CN106706620A - 一种过氧化苯甲酰快速检测方法及试剂盒 - Google Patents

一种过氧化苯甲酰快速检测方法及试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种过氧化苯甲酰快速检测方法及试剂盒，其通过向待测样品中加入甲醇，充分搅拌后，离心提取上清液；向所述上清液中加入邻苯二胺，混匀反应一定时间后，得到第一反应液；将所述第一反应液颜色与第一标准色卡进行定性定量的比对分析；向所述第一反应液中滴加一定量的酸性溶液，得到第二反应液；将所述第二反应液与第二标准色卡进行定性定量的二次判断；待测样品中的过氧化苯甲酰与邻苯二胺反应生成青色反应液，加入酸性溶液后青色反应液转化为红棕色反应液，两步颜色的转变可进行双重定性定量分析，操作简便快捷，反应条件温和，灵敏度高，特异性好，抗干扰能力强，无需仪器可实现半定量分析，适用于现场分析和筛查工作。

Description

一种过氧化苯甲酰快速检测方法及试剂盒
技术领域
本发明涉及食品检测技术领域，特别是一种过氧化苯甲酰快速检测方法及其应用该方法的试剂盒。
背景技术
过氧化苯甲酰具有强氧化性，易还原为苯甲酸，可漂白小麦粉，且有杀菌性能，但对小麦粉中β-胡萝卜素、维生素A、维生素E和维生素B1等均有较强的破坏作用。过多的苯甲酸会加重肝脏负担，严重时使肾、肝出现病理变化，寿命和生长都将受到影响；面粉中残留的未分解的过氧化苯甲酰，在面食加热制作过程中能产生苯自由基，进而会形成苯、苯酚、联苯，这些产物都有毒性，对健康有不良的影响；自由基氧化会加速人体衰老，导致动脉粥样硬化，甚至诱发多种疾病。我国在1997年修订的《食品添加剂食用卫生标准》中规定过氧化苯甲酰的最大使用量为60mg/kg，卫生部于2011年起要求全面禁止在面粉中添加过氧化苯甲酰。
目前用于检测过氧化苯甲酰的技术有色谱法和分光光度法。色谱法有气相色谱法、高效液相色谱法等，而分光光度法包括碘量法、铁粉还原法等。这些方法的样品前处理过于繁琐耗时，且对体系的其它氧化剂成分抗干扰能力弱，在现场快速检测中局限性较大。
发明内容
本发明为解决上述问题，提供了一种过氧化苯甲酰快速检测方法及试剂盒，操作简便快捷，反应条件温和，灵敏度高，特异性好，抗干扰能力强，无需仪器可实现半定量分析，适用于现场分析和筛查工作。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种过氧化苯甲酰快速检测方法，其包括以下步骤：
10)向待测样品中加入甲醇，充分搅拌后，离心提取上清液；
20)向所述上清液中加入邻苯二胺，混匀反应一定时间后，得到第一反应液；
30)将所述第一反应液颜色与第一标准色卡进行定性定量的比对分析；
40)向所述第一反应液中滴加一定量的酸性溶液，得到第二反应液；
50)将所述第二反应液与第二标准色卡进行定性定量的二次判断。
优选的，所述第一标准色卡的制作，是通过配制一系列不同浓度的过氧化苯甲酰标准品溶液，并向所述过氧化苯甲酰标准品溶液加入甲醇，充分搅拌后，离心提取上清液，向所述上清液中加入邻苯二胺，混匀反应一定时间后，得到第一标准反应液，并根据该第一标准反应液的颜色制成第一标准色卡。
优选的，所述第二标准色卡的制作，是通过向所述第一标准反应液中滴加一定量的酸性溶液，得到第二标准反应液，并根据该第二标准反应液的颜色制成所述第二标准色卡。
优选的，所述邻苯二胺为0.5～8g/100mL的溶液，溶剂为甲醇。
进一步的，所述邻苯二胺的浓度为5g/100mL。
