CN106668282A - 益心宁神片在制备治疗心脏疾病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及益心宁神片在制备治疗心脏疾病药物中的应用。本发明通过大量研究发现，益心宁神片具有扩张冠脉、增加冠脉血流量、降低心肌耗氧量、保护缺血心肌等作用，是一种治疗冠心病心绞痛较有效的中成药制剂。

Description

益心宁神片在制备治疗心脏疾病药物中的应用

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及益心宁神片在制备治疗心脏疾病药物中的应用。

背景技术

益心宁神片由辽宁上药好护士药业(集团)有限公司生产，批准文号为国药准字Z21021665。本品有效成分为人参茎叶总皂苷、藤合欢、五味子、灵芝。益心宁神片可以补气生津，养心安神，用于心气不足、心阴亏虚所致的失眠多梦、心悸、记忆力减退；神经衰弱见上述证候者。现阶段临床应于主要是是失眠、神经衰弱、焦虑症患者。

益心宁神片中人参茎叶总皂苷为人参有效提取成分，功可补气健脾，生津止渴，养心安神，为君药。灵芝甘平，具有滋养安神，健脾益肾之功，助人参补气安神；五味子味酸，功专生津安神，敛肺滋肾，与诸多甘味药相伍，酸甘化阴，助君药益气生津，安神敛阴；君臣相须为用，补气生津，宁心安神。藤合欢为佐药，味甘微苦，使补而不滞。诸药合用，共奏补气生津，养心安神之功。

目前，未见关于益心宁神片用于治疗其它疾病的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供益心宁神片在制备治疗心脏疾病药物中的应用。

本发明所述益心宁神片的有效成分包括藤合欢、五味子、灵芝以及人参茎叶总皂苷，或藤合欢、五味子和灵芝的提取物以及人参茎叶总皂苷。

具体而言，所述有效成分可采用如下方法加工而成：将五味子粉碎成粗粉，加75％乙醇，温浸30分钟，回流提取2次，第一次2.5小时，第次2小时，合并提取液，浓缩至稠膏状，得五味子提取物；取藤合欢和灵芝，加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至稠膏状，得藤合欢和灵芝提取物；将所述五味子提取物与藤合欢和灵芝提取物合并，干燥，粉碎成细粉，加入人参茎叶总皂苷，即得。

本发明所述心脏疾病可以由心率失常、心肌缺血或中的一种机理引起，或由两种机理结合引起。

所述心肌缺血为急性心肌缺血和/或睡眠不足导致的心肌缺血。益心宁神片通过调节CRF和/或ACTH水平从而改善HPA功能，继而缓解心肌缺血。

在实际情况下，所述心肌缺血可由体内β受体激动剂过量所导致。

具体而言，本发明所述心脏疾病可以具体表现为冠心病或心绞痛。

本发明通过大量研究显示：益心宁神片可明显改善患者心绞痛疗效。观察组治疗后显效率达58.33％、总有效率达88.3％；对照组治疗后有效率为68.3％。观察组优于对照组。对比差异具有统计学意义(P＜0.05)。益心宁神片还能改善患者心电图，其显效率为53.33％，有效率为86.67％,与对照组相比差异显著。西药硝酸甘油停药率，观察组为81.67％，对照组为66.67％，两组疗效差异，具有统计学意义(P＜0.05)。比较两组西雅图量表积分治疗前观察组为48.68±7.79、对照组为50.31±8.31；治疗后观察组为69.79±8.12、对照组为63.58±7.48，观察组降低明显优于观察组组，对比差异均有统计学意义(均P<0.05)。由大量实验研究可知，益心宁神片具有扩张冠脉、增加冠脉血流量、降低心肌耗氧量、保护缺血心肌的作用，是一种治疗冠心病心绞痛较有效的中成药制剂。

附图说明

图1为实验例1中益心宁神片对睡眠剥夺后大鼠体重的影响示意图；

图2为实验例1中益心宁神片对睡眠剥夺大鼠心电图影响的示意图，单位为50mm/s,10mm/mV；图中箭头代表T波；

图3为实验例2中皮下注射ISO所导致心肌缺血S-T段下降示意图；

图4为实验例2中各组皮下注射ISO所导致心肌缺血S-T段下降示意图；

图5为实验例2所述大鼠典型心电图的示意图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实验例1

1、相关材料

2016年6月27日-7月30日，选取SD大鼠，雄性，98只，体重220-260g，由沈阳药科大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(辽)2015-001。动物在适应期(3d)饲养于明暗循环(light on 8:00)的环境中，室温23±2℃，自由摄食饮水。领鼠后适应3天，连续给药21天，22日开始睡眠剥夺造模，造模时间为10天，造模同时继续给予益心宁神片进行治疗。造模给药6日检测新事物辨别实验，7日检测高架十字迷宫，8日检测Y迷宫，9日检测旷场活动，10、11日检测心电图、眼眶取血及心脏组织取材。

2、实验方法

1)造模后对体重的影响

给药21天后，进行睡眠剥夺造模，造模同时继续给药，每两天称量体重，考察睡眠剥夺及益心宁神片对体重影响。

2)大鼠旷场实验

旷场实验是评价实验动物在新异环境中自主行为、探究行为与紧张度的一种常用方法。实验大鼠给药连续7天，给药后1h，将大鼠从任意的箱角(高40cm，长宽各100cm)，仪器总共记录观察大鼠活动时间为5min，分别记录大鼠自主活动距离、中间区域停留时间、非边缘区域停留时间、边缘区域时间及中间区域潜伏期，检测时每组各一只进行检测，以保证各组间动物检测时间相互平行。每只动物测定完毕后彻底清洗箱内动物排泄物，确保不会干扰下一只动物的测定。数据分析利用Ethos Vision XT 8.0动物行为视频分析系统。

3)大鼠高架十字迷宫实验

大鼠高架十字迷宫实验是观察评价实验动物在新异环境(开阔环境)中自主行为、探究行为与紧张度的一种方法。以实验动物在新奇环境之中某些行为的发生频率和持续时间等，反应实验动物在陌生环境中的自主行为与探究行为。末次给药1h后，将大鼠放入高架十字迷宫中，仪器总共记录观察大鼠活动时间为5min，记录大鼠在开臂时间，检测时每组各一只进行检测，以保证各组间动物检测时间相互平行。数据分析利用Ethos Vision XT 8.0动物行为视频分析系统。

4)新物体辨别实验

物体辨别记忆是一种识别以前熟悉物体的能力，可以用来评价大鼠的工作记忆和视觉识别能力。该装置包括大鼠自主活动箱(60×60×50cm)和摄像头系统。测试前一天，将每只大鼠分别放入箱(无物体)中适应10min。新物体辨别实验包括两个阶段，第一阶段，把两个材质、大小相近的相似物体(A1，A2)放入箱中，每只鼠在箱中自由探索5min，分别记录5min内大鼠探索物体A1、A2的时间(tA1、tA2)。第二阶段，1h后，把物体A2换成新物体B，把大鼠再次放入箱中，自由探索5min，分别记录5min内大鼠探索物体A1、B的时间(tA1、tB)。最后，计算大鼠对新物体的偏爱指数(Preference Index,PI)。PI＝tB/(tA1+tB)。

