CN106661549B - 抗衰老糖肽在增强胰腺细胞健康、存活以及改善移植效果的应用 - Google Patents

抗衰老糖肽在增强胰腺细胞健康、存活以及改善移植效果的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN106661549B
CN106661549B CN201580037524.0A CN201580037524A CN106661549B CN 106661549 B CN106661549 B CN 106661549B CN 201580037524 A CN201580037524 A CN 201580037524A CN 106661549 B CN106661549 B CN 106661549B
Authority
CN
China
Prior art keywords
alkyl
group
tert
benzyl
trimethylsilyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201580037524.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106661549A (zh
Inventor
A·M·J·夏皮罗
L·G·杨
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
PROTOKINETIX Inc
Original Assignee
PROTOKINETIX Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by PROTOKINETIX Inc filed Critical PROTOKINETIX Inc
Publication of CN106661549A publication Critical patent/CN106661549A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106661549B publication Critical patent/CN106661549B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/37—Digestive system
    • A61K35/39—Pancreas; Islets of Langerhans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0676—Pancreatic cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/90—Polysaccharides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/998—Proteins not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/999—Small molecules not provided for elsewhere

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及一种用于增强分离的胰腺细胞的植入的体外方法，包括步骤：在移植到有此需要的对象中之前，将分离的胰腺细胞与通式I的偕取‑二氟化C‑糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、通式I化合物的水合物或溶剂合物相接触
Figure DDA0001205653560000011