优选的，所述酸性溶液为盐酸溶液、硫酸溶液、硝酸溶液或者醋酸溶液，浓度为1％～50％。
进一步的，所述酸性溶液为50％盐酸水溶液。
另外，本发明还提供一种过氧化苯甲酰快速检测试剂盒，所述试剂盒由甲醇溶液、邻苯二胺溶液、酸性溶液、第一标准比色卡和第二标准比色卡组成；所述邻苯二胺为0.5～8g/100mL的溶液，溶剂为甲醇；所述酸性溶液为盐酸溶液、硫酸溶液、硝酸溶液或者醋酸溶液，浓度为1％～50％；所述的第一标准比色卡是根据不同浓度的过氧化苯甲酰标准品溶液进行检测得到的第一标准反应液的颜色制成，每一个色块代表相应的过氧化苯甲酰浓度；所述的第二标准比色卡是根据不同浓度的过氧化苯甲酰标准品溶液进行检测得到的第二标准反应液的颜色制成，每一个色块代表相应的过氧化苯甲酰浓度。
优选的，所述邻苯二胺的浓度为5g/100mL。
优选的，所述酸性溶液为50％盐酸水溶液。
本发明的有益效果是：
本发明的一种过氧化苯甲酰快速检测方法及试剂盒，其通过向待测样品中加入甲醇，充分搅拌后，离心提取上清液；向所述上清液中加入邻苯二胺，混匀反应一定时间后，得到第一反应液；将所述第一反应液颜色与第一标准色卡进行定性定量的比对分析；向所述第一反应液中滴加一定量的酸性溶液，得到第二反应液；将所述第二反应液与第二标准色卡进行定性定量的二次判断；待测样品中的过氧化苯甲酰与邻苯二胺反应生成青色反应液，加入酸性溶液后青色反应液转化为红棕色反应液，两步颜色的转变可进行双重定性定量分析，特异性好，抗干扰能力强。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1为本发明一种过氧化苯甲酰快速检测方法的检测步骤流程图；
图2为本发明一种过氧化苯甲酰快速检测方法的第一标准色卡的示意图；
图3为本发明一种过氧化苯甲酰快速检测方法的第二标准色卡的示意图；
图4为本发明以面粉作为待测样品的测试过程示意图。
具体实施方式
为了使本发明所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚、明白，以下结合附图及实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
如图1所示，本发明的一种过氧化苯甲酰快速检测方法，其包括以下步骤：
10)向待测样品中加入甲醇，充分搅拌后，离心提取上清液；
20)向所述上清液中加入邻苯二胺，混匀反应一定时间后，得到第一反应液；
30)将所述第一反应液颜色与第一标准色卡进行定性定量的比对分析；
40)向所述第一反应液中滴加一定量的酸性溶液，得到第二反应液；
50)将所述第二反应液与第二标准色卡进行定性定量的二次判断。
所述第一标准色卡的制作，是通过配制一系列不同浓度的过氧化苯甲酰标准品溶液，并向所述过氧化苯甲酰标准品溶液加入甲醇，充分搅拌后，离心提取上清液，向所述上清液中加入邻苯二胺，混匀反应一定时间后，得到第一标准反应液，并根据该第一标准反应液的颜色制成第一标准色卡。
所述第二标准色卡的制作，是通过向所述第一标准反应液中滴加一定量的酸性溶液，得到第二标准反应液，并根据该第二标准反应液的颜色制成所述第二标准色卡。
本实施例中，所述邻苯二胺为0.5～8g/100mL的溶液，溶剂为甲醇。优选的，所述邻苯二胺的浓度为5g/100mL。
本实施例中，所述酸性溶液为盐酸溶液、硫酸溶液、硝酸溶液或者醋酸溶液，浓度为1％～50％。优选的，所述酸性溶液为50％盐酸水溶液。
其中，所述待测样品的上清液与所述邻苯二胺的混和反应时间，与所述过氧化苯甲酰标准品溶液的上清液与所述邻苯二胺的混合反应时间，二者是相对应，本实施例中，所述反应时间均为3min。