5)Y迷宫实验

Y迷宫装置由三个结构大小完全相同的支臂和一个连接区组成，三臂相互夹角为120°。实验时，首先在装置底部铺上一层干净无味的动物垫料并在三臂上分别标注上A、B、C以作区分，然后将大鼠轻柔地放入Y迷宫连接区中央，使其自由探索8min，并记录8min内大鼠的进臂总次数(number)、正确交替反应次数(number of alternation)及自发交替反应率(percentage of alternation)。其中，正确交替反应次数为大鼠连续进入三个不同臂的次数，自发交替反应率的计算公式为：percentage of alternation(％)＝number ofalternation/(number-3)×100％。自发交替反应率越低表明空间工作记忆能力越低。

6)心电图检测

心电图T波和的观察：用戊巴比妥钠(0.25％，1.5ml/100g)麻醉大鼠，将多道生理记录仪的针状电极分别插入四肢皮下，待波形平稳后，记录标准肢体Ⅱ导联心电图(上海邦健生物医疗设备有限公司)。

心率检测：待心电平稳后，取连续测定的6次心电图计算

心率(次/min)＝6次心跳*300/6次心跳走纸距离

7)血清促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)Elisa试剂盒检测

心电检测完成后，立即进行腹主动脉取血，离心(4000r/min,5min),取血清，进行CRF、ACTH、CORT Elisa试剂盒(南京建成)检测。

8)心肌组织光镜标本制备

心电检测完成后，立即进行心脏活取，用生理盐水冲洗除去血污，剔除脂肪组织等非心肌组织，顺房室沟从心尖到心基底部平行将心室切开，取心室肌组织修成大约l mm3的小块，置4％甲醛溶液中固定24h以上，HE染色后，于光学显微镜下观察心肌组织形态学改变。

9)血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、缺血修饰白蛋白(IMA)、五羟色胺(5-HT)试剂盒检测

心电检测完成后，立即进行腹主动脉取血，离心(4000r/min,5min),取血清，进行CK-MB、IMA、、5-HT试剂盒(南京建成、上海酶联)检测。

10)统计方法

所有实验结果以均值±标准误表示，在数据是正态分布的前提下，采用单因素方差(One-way ANOVA)结合LSD t-test(方差齐性)或Dunnett’s T3(方差不齐)的分析方法进行组间比较，P＜0.05时表示各组间存在显著性差异。全部数据资料采用SPSS 20.0统计软件包进行分析。

3、实验结果

1)睡眠剥夺后对大鼠体重的影响

给药21天后，进行睡眠剥夺造模，造模同时继续给药，图1为造模给药后各组体重变化趋势。实验结果发现睡眠剥夺能造成大鼠体重降低(P<0.05，P<0.01，P<0.001)，益心宁神片对其无显著性改善作用。

2)益心宁神片对睡眠剥夺后大鼠旷场活动的影响

连续造模给药第9天，考察益心宁神片对大鼠旷场试验中自主活动距离、中间区域停留时间、边缘区域停留时间指标的影响。自主活动距离反映动物的自发活动状态，自发活动越高，表明动物的中枢兴奋性越强。动物对陌生开阔环境恐惧而主要在周边区域活动；但动物的探究特性又促使其产生在中央区域活动的动机，故可观察由此产生的焦虑心理。中间区域停留时间代表动物的探究特性，停留时间越长，探究特性越高，焦虑心理越小；边缘区域停留时间越长，焦虑心理越强。实验结果发现模型组自主活动距离显著性高于空白组(P<0.01)，给予益心宁神片能够显著降低自主活动(P<0.01，P<0.05)，其他各给药组与模型组相比均无显著性差异(Tab.2-1)，提示睡眠剥夺显著升高大鼠的自发活动，益心宁神片对睡眠剥夺所致自发活动升高具有改善作用。与空白组相比，模型组中央区域停留时间升高的趋势(P>0.05)，边缘区域停留时间有减少的趋势(P>0.05)，但均无统计学意义，提示睡眠剥夺对大鼠处于开阔环境的恐惧和紧张感有破坏趋势，益心宁神片对睡眠剥夺所致开阔环境恐惧与紧张感降低具有恢复的趋势(P>0.05，P>0.05)，但均无统计学意义。结果如表1、表2、表3所示。

表1：益心宁神片对睡眠剥夺大鼠自主活动距离的影响

说明：表中数据均代表平均值±S.E.M.，其中，**P<0.01是与空白组相比，##P<0.01,#P<0.05均为与模型组相比。

表2：益心宁神片对睡眠剥夺大鼠边缘区域停留时间的影响

说明：表中数据均代表平均值±S.E.M.

表3：益心宁神片对睡眠剥夺大鼠中央区域停留时间的影响

说明：表中数据均代表平均值±S.E.M.

3)益心宁神片对睡眠剥夺后大鼠高架十字迷宫的影响

高架十字迷宫实验就是利用啮齿动物被放入高架十字迷宫后会主动探究开臂，但又恐惧开臂中高悬敞开的环境，由此形成的矛盾冲突，一般来考察动物的焦虑状态。啮齿动物因恐惧开闭中高敞环境会增加闭臂躲避活动，减少开臂探究活动。连续造模给药第7天，考察益心宁神片对高架十字迷宫的影响，实验结果发现模型组与空白组相比能显著性增加进入开臂时间，提示睡眠剥夺破坏大鼠对高悬敞亮环境的恐惧和紧张感(P<0.001)，益心宁神片具有减少进入开臂时间的趋势，益心宁神片对睡眠剥夺所致开阔环境恐惧与紧张感降低具有恢复的趋势(P>0.05)，但无统计学意义。结果如表4所示。

表4：益心宁神片对睡眠剥夺大鼠进入开臂时间的影响

说明：表中数据均代表平均值±S.E.M.，***P<0.001为与空白组相比

4)新物体辨别

造模给药物体辨别记忆是一种识别以前熟悉物体的能力，可以用来评价大鼠的工作记忆和视觉识别能力。大鼠对新物体的偏爱指数(PI)越高，表明大鼠的工作记忆和视觉识别能力越强。造模给药第6天进行检测，实验结果发现睡眠剥夺及益心宁神片并未影响大鼠的工作记忆和视觉识别能力，结果如表5所示。

表5：益心宁神片对睡眠剥夺大鼠新事物辨别的影响

说明：表中数据均代表平均值±S.E.M.