Description

抗衰老糖肽在增强胰腺细胞健康、存活以及改善移植效果的 应用
相关申请的交叉引用
本申请要求2014年6月4日提交的美国临时申请号62/007,626的优先权，其全部内容通过引用纳入本文。
背景
(a)领域
所公开的主题通常涉及抗衰老糖肽的用途。更具体地，该主题涉及抗衰老糖肽在加强人胰腺细胞移植的用途。
(b)相关现有技术
抗冻生物化合物，特别是糖蛋白，存在于自然环境中。这些化合物存在于例如一些鱼中，使得它们能够在低温环境(即接近零度或低于零度的温度)下存活。科学家们一直在研究取之于自然环境(鱼，两栖动物，植物，昆虫等)中的防冻化合物如何影响这些现象。研究集中在合成足够稳定的类似化合物，其活性至少等于或甚至优于天然分子的活性，以用于商业应用。
人们已经对抗冻蛋白(AFP)在不同条件下保护细胞的能力产生了越来越多的兴趣。它们可在北极和南极的鱼类以及其他寒冷气候居住的无脊椎动物中天然遇见，并且负责维持零度以下的细胞和组织功能。AFP在20世纪50年代被成功地分离，并且已经证明了通过结合到冰晶体上非依数性地(non-colligatively)降低体液的冻结温度的能力。
这些化合物在器官和组织移植领域中的早期实验显示出了良好前景，使得它们成为引人注意的治疗候选物，以保护细胞抵御与恢复-保存-复灌过程相关的有害条件。此外，在不同细胞(包括胰岛)的冷冻保存过程中还显示出了进一步的益处，在冷冻期间补充ATP时，其显著增加了它们的活性和功能。本发明所使用的抗衰老糖肽(AAGPTM)源自获取抗冻糖蛋白类似物的尝试。
抗衰老糖肽(AAGPTM)化合物是偕取-二氟化(gem difluorinated)C-糖肽化合物，已经提出所述化合物在严苛的细胞应激(cellular stresses)，例如营养不足、高温和冷冻保存、来自过氧化氢的(H2O2)的氧化应激、UV照射和炎症下具有适用性。
β细胞移植是将自供体胰腺分离的β胰岛细胞移植到另一个人体内。此为1型糖尿病的实验性治疗。一旦移植，胰岛β细胞开始产生胰岛素，积极调节血液中的葡萄糖水平。虽然在胰岛移植领域已经取得了显着进展，但是目前仍存在许多阻碍其广泛应用的障碍。两个最重要的限制是目前缺乏防止胰岛排斥的方法，以及用于移植的β胰岛细胞供应有限。目前的免疫抑制方案能够持续数月至数年防止β胰岛细胞衰竭，但是在这些治疗中使用的药剂昂贵并且可能增加特定恶性肿瘤和机会性感染的风险。此外，并且有些讽刺地，最常用的药剂(包括达利珠单抗(Zenapax TM)、西罗莫司(Rapamune TM)和他克莫司(Prograf TM)]也已知会损害正常β胰岛细胞功能和/或胰岛素作用。
胰岛移植的远期疗效在高度专业化的中心已得到显着改善，5年胰岛素独立率(insulin-independence rate)超过50％。一部分需要在延后的时间点重新引入胰岛素治疗。特别是在门静脉注射的早期，许多因素导致大量移植物损失，并且胰岛素质量不足可能限制患者的持久血糖控制。导致急性移植物损失的一个因素是缺氧，因为在充足的血管形成重建之前，许多胰岛在移植后立即死亡。移植物损失的其他原因包括即时血液介导的炎症反应、同种异体免疫、自身免疫的复发以及长期暴露于致糖尿病的免疫抑制剂中。这些因素导致大约60％的即刻和早期胰岛损失，导致维持功能性移植物的胰岛质量不足。
根据这些证据，对AFP及其在健康科学中，特别是在移植领域中的潜在用途给予了极大的关注。然而，缺乏数据来反映胰岛移植的潜在影响，其中主要的初始移植物损失似乎是不可避免的。在分离的人胰岛中测试所述AAGPTM化合物的细胞保护作用，所述人胰岛保持在常温培养条件下，暴露于毒素中并移植到免疫缺陷小鼠模型中作为初始胰岛质量的指示。
因此，需要提高分离的胰岛细胞的供应的方法。
需要改善分离细胞的健康和存活的方法。
综述
根据一个实施方案，提供了用于增强分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的移植的体外方法，包括步骤：
a)在移植到有此需要的对象中之前，将分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者与通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、通式I化合物的水合物或溶剂合物相接触：
Figure BDA0001205653540000021
其中，
N为1至5的整数，
R4＝H、AA1或AA1-AA2，
R5＝OH、AA1或AA1-AA2，
AA1和AA2各自独立地代表带有非极性侧链的氨基酸，
并且
R1、R2、R3为独立的基团，其中R1、R2和R3之二选自H、CH3、CH2Ph、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或CH(CH3)CH2CH3，并且余下的R1、R2、R3为
Figure BDA0001205653540000031
其中：
n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基或C(＝O)-Bn,
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、CH2-糖苷基或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”各自独立地选自烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
并且，如果R1＝R2＝H、CH3、CH2Ph、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或CH(CH3)CH2CH3，那么R3＝
Figure BDA0001205653540000032
其中：n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基、或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、CH2-糖苷基或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”各自独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
如果R1＝R3＝H、CH3、CH2Ph、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、或CH(CH3)CH2CH3，那么R2＝
Figure BDA0001205653540000041
其中：n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、CH2-糖苷基或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
如果R2＝R3＝H、CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或CH(CH3)CH2CH3
那么R1＝
Figure BDA0001205653540000051
其中：n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’,R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、CH2-糖苷基或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团。
根据另一个实施方案，提供了在移植到有此需要的对象前，改善分离的胰腺β细胞的胰岛素分泌功能的体外方法，包括步骤：
a)将分离的胰腺β细胞与通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物、或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物接触。
根据另一个实施方案，提供了在移植到有此需要的对象之前，保护分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者免受免疫抑制药物毒性的体外方法，包括步骤：
a)将分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者与通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物、或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物接触。
根据另一个实施方案，提供了在移植到有此需要的对象前，降低分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的炎症反应的体外方法，包括步骤：
a)将分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者与通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物、或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物接触。
根据另一个实施方案，提供了将分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者移植到有此需要的对象中的方法，包括步骤：
a)将分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者与通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物、或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物接触；
b)将步骤a)的经处理的分离胰腺细胞移植到所述有此需要的对象中。
所述方法可在步骤a)之前进一步包括步骤a’)：a’)分离胰腺细胞、胰腺祖细胞或两者。所述方法还可以进一步包括在步骤b)之前的步骤b’)：将步骤a)中的分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者与免疫抑制剂药物接触。
在本发明的方法中，所述分离的胰腺细胞可以是分离的α细胞、分离的β细胞、分离的δ细胞、分离的γ细胞、ε细胞或其组合，优选地，分离的胰腺细胞可以是分离的β细胞。
所述免疫抑制剂药物可以是达珠单抗、西罗莫司、他克莫司、环孢菌素之一、或其组合。
所述对象可以是人体受试者。
所述分离的胰腺细胞可分离自活体供体、尸体供体、或其组合。
在本发明方法中，所述式I化合物可以为式II化合物：
Figure BDA0001205653540000061
其中，N为1至5的整数；并且
R1、R2、R3为各自独立的基团，其中R1、R2和R3之二选自H、CH3，余下的R1、R2和R3为：
Figure BDA0001205653540000062
其中，n为3至4的整数；
Y、Y’为独立的基团，其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’,R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6选自H、CH3、CH2OH、CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
并且，如果R1＝R2＝H或CH3，那么R3＝
Figure BDA0001205653540000071
其中：n为3至4的整数；
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基、或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”各自独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
如果R1＝R3＝H或CH3，那么R2＝
Figure BDA0001205653540000072
其中，n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、Bn、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
如果R2＝R3＝H或CH3，
那么R1＝
Figure BDA0001205653540000081
其中：
n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团。
所述式I化合物可以为式III化合物：
Figure BDA0001205653540000091
所述分离的胰腺细胞可以与约0.01mg/ml至约5mg/ml的所述式I、式II或式III化合物接触，或与约1mg/ml至约5mg/ml的所述式I、式II或式III化合物接触。
根据另一个实施方案，提供了一种根据本发明方法制备的分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者。
根据另一个实施方案，提供了一种将分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者移植到有此需要的对象的方法，包括步骤：
a)将根据本发明方法制备的分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者移植入有此需要的对象中。
根据另一个实施方案，提供了一种治疗糖尿病的方法，包括步骤：
a)将根据本发明方法制备的分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者移植入有此需要的对象中。
根据另一个实施方案，提供了将根据本发明的方法制备的分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者移植到有此需要的对象中的用途。
根据另一个实施方案，提供了将根据本发明方法制备的分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者在治疗有此需要的对象的糖尿病的用途。
根据另一个实施方案，提供了将根据本发明的方法制备的分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者移植到有此需要的对象的用途。
根据另一个实施方案，提供了将分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者与通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的式I化合物的水合物或溶剂合物相接触。
如上所述的通式I化合物可以为如上所述的式II化合物，和/或如上所述的式III化合物。
分离的胰腺细胞可以是分离的α细胞、分离的β细胞、分离的δ细胞、分离的γ细胞、ε细胞、或其组合，并且优选地，分离的胰腺细胞可以是分离的β细胞。
分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者可以与约0.01mg/ml至约5mg/ml的所述式I、式II或式III化合物，或约1mg/ml至约5mg/ml的所述式I、式II或式III化合物接触。
根据另一个实施方案，提供了如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂合物的用途，用于在有此需要的对象中促进分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的植入。
根据另一个实施方案，提供了如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂合物的用途，用于在移植入有此需要的对象中之前，改善分离的胰腺β细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的胰岛素分泌功能。
根据另一个实施方案，提供了如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、通式I化合物的水合物或溶剂合物的用途，在移植入有此需要的对象之前，保护分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者免受免疫抑制药物毒性的影响。
根据另一个实施方案，提供了如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、通式I化合物的水合物或溶剂合物的用途，在移植入有此需要的对象中之前，降低分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的炎症反应。
所述分离的胰腺细胞可以是分离的α细胞、分离的β细胞、分离的δ细胞、分离的γ细胞、ε细胞、或其组合，并且优选地，分离的胰腺细胞可以是分离的β细胞。
所述免疫抑制剂药物可以是达珠单抗、西罗莫司、他克莫司、环孢霉素之一、或其组合。
所述对象可以是人体受试者。
所述分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者可分离自活体供体、尸体供体、或其组合。
如上所述的通式I化合物可以是如上所述的式II化合物，和/或如上所述的式III化合物。
所述分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者可以与约0.01mg/ml至约5mg/ml的所述式I、式II或式III化合物或约1mg/ml至约5mg/ml的所述式I、式II或式III化合物接触。
根据另一个实施方案，提供了如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物、或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂合物的用途，用于在有此需要的对象中促进分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的植入。
根据另一个实施方案，提供了如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂合物的用途，在移植到有此需要的对象中之前，以改善分离的胰腺β细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的胰岛素分泌功能。