另外，本发明还提供一种过氧化苯甲酰快速检测试剂盒，所述试剂盒由甲醇溶液、邻苯二胺溶液、酸性溶液、第一标准比色卡和第二标准比色卡组成；所述邻苯二胺为0.5～8g/100mL的溶液，溶剂为甲醇；所述酸性溶液为盐酸溶液、硫酸溶液、硝酸溶液或者醋酸溶液，浓度为1％～50％；所述的第一标准比色卡是根据不同浓度的过氧化苯甲酰标准品溶液进行检测得到的第一标准反应液的颜色制成，每一个色块代表相应的过氧化苯甲酰浓度；所述的第二标准比色卡是根据不同浓度的过氧化苯甲酰标准品溶液进行检测得到的第二标准反应液的颜色制成，每一个色块代表相应的过氧化苯甲酰浓度。
本实施例中，所述邻苯二胺的浓度为5g/100mL，所述酸性溶液为50％盐酸水溶液。
本发明的工作原理，主要是依据甲醇溶液中过氧化苯甲酰与邻苯二胺可快速反应形成青色化合物，再滴加酸性溶液后青色化合物转变为红棕色化合物，从而进行二次判断。采用本发明的方法，操作简便快捷，反应条件温和，灵敏度高，特异性好，抗干扰能力强，无需仪器可实现半定量分析，适用于现场分析和筛查工作。
本实施例的标准色卡的制作过程简述如下：
配制一系列不同浓度的过氧化苯甲酰标准品溶液，加入邻苯二胺，混匀后静置反应3分钟，制作第一标准色卡(如图2所示)，再滴加酸性溶液后，青色化合物转变为红棕色化合物，制作第二标准色卡(如图3所示)。
所述一系列不同浓度的过氧化苯甲酰标准品的溶液中，所述过氧化苯甲酰的浓度依次为0、10、30、60、90mg/L；
所述一系列不同浓度的过氧化苯甲酰标准品的溶液的体积均为2mL；
所述过氧化苯甲酰检测试剂盒中邻苯二胺的体积为0.2mL；
所述过氧化苯甲酰检测试剂盒中酸性溶液的体积为0.1mL。
同时，考察所述过氧化苯甲酰快速检测方法的特异性及抗干扰性，如下表所示：
成分 现象 结论
过氧化氢(H2O2)(1000ppm) 无色 无干扰
溴酸钾(KBrO3)(1000ppm) 无色 无干扰
苯甲酸(BA)(100ppm) 无色 无干扰
苯甲酸(BA)(100ppm)+过氧化氢(1000ppm) 无色 无干扰
苯甲酸(BA)(100ppm)+溴酸钾(1000ppm) 无色 无干扰
过氧化苯甲酰(BP)(100ppm) 青色 无干扰
过氧化苯甲酰(BP)(100ppm)+过氧化氢(1000ppm) 青色 无干扰
过氧化苯甲酰(BP)(100ppm)+溴酸钾(1000ppm) 青色 无干扰
本发明提供的过氧化苯甲酰检测试剂盒，具有以下特点：
a)待测过氧化苯甲酰与邻苯二胺反应生成青色化合物，加入酸性溶液后青色化合物转化为红棕色化合物，两步颜色的转变可进行双重定性定量分析，特异性好，抗干扰能力强。
b)反应条件温和，常温20～30℃均可。
c)检测速度快，3分钟内即可完成显色。
d)灵敏度高，过氧化苯甲酰在≥10ppm时，即可肉眼观察到颜色，无需仪器就可进行半定量分析。
以面粉作为待测样品为例(如图4所示)，检测过程简述如下：
称取1.0g面粉于10mL的离心管中，加入5mL的甲醇溶液震荡2min后离心，取上清液备用。
向所述上清液中加入邻苯二胺，混匀反应3min后，得到青色的第一反应液；将所述第一反应液颜色与第一标准色卡进行定性定量的比对分析；
然后向所述第一反应液中滴加一定量的酸性溶液，青色的第一反应液转变为红棕色的第二反应液；将所述第二反应液与第二标准色卡进行定性定量的二次判断。