5)Y迷宫实验

Y迷宫反应空间工作记忆能力。自发交替反应率越低表明空间工作记忆能力越低。Dou等研究证明睡眠剥夺对大鼠的认知功能产生影响^[13]。连续造模给药第8天进行检测，实验结果发现睡眠剥夺会增加大鼠的进臂总次数，表明大鼠兴奋性增高，这与自主活动的结果保持一致；同时睡眠剥夺模型会降低大鼠的自发交替反应率(P<0.05)，而益心宁神片对进臂总次数及自发交替反应率无显著性改善作用。提示睡眠剥夺造成大鼠的空间工作记忆能力障碍，益心宁神片对睡眠剥夺造成大鼠的空间工作记忆能力障碍无显著性影响，结果如表6所示。

表6：益心宁神片对睡眠剥夺大鼠Y迷宫实验的影响

说明：表中数据均代表平均值±S.E.M.，*P<0.05为与空白组相比

6)益心宁神片对睡眠剥夺大鼠心电图T波的影响

T波：反映心室电刺激恢复期的电压改变。T波高度降低(称低平)，进一步则T波方向向下(称倒置)，是心电图上心室复极引起的电位变化，又叫心室复极波。心肌缺血时，会导致心肌的电生理及形态学的改变，其中T波下降就是其中一个显著特征。大鼠心电的零电平线(IL)有2段，1个是PR段，1个是TP段。TP段的时限长度一般大于PR段，因此可以把TP段作为零电平的参考。但是在众多模型条件下，TP段不可分辨，顾及“普适性”，本文以PR段为基线参考。造模给药第10天，心电图如图2所示。实验结果发现模型组与空白组相比能显著性降低T波高度(P<0.01)，给药后益心宁神片低、中、高剂量均能显著性恢复T波高度(P<0.01，P<0.05，P<0.01)，结果如表7所示。提示益心宁神片可能具有改善心肌缺血的作用。

表7：益心宁神片对睡眠剥夺大鼠T波与基线的高度的影响

说明：表中数据均代表平均值±S.E.M.，**P<0.01为与空白组相比，#P<0.05,##P<0.01为与模型组相比

7)益心宁神片对对睡眠剥夺大鼠心电图心率的影响

体重为180～350g的成年大鼠心率约为475次/分(370～580次/分)^[16]。在麻醉状态下会有所降低。实验结果发现睡眠剥夺能显著降低心率(P<0.05)，益心宁神片高剂量能显著恢复其心率(P<0.05)。提示益心宁神片对睡眠剥夺所致心率异常可能具有一定的调节作用，如表8所示。

表8：益心宁神片对睡眠剥夺大鼠心率的影响

说明：表中数据均代表平均值±S.E.M.，*P<0.05为与空白组相比，#P<0.05为与模型组相比

8)益心宁神片对对睡眠剥夺大鼠HPA轴的影响

在造模过程中发现，大鼠的应激反应明显增强，表现为易爆易怒。生物体面对应激反应时，HPA轴首先被激活，肾上腺大量释放肾上腺皮质激素(以糖皮质激素为主)以对抗应激因素。CRF为促肾上腺皮质激素释放因子，是由下丘脑分泌的激素，主要作用在于释放促肾上腺皮质激素(ACTH)，同时促肾上腺皮质激素进一步促进皮质酮CORT(人类为皮质醇)分泌，从而用来调节HPA轴的功能。实验结果发现睡眠剥夺能显著升高血清CRF水平(P<0.05)，给药后益心宁神片中剂量能显著性降低CRF血清浓度(P<0.05)。提示，益心宁神片可能具有下调HPA轴活性的作用，结果如表9。

表9：益心宁神片对睡眠剥夺大鼠血清CRF浓度的影响

说明：表中数据均代表平均值±S.E.M.，**P<0.01为与空白组相比，##P<0.05,##P<0.01为与模型组相比

ACTH受下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素的促进，血浆皮质激素对垂体也有反馈作用。对其血清进行分析，实验结果发现睡眠剥夺能显著升高血清ACTH水平(P<0.05)，给药后益心宁神片中、高剂量能显著性降低ACTH血清浓度(P<0.05)。提示，益心宁神片可能具有下调HPA轴活性的作用，结果如表10所示。

表10：益心宁神片对睡眠剥夺大鼠血清ACTH浓度的影响

说明：表中数据均代表平均值±S.E.M.，*P<0.05为与空白组相比，#P<0.05,##P<0.01为与模型组相比

CORT其主要作用是调节上腺皮质激素受促肾上腺皮质激素(ACTH)的作用加速合成和分泌。实验结果发现模型组与空白组相比能无显著性差异，给药后亦无显著性变化。提示益心宁神片可能对CORT无明显影响，结果如表11所示。

表11：造模给予益心宁神片对血清CORT浓度的影响

说明：表中数据均代表平均值±S.E.M.

4、小结：

睡眠剥夺显著降低大鼠体重，益心宁神片对睡眠剥夺所致大鼠体重降低无显著性恢复作用；益心宁神片对旷场实验中睡眠剥夺所致自发活动升高具有恢复作用；睡眠剥夺没有诱发旷场实验中大鼠出现明显的焦虑行为，睡眠剥夺具有升高中央区域停留时间的趋势和减少边缘区域停留时间的趋势，提示睡眠剥夺可能破坏大鼠对开阔环境的恐惧和紧张感，益心宁神片对睡眠剥夺所致开阔环境恐惧与紧张感降低具有恢复的趋势，但均无统计学意义；睡眠剥夺没有诱发高架十字迷宫实验中大鼠出现明显的焦虑样行为，但破坏动物对高悬敞开的环境的恐惧性，益心宁神片具有恢复睡眠剥夺所致高架十字迷宫中恐惧性降低的趋势，但无统计学意义；睡眠剥夺对新物体辨别实验无显著性影响，提示睡眠剥夺及益心宁神片对大鼠工作记忆和视觉识别能力无显著性影响；睡眠剥夺能增加Y迷宫进臂探索次数，同时睡眠剥夺降低自发反应交替率，提示睡眠剥夺可致大鼠产生空间记忆能力障碍，给予益心宁神片后无显著性变化；益心宁神片能显著性恢复睡眠剥夺显著降低T波高度，提示睡眠剥夺可能诱发大鼠心肌缺血的状态，益心宁神片对睡眠剥夺所致T波降低具有改善作用，提示益心宁神片可能对心肌缺血有一定的保护作用；益心宁神片对睡眠剥夺所致心率降低具有改善作用，提示益心宁神片对睡眠剥夺所致心率失常可能具有调节作用；益心宁神片能显著性降低睡眠剥夺所致CRF、ACTH浓度升高，提示益心宁神片可改善HPA轴功能。

5、讨论：

前期查阅发现，睡眠剥夺影响机体各系统生理功能，造成学习记忆、免疫功能、认知功能等方面的紊乱，同时对诱发心血管系统疾病也有很大的影响。本实验首先从行为学上考察睡眠剥夺是否会诱发动物精神行为异常行为和认知障碍及益心宁神片的改善作用。结合以上结果进行分析：

关于模型组结果

(1)动物在旷场中，由于对于新异环境的紧张和恐惧，主要在箱子内的周边部活动，而在中间区活动较少，但是动物的探究本性必然促使它试图在箱子的中间区活动，从而产生冲突行为。高架十字迷宫同样利用动物对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐惧形成矛盾冲突行为来考察动物的精神行为状态。旷场实验和高架十字迷宫结果发现，睡眠剥夺模型没有诱发大鼠出现明显的焦虑样行为，如没有发现大鼠在旷场实验中的中间区域停留时间减少，没发现大鼠在高架十字迷宫中闭臂停留时间增长等现象。与此相反，睡眠剥夺能显著增加大鼠的兴奋性，如增加自主活动距离，且睡眠剥夺破坏动物对高悬敞开的环境的恐惧性。