根据另一个实施方案，提供了如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂合物的用途，在移植到有此需要的对象中之前，保护分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者免受免疫抑制药物毒性的影响。
根据另一个实施方案，提供了如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂合物的用途，在移植到有此需要的对象中之前，降低分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的炎症反应。
所述分离的胰腺细胞可以是分离的α细胞、分离的β细胞、分离的δ细胞、分离的γ细胞、ε细胞、或其组合，并且优选地，分离的胰腺细胞可以是分离的β细胞。
所述免疫抑制剂药物可以是达珠单抗、西罗莫司、他克莫司、环孢霉素之一、或其组合。
所述对象可以是人体受试者。
所述分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者可分离自活体供体、尸体供体、或其组合。
如上所述的通式I的化合物可以是如上所述的式II的化合物和/或如上所述的式III的化合物。
所述分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者可以与约0.01mg/ml至约5mg/ml的所述式I、式II或式III化合物或约从1mg/ml至约5mg/ml的所述式I、式II或式III化合物接触。
以下术语定义如下。
本文所用的术语“组合物”旨在包括一种含有指定数量的特定成分的产物，以及直接地或间接地产生于由指定数量的特定成分的组合的任意产物。涉及药物组合物或其它组合物的此类术语通常意在包括一种含有有效成分和组成载体的填料的产物，以及直接地或间接地由任意两种或多种成分的组合、络合或聚集、或由一种或多种成分的解离、或由一种或多种成分的其他类型的反应或相互作用而产生的任意产物。因此，本发明的药物组合物或其它组合物包括通过混合本发明的化合物和药学上可接受的载体制备的任何组合物。“药学上可接受的”或“可接受的”是指载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂的其它成分相容并且对其接受者无害。
术语“胰腺细胞”、“分离的胰腺细胞”、“胰岛细胞”或“分离的胰岛细胞”意指来源于通过已知方法和/或如下所述的来自活体供体或尸体供体的胰腺的胰岛，也指在体内、离体和/或体外生长的胰腺来源的细胞。胰岛细胞包括产生胰高血糖素并代表约15-20％的胰岛细胞的α细胞，产生激素胰岛素和胰淀素并代表约65-80％的胰岛细胞的β细胞，产生激素生长抑制素并代表约3-10％的胰岛细胞的δ细胞，产生激素胰多肽的PP细胞(也称为γ细胞)(3-5％的胰岛细胞)和产生胃促生长素的ε细胞，代表了<1％的胰岛细胞。
术语“胰腺β细胞”和“分离的胰腺β细胞”意指通过已知方法和/或如下文所述的分离的来源于活体供体或尸体供体的胰腺的细胞，也指在体内、离体和/或体外生长的胰腺β细胞。
术语“胰腺祖细胞”和“分离的胰腺祖细胞”意指来源于任何适当来源的细胞，例如已经分化或自然分化或通过已知方法在体内、离体和/或体外分化成胰腺祖细胞的(人或其他来源的)胚胎干细胞。所述分离的胰腺祖细胞具有通过进一步自然分化或通过已知方案在体内、离体或体外处理而成为胰腺β细胞的潜力。例如，分离的胰腺祖细胞可以通过分化方案在体外获得，并通过分化方案在体外进一步分化为胰腺β细胞。此外，分离的胰腺祖细胞可以通过分化方案在体外获得，并且在植入/移植到有此需要的患者体内后进一步分化成胰腺β细胞。
除非对碳链另有定义，“烷基”以及具有前缀“烷(alk)”的其它基团，例如烷氧基和烷酰基，指直链或支链的碳链，以及它们的组合。烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲和叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基等。在特定数目的碳原子允许的情况下，例如从C3-10，术语烷基还包括环烷基，以及直链或支链烷基链与环烷基结构的组合。没有指定碳原子数时，意指C1-6。
“环烷基”是烷基的子集，并且指具有指定数目碳原子的饱和碳环。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基等。除非另有说明，环烷基通常是单环的。除非另有定义，环烷基是饱和的。
术语“烷氧基”是指具有指定碳原子数(例如C1-6烷氧基)或在该范围内[即甲氧基(MeO-)、乙氧基、异丙氧基等]的任何数目的直链或支链烷氧化物。
术语“烷硫基”是指具有指定碳原子数(例如C1-6烷硫基)或在该范围内[即甲硫基(MeS-)、乙硫基、异丙硫基等]的任何数目的直链或支链烷基硫化物。
术语“烷基氨基”是指具有指定碳原子数(例如C1-6烷基氨基)或该范围内[即甲基氨基、乙基氨基、异丙基氨基、叔丁基氨基等]的任何数目的直链或支链烷基胺。
术语“烷基磺酰基”是指具有指定碳原子数(例如C1-6烷基磺酰基)或该范围内[即甲基磺酰基(MeSO2 -)、乙基磺酰基、异丙基磺酰基等]的任何数目的直链或支链烷基砜。
术语“烷基亚磺酰基”是指具有指定碳原子数(例如C1-6烷基亚磺酰基)或该范围内[即甲基亚磺酰基(MeSO-)、乙基亚磺酰基、异丙基亚磺酰基等]的任何数目的直链或支链烷基亚砜。
术语“烷氧基羰基”是指具有指定碳原子数(例如C1-6烷氧基羰基)或该范围内[即甲氧基羰基(MeOCO-)、乙氧基羰基或丁氧基羰基]的任何数目的本发明羧酸衍生物的直链或支链酯。
“芳基”是指含有碳环原子的单环或多环芳族环系。优选的芳基是单环或双环6-10元芳环系。苯基和萘基是优选的芳基。最优选的芳基是苯基。
“杂环基”是指含有至少一个选自O，S和N的杂原子的饱和或不饱和非芳环或环系，进一步还包括硫的氧化形式，即SO和SO2。杂环的实例包括四氢呋喃(THF)、二氢呋喃、1,4-二氧六环、吗啉、1,4-二噻烷、哌嗪、哌啶、1,3-二氧戊环、咪唑烷、咪唑啉、吡咯啉、吡咯烷、四氢吡喃、二氢吡喃、氧硫杂环戊烷、二硫戊环、1,3-二氧己环、1,3-二噻烷、氧硫杂环戊烷(oxathiane)、硫代吗啉、2-氧代哌啶-1-基、2-氧代吡咯-1-基、2-氧代氮杂环丁烷-1-基、1,2,4-恶二嗪-5(6H)-酮-3-基等。
“杂芳基”是指含有至少一个选自O，S和N的环杂原子的芳杂环或部分芳杂环。杂芳基因此包括与其它种类的环稠合的杂芳基，例如芳基、非芳香族的环烷基和杂环基。杂芳基的实例包括：吡咯基，异恶唑基，异噻唑基，吡唑基，吡啶基，恶唑基，恶二唑基(oxadiazolyl)(特别是1,3,4-恶二唑-2-基和1,2,4-恶二唑-3-基)，噻二唑基，噻唑基，咪唑基，三唑基，四唑基，呋喃基，三嗪基，噻吩基，嘧啶基，苯并异恶唑基，苯并恶唑基，苯并噻唑基，苯并噻二唑基，二氢苯并呋喃基，二氢吲哚基，哒嗪基，吲唑基，异吲哚基，二氢苯并噻吩基，吲哚嗪(indolizinyl)，噌啉基(cinnolinyl)，酞嗪基，喹唑啉基，萘啶基(naphthyridinyl)，咔唑基、苯并二氧杂环戊烯(benzodioxolyl)、喹喔啉基，嘌呤基，呋吖基，异苯并呋喃基，苯并咪唑基，苯并呋喃基，苯并噻吩基，喹啉基，吲哚基，异喹啉基，二苯并呋喃基等。对于杂环基和杂芳基，包括含有3-15个原子的环和环系，形成1-3个环。
“卤素”是指氟、氯、溴和碘。通常优选地为氯和氟。当卤素在烷基或烷氧基(例如CF3O和CF3CH2O)上取代时，氟是最优选的。
在详细描述本发明之前，将定义多个术语。如本文所用，单数形式“一种”，“一个”和“该”包括多个所指物，除非上下文另有明确指示。
应注意，如“优选地”，“通常地”和“典型地”的术语在本文中不用于限制所要求保护的发明的范围或暗示本发明的功能或结构的特定特征是关键的、必要的或甚至重要的。相反地，这些术语仅旨在突出可能或不能在本发明的特定实施例中使用的替代或附加特征。
为了描述和限定本发明的目的，应当注意，术语“实质上地”在本文中用于表示可以归因于任何定量比较、数值、量度或其他表示的不确定性的固有程度。术语“基本上地”在本文中也用于定量表示可以从所述参考值所变化而不导致主体组织基本功能变化的程度。
根据如附图中所述的所选实施方式的以下详细描述，本发明的主题的特征和优势将变得更加明显。将意识到的是，所公开和要求保护的主题能够在各个方面进行修改，而不脱离权利要求的范围。因此，认为所述附图和描述本质上是说明性的，而不是限制性的，并且主题的全部范围在权利要求中阐述。
附图简要说明
图1说明了使用AAGPTM增强人体β细胞健康。(A)有或没有AAGPTM时，β胰岛细胞在24h后的恢复率(每组n＝6)；(B)有或没有AAGPTM时，β胰岛细胞在24h后的活性(
Figure BDA0001205653540000141
green/EB测量)(每组n＝6)；和(C-D)有或没有AAGPTM时(每组n＝3)，葡萄糖刺激的胰岛素释放。
图2说明了使用AAGPTM保护人体β胰岛细胞健康抵御他克莫司对胰岛(Tac)的毒性。(A)有或没有AAGPTM时(每组n＝6)，Tac暴露后的β胰岛细胞的恢复率，(B-D)有或没有AAGPTM时(每组n＝6)，Tac暴露后的β胰岛的活性(
Figure BDA0001205653540000142
green/EB测量)；和(E-F)有或没有AAGPTM时(每组n＝6)，葡萄糖刺激的胰岛素释放。
图3说明了使用AAGPTM改善移植效果。(A-D)有或没有AAGPTM时(n分别为4和5)，24h后的移植物功能，(E-F)有或没有AAGPTM时(葡萄糖耐量实验)，24h后的移植物功能，和(G)移植后60天时，用或不用AAGPTM处理(n＝4和5)的β胰岛细胞的血糖正常的百分比。
图4说明了在有或没有AAGPTM补充时培养物中人体胰岛的体外评估。A.培养24h后胰岛恢复率的差异(p＝0.02)。B.灌注曲线的功能评估，比较葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)。C.对应于灌注曲线的曲线下面积的差异。数据点表示平均值±SEM，n＝3，*P<0.05，***p<0.001和****p<0.0001。
图5说明了在有或没有AAGPTM补充和他克莫司暴露的培养物中对人胰岛的体外评估。A.培养和他克莫司暴露后胰岛恢复率的差异。B.不同培养条件下的灌注曲线的功能评估，比较葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)。C.对应于灌注曲线的曲线下面积的差异。数据点表示平均值±SEM，n＝6，**p<0.01和***p<0.001。
图6说明了(A)在没有AAGPTM时，暴露于他克莫司的人类胰岛中的升高的细胞外活性氧(ROS)。采用Acridan亮色素PS-3测定法(n＝3)分析细胞外ROS的倍数增加来测量氧化应激。将AAGPTM和他克莫司从培养基中洗去之后，将胰岛再保存3天。在第3天(Tac存在)和第7天(无Tac)时，对不同的组进行GSIS静态测定和细胞内胰岛素含量测定。(B)与Tac+AAGPTM相比，Tac+组的刺激指数(SI)在第3天显著降低。第7天时SI是相似的，表明了一旦Tac不再存在，功能即恢复。尽管功能存在变化，在基线(C)处以及第3天和第7天时(D)，没有发现测定的胰岛素的细胞内含量的明显变化。数据点表示平均值±SEM，来自两种不同制剂，一式三份。
图7说明了AAGPTM效应不是他克莫司直接药物抑制的结果。(A-C)同种异体混合的淋巴细胞反应(MLR)用于评估直接药物抑制。结果表明，存在他克莫司、AAGPTM以及两者的组合的情况下，T细胞增殖显着降低，因此，证明了AAGPTM没有直接抑制他克莫司。数据点表示平均值±SEM，n＝6，***p<0.001和****p<0.0001。
图8说明了急性暴露于他克莫司并不影响钙的细胞内含量，但是降低了胞外分泌。尽管有实验干预，胰岛内的钙浓度保持不变。与其他组相比，(A)比较细胞内钙浓度和(B)在Tac+中，降低的累积电容，以及减小的曲线下的相应面积(C)(n＝10-16个两种不同制剂的胰岛)。进行电容测量以功能性鉴定胞外分泌的差异(D)，表明了两组间胞外分泌的显著差异。数据点表示平均值±SEM，n＝100个胰岛/组，一式三份，来自两次分离。
图9说明了移植后急性表达(24小时)的炎症细胞因子和趋化因子。通过均质化对所述移植物局部测量IL-1β(A)、IL-6(B)、TNF(C)和角质细胞趋化因子(KC)(D)的浓度。先前用AAGP TM处理的移植胰岛中，IL-1β、IL-6和角质细胞趋化因子(KC)的浓度显著降低。通过均质化(对每克组织标准化，n＝3)对所述移植物局部测量细胞因子。数据点表示平均值±SEM(pg/mL)，每克组织标准化，n＝3，***p<0.001，****p<0.0001。
图10说明了移植后24小时急性测量细胞凋亡。(A).代表性载玻片显示出胰岛素(红色)、TUNEL(绿色)和细胞核(蓝色)的多重染色。(B).测量TUNEL阳性细胞的百分比，并导致Tac+组中的显著较高。(C).均质后在移植物中局部表达的裂解的胱天蛋白酶-3的浓度也证实了Tac+组中更高的细胞死亡率。结果表示为相对于原生(naive)肾组织的倍数变化增加。移植后急性测量不同研究组中的TUNEL阳性细胞的百分比作为细胞凋亡的表达。数据点表示每克组织调整的平均值±SEM，n＝3，*p<0.05，**p<0.01和****p<0.0001。
图11说明了接受最小人类胰岛当量(～1000IEQ)移植的免疫缺陷小鼠在移植后的移植物功能。先用AAGPTM和他克莫司相应地处理胰岛。(A).汇集的血糖曲线证明了存在长期移植功能(60天)。虚线表示在第60天的移植物恢复肾切除术。(B).腹膜内葡萄糖耐量试验(IPGTT)以评价在接受葡萄糖推注后的代谢反应。(C).移植60天后，移除的移植物的胰岛素含量作为残留胰岛质量的指示。数据点表示每克组织(Tac-n＝6，Tac+n＝3和Tac+AAGP TM n＝7)调整的平均值±SEM，*p<0.05，**p<0.01和***p<0.001。(D)和(E).在接受同源全当量(～500IEQ)胰岛移植的小鼠中的移植后移植物功能。在移植前1小时将AAGPTM加入培养基中，并以1mg/kg/天的连续速率通过皮下渗透泵(在同一过程中植入)施用他克莫司。(D).在Tac存在下，40多天的动物合并血糖谱显示清晰的Tac+胰岛功能紊乱。垂直虚线表示他克莫司处理停止，并标记Tac+移植物的逐渐恢复。在y＝11处的水平连续线表示血糖正常限度。在第30天再次进行移植物恢复肾切除术。(E).移植后的平均时间-正常血糖曲线显示Tac+AAGP TM组小鼠更早地逆转糖尿病(p<0.001，对数秩，Mantel-cox试验)。(F)和(G).最后，葡萄糖耐量试验显示当小鼠接受他克莫司(7天)和当受体不含CNI时，Tac+的移植物应答具有显著差异。在Tac+AAGPTM组中没有观察到这些差异。
详细描述
β细胞移植是将来自供体胰腺的分离的β胰岛细胞移植到另一个人体内。它是1型糖尿病的实验性治疗方法。一旦移植，胰岛β细胞开始产生胰岛素，主动调节血液中的葡萄糖水平。
胰岛通常输注到患者的肝脏中。如果细胞不是来自遗传上相同的供体，患者的身体会将其识别为外来的，并且免疫系统将如任何移植排斥反应一样开始攻击它们。为了防止这种情况，可使用免疫抑制剂药物。虽然在胰岛移植领域已经取得了显著进展，但是目前仍存在许多阻碍其广泛应用的障碍。两个最重要的限制是目前缺乏用于防止胰岛排斥的方法，以及用于移植的β胰岛细胞供应有限。目前的免疫抑制方案能够持续数月至数年防止β胰岛细胞衰竭，但是在这些治疗中使用的药剂昂贵并且可能增加特定恶性肿瘤和机会性感染的风险。此外，并且有些讽刺地，最常用的药剂(包括达利珠单抗(Zenapax TM)、西罗莫司(Rapamune TM)和他克莫司(Prograf TM)]也已知会损害正常β胰岛细胞功能和/或胰岛素作用。
在第一实施方案中，公开了用于增强分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的植入的体外方法，包括步骤：
a)移植入有需要的对象中之前，将分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者与通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、通式I化合物的水合物或溶剂合物相接触：
Figure BDA0001205653540000161
其中，N为1至5的整数，
R4＝H、AA1或AA1-AA2，
R5＝OH、AA1或AA1-AA2，
AA1和AA2各自独立地代表带有非极性侧链的氨基酸，
并且
R1、R2、R3为独立的基团，其中R1、R2和R3之二选自H、CH3、CH2Ph、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或CH(CH3)CH2CH3，并且余下的R1、R2、R3为
Figure BDA0001205653540000162
其中：
n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基或C(＝O)-Bn,
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、CH2-糖苷基或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”各自独立地选自烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
并且，如果R1＝R2＝H、CH3、CH2Ph、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或CH(CH3)CH2CH3，那么R3＝
Figure BDA0001205653540000171
其中：n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基、或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、CH2-糖苷基或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”各自独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