需要说明的是，本说明书中的各个实施例均采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似的部分互相参见即可。对于试剂盒实施例而言，由于其与方法实施例基本相似，所以描述的比较简单，相关之处参见方法实施例的部分说明即可。并且，在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。另外，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分步骤可以通过硬件来完成，也可以通过程序来指令相关的硬件完成，所述的程序可以存储于一种计算机可读存储介质中，上述提到的存储介质可以是只读存储器，磁盘或光盘等。
上述说明示出并描述了本发明的优选实施例，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种过氧化苯甲酰快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
10)向待测样品中加入甲醇，充分搅拌后，离心提取上清液；
20)向所述上清液中加入邻苯二胺，混匀反应一定时间后，得到第一反应液；
30)将所述第一反应液颜色与第一标准色卡进行定性定量的比对分析；
40)向所述第一反应液中滴加一定量的酸性溶液，得到第二反应液；
50)将所述第二反应液与第二标准色卡进行定性定量的二次判断。
2.根据权利要求1所述的一种过氧化苯甲酰快速检测方法，其特征在于：所述第一标准色卡的制作，是通过配制一系列不同浓度的过氧化苯甲酰标准品溶液，并向所述过氧化苯甲酰标准品溶液加入甲醇，充分搅拌后，离心提取上清液，向所述上清液中加入邻苯二胺，混匀反应一定时间后，得到第一标准反应液，并根据该第一标准反应液的颜色制成第一标准色卡。
3.根据权利要求2所述的一种过氧化苯甲酰快速检测方法，其特征在于：所述第二标准色卡的制作，是通过向所述第一标准反应液中滴加一定量的酸性溶液，得到第二标准反应液，并根据该第二标准反应液的颜色制成所述第二标准色卡。
4.根据权利要求1或2或3所述的一种过氧化苯甲酰快速检测方法，其特征在于：所述邻苯二胺为0.5～8g/100mL的溶液，溶剂为甲醇。
5.根据权利要求4所述的一种过氧化苯甲酰快速检测方法，其特征在于：所述邻苯二胺的浓度为5g/100mL。
6.根据权利要求1或2或3所述的一种过氧化苯甲酰快速检测方法，其特征在于：所述酸性溶液为盐酸溶液、硫酸溶液、硝酸溶液或者醋酸溶液，浓度为1％～50％。
7.根据权利要求6所述的一种过氧化苯甲酰快速检测方法，其特征在于：所述酸性溶液为50％盐酸水溶液。
8.一种过氧化苯甲酰快速检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒由甲醇溶液、邻苯二胺溶液、酸性溶液、第一标准比色卡和第二标准比色卡组成；所述邻苯二胺为0.5～8g/100mL的溶液，溶剂为甲醇；所述酸性溶液为盐酸溶液、硫酸溶液、硝酸溶液或者醋酸溶液，浓度为1％～50％；所述的第一标准比色卡是根据不同浓度的过氧化苯甲酰标准品溶液进行检测得到的第一标准反应液的颜色制成，每一个色块代表相应的过氧化苯甲酰浓度；所述的第二标准比色卡是根据不同浓度的过氧化苯甲酰标准品溶液进行检测得到的第二标准反应液的颜色制成，每一个色块代表相应的过氧化苯甲酰浓度。
9.根据权利要求8所述的一种过氧化苯甲酰快速检测试剂盒，其特征在于：所述邻苯二胺的浓度为5g/100mL。
10.根据权利要求8所述的一种过氧化苯甲酰快速检测试剂盒，其特征在于：所述酸性溶液为50％盐酸水溶液。
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