(2)新物体辨别实验和Y迷宫分别考察的的是大鼠工作记忆和视觉识别能力、空间工作记忆能力。新物体辨别结果发现睡眠剥夺对偏爱指数无显著性影响，Y迷宫结果发现睡眠剥夺可增加大鼠进臂次数，说明其中枢兴奋性增加，这与旷场实验结果保持一致；同时睡眠剥夺使自发反应交替率降低，可致大鼠产生空间记忆能力障碍。

(3)心电图异常和心脏病理组织切片考察睡眠剥夺对大鼠心脏功能的影响及益心宁神片对其心脏的保护作用。心肌缺血时，会导致心肌的电生理及形态学的改变，其中T波和心率改变就是其中的显著特征。临床研究表明，T波低平与心肌受累相关，同时传统观念认为T波持续低平且伴随ST段下移常见于冠状动脉供血不足。垂体后叶素静脉注射造成急性心肌缺血模型中在二期也可见T波低平、双相或倒置，P-R间期延长，心率下降等。已有研究发现睡眠剥夺可引发心室节律不规则且较前明显减慢，且ST段明显抬高并与高尖的T波融合。通过心电检测，结果与文献保持一致，发现睡眠剥夺显著降低T波的高度，提示睡眠剥夺可能诱发大鼠心肌缺血的状态，同时，对其心率进行考查，发现睡眠剥夺会诱发心率减慢，提示睡眠剥夺可能诱发大鼠心率异常。

(4)在造模过程中，发现大鼠相互攻击性增强，应激反应明显。生物体面对应激反应时，HPA轴首先被激活，肾上腺大量释放肾上腺皮质激素(以糖皮质激素为主)以对抗应激因素。当应激反应结束后，为了避免持续高水平的糖皮质激素带来的负面作用，HPA轴会通过负反馈的机制，抑制糖皮质激素的释放，促使体内糖皮质激素恢复至正常水平。而应激反应过强往往可以诱发心绞痛、心电图缺血改变，心律失常等，也常常是无症状性心肌缺血的原因之一。故此本研究也对HPA轴功能进行了评价。本次结果发现，睡眠剥夺会显著升高血清ACTH和CRF水平，对CORT无显著性影响，提示睡眠剥夺上调HPA活性，升高交感神经兴奋的作用，这与前期旷场试验和Y迷宫行为学结果保持一致，如自主活动升高、进臂次数增加。

关于益心宁神片结果

(1)旷场实验和高架十字迷宫结果发现给予益心宁神片后能显著性降低旷场实验中大鼠的自主活动距离，提示益心宁神片能降低大鼠的中枢兴奋性，从而缓解大鼠的亢奋状态；益心宁神片具有增加旷场实验中边缘区域停留时间和减少中央区域停留时间的趋势，提示益心宁神片具有恢复睡眠剥夺所致旷场实验中紧张感及恐惧性降低的趋势，但无统计学意义；在高架十字迷宫实验中，益心宁神片具有减少开臂停留时间的趋势，提示给予益心宁神片后具有恢复紧张和恐惧感降低的趋势，但无统计学意义。以上结果说明，益心宁神片可能具有降低中枢兴奋性从而改善精神行为异常的作用。

(2)新物体辨别实验和Y迷宫中，给予益心宁神片后对新事物辨别实验中偏爱指数无显著性变化，提示益心宁神片对大鼠工作记忆和视觉识别能力无显著性影响；益心宁神片对睡眠剥夺所致进臂次数增加及自发交替反应率无明显调节作用，提示益心宁神片对大鼠产生的空间记忆能力障碍无显著性改善作用。由此推测，益心宁神片可能对大鼠工作记忆和视觉识别能力、空间工作记忆能力没有显著的调节作用。

(3)心电图结果显示益心宁神片能升高睡眠剥夺所致T波降低，提示益心宁神片可回调心室电激动恢复期的电压，从而改善心肌缺血的状态；益心宁神片显著升高睡眠剥夺所致心率降低，提示益心宁神片具有改善心率失常的作用。由此推测，益心宁神片可能对心肌缺血有一定的保护作用。

(4)查阅文献发现，大鼠经受睡眠剥夺这一应激后，内源性氧化反应激活HPA轴，下丘脑首先产生兴奋产生释放CRF，进而促进垂体分泌ACTH，肾上腺分泌CORT。给予益心宁神片后能显著性降低ACTH及CRF的浓度，提示益心宁神片可能有下调HPA轴活性的作用。造成心肌损伤及心肌缺血的原因可能是睡眠剥夺条件下应激反应强烈，HPA轴过度活化，在持续高水平儿茶酚胺和糖皮质激素作用下，机体抗氧化能力降低，自由基“生成-清除”失衡，从而引发广泛的损伤效应。同时大量儿茶酚胺及糖皮质激素释放，也可能诱发心律失常，心肌耗氧量增大，导致冠状动脉强烈收缩从而引起心肌缺血。由此推测，益心宁神片可能通过改善HPA功能从而改善心肌缺血的状态。

关于阳性药组结果(参芍片组，氟西汀组)

(1)旷场实验和高架十字迷宫结果发现：旷场实验中，给予参芍片后对睡眠剥夺所致自主活动升高无改善作用，给予氟西汀后能显著性降低睡眠剥夺所致自主活动升高，提示参芍片对中枢兴奋性无调节作用，而氟西汀可缓解大鼠的精神兴奋状态；对于睡眠剥夺所致旷场实验中紧张感及恐惧性降低的趋势，参芍片及氟西汀基本无作用；在高架十字迷宫实验中，氟西汀具有减少开臂停留时间的趋势，提示给予氟西汀后具有恢复紧张和恐惧感降低的趋势，而参芍片则无此作用。以上结果说明，氟西汀和益心宁神片作用效果相似，可能具有降低中枢兴奋性从而精神行为异常的作用，而参芍片对神经行为异常基本无作用。

(2)新物体辨别实验和Y迷宫中，给予参芍片及氟西汀后对新事物辨别实验中偏爱指数无显著性变化，提示参芍片及氟西汀对大鼠工作记忆和视觉识别能力无显著性影响；参芍片对睡眠剥夺所致进臂次数增加及自发交替反应率无明显调节作用，提示参芍片大鼠产生的空间记忆能力障碍无显著性改善作用，氟西汀对睡眠剥夺所致进臂次数增加无明显调节作用但能显著性升高自发交替反应率。由此推测，参芍片可能和益心宁神片相似对大鼠工作记忆和视觉识别能力、空间工作记忆能力没有显著的调节作用，而氟西汀能显著性改善空间工作记忆能力障碍。

(3)心电图结果显示参芍片能升高睡眠剥夺所致T波降低，提示参芍片可回调心室电激动恢复期的电压，从而改善心肌缺血的状态，参芍片对睡眠剥夺所致心率降低无调节作用；氟西汀对T波和心率均无改善作用。由此推测，在对心脏功能作用上，氟西汀基本无心肌缺血保护作用，参芍片只能回调T波高度而对心率无改善作用，由此看来参芍片对心肌缺血T波异常具有调节作用。

