CN106706608A - β‑羟丁酸的检测试剂及β‑羟丁酸的检测试纸 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了β‑羟丁酸的检测试剂及β‑羟丁酸的检测试纸。该检测试剂包含3～5KU/L的黄递酶、9～13KU/L的β‑羟丁酸脱氢酶、1.2～2.5KU/L的NAD和0.6～1.0KU/L的NBT。本发明的检测试剂，其含有多种特定酶进行特定配比，能达到检测快速和检测较为准确的目的。本发明的检测试纸包括反应基层、反应层、滤血层和亲水层，这些层叠加构成一个虹吸体系，进一步保证了检测快速和检测较为准确。
Description
技术领域
本发明涉及β-羟丁酸检测的技术领域，具体而言，涉及β-羟丁酸的检测试剂及β-羟丁酸的检测试纸。
背景技术
目前，用于检测血液中是否存在某种成分或该成分的含量的方法包括液体试剂检测和干化学试纸检测。干化学试纸具有使用方便、操作简单、快速出结果的特点。
根据检测液体样本在干化学试纸上的流动路程，可以将干化学试纸分为多种类型，纵向垂直检测试纸是干化学试纸的一种。纵向垂直检测试纸包括将带有反应试剂的载体相互叠加在一起，液体样本自上而下的流经各个反应试剂层，最终显示检测结果。例如美国专利US4816224采用纵向垂直检测试纸的方法。
纵向垂直检测试纸其反应试剂载体的面积都较小，因此只需要较少的液体样本用量就可以完成检测。因为个体差异，在指尖采血的过程中，采集的样本量是很难控制的，例如，欧美人的指尖采血量往往会比亚洲人多。而反应试剂载体对液体的吸收有一定的饱和度，当滴加在试纸上的血样过多时，现有的干化学检测试纸没办法及时处理多余的血样。如现有技术中的纵向垂直检测试纸，该试纸包括：底板粘附并支撑着反应层，反应层上 覆盖有样本分离层、玻纤层和网格层。当液体滴加到网格层后垂直流经玻纤和样本分离层，最终达到反应层发生化学反应。若加入的血液样本量较多，达到液体饱和的反应层不能再吸收多余的样本时，这些多余的血样就会溢出检测试纸，污染环境或者接触到检测者。多余的血液还会聚集在反应试剂层上形成液滴，不仅影响光学等检测仪器对结果的判读，还会严重的污染检测仪器。
专利CN 102128918A采用了一种锁液结构，此结构试纸包括：底板上粘附并支撑着反应层，在反应层相对于底板的另一侧覆盖有加样层，加样层上有一加样口。反应层沿着底板方向的至少一侧搭接着锁液部件，锁液部件被固定在底板上。在底板相对于反应层处有一用于读取反应结果的检测窗。所有结构通过粘合片更牢固的固定他们之间的位置。当液体样本加到加样层时，先垂直流入反应层并被反应层所吸收。当反应层液体饱和时，液体通过横向测流的方式扩散到与反应层搭接的锁液部件中。由于锁液部件吸收液体的速度小于或等于反应层的吸收液体速度，所以当多余液体扩散到锁液部件时，反应层上的液体已经足够进行相关的检测反应，从而并不影响检测反应所需的有效用量。当加入过量的样本时，多余的样本被锁液部件所吸收，因此多余的样本不会形成液滴溢出试纸之外。
以上现有技术中，检测准确度有待提高，检测不够快速。
发明内容
有鉴于此，本发明一方面在于提供一种β-羟丁酸的检测试剂，该检测试剂检测较为快速，检测准确度较高。
一种β-羟丁酸的检测试剂，其包含3～5KU/L的黄递酶、9～13KU/L的β-羟丁酸脱氢酶、1.2～2.5KU/L的NAD和0.6～1.0KU/L的NBT。
进一步地，其还包含0.08～0.12mmol/L Tris-HCl缓冲液。
进一步地，所述Tris-HCl缓冲液的pH为8.0～9.0；
进一步地，其还包含1.0～1.5g/L海藻糖。
本发明另一方面在于提供一种β-羟丁酸的检测试纸，该检测试纸检测较为快速，检测准确度较高。
一种β-羟丁酸的检测试纸，包括反应基层、设置于所述反应基层一表面的反应层、设置于反应层的一表面的滤血层，和设置于所述滤血层一表面的亲水层，所述反应层的表面涂覆有如上述的检测试剂。
进一步地，所述反应基层的材质为聚氯乙烯、聚碳酸酯、聚酰胺酯或聚酯；
进一步地，所述反应基层与反应层之间设有一双面胶。
进一步地，所述亲水层和滤血层之间设有一双面胶。
进一步地，所述亲水层为亲水膜或网纱。
进一步地，所述反应基层设有孔，所述反应基层与反应层之间的双面胶设有孔。
本发明的检测试剂，其含有多种特定酶进行特定配比，能达到检测快速和检测较为准确的目的。本发明的检测试纸包括反应基层、反应层、滤血层和亲水层，这些层叠加构成一个虹吸体系，进一步保证了检测快速和检测较为准确。
附图说明
图1为本发明实施例检测试纸的结构示意图。
主要元件符号说明：
100 检测试纸
30 反应基层
31,41 孔
40,70 双面胶
50 反应层
60 滤血层
80 亲水层。
具体实施方式
除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。
如本文所用之术语：
