冻蛋白的方法，属分子生物学研究技术领域。
背景技术：
抗冻蛋白以其独特的功能与特性和潜在的商业价值引起了广泛的关注，抗冻蛋白的异源表达可以提高动植物体的抗冻能力。此外，抗冻蛋白还可以作为食品添加剂提高食品质量；作为冰冻保护剂用于冰冻和低温贮存生物体、器官、组织和细胞系；作为化学佐剂以保护癌症冷冻手术中的目标组织以及作为新型的除冰剂，抗冻蛋白均具有广阔的应用前景。发掘具有更高热滞活性的抗冻蛋白具有重要的实际意义。
本技术应用领域主要针对抗冻蛋白在不同物种间不但抗冻活性差异很大，其序列特征也呈现多样性，因此，基于序列相似性比对的抗冻蛋白预测经常失败。基于结构特征的抗冻蛋白预测由于对已知抗冻蛋白的序列和结构特征依赖较大，并未达到预期的效果。目前昆虫抗冻蛋白的分离大多是采用越冬过程中的昆虫或者是经过低温驯化的昆虫，进行提取纯化，然后采用乙醇抽提、凝胶过滤层析、离子交换柱色谱分析、聚丙烯酰胺凝胶电泳以及高效液相色谱等方法，但是这些方法在实际操作中存在很多问题，对样品和技术的要求较高，很多时候并不能得到理想的结果。
为克服抗冻蛋白分离存在的困难，已有人根据抗冻蛋白冰吸附的原理，采用程控降温的方法，用降温的金属冰手指从溶液中富集抗冻蛋白，但该设备价格比较昂贵，操作也比较复杂。
因此，根据最近几年针对抗冻蛋白作用机理的研究，抗冻蛋白采用氢键和疏水相互作用与冰晶结合，并能不可逆的吸附在冰晶上，根据此原理，同时针对目前抗冻蛋白分离鉴定困难，相关设备价格昂贵、不易操作的现状，提供本本发明。经文献检索，未见与本发明相同的公开报道。
发明内容：
本发明的目的在于根据抗冻蛋白冰吸附的原理，克服现有仪器设备价格昂贵、操作不简便的不足，而提供一种简单、实用、快速的抗冻蛋白分离方法。
本发明方法为改进的冰吸附方法，具体步骤如下：
a.将漏斗(1)底部封闭，用液氮作为降温材料倒入将封闭漏斗(1)的底部形成冰手指，并通过铁架台(2)固定且置于底部放有磁珠(5)的烧杯(3)中,固定高度以离烧杯(3)底部1厘米为宜；烧杯(3)放置在磁力搅拌器(4)上；
b.将要分离的组织匀浆溶液过滤后倒入200毫升烧杯(3)中，打开磁力搅拌器(4)，组织匀浆溶液在烧杯(3)中旋转，在形成冰手指的漏斗管子(1)周围结冰并吸附抗冻蛋白；经过3-5分钟的吸附，将漏斗(1)取出，放置在一容器中，使吸附在漏斗(1)周围的抗冻蛋白融化；再重复吸附一次，经两轮吸附后富集出抗冻蛋白。
本发明所用仪器为市场购买和改进，所用液氮为市场购买。
本发明的优点在于：
1、简洁快速。本发明所涉及的操作步骤少、简单、便于操作。
2、成本低。所需配件主要为磁力搅拌器、铁架台，消耗少量液氮，设备成本非常低。
3、效率高。经过两轮吸附，能够从溶液中吸附到大量抗冻蛋白，经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，能看到一条或以上单一的条带。
4、适用范围广。本装置对吸要附抗冻蛋白的来源没有要求，根据抗冻蛋白结合冰晶的原理，抗冻蛋白均能吸附在液氮冷却的冰手指上。
附图说明：
图1为本发明所使用装置的主视结构示意图。
具体实施方式：
本发明所用仪器为市场购买和改进，所用液氮为市场购买。
本发明方法为改进的冰吸附方法，具体步骤如下：
a.将漏斗1底部在酒精灯上灼烧并使其底部末端封闭，用液氮作为降温材料倒入将封闭漏斗1中形成冰手指，并通过铁架台2固定且置于底部放有磁珠5的烧杯3中,固定高度以离烧杯3底部1厘米为宜；烧杯3放置在磁力搅拌器4上；
b.将要分离的组织匀浆溶液过滤后倒入200毫升烧杯3中，打开磁力搅拌器4，组织匀浆溶液在烧杯3中旋转，在形成冰手指的漏斗1周围结冰并吸附抗冻蛋白；经过3分钟或5分钟的吸附，将漏斗1取出，放置在一容器中，使吸附在漏斗1周围的抗冻蛋白融化；再重复吸附一次，经两轮吸附后富集出抗冻蛋白。
实际应用表明，本发明不仅简洁快速、成本低、效率高，而且适用范围非常广，对要分离抗冻蛋白的物种来源没有要求。

Claims (1)

1.一种快速分离抗冻蛋白的方法，其特征在于该方法的具体步骤如下：
a.将漏斗(1)底部封闭，用液氮作为降温材料倒入将封闭漏斗(1)的底部形成冰手指，并通过铁架台(2)固定且置于底部放有磁珠(5)的烧杯(3)中,固定高度以离烧杯(3)底部1厘米为宜；烧杯(3)放置在磁力搅拌器(4)上；
b.将要分离的组织匀浆溶液过滤后倒入烧杯(3)中，打开磁力搅拌器(4)，组织匀浆溶液在烧杯(3)中旋转，在形成冰手指的漏斗管子(1)周围结冰并吸附抗冻蛋白；经过3-5分钟的吸附，将漏斗(1)取出，放置在一容器中，使吸附在漏斗(1)周围的抗冻蛋白融化；再重复吸附一次，经两轮吸附后富集出抗冻蛋白。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111592593A (zh) * 2020-05-23 2020-08-28 新疆畜牧科学院畜牧业质量标准研究所（新疆维吾尔自治区种羊与羊毛羊绒质量安全监督检验中心） 一种胶原抗冻多肽分离装置

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1627055A (zh) * 2003-12-08 2005-06-15 安黎哲 高山冰缘植物抗冻蛋白分离与检测的方法及其装置
CN106349351A (zh) * 2016-08-25 2017-01-25 哈尔滨商业大学 一种冰法提取植物冰结构蛋白的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1627055A (zh) * 2003-12-08 2005-06-15 安黎哲 高山冰缘植物抗冻蛋白分离与检测的方法及其装置
CN106349351A (zh) * 2016-08-25 2017-01-25 哈尔滨商业大学 一种冰法提取植物冰结构蛋白的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MICHAEL J. KUIPER等: "Purification of antifreeze proteins by adsorption to ice", 《BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS》 *
刘尚等: "一种女贞叶抗冻蛋白的分离纯化", 《植物学通报》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111592593A (zh) * 2020-05-23 2020-08-28 新疆畜牧科学院畜牧业质量标准研究所（新疆维吾尔自治区种羊与羊毛羊绒质量安全监督检验中心） 一种胶原抗冻多肽分离装置
CN111592593B (zh) * 2020-05-23 2023-11-28 新疆畜牧科学院畜牧业质量标准研究所（新疆维吾尔自治区种羊与羊毛羊绒质量安全监督检验中心） 一种胶原抗冻多肽分离装置

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