(4)在对血清ACTH、CRF及CORT水平考察中，参芍片对三者均无调节作用，氟西汀仅能下调血清CRF水平，表明参芍片对睡眠剥夺所致HPA轴过度活化无显著性调节作用，氟西汀对此能适当改善HPA轴活性。由此推测，在调节HPA轴功能上，参芍片基本无改善作用，氟西汀可通过调节CRF水平从而改善HPA轴功能。

综上所述，本实验采用睡眠剥夺模拟心理应激模型，从行为学及血清激素上反映出自主活动增加、开闭停留时间增加、攻击性增强等交感神经兴奋样状态，这与临床焦躁、易怒等负面情绪相似；同时睡眠剥夺模拟心脏功能损伤模型，从心电图上反映出T波降低、心率失常等心脏功能异常状态，这与临床心肌损伤及心肌缺血早期症状相近。结果发现益心宁神片可能对睡眠剥夺所致中枢兴奋、心脏功能损伤及调节HPA轴功能具有一定的改善作用。目前为止的结果提示益心宁神片对睡眠剥夺所致精神行为状态异常及心肌缺血具有一定的保护作用。

实验例2

1、实验时间：2016年7月-8月。

2、实验动物：SD大鼠，雄性，75只，体重160-180g，由沈阳药科大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(辽)2015-001。动物在适应期(3d)饲养于明暗循环(light on 8:00)的环境中，室温23±2℃，自由摄食饮水。

3、实验分组：雄性SD大鼠75只，按体重分为5组,每组各15只；模型组，益心宁神片1/3×临床等效量(0.09g/kg)，益心宁神片1×临床等效量(0.27g/kg)，益心宁神片3×临床等效量(0.81g/kg)，普萘洛尔1×临床等效量(15mg/kg)组。具体实验分组如表12所示。

表12：实验分组

4、实验方法

1)心电图检测

各个受试药组和模型组每天给药一次，连续给药30天。阳性药组每天给药一次，连续给药8天。各个受试药组和模型组在第30天给药后1小时用戊巴比妥钠(0.25％，1.5ml/100g)麻醉大鼠，阳性药组在第8天给药30min后麻醉大鼠，按3.0mg/kg的剂量皮下多点注射异丙肾上腺素造模，记录注射异丙肾上腺素之前及之后1、5、10分钟标准肢体Ⅱ导联心电图S-T段。

2)采取动物血液样本

造模2小时后，各组大鼠腹主动脉取血，恒温静止2小时后，4000转、4摄氏度离心15分钟，取上清(血清)，并在–80摄氏度冰箱保存。等检测时IMA，步骤参照试剂盒说明书。

3)统计方法

各组大鼠注射ISO后1、5、10分钟Ⅱ导联心电图S-T段下降值和IMA的结果以平均值±标准误(mean±SEM)表示，实验数据采用SPSS 21分析软件进行分析。五组组间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)来判断总体显著性差异，使用LSD法进行样本均数之间的两两比较(方差齐性时)，使用Dunnett’s T3进行组间比较(方差不齐时)。

5、实验结果

皮下注射ISO所导致心肌缺血的一个明显的特征是：S-T段的下降。如图3和图4示，模型组动物在注射异丙肾上腺素前的心电图各部分结构正常，在注射异丙肾上腺素后1分钟开始，出现S-T段的向下偏移，5分钟时S-T段偏移达到最大，5分钟至10分钟S-T段偏移逐渐恢复。

结果表明，在注射异丙肾上腺素注射液1分钟时，高、中、低剂量组能显著抑制Ⅱ导联心电图S-T段下降值。5分钟时，低、中剂量组能显著抑制Ⅱ导联心电图S-T段下降值。10分钟时，高、中、低剂量组和阳性药组能显著抑制Ⅱ导联心电图S-T段下降值。如表13所示。

表13：高、中、低剂量组能显著抑制Ⅱ导联心电图S-T段下降值

组别	剂量g/kg	N	1min	5min	10min
						模型组	—	11	0.169±0.034	0.356±0.047	0.304±0.046
低剂量组	0.09	14	0.022±0.00*	0.234±0.03*	0.119±0.029*
						中剂量组	0.27	10	0.030±0.01*	0.191±0.04*	0.119±0.002*
高剂量组	0.81	12	0.042±0.01*	0.305±0.018	0.175±0.034*
						阳性药组	0.015	8	0.052±0.018	0.290±0.038	0.195±0.003*

说明：数据以平均值±S.E.M的形式提供，其中*P<0.05是指与模型组比较

急性心肌缺血模型是基于临床心肌缺血特点而建立的一种短期的实验模型。皮下注射ISO是常用的造急性心肌缺血模型的方法。这种造模方法模拟的是短期的心肌缺血，有恢复期，造成的心肌损伤是可逆的，缺血程度有限。此法简单有效，且模型比较接近心肌缺血的病理状态。

心电图是心脏兴奋的产生、传导、和恢复过程中生物电变化的记录，如图5所示。其在临床上是诊断心肌缺血重要的、直接的依据之一。S-T段代表心室肌除极完毕后至心室肌开始复极的电位变化。根据相关文献，QQ基线以下S波的升支即S-T段。据相关文献，S-T段的降低可作为大鼠肾上腺素性心肌缺血的诊断指标。我们所观察到的S-T段的变化与文献记载的一致。与模型组相比，益心宁高、中、低剂量组能显著抑制Ⅱ导联心电图S-T段偏移值。表明益心宁神片可能对异丙肾上腺素所致的急性心肌缺血有保护作用。

综上所述，本实验采用给大鼠皮下注射异丙肾上腺素的方法造急性心肌缺血的模型，从心电图上反应的S-T段下降与临床上心肌缺血的症状相似。结果发现，益心宁神片能够抑制异丙肾上腺素引起的大鼠S-T段的偏移。

实验结果提示益心宁神片对大鼠急性心肌缺血性损伤有保护作用，且低、中剂量组对大鼠心肌缺血性损伤的保护作用较好。

实验例3

1、临床资料

自2015年5月至2016年5月，辽宁中医药大学附属医院门诊、住院部就诊的符合纳入标准的患者120例。由电脑按就诊时间先后顺序分为观察组和对照组，各60人。

2.诊断标准：

1)冠心病的诊断标准：

参照中华医学会心血管病学分会，中华心血管病杂志编辑委员会2007年《慢性稳定性心绞痛诊断与治疗指南》中冠心病的诊断标准。

2)焦虑抑郁症的诊断标准：

参照2001年中华精神科杂志发布的《中国精神障碍分类与诊断标准第三版》中抑郁症发作制定：

症状标准：以心境低落为主要特征且持续至少2周，此期至少有下列症状中的4项：①兴趣丧失，无愉快感：②精力减退或疲乏感：③精神运动性迟滞或激越：④自我评价过低、自责或有内疚感：⑤联想困难或自觉思考能力下降：⑥反复出现想死念头或有自杀、自伤行为：⑦睡眠障碍，失眠、早睡或睡眠过多；⑧食欲降低或体质量明显减轻：⑨性欲减退。