如果R1＝R3＝H、CH3、CH2Ph、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、或CH(CH3)CH2CH3，那么R2＝
Figure BDA0001205653540000181
其中：n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、CH2-糖苷基或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
如果R2＝R3＝H、CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或CH(CH3)CH2CH3
那么R1＝
Figure BDA0001205653540000182
其中：n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’,R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、CH2-糖苷基或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团。
根据第二个实施方案，公开了在移植到有此需要的对象中之前，改善分离的胰腺β细胞的胰岛素分泌功能的体外方法，包括步骤：
a)将分离的胰腺β细胞与通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物、或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物接触。
根据第三个实施方案，公开了一种在移植到有此需要的对象中之前，保护分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者免受免疫抑制药物毒性的体外方法，包括步骤：
a)将分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者与通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物、或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物接触。
根据第四个实施方案，公开了在移植到有此需要的对象中之前，降低分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的炎症反应的体外方法，包括步骤：
a)将分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者与通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物、或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物接触。
根据第四个实施方案，公开了在有需要的对象体内移植分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的方法，包括步骤：
a)将分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者与通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物、或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物接触；
b)将所述步骤a)的经处理的分离的胰腺细胞移植到所述有需要的对象中。
根据一个实施方案，本发明的移植方法可在步骤a)之前进一步包括步骤a’)：a’)分离胰腺细胞、胰腺祖细胞或两者。
根据另一个实施方案，所述方法还可以进一步包括在步骤b)之前的步骤b’)：将步骤a)中的分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者与免疫抑制剂药物接触。
在实施方案中，移植过程可以根据任何已知的和适当的移植过程、以及适合本发明细胞类型的将来的移植过程来进行。根据一个实施方案，所述移植过程可以是“埃德蒙顿方案(the Edmonton protocol)”。被称为“埃德蒙顿方案”的胰岛细胞移植过程涉及将尸体性胰岛细胞移植到患者的肝门静脉中。由于移植手术的同种异体性质，采用钙调神经磷酸酶抑制剂(例如他克莫司)进行免疫抑制。植入过程中存在一段移植细胞是无血管的并且处于巨大压力下的移植后期，这期间可能发生移植失败。已经使用的其它移植部位包括肾下被膜和皮下。根据实施方案，在胰岛或β祖细胞移植的情况下，由于获得期望效果需要大量细胞，原发移植部位仍然是门静脉。
根据另一个实施方案，在本发明的方法中，分离的胰腺细胞可以是分离的α细胞、分离的β细胞、分离的δ细胞、分离的γ细胞、ε细胞或其组合，并且优选地，分离的胰腺细胞是分离的β细胞。
在上述本发明的方法中，所述免疫抑制剂药物可以是达珠单抗、西罗莫司、他克莫司、环孢菌素中的一种、或其组合。
根据实施方案，所述对象可以是人受试者，并且分离的胰腺细胞可以从活体供体、尸体供体、或其组合中分离。
根据一个实施方案，所述通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物可以是通式II的化合物：
Figure BDA0001205653540000201
其中，N为1至5的整数，并且
R1、R2、R3为独立的基团，其中R1、R2和R3之二选自H、CH3，并且余下的R1、R2、R3为
Figure BDA0001205653540000202
其中：n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基或C(＝O)-Bn,
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6选自：H、CH3、CH2OH、CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”各自独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
并且，如果R1＝R2＝H或CH3，那么R3＝
Figure BDA0001205653540000211
其中：n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基、或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6选自H、CH3、CH2OH、或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”各自独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
如果R1＝R3＝H或CH3，
那么R2＝
Figure BDA0001205653540000221
其中：n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”各自独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
如果R2＝R3＝H或CH3，
那么R1＝
Figure BDA0001205653540000222
其中：n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’(为)H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基、或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6选自H、CH3、CH2OH、或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”各自独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团。
根据另一实施方案，优选的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物为式III化合物，也称为AAGPTM：
Figure BDA0001205653540000231
根据另一个实施方案，公开了根据本发明的方法制备的分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者。
根据另一个实施方案，公开了将分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者移植到有此需要的对象中的方法，包括步骤：
a)在所述有此需要的对象体内，移植根据本发明的方法制备的分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者。
根据另一个实施方案，公开了一种治疗糖尿病的方法，包括步骤：
a)在所述需要的对象体内，移植根据本发明的方法制备的分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者。
根据另一个实施方案，分离的胰腺细胞可以是分离的α细胞、分离的β细胞、分离的δ细胞、分离的γ细胞、ε细胞或其组合，并且优选地，分离的胰腺细胞是分离的β细胞。
根据另一个实施方案，公开了根据本发明的方法制备的分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的用途，用于移植到有需要的对象体内。
根据另一个实施方案，公开了根据本发明的方法制备的分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的用途，用于对有需要的对象治疗糖尿病。
根据另一个实施方案，公开了根据本发明的方法制备的分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者，用于移植到有需要的对象体内。
根据另一个实施方案，所述分离的胰腺细胞可以是分离的α细胞、分离的β细胞、分离的δ细胞、分离的γ细胞、ε细胞、或其组合，并且优选地，所述分离的胰腺细胞是分离的β细胞。
根据另一个实施方案，公开了与如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物相接触的分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者。
根据另一个实施方案，公开了如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物的用途，用于在有此需要的对象中增强分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的植入。
根据另一个实施方案，公开了如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物的用途，用于在移植入有此需要的对象之前改善分离的胰腺β细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的胰岛素分泌功能。
根据另一个实施方案，公开了如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物的用途，用于在移植入有此需要的对象中之前，保护分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者免受抑制免疫抑制剂药物毒性。
根据另一个实施方案，公开了如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物的用途，用于在移植入有此需要的对象中之前，降低分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的炎症反应。
根据另一个实施方案，公开了如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物，用于增强有此需要的对象中分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的植入。
根据另一个实施方案，公开了如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物，用于在移植入有此需要的对象之前，改善分离的胰腺β细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的胰岛素分泌功能。
根据另一个实施方案，公开了如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物，用于在移植入有此需要的对象之前，保护分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者免受抑制免疫抑制剂药物毒性。
根据另一个实施方案，公开了如上所述的通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、如上所述的通式I化合物的水合物或溶剂化物的用途，在移植入有此需要的对象之前，降低分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者的炎症反应的应用。
根据另一个实施方案，所述通式I化合物可以为式II化合物和/或式III化合物：
根据另一个实施方案，所述分离的胰腺细胞、分离的胰腺祖细胞或两者可以与约0.01mg/ml至约5mg/ml的所述式I、式II或式III化合物接触，或与约1mg/ml至约5mg/ml的所述式I、式II或式III化合物接触。
在如上所述的本发明的应用中，所述免疫抑制剂药物可以是达珠单抗、西罗莫司、他克莫司、环孢菌素中的一种、或其组合。
根据如上所述的用途和化合物，所述对象可以是人体受试者，并且所述分离的胰腺细胞可以从活体供体、尸体供体、或其组合中分离。
根据另一个实施方案，所述分离的胰腺细胞可以是分离的α细胞、分离的β细胞、分离的δ细胞、分离的γ细胞、ε细胞、或其组合，并且优选地，所述分离的胰腺细胞是分离的β细胞。
本发明包括所示的化合物，并且还包括(在可能的情况下)所述化合物的单独的非对映异构体、对映异构体和差向异构体，以及其非对映异构体和/或对映异构体的混合物，包括外消旋混合物。虽然本文公开的具体立体化学是优选的，但是其它立体异构体，包括非对映异构体、对映异构体、差向异构体，以及它们的混合物也可以是有用的。无活性或活性较低的非对映异构体和对映异构体可用于与靶点和/或活化机理有关的科学研究。
本文公开的化合物可用于包含(a)化合物或其药学上可接受的盐，和(b)药学上可接受的载体的药物组合物中。所述化合物可用于包含一种或多种其它活性药物成分的药物组合物中。所述化合物还可以用于药物组合物中，其中式I、式II或式III的化合物或其药学上可接受的盐是唯一的活性成分。
结构式I、结构式II和/或结构式III的化合物可以含有一个或多个不对称中心，并且因此可以以外消旋体和外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单独的非对映异构体的形式出现。本发明意在包含结构式I、结构式II和/或结构式III的化合物的所有此类异构体形式。
通过例如从适当的溶剂中(例如甲醇或乙酸乙酯、或其组合)分部结晶、或通过利用光学活性的固定相的手性色谱法，结构式I、结构式II和/或结构式III的化合物可分离成其单独的非对映异构体。如果需要，采用含有已知的绝对构型的不对称中心的试剂，绝对构型可通过结晶产物或衍生的结晶中间体的X-射线晶体学来确定。
或者，结构通式I、结构通式II和/或结构通式III的化合物的任何立体异构体可以通过使用光学纯的起始材料或已知的绝对构型的试剂通过立体定向合成来获得。
如果需要，可分离所述化合物的外消旋混合物，从而分离出单独的对映异构体。所述分离可以通过本领域熟知的方法进行，例如将化合物的外消旋混合物与对映异构纯的化合物偶联以形成非对映异构体混合物，然后通过标准方法分离单独的非对映异构体，例如分步结晶或色谱法。所述偶联反应通常是使用对映纯的酸或碱形成盐。然后可通过裂解加入的手性残基将非对映异构体衍生物转化成纯对映体。所述化合物的外消旋混合物也可以通过使用手性固定相的色谱法直接分离，这些方法是本领域熟知的。
本文所述的一些化合物含有烯属双键，并且除非另有说明，否则意在包括E和Z两种几何异构体。
本文所述的一些化合物可以作为互变异构体存在，其具有伴随一个或多个双键位移的氢的不同连接点。例如，酮及其烯醇形式是酮-烯醇互变异构体。单个互变异构体及其混合物包括在本发明的化合物中。
在通式I、通式II和/或通式III的化合物中，原子可以显示它们的天然同位素丰度，或者一个或多个原子可以在具有相同原子序数的特定同位素中人为地富集，但是具有与自然界中主要存在的原子质量或质量数不同的原子质量或质量数。本发明意在包括通式I、通式II和/或通式III的化合物的所有合适的同位素变体。例如，氢(H)的不同同位素形式包括氕(1H)和氘(2H)。氕是自然界中发现的主要氢同位素。氘的富集可提供某些治疗优势，例如升高体内半衰期或降低剂量需要，或可提供可用作表征生物样品的标准的化合物。在通式I、通式II和/或通式III内的同位素富集的化合物可以通过本领域技术人员熟知的常规技术无需过度实验制备。
盐和制剂