“由……制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
连接词“由……组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由……组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优 选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1～4”、“1～3”、“1～2”、“1～2和4～5”、“1～3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
“质量份”指表示多个组分的质量比例关系的基本计量单位，1份可表示任意的单位质量，如可以表示为1g，也可表示2.689g等。假如我们说A组分的质量份为a份，B组分的质量份为b份，则表示A组分的质量和B组分的质量之比a：b。或者，表示A组分的质量为aK，B组分的质量为bK(K为任意数，表示倍数因子)。不可误解的是，与质量分数不同的是，所有组分的质量份之和并不受限于100份之限制。
“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如，A和/或B包括(A和B)和(A或B)；
此外，本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。
本发明的β-羟丁酸的检测试剂，其包含3～5KU/L的黄递酶、9～13KU/L的β-羟丁酸脱氢酶、1.2～2.5KU/L的NAD和0.6～1.0KU/L的NBT。
具体地，黄递酶的含量可以为3KU/L、3.5KU/L、4KU/L、4.5KU/L、5KU/L等；β-羟丁酸脱氢酶的含量可以为9KU/L、9.5KU/L、11KU/L、12KU/L、12.5KU/L或13KU/L等；NAD的含量可以为 1.2KU/L、1.4KU/L、1.8KU/L、2.3KU/L、2.5KU/L等；NBT的含量可以为0.6KU/L、0.7KU/L、0.9KU/L、0.95KU/L或1KU/L等。
此处，NAD是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，简称辅酶Ⅰ。其CAS号为53-84-9。NBT即氯化硝基四氮唑蓝，其CAS号为298-83-9。
作为本发明的上述检测试剂，除了可以包含上述原料，还可以包含Tris-HCl缓冲液，以维持体系的pH稳定性。Tris-HCl缓冲液的含量以0.08～0.12mmol/L为佳，如0.08mmol/L、0.085mmol/L、0.09mmol/L、0.10mmol/L、0.11mmol/L或0.12mmol/L等，优选为0.10mmol/L等。
Tris-HCl缓冲液的pH较好地为8.0～9.0，如8.0、8.2、8.5、8.8、8.9、9.0等。
作为本发明的上述检测试剂，还可进一步地包含1.0～1.5g/L海藻糖，例如海藻糖的含量可以为1.0g/L、1.05g/L、1.1g/L、1.2g/L、1.3g/L、1.4g/L、1.45g/L或1.5g/L等。
本发明的β-羟丁酸的检测试纸100，包括反应基层30、设置于该反应基层30一表面的反应层50、设置于反应层50的一表面的滤血层60，和设置于所述滤血层60一表面的亲水层80，所述反应层50的表面涂覆有如上述的检测试剂。
作为本发明的检测试纸100，其反应基层30的作用是支撑整个检测试纸100。反应基层30的材质为聚氯乙烯(PVC)、聚碳酸酯(PC)、聚酰胺酯(PA)或聚酯(PBT和PET的统称)，优选为聚酯，进一步优选为PET基板。
反应基层30的形式可以为薄膜或薄板，其可以设置有一孔31，以作为光反射检测之用。
反应层50的表面用来滴附检测试剂，反应层50的形式可以为薄膜。 反应层50与反应基层30之间可设置一双面胶40。该双面胶40的面积可以小于反应基层30，可大于反应层50。
该双面胶40可以设置一孔41，该孔41可以于反应基层30的孔31对齐，在反应层50通过双面胶40贴覆于反应基层30时。
作为本发明的检测试纸100，滤血层60的形式可以为薄膜。滤血层60的面积可大于反应层，这样滤血层60覆盖在反应层50上时其两端粘贴在双面胶40。滤血层60的面积可小于粘合其的双面胶40的大小。
亲水层和滤血层之间可以设有一双面胶70。该双面胶可以为U型双面胶和方形双面胶，并分别粘贴在滤血层60的上下两端。需要说明的是，亲水层80和双面胶70的U型口构建的虹吸槽到达滤血层。
上述亲水层80可以为亲水膜或网纱。
以上未述及之处适用于现有技术。
实施例1
步骤一、在一定的硬度的PET材质的反应基层30贴上双面胶40，打孔后备用。