严重标准：社会功能受损，给本人造成痛苦或不良后果。

病程标准：①符合症状标准和严重标准至少持续2周：②可存在某些分裂性症状，但不符合分裂症的诊断。若同时符合分裂症的症状标准，在分裂症状缓解后，满足抑郁发作至少2周。

3)中医证候诊断标准：

参照2002年国家药品监督管理局修订的《中药新药临床研究指导原则》中冠心病气阴两虚证、肝气郁结兼血瘀证的诊断标准：主症：胸闷(痛)，胸胁胀满，气短，乏力，精神抑郁，焦虑；次症：心悸，自汗、耳鸣、失眠多梦、五心烦热、食欲减少；舌脉：舌淡或红，少苔，脉细数或舌质暗有瘀斑、瘀点，脉涩；主症必备，次症具备1项以上，结合舌象、脉象即可诊断。

4)纳入标准：

①符合以上冠心病、焦虑抑郁症的诊断标准；②符合以上中医证候气阴两虚、肝气郁结兼血瘀证的诊断标准；③年龄≥40岁，且年龄≤80岁；④焦虑自评量表(SAS)标准分≥50分，抑郁自评量表(SDS)标准分≥53分；⑤本人及家属同意参加本试验，并签署知情同意书。(同时符合以上纳入标准者才可纳入)

5)排除标准：

①合并重度心功能不全(心功能LVEF<40％的患者；)、重度心律失常(阵发性室速、室上速、Ⅲ度房室传导阻滞等)的患者；②伴有严重性的肝、肾等多脏器损伤患者(超过正常值高阶的150％)；③具有严重自杀倾向、神志意识障碍、智力发育迟缓、严重语言及听力困难等精神疾病；④正在使用抗焦虑抑郁药物，妊娠或者哺乳期妇女及对药物过敏者；⑤药物治疗禁忌症者；⑥滥用酒精或者精神活性药物等不配合治疗者；(凡符合以上排除标准中任意一项者均不得纳入)

6)退出标准：

①病情恶化；②病人坚持退出；③严重不良事件；④发生其他可能影响病人治疗结果的疾病；⑤主要研究者认为有理由退出；⑥虽然完成试验，但用药量不在应服量的80％-120％。

7)剔除标准：

①误诊；②未曾用药者；③无任何检测记录者；④使用禁忌药物或出现禁忌症，以致无法作有效性评价；(剔除应说明原因，实验记录表保留备查。不作疗效统计分析，但至少接受一次治疗，且有安全性记录者，视情况可参加安全性分析。)

8)中止标准：

①研究者发现严重的安全问题；②疗效太差，没有进行的必要；③方案有重大失误。

3、观察指标：

1)疗效性观察指标：

①双心疾病患者心绞痛轻重分级标准、西雅图心绞痛量表积分、中医单项症状轻；重分级及计分标准、中医证候积分；②双心疾病患者焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SDS)；③双心疾病患者心电图、西药的停减率、甘油三酯、胆固醇。

2)安全性指标：

①治疗前后血、尿、便常规检查；②治疗前后肝功能(谷丙转氨酶、谷草转氨酶)，肾功(血肌酐、尿素氮),电解质(钾、钠、氯、钙、碳酸氢跟)检查。

4、疗效性指标：

1)心绞痛轻重分级标准：参照全国中西医结合防治冠心病、心绞痛、心律失常座谈会《冠心病心绞痛及心电图疗效评定标准》

2)西雅图心绞痛量表(SAQ)：包括躯体活动受限程度(PL)、心绞痛稳定状态(AS)、心绞痛发作情况(AF)、治疗满意程度(TS)、疾病认识程度(DP)五个维度的评价。

3)中医症状轻重分级及计分标准：参照《中药新药临床研究指导原则》、《中医病症诊疗标准》的有关规定。

胸痛：2分：有胸痛发作，每日发作2-3次，每次持续5分钟以内，疼痛症状减轻。可自行缓解，不影响工作；4分：每日1-3次胸痛发作，每次持续数分钟，日常活动可引起胸痛发作，活动稍受限制；6分：每日数次胸痛发作，每次持续数分钟致10分钟左右，疼痛较重，较日常轻的活动即可引起胸痛发作。

胸闷：2分：偶有胸闷，可自行缓解；4分：胸闷发作较频繁，但不影响正常生活和工作；6分：胸闷持续不解，影响生活和工作。

心悸：2分：偶有心悸，可自行缓解；4分：心悸发作频繁，但能坚持工作。6分：心悸持续不解，影响生活和工作；

气短：2分：一般活动后气短；4分：稍活动后气短；6分：平素活动亦气短喘促。

不寐：2分：睡眠时常觉醒，晨醒过早，但不影响工作；4分：睡眠不足4小时，但尚能坚持工作；6分：彻夜不眠，难以坚持工作。

自汗：2分：平素皮肤微潮，稍动则更甚；4分：平素皮肤潮湿，稍动则汗出；6分；平素即汗出，动则汗出如水渍状。

舌有瘀斑：2分：瘀斑直径在0.3厘米以下者；4分：瘀斑直径在0.3-0.5厘米者；6分：瘀斑直径在0.5厘米以上者。

舌有瘀点：2分：在3个以内者；4分：在3-5个以内者；6分：在5个以上者。

分级标准：轻度：中医症状积分：0-12；中度：中医症状积分：13-25；重度：中医症状积分：26-42

4)中医证候积分：参照《中药新药治疗心力衰竭的临床研究指导原则》制定，主症和次症均分为无、轻、中、重四个级别，主症依次记为0分、2分、4分和6分；次症依次记为0分、1分、2分和3分；舌脉分为正常和异常两种情况，正常记为0分、异常记为1分。

5)心电图：根据《2007中国慢性稳定性心绞痛诊断与治疗指南》，所有胸痛患者均应行静息心电图检查。在胸痛发作时争取心电图检查，缓解后复查。静息心电图正常不能完全排除冠心病心绞痛，但如果有ST-T改变符合心肌缺血时，特别是在疼痛发作时检出，则支持心绞痛的诊断。当静息心电图出现2个或更多的相邻导联ST段下移≥0.1mv。静息状态下症状发作时记录到一过性ST段改变，症状缓解后ST段缺血改变改善，或者发作时倒置T波呈伪性改善(假性正常化)，发作后恢复原倒置状态更具有诊断价值，提示急性心肌缺血，并高度提示可能是严重冠状动脉疾病。发作时心电图显示胸前导联对称的T波深倒置并呈动态改变，多提示左前降支严重狭窄。

6)甘油三酯、胆固醇水平：

观察并比较两组治疗前甘油三酯、胆固醇水平并记录。

7)扩冠西药服用：

观察并记录两组患者每人每日服用扩冠西药的次数和用量，1个月后汇总记录并比较。

8)焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SDS)：SAS的主要统计指标为总分。将各个项目的各个得分相加，即得粗分；用粗分乘以1.25以后取整数部分，就得到标准分。按标准分评分的高低分别分为轻、中、重三度。本试验纳入SAS标准分≥50分和SDS标准分≥53分的患者。SAS标准分分级：50—59分为轻度焦虑，60—69分为中度焦虑，70分以上为重度焦虑。SDS标准分分级：53—62分为轻度焦虑，63—72分为中度焦虑，72分以上为重度焦虑。