应当理解，如本文所使用的，当它们用作游离化合物或其药学上可接受的盐的前体或在其他合成操作中，提及式I、式II和/或式III的化合物意指还包括药学上可接受的盐，以及非药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒碱或酸(包括无机或有机碱和无机或有机酸)制备的盐。包含在术语“药学上可接受的盐”中的碱性化合物的盐是指本发明化合物的无毒盐，其通常由游离碱与合适的有机或无机酸反应制备。本发明的碱性化合物的代表性盐包括但不限于以下：乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、克拉维酸盐、柠檬酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐(edisylate)、丙酸酯十二烷基硫酸盐(estolate)、酚磺乙胺盐(esylate)、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、己基间苯二酚盐、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、碘化物、羟基乙酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、黏酸盐(mucate)、萘磺酸盐、硝酸盐、N-甲葡糖胺铵盐、油酸盐、草酸盐、双羟萘酸噻嘧啶(双羟萘酸盐)、棕榈酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、硫酸盐、次乙酸盐、琥珀酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐、甲苯磺酸盐、三乙基碘化物和戊酸盐。此外，当本发明化合物携带酸性部分时，其合适的药学上可接受的盐包括但不限于：衍生自无机碱的盐，包括铝、铵、钙、铜、三价铁、二价铁、锂、镁、锰、钾、钠、锌等。特别优选的是铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。衍生自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括伯胺盐、仲胺盐和叔胺盐、环胺盐、以及碱性离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、氨基葡萄糖(glucosamine)、组氨酸、异丙胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。
此外，在本发明化合物中，存在羧酸(-COOH)或醇基的情况下，可以使用药学上可接受的羧酸衍生物的酯，例如甲基、乙基或新戊酰氧基甲基，或者是乙醇的酰基衍生物(如乙酰基、新戊酰基、苯甲酰基和氨酰基)。包括本领域已知的那些用于改变用作缓释剂或前药制剂的溶解性或水解特性的酯基和酰基。
本发明中也包括结构式I、结构式II和/或结构式III化合物的溶剂合物，特别是水合物。
根据一个实施方案，结构式I、结构式II和/或结构式III的化合物可以包括在用作药物的各种制剂中。
水性悬浮液含有活性物质与适于制备水性悬浮液的赋形剂的混合物。此类赋形剂是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散剂或润湿剂可以是天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或烯化氧(alkylene oxide)与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物，例如十七乙烯氧基鲸蜡醇(heptadecaethylene-oxycetanol)，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酸酐的偏酯的缩合产物，例如聚乙烯山梨醇酐单油酸酯。水性悬浮液还可以包含一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯、或对羟基苯甲酸正丙酯，一种或多种着色剂，一种或多种调味剂和一种或多种甜味剂，例如蔗糖、糖精或阿斯巴甜。
油性悬浮液可以通过将活性成分悬浮在植物油(例如花生油、橄榄油，芝麻油或椰子油)中或在矿物油(例如液体石蜡)中来配制。油性悬浮液可以含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可以加入如上所述的甜味剂和调味剂以制得可口的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧化剂如抗坏血酸来保存。
适于通过加水制备水性悬浮液的可分散粉末和颗粒提供活性成分与分散剂或润湿剂、悬浮剂以及一种或多种防腐剂的混合物。合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂由上面已经提到的那些举例说明。也可以存在另外的赋形剂，例如甜味剂、调味剂和着色剂。
本发明的药物组合物还可以是水包油乳剂的形式。所述油相可以是植物油，例如橄榄油或花生油，或矿物油，例如液体石蜡、或这些的混合物。合适的乳化剂可以是天然存在的磷脂，例如大豆、卵磷脂和衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，例如山梨糖醇酐单油酸酯，以及所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。所述乳剂还可以含有甜味剂和调味剂。
所述药物组合物可以是无菌可注射水性或油性悬浮液的形式。该悬浮液可根据已知技术使用那些上述的适当的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌可注射剂型还可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的载体和溶剂是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发油通常用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何温和的不挥发油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸可用于制备注射剂。
根据一个实施方案，使用本领域已知的方法来制备分离细胞。例如，可以使用酶，如胶原酶I和胶原酶II、嗜热菌蛋白酶、非梭菌中性蛋白酶或用于此目的的其它酶的混合物从供体(活体或尸体供体)中分离细胞。然后可以在标准组织培养瓶中在正常组织培养条件下培养分离的细胞。
根据一个实施方案，可以用通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物-优选式II的化合物，最优选式III的化合物-处理细胞、胰腺祖细胞或两者，所述化合物浓度为从约0.01mg/ml至约5mg/ml；或从约0.1mg/ml至约5mg/ml；或从约0.5mg/ml至约5mg/ml；或从约1mg/ml至约5mg/ml；或从约3mg/ml至约5mg/ml；或从约0.01mg/ml至约3mg/ml，或从约0.1mg/ml至约3mg/ml，或从约0.5mg/ml至约3mg/ml，或从约1mg/ml至约1mg/约3mg/ml，或从约0.01mg/ml至约1mg/ml；或从约0.1mg/ml至约1mg/ml；或从约0.5mg/ml至约1mg/ml；或从约0.01mg/ml至约0.5mg/ml；或从约0.1mg/ml至约0.5mg/ml；或从约0.01mg/ml至约0.1mg/ml；或约3mg/ml。根据实施方案，上述用量被认为是用于本发明目的的治疗有效量。
根据另一个实施方案，使细胞与偕取-二氟化C-糖肽化合物接触足以实现提高细胞活力和存活率的时间。根据实施方案，足够的时间可以是约12小时至120小时，或约12小时至约96小时，或约12小时至约72小时，或约12小时至约48小时，或约12小时至约24小时，或约120小时，或约96小时，或约72小时，或约48小时，或约24小时，或约12小时。
在另一个实施方案中，公开了根据本发明的方法制备的在药学上可接受的载体中的细胞制剂。根据一个实施方案，所述细胞制剂可以用于制备用作细胞移植的药物。根据另一个实施方案，所述细胞制剂可以用于细胞移植。
在另一个实施方案中，公开了一种移植方法，包括将本发明的细胞制剂移植到有需要的对象中。所述对象可以是哺乳动物，优选地为人类。
通过参考以下实施例将更容易理解本发明，所述实施例用于说明本发明而不是限制其范围。
实施例1
使用AAGPTM增强人体β细胞健康
初始表征
实验方法
研究级人类胰岛制剂在以下组中培养24小时：
1)AAGPTM补充的胰岛细胞；
2)对照(无补充的胰岛细胞)。
使用标准组织培养瓶，在37℃下、95％空气和5％CO2的的湿润气氛中、以200IE/mL的密度培养胰岛。AAGPTM浓度为3mg/mL。在胰岛分离后第1天进行一些测试，包括：胰岛恢复、膜完整性存活性染色(
Figure BDA0001205653540000291
EB)以及葡萄糖刺激的胰岛素释放。结果示于图1A-D。
实施例2
使用AAGPTM保护人体β细胞免受
他克莫司毒性
实验方法
研究级人类胰岛制剂在以下组中培养48小时：
1)无他克莫司(Tac-)处理的β胰岛细胞；
2)他克莫司(Tac+)处理的β胰岛细胞；和
3)他克莫司(Tac+)处理的+AAGPTM补充的β胰岛细胞；
48h后，将他克莫司(10ng/L)加入组2和组3中。
使用标准组织培养瓶，在37℃下、95％空气和5％CO2的的湿润气氛中、以200IE/mL的密度培养胰岛。AAGPTM浓度为3mg/mL。在胰岛分离后第1天进行一些测试，包括：胰岛恢复、膜完整性存活性染色(Syto B)以及葡萄糖刺激的胰岛素释放。结果示于图2-F。
实施例3
使用抗衰老糖肽类增强移植结果
实验方法
将两种研究级人类胰岛制剂在以下组中培养24小时：
1)AAGPTM+补充的β胰岛细胞；和
2)对照(无补充的胰岛细胞)。
48h后，将他克莫司(10ng/L)加入组2和组3中。
使用标准组织培养瓶，在37℃下、95％空气和5％CO2的湿润气氛中、以200IE/mL的密度培养胰岛。AAGPTM浓度为3mg/mL。24h后，以最小胰岛当量(～1000IEQ)，对免疫缺陷小鼠(Rag1)进行肾下背膜胰岛移植，以评估移植效力(n＝4和5，分别为对照组和AAGP TM组)。结果示于图3A-G。
结论
AAGPTM配方对人类胰岛细胞没有显示出毒性。
AAGPTM似乎增强了培养中的胰岛存活。
AAGPTM保护了体外暴露于他克莫司的胰岛。
具有最小胰岛质量的移植研究是非决定性的，尽管AAGPTM似乎有利于移植胰岛。
实施例4
胰岛分离和纯化
在所有实验中使用人类胰岛。在阿尔伯塔大学(University of Alberta)的临床胰岛移植计划中，在临床良好生产规范(GMP)的设备内从已故供体中分离胰岛。简言之，从多器官死亡的供体中获得胰腺并保存在组氨酸-色氨酸-酮戊二酸溶液(HTK，Custodiol.Metapharm，Brandford，安大略省，加拿大)或静态保存溶液(SPS-1，伊塔斯加，伊利诺伊州，美国)中。然后用补充有CIzyme胶原酶和CIzyme嗜热菌蛋白酶(Vitacyte LLP，Indianapolis，印第安纳波利斯，美国)的Liberase MTF C/T GMP(罗氏诊断有限公司，曼海姆，德国)扩增腺体并在Ricordi小室中消化。在细胞处理器(2991型，Cobe Laboratories，莱克伍德，美国)上使用连续密度梯度离心进一步纯化游离的胰岛(临床移植的胰岛分离(Islet isolation for clinical transplantation).刊于:Shahidul.M,(编).《朗格汉斯胰岛》.纽约：Springer，2010)。
实施例5
体外评估
在培养开始和结束时使用光学显微镜用双硫腙染色(3mg/mL终浓度，Sigma-Aldrich，安大略省，加拿大)计数胰岛。将胰岛的总数转换为胰岛等效物(IEQ)(标准化至150μm的直径)(临床移植的胰岛分离(Islet isolation for clinical transplantation.刊于:Shahidul.M,(编).《朗格汉斯胰岛》.纽约:Springer,2010；和Ranuncoli A,等.细胞移植2000；9(3):409-414)。
在37℃，5％CO2和饱和湿度下，将来自三种不同制剂的胰岛分成两组用于初始表征，并在补充有10％胎牛血清、L-谷氨酰胺(100mg/l)、青霉素(112kU/l)，链霉素(112mg/l)和HEPES(25mmol/l)的培养基(CMRL-1066，Mediatech，马纳萨斯，维吉尼亚州，美国)中培养，pH 7.4(NaOH)。一组还补充有3mg/mL的AAGPTM(ProtoKinetix)，一种AFP的合成类似物。AAGPTM在所有培养基中高度可溶，并且已证明在保持与天然AFP相当的高生物活性的情况下更稳定。另一组作为对照组。
培养24小时后，评估胰岛的恢复、活性和功能。恢复率计算为与每种条件的初始计数相比，24小时培养后存活胰岛的百分比。使用带有syto绿染料/溴化乙锭的复染色(Cedarlane Laboratories，伯灵顿，安大略省，和Sigma-Aldrich，安大略省)的荧光膜完整性测定法评估活性(临床移植的胰岛分离.刊于:Shahidul.M,(编).《朗格汉斯胰岛》.纽约：Springer，2010；Ranuncoli A,等.细胞移植2000；9(3):409-414；Ricordi C等.Actadiabetologica latina 1990；27(3):185-195；和Barnett MJ等.细胞移植2004；13(5):481-488)。
如Cabrera等人在细胞移植2008；16(10)：1039-1048中所述，通过在连续葡萄糖刺激期间监测体外胰岛素分泌概况来评估胰岛分泌功能。这种体外灌流测定是一种连续葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)测试的模式，以应激胰岛处于正常血糖和高血糖的交替的环境中以模拟生理胰岛反应。收集来自灌流测定的上清液，并使用市售ELISA试剂盒(胰岛素ELISA试剂盒，Mercodia Inc.匹兹堡，宾夕法尼亚州，美国)测定胰岛素水平。结果表示为，对于100IEQ标准化，与低(2.8mMol)葡萄糖刺激基线相比，胰岛素分泌的倍数变化。
实施例6
他克莫司毒性
根据他克莫司诱导的毒性来评价AAGPTM的细胞保护能力(Johnson JD等，细胞移植2009；18(8)：833-845)。来自六种不同研究级的人类制剂的胰岛被分成三组：一组AAGP TM补充组和两组非补充对照组。在相似的培养条件下保存胰岛24小时，然后在AAGPTM组中和对照组(阳性对照)之一中加入他克莫司(Prograf，Astellas Pharma Canada Inc.，马卡姆，安大略省，加拿大)。将他克莫司以10ng/mL的临床相关剂量的浓度加入培养基中，所有组再培养24小时，然后灌注并测定促炎细胞因子、氧化应激和细胞凋亡。结果示于图？？中。
实施例7
促炎细胞因子和趋化因子
在暴露于他克莫司24小时后，将来自所有组的培养基的样品冷冻，并且，使用多点人类促炎7-Plex超敏设备(Multi-Spot Human ProInflammatory 7-Plex Ultra-Sensitive kit)(Meso Scale
Figure BDA0001205653540000311
盖瑟斯堡，马里兰州，美国)测定相关的细胞因子和趋化因子(IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12，角质化细胞衍生趋化因子(KC)，和TNF-α)，在SECTORTM成像仪(Meso Scale
Figure BDA0001205653540000312
盖瑟斯堡，马里兰州，美国)上分析。结果表示为绝对值(pg/mL)，并且CMRL培养基单独用作对照用于比较。
实施例8
ROS分析
使用Acridan LumigenTM PS-3测定法(Amershan ECL Plus试剂盒，FisherScientific Inc.渥太华，安大略省，加拿大)(18)测定培养基中的活性氧(ROS)。在该测定中，Acridan LumigenTM PS-3在过氧化氢存在下被活性氧和氮物质(RNS)激发，在430nm产生化学发光。将培养基样品用液氮快速冷冻并储存直至进行测定。CMRL培养基单独用作对照，结果表示为与对照培养基相比，呈倍数增加。
实施例9
细胞凋亡分析
使用切割的胱冬酶-3分光光度测定法和末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色测量所有组的细胞凋亡。所有测定均在100IEQ的标准化组及其相应的培养基上进行。
使用分光光度测定法(EMD MilliporeTM，比勒利卡，马萨诸塞州，美国)，采用冷冻的培养基样品测定裂解的胱冬酶-3的增加。再次，将单独具有添加剂和无细胞的CMRL培养基用作对照，结果表示为与对照培养基相比以倍数增加。
对于TUNEL染色(DeadEndTM细胞凋亡检测系统，Promega，麦迪逊，威斯康星州)，将胰岛固定在福尔马林中，处理并包埋在石蜡中。进行共染色以鉴定移植物(胰岛素)，凋亡细胞和视野中存在的所有细胞核。使用ImageJ软件通过阳性TUNEL染色区域的百分比来定量细胞凋亡。
实施例10
移植
从Jackson实验室(巴哈伯，缅因州，美国)获得8至12周免疫缺陷小鼠(B6.129S7-Rag1tm1Mom)，并置于无特定病原体的条件下饲养，随意获得食物和水。根据加拿大动物保护理事会的指导方针照顾动物，并获得艾伯塔大学的动物福利委员会的伦理批准。
通过以180mg/kg的剂量腹膜内注射链脲霉素(STZ，Sigma-Aldrich，安大略省，加拿大)化学诱导糖尿病。在连续两次血糖测量记录为≥18mmol/L之后，认为动物患糖尿病。
如先前所述(19)，每组的动物在左肾囊下接受约1,000个IEQ人类胰岛的移植。
实施例11
24h时的移植肾切除术
每组三只小鼠进行肾切除术，并在移植后24小时安乐死，以在移植区域中完成促炎细胞因子、裂解的胱冬酶和TUNEL的短时测定。在所有情况下，从肾脏切除胰岛移植物，称重，在液氮中快速冷冻并储存在-80℃下。随后使用1ml裂解缓冲液/每200mg组织(0.15MNaCl，1mM的三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液(Tris-HCl)，0.1％SDS，0.1％Triton X-100，20mM脱氧胆酸钠，5mM EDTA)裂解组织样品。然后将裂解物在冰上进行30秒×2次复制的均质化(PowerGen，Fisher Scientific，安大略省，加拿大)，并在冰上用10个快速脉冲进行超声处理(VirSonic，VirTis，纽约，美国)。通过在4℃下以14,000rpm离心分离10分钟使细胞碎片沉淀并收集所得上清液，并置于含有10μl的蛋白酶抑制剂混合物(Sigma-Aldrich CanadaCo.，奥克维尔，安大略省，加拿大)/每1ml裂解物(1:100)的微量离心管中。
如前所述，测定移植物样品的促炎细胞因子/趋化因子、胱冬酶-3和TUNEL染色(使用相应的小鼠试剂盒)。每克组织都校准调试所有测定。