步骤二、撕掉反应基层40上双面胶，将反应膜50粘贴在PET板的双面胶40上，反应膜50需要完全覆盖住PET基板上的孔31。
步骤三、按照该配比配制检测试剂：包含3KU/L的黄递酶、9KU/L的β-羟丁酸脱氢酶、1.2KU/L的NAD和0.6KU/L的NBT、0.08mmol/L(pH为8.0)的Tris-HCl缓冲液、1.0g/L g/L海藻糖。将配制好的检测试剂用点胶机滴加到反应膜板的孔中，每孔重量为6mg，滴完液的膜板放入烘道干燥，干燥温度：37℃，干燥时间20min，得反应层50。
步骤四、贴上并将滤血层60完全覆盖住反应层50。
步骤五、围绕反应层50贴上U型双面胶70，利用虹吸原理，用U型 双面胶70和亲水层80(亲水膜或网纱)作为组成一个微量吸样装置，可以固定吸样的量。
实施例2
本例中检测试剂包含包含3KU/L的黄递酶、13KU/L的β-羟丁酸脱氢酶、2.5KU/L的NAD和0.6KU/L的NBT、0.12mmol/L(pH为9.0)的Tris-HCl缓冲液、1.5g/L g/L海藻糖，其它均同实施例1。
实施例3
本例中检测试剂包含5KU/L的黄递酶、9KU/L的β-羟丁酸脱氢酶、1.2KU/L的NAD和1.0KU/L的NBT、0.08mmol/L(pH为8.0)的Tris-HCl缓冲液、1.0g/L g/L海藻糖，其它均同实施例1。
实施例4
本例中检测试剂包含包含5KU/L的黄递酶、13KU/L的β-羟丁酸脱氢酶、1.85KU/L的NAD和0.8KU/L的NBT、0.10mmol/L(pH为8.0～9.0)的Tris-HCl缓冲液、1.0g/L g/L海藻糖，其它均同实施例1。
实施例5
本例中检测试剂包含4KU/L的黄递酶、10.5KU/L的β-羟丁酸脱氢酶、1.85KU/L的NAD和0.80KU/L的NBT、0.10mmol/L(pH为8.5)的Tris-HCl缓冲液、1.3g/L g/L海藻糖，其它均同实施例1。
对比例
某医院测试样本。
评价方法：
将实施例5的β-羟丁酸的检测试纸100直接插入自制干式化学分析仪中，6分钟后结果在仪器上显示出来。表1为自制干式化学分析仪的测试结果跟对比例测试结果对比表，其相关性达到0.991。可直接用于临床上测试。
表1、医院测试样品的测试结果与本发明β-羟丁酸测试结果相比
本发明的检测试纸100具有以下优势：抗干扰能力更强，有效的消除了红细胞及内源性物质的干扰，并且能在6分钟内能准确的测试全血的β-羟丁酸的浓度，测试结果与传统的方法相比测试结果更准确。与公司自制的便携式干式化学分析仪一起使用，更符合临床旁边的要求，适合医院急诊、病房、社区医院、家庭用户等使用。
由于本发明中所涉及的各工艺参数的数值范围在上述实施例中不可能全部体现，但本领域的技术人员完全可以想象到只要落入上述该数值范围 内的任何数值均可实施本发明，当然也包括若干项数值范围内具体值的任意组合。此处，出于篇幅的考虑，省略了给出某一项或多项数值范围内具体值的实施例，此不应当视为本发明的技术方案的公开不充分。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅料组分成分的添加、具体方式选择等，落在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种β-羟丁酸的检测试剂，其特征在于，其包含3～5KU/L的黄递酶、9～13KU/L的β-羟丁酸脱氢酶、1.2～2.5KU/L的NAD和0.6～1.0KU/L的NBT。
2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，其还包含0.08～0.12mmol/L Tris-HCl缓冲液。
3.根据权利要求2所述的检测试剂，其特征在于，所述Tris-HCl缓冲液的pH为8.0～9.0。
4.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，其还包含1.0～1.5g/L海藻糖。
5.一种β-羟丁酸的检测试纸，其特征在于，包括反应基层、设置于所述反应基层一表面的反应层、设置于反应层的一表面的滤血层，和设置于所述滤血层一表面的亲水层，所述反应层的表面涂覆有如权利要求1～4任意一项所述的检测试剂。
6.根据权利要求5所述的检测试纸，其特征在于，所述反应基层的材质为聚氯乙烯、聚碳酸酯、聚酰胺酯或聚酯。
7.根据权利要求5所述的检测试纸，其特征在于，所述反应基层与反应层之间设有一双面胶。
8.根据权利要求5所述的检测试纸，其特征在于，所述亲水层和滤血层之间设有一双面胶。
9.根据权利要求8所述的检测试纸，其特征在于，所述亲水层为亲水膜或网纱。
10.根据权利要求5所述的检测试纸，其特征在于，所述反应基层设有孔，所述反应基层与反应层之间的双面胶设有孔。
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