5、疗效评价标准：

1)心绞痛疗效标准：

轻度：

显效：症状消失或基本消失；有效：疼痛发作次数,程度及持续时间有明显减轻；无效：症状基本与治疗前相同；加重：疼痛发作次数,程度及持续时间有所加重(或达到“中度”“较重度”的标准)

中度：

显效：症状消失或基本消失；有效：症状减轻到“轻度”的标准；无效：症状基本与治疗前相同；加重：疼痛发作次数,程度及持续时间有所加重(或达到“较重度”“重度”的标准)

较重度：

显效：症状基本消失或减轻到“轻度”的标准；有效：症状减轻到“中度”的标准；无效：症状基本与治疗前相同；加重：疼痛发作次数,程度及持续时间有所加重(或达到“重度”的标准)

重度：

显效：症状基本消失或减轻到“中度”的标准；有效：症状减轻到“较重度”的标准以下；无效：症状基本与治疗前相同。

2)西雅图量表评价标准：西雅图心绞痛量表分为5大项19个条目:躯体活动受限程度(PL,问题l),心绞痛稳定状态(AS,问题2),心绞痛发作情况(AF,问题3-4),治疗满意程度(TS,问题5-8),疾病认知程度(DP,问题9-11)。对5大项19个条日逐项评分，并对每一评分进行正向化处理,标准积分＝(实际得分该方面最低得分)/(该方面最高得分-该方面最低得分)×100,评分越高患者生活质城及机体功能状态越好。

3)中医单项症状疗效判定标准：参照《中药新药临床研究指导原则》的有关规定而拟定。显效：原有症状消失或症状改善2级。有效：症状改善1级而未消失。无效：症状无变化或加重。

4)中医证候评定标准：

痊愈：临床症状、阳性体征消失，症状评分减少≥95％；显效：临床症状、阳性体征明显改善，症状评分减少≥70％且<95％；有效：临床症状、阳性体征均有好转，症状评分减少≥30％且<70％；无效：临床症状、阳性体征均无明显改善，症状评分减少＜30％。

5)心电图疗效评价标准：

显效：治疗后心电图恢复至“大致正常”或达到“正常心电图”；有效：治疗后S—T段回升＜0.05mv，主要导联T波改变变浅；或T波由平坦变为直立；无效：心电图基本与治疗前相同；加重：S—T段较治疗前降低0.05mv以上，在主要导联倒置T波加深或直立T波变平坦；平坦T波变倒置等。

有效：临床症状、阳性体征均有好转，症状评分减少≥30％且<70％。

无效：临床症状、阳性体征均无明显改善，症状评分减少＜30％。

6)血脂、甘油三酯评定标准：

治愈：治疗后血脂、甘油三脂检测恢复正常。显效：治疗后血脂检测两者达到任何一项：TC下降≥20％，TG下降≥40％；有效：治疗后血脂检测达到两者任何一项者：TC下降≥10％，TG下降≥20％；无效：疗后血脂检测无明显改善或改善达不到有效标准者。

7)扩冠西药停减率评定标准：

停药：治疗后完全停服；减量：治疗后较治疗前用量减少50％以上；不变：治疗后用量减少不足50％；计算方法：(治疗前用药片数-治疗后用药片数)/治疗前用药片数×100％。

8)抑郁、焦虑评定标准：

痊愈：临床症状、阳性体征消失，症状评分减少≥95％；显效：临床症状、阳性体征明显改善，症状评分减少≥70％且<95％；有效：临床症状、阳性体征均有好转，症状评分减少≥30％且<70％；无效：临床症状、阳性体征均无明显改善，症状评分减少＜30％。

6、研究方法：

1)治疗方法：

对照组和试验组同时进行研究，记录治疗前两组观察指标，包括心绞痛分级、心电图、西雅图心绞痛量表积分、中医证候积分、双心疾病患者焦虑自评量表和抑郁自评量表。以及安全性指标，包括血、尿、便常规、肝功能(谷丙转氨酶、谷草转氨酶)，肾功(血肌酐、尿素氮),电解质(钾、钠、氯、钙、碳酸氢根)、甘油三酯、总胆固醇、空腹血糖、餐后血糖、心脏彩色多普勒检查。

对照组予西医常规治疗，阿司匹林肠溶片100mg日一次饭前半小时口服(拜耳医药保健有限公司国药准字J20130078)、立普妥20mg晚睡前口服(辉瑞制药有限公司国药准字H20051408)、硝酸甘油0.5mg日三次舌下含服(北京益民药业有限公司国药准字H11021022)，嘱托受试人员根据病情需要，胸闷胸痛发作时，可舌下含服硝酸甘油1片。并根据受试人员病情，酌情给予控制血压，降低血糖、尿酸等对症治疗。

观察组在西药常规治疗冠心病的基础上，加用中成药益心宁神片(辽宁好护士药业(集团)有限责任公司国药准字Z21021665)，一日三次，每次三片，饭后半小时后服用；对照组在西医常规治疗冠心病的基础上，加用百忧解20mg日二次口服(礼来苏州制药有限公司国药准字J20120001)。疗程为四周，记录治疗后的观察指标，进行统计分析。

2)统计分析方法：确定标准P＞0.05时为无统计学意义，P＜0.05时为有统计学意义，P＜0.01时为差异有显著性意义。采计量资料治疗前后比较用成对检验,组间比较用两样本的t检验；计量资料用X±S表示。

7、结果

1)病例的一般情况分析，两组性别、年龄比较如表14所示。

表14：两组性别、年龄比较

组别	n	男性人数	男性百分比	女性人数	女生百分比	平均年龄
							观察组	60	34	56.67	26	43.33	63.80±7.11
对照组	60	29	48.33	31	51.67	65.87±8.51

注：电脑按就诊时间先后顺序随机分为观察组和对照组。其中观察组60例，男34例，女26例；对照组60例，男29例，女31例。两组性别、年龄，两组比较差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

2)病情资料，如表15～表21所示。

表15：治疗前心绞痛病情程度分级比较

组别	n	轻度	中度	重度	P
						观察组	60	26	27	7	＞0.05
对照组	60	27	28	5

表16：治疗前心绞痛量表积分比较

组别	n	心绞痛量表积分
			观察组	60	48.68±7.79
对照组	60	50.31±8.31

表17：治疗前中医单项症状比较

表18：治疗前中医证候积分比较

组别	n	中医证候积分
			观察组	60	39.2±4.79
对照组	60	38.1±5.24

表19：治疗前ST下移幅度比较

组别	n	ST-T下降幅度
			观察组	60	2.12±0.81
对照组	60	2.13±0.68

表20：治疗前甘油三酯、胆固醇比较

表21：治疗前抑郁、焦虑比较

从表15到表21可知，观察组、对照组间性别、年龄、心绞痛病情程度、心绞痛量表积分、中医单项症状、中医证候积分、心电图、甘油三酯、胆固醇、焦虑及抑郁积分等均无显著性差异(P＞0.05)，具有可比性。且均无其他系统严重疾病。