实施例12
移植物长期功能
使用便携式血糖仪(OneTouch Ultra 2，LifeScan，加拿大)在超过60天内每周三次监测每组的剩余7只小鼠的非空腹血糖。当两次连续读数低于11.3mmol/L时，定义为血糖正常。
在移植后60天时，进行腹膜内葡萄糖耐量试验(IPGTT)，以评价胰岛在过夜禁食后对葡萄糖推注(3g/kg)反应的能力。在基线(注射后0、15、30、60、90和120分钟时)监测血糖水平。将所有结果与未处理对照小鼠的血糖谱进行比较。
第65天时，对所有动物进行恢复肾切除术以证明移植物依赖型的血糖正常。在肾切除术后1周记录非空腹血糖水平。同样，在末端终点切除本体胰腺，在10％福尔马林中固定，并采用免疫组织化学分析以确认小鼠胰岛素染色的缺失，从而消除本体胰腺β细胞功能的残留或再生。
然后如前所述处理保存的移植物，并使用人胰岛素ELISA测定残留胰岛素含量来测量存活的胰岛。
实施例13
统计分析
数据表示为平均值±平均值的标准误差(SEM)。计算GSIS和IPGTT的曲线下面积，并且用单因素方差分析(one-way ANOVA)和Tukey事后比较法(Tukey’s post-hoc test)分析组之间的差异。p值<0.05被认为是显著的，并且使用GraphPad Prism(GraphPadSoftware，拉荷亚，加利福尼亚州，美国)进行所有分析。
实施例14
AAGPTM增强了培养的胰岛的保存
将来自3种不同的制备物的分离的人类胰岛在补充或不补充AAGPTM的培养基中培养24小时，以评价胰岛质量维持(mass preservation)和功能变化。24小时培养后计数胰岛，导致胰岛恢复率的显著差异。在AAGPTM补充组中，观察到更多数量的存活胰岛(76.62±7.4％相对50.63±6.2％，p＝0.029)(图4A)，虽然按每个膜完整性测定中，细胞存活率方面没有不同。(数据未显示)。
当比较这两组的体外功能(GSIS)时，如在灌注曲线(p<0.001)(图4B)中所示，在第二分泌期期间观察到带有AAGPTM补充的胰岛的胰岛素分泌的显著增加。曲线下得到的面积证实了来自AAGPTM补充的胰岛的胰岛素释放的总体增加(AUC，149.5±0.5相对75.5±0.5，p<0.001)(图4C)。
实施例15
AAGPTM有效保护胰岛免受他克莫司相关的损伤
基于钙调神经磷酸酶抑制剂(CNI)，特别是他克莫司的已知致糖尿病作用，进行毒性胰岛测定，并评价AAGPTM的细胞保护能力。再次，将来自6种不同制备物的分离的人体胰岛在补充或不补充AAGPTM的培养基中培养24小时，然后暴露于10ng/ml的临床相关剂量的他克莫司中24小时。为了检查AAGPTM的细胞保护作用，在仅有培养基(Tac-)，仅含有他克莫司(Tac+)或含有他克莫司(Tac+AAGPTM)的AAGPTM存在下培养胰岛。在明确的培养期后，所有组都表征体外存活力、活性、功能和氧化应激性。
尽管存在已知的β-细胞毒性剂-他克莫司，补充AAGPTM导致培养后的胰岛的存活率升高。Tac+AAGPTM组显示与从未暴露于他克莫司的胰岛类似的恢复率。然而，与Tac+组相比，存活显著增加(67.65％相对31.55％，p<0.001)(图5A)。通过膜完整性染色，不存在细胞活性的差异(数据未显示)，但是GSIS灌注导致Tac+和Tac+AAGPTM之间的胰岛素分泌的显著差异。AAGPTM补充组显示对葡萄糖的双相胰岛素响应，类似于对照组的从未暴露于他克莫司的胰岛。相反地，Tac+组产生了高度不良反应(AUC：Tac-相对Tac+，158.8相对8.22，p<0.001；Tac-相对Tac+AAGPTM，158.8相对129.3，p＝0.231；Tac+相对Tac+AAGPTM，8.22相对129.3，p＝0.003)(图5B，5C)。
通过细胞外ROS的倍数增加来测量AAGPTM对培养和暴露于他克莫司期间的人类胰岛产生的氧化应激的可能影响。在他克莫司暴露后24小时从每组中取出培养基样品，并用Acridan激活发光PS-3测定法分析。如所预期的，所有样品中都发生氧化应激，但暴露于他克莫司导致了ROS的显著增加(图6A)。然而，在AAGPTM的存在下，这种现象得到了改善(p＝0.012)。
将来自6种不同制备物的分离的人类胰岛在补充有或不补充AAGPTM的培养基中培养24小时，补充他克莫司，再培养24小时。总共48小时的培养期之后，表征所有组的体外存活力、活性、功能和氧化应激性。
如所预期的，所有样品中都发生氧化应激，但暴露于他克莫司导致了ROS的显著增加(图6A)。然而，在AAGPTM的存在下，这种现象得到了改善(n＝3，p＜0.05)。
重新形成类似的实验条件(用和不用AAGPTM培养并暴露于他克莫司的人类胰岛)，在第3天收集每个相应组的约100IEQ的等分试样以进行s-GSIS测定和同步的细胞内胰岛素含量。然后大量洗涤胰岛以除去他克莫司，在培养物中再保留4天，在第7天时重复取样和比较测试。
与初始评估一样，Tac+组在第3天显示出显著受损的胰岛素分泌，在Tac+AAGPTM系列中没有观察到(刺激指数1.4相对9.7，p<0.01，图6B)。然而，这种胰岛素分泌的降低是短暂的，并且当他克莫司不再存在时，截止到第7天组间的差异消失，培养期结束时调整为预期的整体减弱的胰岛效力。尽管胰岛素分泌谱存在差异，细胞内胰岛素含量仍保持稳定并且在整个组中是可参照的，这表明β细胞中胰岛素的生物合成没有改变(图6C和6D)。
实施例16
AAGPTM不抑制他克莫司的免疫抑制能力
为了证实AAGPTM不抑制T细胞增殖的他克莫司抑制，使用小鼠脾细胞进行混合淋巴细胞反应。该测定通过CFSE染色水平测定T细胞增殖反应。如所预期的，与IgG对照相比，在他克莫司存在下，T细胞增殖显著降低(n＝4，p<0.001)。在他克莫司单独存在或他克莫司与AAGPTM组合存在的情况下，CD8+和CD4+阳性T细胞的增殖也显著降低(两种情况下n＝4，p<0.001)。然而，当单独暴露于AAGPTM时，T细胞的增殖没有显著减少(图7)。
实施例17
他克莫司对胰岛细胞内钙含量和胞外分泌的影响
对人类胰岛进行了各种电生理学研究，通过表征CNI相关损伤及其避免(avoidance)来阐明AAGPTM的潜在作用机制。在组之间没有发现钙内流的显著差异(图8A、8C)，表明在胰岛素通路中可能的作用机制在更下游之处。
用这些相同的条件进行互补电容研究，作为在高葡萄糖刺激下的胞外分泌的间接指示。结果表明，与其他组相比，Tac+组的累积电容降低，与Tac+AAGPTM组(AUC：39.08相对68.01，p<0.01)(图8B，8D)相比时，曲线下面积显著降低。
实施例18
AAGPTM在立即移植后对炎症反应的改善
进行进一步的体内测试以补充我们的体外发现。在化学诱导的糖尿病免疫缺陷小鼠(每组n＝10)中使用相同的研究组(Tac-、Tac+和Tac+AAGP TM)，进行最小质量(～1,000IEQ)的胰岛移植。为了测量AAGPTM对局部移植后炎症反应的可能影响，将来自每组中(移植后24小时)的三只动物的恢复移植物均质化并表征促炎细胞因子和趋化因子。
相对于原初小鼠，所有组中的IL-1β的短时水平都升高了。Tac+组中的水平显著更高，但是AAGPTM的添加显著抑制了细胞因子的分泌(17.81相对4.94pg/mL/g组织，p<0.001)(图9A)。在测量IL-6水平时，观察到类似的效果，AAGPTM(147.8相对54.4pg/mL/g组织，p<0.001)存在时，产生了显著降低(图9B)。然而，在他克莫司暴露组(1.63相对1.34pg/mL/g组织)之间没有出现可辨别的TNF-α水平差异(图9C)。
在移植后短时测量的趋化因子中，参与嗜中性粒细胞募集(neutrophilrecruitment)的KC分泌与主要的分泌变化相关。同IL-1β和IL-6一样，KC在Tac+组中显著过表达，并且在AAGPTM(9.79相对3.58pg/mL/g组织，p<0.001)存在下显著降低(图9D)。当比较体外细胞因子和趋化因子表达时，没有观察到组之间的显著差异(数据未显示)。
实施例19
AAGPTM减少移植后胰岛细胞凋亡
还分析了短时移除的移植物(移植后24小时)的移植物内凋亡。相对于原初小鼠的肾中的基础水平测定切割的胱天蛋白酶-3(Casapse-3)水平的倍数变化增加。TAC+组中胱天蛋白酶-3的水平相对于TAC+AAGPTM显著增加，其基本上显示与那些从未暴露于他克莫司的胰岛非常相似的水平(3.14相对1.46，p<0.001)(图10B)。使用TUNEL测定法进一步分析剩余的移植物部分的细胞凋亡，当与TAC+AAGPTM和对照组(53.3％相对24.0％相对14.9％，p<0.023)比较时，显示出与TAC+组中TUNEL阳性细胞的主要百分比一致的结果(图10A，10C)。
实施例20
尽管暴露于他克莫司，体内AAGPTM-补充的胰岛功能提高
将剩余的移植小鼠(每组n＝7)跟踪至移植后60天，以确定移植效力并评估长期移植物功能。定期监测血糖以确定正常血糖的速率。如在边际胰岛质量模型中所预期的，观察到了延迟的植入。与所有小鼠都全程保持高血糖值直至第60天终止(图11A)的Tac+组相比，Tac-和Tac+AAGPTM组中的血糖随时间改善。
移植后60天的研究组进行IPGTT以评估胰岛的移植功能。Tac-和Tac+AAGPTM组都适当地作出响应，但是Tac+在120分钟内仍保持高度的糖尿病(AUC：Tac-与Tac+AAGPTM，92.63相对91.20，p＝0.095；Tac-与初始组，92.63相对71.43，p＝0.434；Tac+AAGPTM对初始，91.20相对71.43，p＝0.423，Tac+相对Tac+AAGPTM，149.8相对91.2，p＝0.021)(图11B)。为了证明移植的胰岛单独作用于观察到的正常血糖，在第60天进行移植物恢复肾切除术。所有小鼠恢复到其先前的糖尿病状态，也通过其自身胰腺的弱胰岛素染色证实(数据未显示)。
在移植物恢复时，胰岛素含量被确定为移植60天后残余胰岛质量的指标。图11C显示了暴露于他克莫司的移植物中具有显著胰岛素含量降低的组之间的显著差异。再次，尽管暴露于他克莫司(Tac+相对Tac+AAGPTM，30.86相对100.8ng/mL，p<0.01)，AAGPTM的存在有益于胰岛保护。
为了进一步支持这些发现，在采用他克莫司连续处理的同系糖尿病小鼠移植模型中进行移植实验，以与临床实践类似。如在体外环境中，暴露于他克莫司的移植胰岛(在这种情况下的更高的浓度对他克莫司的鼠代谢差异作出了解释)不能有效地分泌胰岛素并使动物恢复到正常血糖状态。然而，AAGPTM的存在使得胰岛功能正常，并且实现正常血糖的时间段与对照组相似(图11D，11E，p<0.001)。
当与他克莫司处理下的初始腹膜内葡萄糖耐量试验(IPGTT)比较时，也观察到这些发现，当与其它组相比时，在Tac+组中为明显的无效调节(图11F，AUC：101相对54.69和59.26，p<0.01)。
一旦停止他克莫司治疗，胰岛恢复其正常功能，动物同它们的研究负体一样变得血糖正常。在终点(30天)的重复IPGTT中，当用高葡萄糖推注(图11G)攻击时，差异消失并且所有动物都表现相似的行为。
讨论
本文所证明的是向胰岛培养基中加入有效的AFP、AAGPTM对人类胰岛的存活和体外功能提供了相当大的保护。此外，AAGPTM保护人类胰岛免受他克莫司相关的损伤，对体内的包括植入，以及急性炎症、凋亡和长期移植功能的标志物有益。
尽管在临床移植中，胰岛培养提供了相当大的灵活性，但是由于来自供体和分离过程的多种因素，通常会观察到14-20％的胰岛损失(Kin T等，世界移植杂志：欧洲社会器官移植的官方期刊；(Transplant international：official journal of the EuropeanSociety for Organ Transplantation)2008；21(11)：1029-1035)。当培养基补充AAGPTM时，在不同的人类胰岛制剂中始终观察到胰岛恢复和功能的显著改善。
AFP在低温下保护细胞的机制仍然是令人困惑的。不同的作者报道了这些分子的膜稳定作用，防止在低温下发生不能控制的离子转移，这降低了细胞破坏的风险(22)。该机制可以很好地应用于我们的实验设计中，即使在正常体温条件下，由于缺氧和缺血再灌注，可能发生不稳定的膜通透性(Karle C等，美国生理学肺细胞和分子生理学杂志(Americanjournal of physiology Lung cellular and molecular physiology)2004；286(6)：L1154-1160；Weir EK等.心血管研究(Cardiovascular research)2006；71(4)：630-641；Belliard A等.美国生理学杂志心脏和循环生理学(American journal of physiologyHeart and circulatory physiology)2013；304(1)：H94-103。)。
他克莫司是胰岛移植领域中广泛使用的一种免疫抑制剂，并且是常规用于降低急性、慢性排斥和复发性自身免疫的风险的关键元素(Shapiro AM等.新英格兰医学杂质(TheNew England journal of medicine).2000；343(4)：230-238)。然而，这种和其它CNI的长期使用已经与副作用相关，主要是肾毒性和移植后的糖尿病(Chand DH等.小儿科移植(Pediatric transplantation)2001；5(1)：32-36)。事实上，已经报道了胰岛中的他克莫司和环孢菌素相关的损伤，其特征在于几种机制，包括活化T细胞(NFAT)信号抑制的钙调神经磷酸酶/核因子(Oetjen E等.分子药理学(Molecular pharmacology)2003；63(6)：1289-1295)，胰岛素基因抑制(Hernandez-Fisac I等.美国移植期刊(American journal oftransplantation)2007；7(11)：2455-2462)，线粒体阻滞(Rostambeigi N等.移植(Transplantation)2011；91(6)：615-623)，和移植后血管形成的减少(Nishimura R等.PloS one 2013；8(4)：e56799)。
如本文所示，通过降低培养物中的存活率和抑制胰岛素分泌，临床相关剂量下的体外存在的他克莫司对人类胰岛明显有害，而添加AAGPTM明显保护人类胰岛免受这种毒性。
胰岛对通过培养和门静脉移植的捐献所产生的缺氧高度敏感。这种现象主要归因于它们高的氧需求量和尺寸，是培养期间依据接种密度产生有害的CO2梯度的原因(PapasKK等，移植学会会报(Transplantation proceedings)2005；37(8)：3412-3414)。由于抗氧化能力降低，胰岛易于发生氧化应激(Sklavos MM等.糖尿病(Diabetes)2010；59(7)：1731-1738)。这些因素导致了培养和移植后期间的胰岛损失。研究结果表明，Tac+组的氧化应激增加，如培养基中增长的的细胞外ROS所证明的。
进行体内实验以补充所有的体外发现并将AAGPTM的补充与早期炎症、细胞死亡、植入和长期功效相关联。急性安乐死的小鼠的移植物表征显示出了所研究化合物的抗炎能力的清楚证明。尽管暴露于培养物中的他克莫司，AAGPTM补充的胰岛显示出了IL-1β和IL-6的明显降低的表达，以及角化细胞趋化因子的分泌减少。这些细胞因子和趋化因子以及TNF-α是移植后炎症反应和随后的适应性免疫激活的关键参与者(Kanak MA TM等.国际内分泌学期刊(International Journal of Endocrinology)2014)。
他克莫司还与胰岛中增长的细胞死亡相关(Johnson JD等.细胞移植(Celltransplantation)2009；18(8)：833-845)。本实验测量了切割的胱冬酶-3在移植物中的倍数变化作为细胞凋亡的指示，随后是相同移植物的TUNEL染色。结果一致地表明，AAGPTM补充组中的细胞凋亡减少，与未暴露于他克莫司的初始人类胰岛中的水平相似。
在研究最后时进行的葡萄糖耐受性测试再次显示与Tac-和Tac+AAGPTM组相似的葡萄糖标准化率，其与初始小鼠没有显著差异。这些结果与表示为最终胰岛素含量的残留移植物质量相关。另一方面，在没有AAGPTM的情况下，他克莫司暴露的有害影响似乎足以在移植阶段损伤胰岛，表明在用葡萄糖推注后血糖没有降低以及葡萄糖正常化的失败。
为了使我们的实验更加与临床相关，进行了新的体内同基因小鼠移植模型，通过皮下渗透泵用他克莫司连续处理。观察到在开始施用CNI后，立即发送移植的胰岛的功能性损伤，并在整个治疗期(7天)期间持续。一旦免疫抑制停止，移植功能逐渐标准化，所有组在端点是相当的。
然而，与对照组类似，用AAGPTM治疗的胰岛似乎不受高剂量CNI的存在的影响并无缺陷地发挥功能。
这些发现支持先前的体外实验，显示了他克莫司的临时有害作用，如果除去药物，该有害作用可以逆转。显然，在当前的临床环境中中断他克莫司似乎是不可能的。或许，尽管在向患者施用AAGPTM分子之前需要进一步的调节毒性研究，本解决方案可以同时用AAGPTM治疗这些个体以延长细胞保护作用。
尽管收集了AAGPTM对胰岛的有益效果的压倒性证据，但是该药物的明确作用机制或避免他克莫司毒性的机理过程是未知的。在这些实验中，在AAGP TM的存在下，没有AAGPTM对他克莫司抗增殖效应的干扰时，通过进行MLR测定，证明了没有对他克莫司的直接药理学抑制。
此外，还发现，既不是他克莫司也不是AAGPTM影响胰岛中的钙浓度，所述钙浓度是β细胞中胰岛素合成分泌机制中的关键因素。该信息支持了最近公布的证据，该证据指出了分泌通路中更下游之处的潜在的他克莫司机制位点的证据(Uchizono Y，等.内分泌学(Endocrinology)2004；145：2264-2272)。事实上，对胰岛的电容测量确实显示Tac+组和Tac+AAGPTM组之间的显著差异。这些发现可以解释为受损的胞外分泌的指征，而在Tac+AAGPTM中没有观察到这些发现。
总之，在培养中补充有AAGPTM的人类胰岛改善了最终制剂的质量和产量，并且即使在胰岛毒性试剂存在的情况下，移植该胰岛改善了植入(效果)。这种方法可能潜在地带来临床移植的改进，可作为单供体胰岛移植的潜在战略。还可能开启其他在细胞、组织和器官保存中有前景的研究途径
尽管以上已经描述并且在附图中示出了优选实施例，但是对于本领域技术人员显而易见的是，在不脱离本公开的情况下可以进行修改。这样的修改被认为是包括在本公开的范围内的可能的变形。