3)疗效性评价，如表22～表29所示。

表22：心绞痛疗效比较

组别n	显效	有效	无效	加重	总有效
						观察组60	35	18	7	0	88.33％
对照组60	24	17	15	4	68.33％

由表22结果可知，观察组治疗后总有效率达88.3％；对照组治疗后有效率为68.3％。观察组优于对照组。对比差异具有统计学意义(P＜0.05)。

表23：西雅图量表积分比较

组别	n	治疗前	治疗后
				观察组	60	48.68±7.79	69.79±8.12
对照组	60	50.31±8.31	63.58±7.48

由表23结果可知，观察组、对照组在治疗后西雅图量表积分均降低。观察组降低明显优于观察组组，对比差异均有统计学意义(均P<0.05)

表24：中医单项症状积分比较

由表24可以看出,中医单项症状疗效比较,除气短比较无显著性差异外(P＞0.05),胸痛、胸闷、心悸、不寐、自汗、舌有瘀斑、舌有瘀点等症状两组比较有显著性差异(P＜0.05)。

表25：中医证候积分比较

组别	n	治疗前	治疗后
				观察组	60	39.2±4.79	27.2±8.12
对照组	60	38.1±5.24	29.5±6.79

由表25结果可知，治疗后中医证候积分均明显降低。观察组中医证候积分下降明显，优于对照组，对比差异均有统计学意义(P＜0.05)。

表26：心电图改善情况

组别n	显效	有效	无效	加重	总有效
						观察组60	32	20	8	0	86.67％
对照组60	23	20	17	0	71.67％

由表26结果可自，观察组治疗后总有效率达86.7％；对照组治疗后有效率为71.67％。观察组优于对照组。对比差异具有统计学意义(P＜0.05)。

表27：甘油三酯(TC)、总胆固醇(TG)比较

由表27结果可知，治疗前后两组胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)比较、治疗后两组间胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)比较，均无显著性差异(P＞0.05)。但观察组患者治疗后甘油三酯、胆固醇平均水平有下降趋势。

表28：扩冠西药停减率比较

组别	n	停药(％)	减量(％)	不变(％)	停减率
						观察组	60	17(28.33)	32(53.33)	11(18.33)	81.67％
对照组	60	14(23.33)	26(43.33)	20(33.33)	66.67％

由表28可知,观察组60例,停药17例,减量32例,停减率81.67％；对照组停药14例,减量26例,停减率66.67％。经统计学处理,两组疗效差异，具有统计学意义(P＜0.05)。

表29：抑郁、焦虑量表比较

由表29结果可知，治疗后焦虑自评量表(SAS)积分、抑郁自评量表(SDS)积分均明显降低。观察组焦虑评分下降明显，明显优于对照组，对比差异均有统计学意义(P＜0.05)；抑郁自评量表(SDS)积分明显降低。观察组焦虑评分下降明显优于对照组，对比差异均有统计学意义(P＜0.05)益心宁神片能够改善患者焦虑、抑郁症状。

4)安全性比较：治疗前后血、尿、便常规、肝功能(谷丙转氨酶、谷草转氨酶)，肾功(血肌酐、尿素氮),电解质(钾、钠、氯、钙、碳酸氢根)未见异常、未见不良反应，说明益心宁神片临床应用安全可靠。

8、研究结果评价

a、关于中医药对心绞痛、心电图的疗效结果评价：

本研究显示：益心宁神片可明显改善患者心绞痛疗效。观察组治疗后显效率达58.33％、总有效率达88.3％；对照组治疗后有效率为68.3％。观察组优于对照组。对比差异具有统计学意义(P＜0.05)。本药能改善患者心电图,其显效率为53.33％,有效率为86.67％,与对照组相比差异显著。西药硝酸甘油停药率，观察组为81.67％；对照组为66.67％。两组疗效差异，具有统计学意义(P＜0.05)。比较两组西雅图量表积分治疗前观察组为48.68±7.79、对照组为50.31±8.31；治疗后观察组为69.79±8.12、对照组为63.58±7.48。观察组降低明显优于观察组组，对比差异均有统计学意义(均P<0.05)。

因此,益心宁神片是一种治疗冠心病心绞痛较有效的中成药制剂,说明其具有扩张冠脉,增加冠脉血流量,降低心肌耗氧量,保护缺血心肌的作用。

b、关于抑郁、焦虑疗效分析：

比较两组患者治疗前后的焦虑、抑郁评分(焦虑：治疗前观察组为(58.37±8.12)、治疗后观察组为(53.37±8.36)。治疗前对照组为(60.17±7.53)、治疗后对照组为(56.67±6.28)；抑郁：治疗前观察组为(60.12±5.73)、治疗后观察组为(54.65±9.13)；治疗前对照组为(59.31±4.69)、治疗后对照组为(55.96±3.29))，两组在治疗后评分均降低。治疗后观察组抑郁、焦虑评分下降明显，明显优于对照组，对比差异均有统计学意义(P<0.05)。说明益心宁神片可改善双心病患者抑郁、焦虑状态，提升患者生活质量。

c、关于对中医证候积分、中医单项症状疗效分析：

两组患者治疗后中医证候积分疗效相比较，观察组治疗前积分为(39.2±4.79)，治疗后为(27.2±8.12)；对照组治疗前积分为(38.1±5.24)，治疗后为(29.5±6.79)治疗后中医症候积分均明显降低，且观察组优于对照组。对比差异均有统计学意义(P＜0.05)。两组中医单项症状疗效比较,患者胸痛、胸闷、心悸、不寐、自汗、舌有瘀斑、舌有瘀点等症状两组比较有显著性差异(P＜0.05)，观察组明显优于对照组。益心宁神片对中医症状改善、改善患者生存质量方面，作用显著。

d、对甘油三酯、胆固醇疗效分析：

本研究显示：经治疗两组患者血TG、TC水平组内、组间均无显著性差异(P>0.05)，说明益心宁神片对降低甘油三酯、胆固醇水平方面尚无明显的疗效，但治疗组患者血TG、TC水平呈现下降趋势。

e、安全性评价：

通过临床观察两组患者治疗前后血、尿、便常规；肝功能(谷丙转氨酶、谷草转氨酶)，肾功(血肌酐、尿素氮),电解质(钾、钠、氯、钙、碳酸氢跟)，均未见异常，且未见不良反应，说明益心宁神片临床应用安全可靠。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (8)

1.益心宁神片在制备治疗心脏疾病药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述益心宁神片的有效成分包括藤合欢、五味子、灵芝以及人参茎叶总皂苷，或藤合欢、五味子和灵芝的提取物以及人参茎叶总皂苷。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述心脏疾病是由心率失常和/或心肌缺血引起的。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述心肌缺血为急性心肌缺血和/或睡眠不足导致的心肌缺血。

5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，益心宁神片通过通过调节CRF和/或ACTH水平从而改善HPA功能，继而缓解心肌缺血。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述心肌缺血由体内β受体激动剂过量导致。

7.根据权利要求1～6任意一项所述的应用，其特征在于，所述心脏疾病为冠心病。

8.根据权利要求1～6任意一项所述的应用，其特征在于，所述心脏疾病为心绞痛。