Claims (10)

1.通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、通式I化合物的水合物或溶剂合物的用途，用于制备保护分离的人胰腺细胞、分离的人胰腺祖细胞或两者免受免疫抑制药物毒性的药物，以增强在用免疫抑制药物进行免疫抑制的免疫抑制人患者中所述分离的人胰腺细胞、分离的人胰腺祖细胞或两者的胰岛素分泌：
Figure FDA0003216494460000011
其中，
N为1至5的整数，
R4＝H、AA1或AA1-AA2，
R5＝OH、AA1或AA1-AA2，
AA1和AA2各自独立地代表带有非极性侧链的氨基酸，
并且
R1、R2、R3为独立的基团，其中R1、R2和R3之二选自H、CH3、CH2Ph、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或CH(CH3)CH2CH3，并且余下的R1、R2、R3为
Figure FDA0003216494460000012
其中：
n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基或C(＝O)-Bn,
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、CH2-糖苷基或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”各自独立地选自烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
并且，如果R1＝R2＝H、CH3、CH2Ph、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或CH(CH3)CH2CH3，那么
Figure FDA0003216494460000021
Figure FDA0003216494460000022
其中：n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基、或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、CH2-糖苷基或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”各自独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
如果R1＝R3＝H、CH3、CH2Ph、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、或CH(CH3)CH2CH3，那么
Figure FDA0003216494460000031
Figure FDA0003216494460000032
其中：n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、CH2-糖苷基或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
如果R2＝R3＝H、CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或CH(CH3)CH2CH3
那么
Figure FDA0003216494460000033
Figure FDA0003216494460000034
其中：n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’,R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、CH2-糖苷基或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团。
2.通式I的偕取-二氟化C-糖肽化合物或其药学上可接受的碱、酸加成盐、通式I化合物的水合物或溶剂合物的用途，用于制备保护分离的人胰腺祖细胞免受免疫抑制药物毒性的药物，以增强在用免疫抑制药物进行免疫抑制的免疫抑制人患者中所述分离的人胰腺细胞、分离的人胰腺祖细胞或两者的胰岛素分泌：
Figure FDA0003216494460000041
其中，
N为1至5的整数，
R4＝H、AA1或AA1-AA2，
R5＝OH、AA1或AA1-AA2，
AA1和AA2各自独立地代表带有非极性侧链的氨基酸，
并且
R1、R2、R3为独立的基团，其中R1、R2和R3之二选自H、CH3、CH2Ph、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或CH(CH3)CH2CH3，并且余下的R1、R2、R3为
Figure FDA0003216494460000051
其中：
n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基或C(＝O)-Bn,
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、CH2-糖苷基或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”各自独立地选自烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
并且，如果R1＝R2＝H、CH3、CH2Ph、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或CH(CH3)CH2CH3，那么
Figure FDA0003216494460000052
Figure FDA0003216494460000053
其中：n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基、或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、CH2-糖苷基或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”各自独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
如果R1＝R3＝H、CH3、CH2Ph、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、或CH(CH3)CH2CH3，那么
Figure FDA0003216494460000061
Figure FDA0003216494460000062
其中：n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、CH2-糖苷基或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
如果R2＝R3＝H、CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或CH(CH3)CH2CH3
那么
Figure FDA0003216494460000071
Figure FDA0003216494460000072
其中：n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’,R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH、CH2-糖苷基或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述分离的人胰腺细胞为分离的人α细胞、分离的人β细胞、分离的人δ细胞、分离的人γ细胞、分离的人ε细胞或其组合。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，分离的人胰腺细胞为分离的人β细胞。
5.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其特征在于，所述免疫抑制剂药物是达珠单抗、西罗莫司、他克莫司、环孢菌素之一、或其组合。
6.如权利要求1-5中任一项所述的用途，其特征在于，所述分离的人胰腺细胞或所述分离的人胰腺祖细胞分离自活体供体、尸体供体、或其组合。
7.如权利要求1-6中任一项所述的用途，其特征在于，所述式I化合物为式II化合物：
Figure FDA0003216494460000081
其中，N为1至5的整数；并且
R1、R2、R3为各自独立的基团，其中R1、R2和R3之二选自H、CH3，并且余下的R1、R2和R3为：
Figure FDA0003216494460000082
其中，n为3至4的整数；
Y、Y’为独立的基团，其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’,R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6选自H、CH3、CH2OH、CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团
并且，如果R1＝R2＝H或CH3，那么
Figure FDA0003216494460000083
Figure FDA0003216494460000091
其中：n为3至4的整数；
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基、或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷、叔丁基二苯基硅烷或醋酸基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”各自独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
如果R1＝R3＝H或CH3，那么
Figure FDA0003216494460000092
Figure FDA0003216494460000093
其中，n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、Bn、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团，
如果R2＝R3＝H或CH3，
那么
Figure FDA0003216494460000101
Figure FDA0003216494460000102
其中：
n为3至4的整数，
Y、Y’为独立的基团，
其中Y、Y’＝H、OR、N3、NR’R”、或SR”’，
其中R＝H、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R’、R”独立地＝H、烷基、烯丙基、苄基、甲苯磺酸酯基、C(＝O)-烷基、或C(＝O)-Bn，
R”’＝H、烷基或醋酸酯基，
R6为H、CH3、CH2OH或CH2-OGP，其中GP为选自下组的保护基团：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R7＝OH、OGP’、NH2、N3、NHGP’或NGP’GP”，其中GP’和GP”独立地选自：烷基、苄基、三甲基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或醋酸酯基，
R8为氢原子H或游离的或经保护的醇官能团。
8.如权利要求1-7任一项所述的用途，其特征在于，所述式I化合物为式III化合物，或其药学上可接受的碱、酸加成盐、水合物或溶剂合物：
Figure FDA0003216494460000111
9.如权利要求1-8任一项所述的用途，其特征在于，所述分离的人胰腺细胞或所述分离的人胰腺祖细胞与约0.01mg/ml至约5mg/ml的所述式I、式II或式III化合物接触。
10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述分离的人胰腺细胞与所述分离的人胰腺祖细胞约1mg/ml至约5mg/ml的所述式I、式II或式III化合物接触。
CN201580037524.0A 2014-06-04 2015-06-02 抗衰老糖肽在增强胰腺细胞健康、存活以及改善移植效果的应用 Active CN106661549B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462007626P 2014-06-04 2014-06-04
US62/007,626 2014-06-04
PCT/CA2015/050509 WO2015184544A1 (en) 2014-06-04 2015-06-02 Use of anti-aging glycopeptides to enhance pancreatic cell health, survival and improve transplant outcome

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106661549A CN106661549A (zh) 2017-05-10
CN106661549B true CN106661549B (zh) 2022-02-11

Family

ID=54765902

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580037524.0A Active CN106661549B (zh) 2014-06-04 2015-06-02 抗衰老糖肽在增强胰腺细胞健康、存活以及改善移植效果的应用

Country Status (9)

Country Link
US (4) US20150352155A1 (zh)
EP (1) EP3152297A4 (zh)
JP (1) JP6801934B2 (zh)
KR (1) KR102411834B1 (zh)
CN (1) CN106661549B (zh)
AU (1) AU2015271608B9 (zh)
CA (1) CA2950963A1 (zh)
NZ (1) NZ727749A (zh)
WO (1) WO2015184544A1 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017130148A1 (en) 2016-01-27 2017-08-03 Protokinetix Inc. Use of anti-aging glycoprotein for enhancing survival of neurosensory precursor cells
JP6884420B2 (ja) 2016-02-04 2021-06-09 クザップ リサーチ アンド デベロップメント エルエルシーＣｚａｐ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， Ｌｌｃ 放出制御及び階層化シクロデキストリン包接体ビヒクル
AU2021211397A1 (en) * 2020-01-24 2022-09-01 Protokinetix Inc. Use of anti-aging glycopeptides for inhibition of immune rejection of a graft

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2878851B1 (fr) * 2004-12-02 2007-02-09 Inst Nat Sciences Appliq Composes c-glycopeptides gem-difluores, leur preparation et leur utilisation en cryochirurgie et/ou cryopreservation
FR2900656A1 (fr) * 2006-05-03 2007-11-09 Inst Nat Sciences Appliq Composes c-glycopeptides gem-difluores, leur preparation et leur utilisation notamment pour la preservation de materiaux biologiques

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AAGPsTM – Anti-Aging Glyco Peptides;ProtoKinetix;《https://www.protokinetix.com/pdf/aagp-presentation-march-2010.pdf》;20100331;第29页 *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2017520275A (ja) 2017-07-27
WO2015184544A1 (en) 2015-12-10
US20170360844A1 (en) 2017-12-21
JP6801934B2 (ja) 2020-12-16
US20230414675A1 (en) 2023-12-28
KR102411834B1 (ko) 2022-06-21
US20210023142A1 (en) 2021-01-28
AU2015271608B9 (en) 2021-06-17
CN106661549A (zh) 2017-05-10
NZ727749A (en) 2023-04-28
US20150352155A1 (en) 2015-12-10
AU2015271608B2 (en) 2021-05-27
EP3152297A4 (en) 2018-01-31
CA2950963A1 (en) 2015-12-10
KR20170023029A (ko) 2017-03-02
AU2015271608A1 (en) 2017-01-12
EP3152297A1 (en) 2017-04-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230414675A1 (en) Use of anti-aging glycopeptides to enhance pancreatic cell health, survival and improve transplant outcome
US10687525B2 (en) Enhancement of cell cryopreservation with glycolipids
EP3316684B1 (fr) Procédé de cryoconservation de cellules a visée thérapeutique
HUE029784T2 (en) Microvesicles isolated from mesenchymal stem cells for use as immunosuppressive agents
US11826387B2 (en) Use of anti-aging glycoprotein for enhancing survival of neurosensory precursor cells
US20170112737A1 (en) Cosmetics and pharmaceutical applications of gallic acid and gallic acid derivatives
CN111655258A (zh) 用于冷冻保存的组合物和其使用方法
ES2604110T3 (es) Activador de la producción del factor de crecimiento derivado de plaquetas-BB, y activador de la producción de células madre mesenquimatosas, estabilizador de células madre y regenerador de la dermis comprendiendo cada uno el mismo
EP3316895B1 (fr) Procédé de cryoconservation de cellules à visée thérapeutique
EP4089164A1 (en) Composition for reinforcing function of stem cell
US20230142705A1 (en) Use of anti-aging glycopeptides for inhibition of immune rejection of a graft
WO2017209270A1 (ja) ２５－ヒドロキシコレステロール又はその類縁体コレステロールを有効成分として含有してなる、活性化されたｔ細胞及び／又はｂ細胞に選択的な細胞死誘導剤又は細胞死促進剤
Yan-rong et al. The Bone Marrow Cavity Is Suitable for Islet Transplantation in Diabetic Rhesus Monkey.: Abstract# C1718
JP2016138087A (ja) 抗腫瘍剤
JPH07196595A (ja) スチレン誘導体および該誘導体を含有する棘皮動物発生阻害剤

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1237814

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant