CN106581639A

CN106581639A - 预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品

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Publication number: CN106581639A
Application number: CN201710067367.9A
Authority: CN
Inventors: 袁瑞娟; 沈蒙; 张艳飞; 杨国燕; 张乃玉; 何婷; 王炎; 常艳丽
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2017-02-07
Filing date: 2017-02-07
Publication date: 2017-04-26

Abstract

本申请涉及一种预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品及其制备方法，属食品领域。本发明提供一种预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品，其是由如下重量份的原料组成：石斛蛋白提取物1%‑10%，石斛多糖提取物1%‑10%，酸味剂0.1%‑1%、防腐剂0.01%‑0.02%、稳定剂0.01%‑0.02%，余量为去离子水。本发明经过大量实验最终筛选出具有最佳预防雾霾伤害的饮品，该饮品与简单的服用石斛多糖或者石斛蛋白能起到更优的效果，而且本发明中涉及的制备石斛蛋白和石斛多糖提取物的方法，以及制备该饮品的方法操作简单，容易进行规模化生产。

Description

预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品

技术领域

本申请涉及一种预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品及其制备方法，属食品领域。

背景技术

当前PM 2.5已成为北方冬季影响人体健康的头号威胁。雾霾天气对健康的影响主要以急性效应为主，研究表明，婴幼儿、儿童、老年人、肥胖者、糖尿病人、心血管疾病患者、有慢性肺疾患的病人对PM2.5 的危害比较敏感。PM2.5 可削弱人体呼吸系统的防御能力，增加人体呼吸道对细菌、病毒等病原体的易感性。最近的研究还显示，肥胖者对PM2.5 的健康危害也比较敏感，这类人群在雾霾天最好减少外出活动。PM 2.5浓度极高时，人还容易出现疲惫、情绪低落、烦躁不安、抑郁等情绪问题，而原本就有心理疾病的患者病情更容易出现波动，需要用药来控制症状。此外，雾霾天气还会对人体健康产生一些间接影响。雾霾的出现会减弱紫外线的辐射，如经常发生雾霾，则会影响人体维生素D合成，导致小儿佝偻病高发，并使空气中传染性病菌的活性增强。长期暴露在氮氧化物和PM 2.5、PM 10中，PM 2.5每增加5 微克/立方米，肺癌发病风险增加18%；PM 10增加10 微克/立方米，肺癌发病风险增加22%；污染时间越长，造成肺癌的机会就越大。现在中国许多大城市，肺癌（包括女性）增加明显，一个是跟香烟有关系，还有一个原因就是空气污染。

石斛（Dendrobium）为兰科石斛属多年生草本植物，在中国发现的76种石斛属植物中，有50多种具有药用价值，是名贵中草药，常用于治疗慢性萎缩性胃炎及降血糖、抗肿瘤、抗衰老，心血管等（CN CN101407557 A）等。金钗石斛（D．nobile Lindl）和铁皮石斛（D．candidum Wall．ex Lind）是《中国药典》2015 年版收载的两种药用石斛，《本草纲目》将其列为上品。石斛的化学成分复杂，包括生物碱、多糖、酚类、联苄、倍半萜类和糖苷等，主要活性成分生物碱和多糖具有明显的抗肿瘤活性和免疫调节功能。

目前对雾霾防治所致不适的相关研究还不多见，将石斛与雾霾相关联的研究鲜有报道；已有的用于预防雾霾对身体带来伤害的产品大多数是通过中医简单组方而成，并未探讨是何种或何类成分发挥主要作用；目前石斛野生资源非常珍贵又非常稀少，现有技术对石斛的开发利用率还不够高，造成资源浪费比较严重。

发明内容

本发明目的在于提供一种对雾霾所致伤害具有预防作用的含有石斛的饮品及其制备方法。

为解决上述问题，本发明提供一种预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品，其是由如下重量份的原料组成：石斛蛋白提取物1%-10%，石斛多糖提取物1%-10%，酸味剂0.1%-1%、防腐剂0.01%-0.02%、稳定剂0.01%-0.02%，余量为去离子水。

所述石斛蛋白提取物和石斛总多糖提取物提取自：金钗石斛、铁皮石斛、霍山石斛、鼓槌石斛或流苏石斛中的一种或几种，优选的，提取自铁皮石斛；

所述酸味剂可选自柠檬酸、苹果酸、酒石酸等，所述防腐剂可选自山梨酸、苯甲酸；所述稳定剂选自海藻酸丙二醇酯、卡拉胶、果胶等。

所述预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品，还可以制成其他口服剂型如软胶囊、含片、固体饮料、颗粒剂。

一种制备预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品的方法，其特征在于，所述石斛蛋白提取物制备方法包括以下步骤：

（1）一定重量份石解粉末，液氮研磨，加入1.5g/20mL-2.5g/20mL磷酸盐缓冲液，浸泡12-20 h，得磷酸盐缓冲液提取物；

（2）将上述得到的磷酸盐缓冲液提取物，过500目筛，得石斛磷酸盐缓冲液提取液；将所得石斛药渣收集，烘干，备用；

（3）向上述得到的提取物液中加入25%-30%的硫酸铵，放置过夜后离心，转速6000-7000r/min，离心5-10min后除去沉淀，留上清液；

（4）向上述上清液中加入硫酸铵至溶液浓度60-90%，放置过夜后离心，转速6000-7000r/min，离心5-10 min后除上清液，得石斛蛋白沉淀；用磷酸盐缓冲液溶解沉淀后装入截留分子量范围7000-10000的透析袋，透析36-48 h，冻干，粉碎成极细粉，得石斛蛋白提取物。

一种制备预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品的方法，其特征在于，所述石斛多糖制备方法包括以下步骤：

（1）加水煎煮提取蛋白后所得石斛药渣1-4次，提取时间1.5-3.5小时每次，加水量为药渣10-30倍，得到提取液；

（2）提取液合并，减压浓缩至相对密度为1.10-1.30（60 ℃）的浓缩液；

（3）向浓缩液中加入浓度为70-90%的乙醇1-3倍，沉淀，静置过夜，其中乙醇加入倍数以体积计；

（4）将所得醇液过滤，收集沉淀，得粗多糖提取物；将所得粗多糖提取物中加入30-80倍去离子水，加热搅拌使其充分溶解；

（5）向上述得到的粗多糖溶解液中加入0.5-1倍体积丙酮萃取1-3次，取水层，减压浓缩至相对密度为1.10-1.30（60 ℃）的浓缩液；

（6）将步骤（5）所得浓缩液过树脂柱，用2-3V体积的100%-0%比例水-乙醇溶液洗脱，所述树脂选自DEAE-纤维素树脂柱、AB-8、Sephadex G或D310R，优选D310R；

（7）选取步骤（6）中100%-50%段洗脱液，浓缩，冻干，粉碎成极细粉，得石斛多糖提取物。

通过上述提取富集方法，对石斛中石斛蛋白的提取率可达2%-3.5%，对石斛多糖的提取率可达25%-40%。

一种预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品的制备方法，其特征在于：

（1）称取各重量份的原料及辅料、去离子水，120-150 r/min搅拌15-20 min，得搅拌液；

（2）向上述搅拌液中加入酸味剂，搅拌2-4min，溶解后， 500目筛过滤；

（3）向上述滤液中加入防腐剂和稳定剂，低速搅拌2-3 min，500目筛过滤；

（4）上述过滤液，灭菌，灌装，冷却后检验，即得。

一种所述预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品在制备提高人体免疫力的产品中的应用，其特征在于，能够用于呼吸道细菌、病毒等病原体所致的抵抗力下降。

由于石斛在药学上具有很多用途，因此，本发明还可制成能够预防雾霾伤害的含有石斛提取物的药物口服制剂，以石斛蛋白和石斛多糖药用有效量为基础，再加入药用载体和药学上可接受的辅料，例如：填充剂、粘合剂、稀释剂、赋形剂、润湿剂、崩解剂等制备成用于辅助治疗因免疫力低下而引起的疾病的药物。填充剂可包括淀粉、甘露醇、糊精、微晶纤维素等；粘合剂可包括纤维素衍生物、藻酸盐、聚乙烯吡咯烷酮等；润湿剂如乙醇等；崩解剂如交联羟甲基纤维素、琼脂和碳酸氢钠等。还可以在所述药物组合物中加入其他辅料如矫味剂等。

所述的含有石斛提取物的药物组合物可以为多种剂型，优选剂型为口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂或注射剂。其中，所述口服固体制剂为颗粒剂、片剂、丸剂、滴丸剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、固体分散剂、散剂、微颗粒剂、微丸剂、微囊剂、微球剂等。

本发明经过大量实验最终筛选出具有最佳预防雾霾伤害的饮品，该饮品与简单的服用石斛多糖或者石斛蛋白能起到更优的效果，而且本发明中涉及的制备石斛蛋白和石斛多糖提取物的方法，以及制备该饮品的方法操作简单，操作简单，容易进行规模化生产。

为证明其效果，本发明者按下述具体实施方式中实施例3中提供的方法制备得到的饮品，研究了其对小鼠相关脏器功能的影响，实验结果如下：

一、对小鼠免疫功能影响

1、实验材料

实验动物：昆明种小鼠，雄性，18-20g，共200只

实验药品：环磷酰胺，香菇菌多糖，石斛蛋白提取物、石斛多糖提取物，石斛蛋白与石斛多糖提取物复合组，石斛提取物组（按照CN CN101407557 A中方法制备，下同）

2、实验分组及步骤

将实验小鼠随机分为16组，每组6只。普通饲料喂食，5g/只/天，共 14天，各组除正常组外，第7、9、11、13天，每只小鼠每天腹腔注射60mg/kg 环磷酰胺。正常组小鼠则注射生理盐水为对照。

（1）正常组：每天以0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃，0.1ml/10g，连续灌胃14天。

（2）模型组：第7、9、11、13天，每只小鼠每天腹腔注射60mg/ml环磷酰胺，同时每天以0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃，0.1ml/10g，连续灌胃14 天。

（3）石斛蛋白提取物组、石斛多糖提取物组、石斛蛋白与石斛多糖提取物复合组、石斛提取物组制成0.5mg/ml口服溶液，以0.1ml/10g灌胃给药。

3、实验结果

预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品对小鼠免疫功能的影响结果。

表1预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品对小鼠免疫功能的影响

（1）对CD4/CD8的影响

结果显示：石斛蛋白与石斛多糖组、石斛组、石斛多糖组能明显提高小鼠CD4/CD8的比值。与正常组和模型组比较，石斛蛋白与石斛多糖组能明显提高小鼠CD4/CD8的比值，且比石斛提取物组和石斛多糖组作用明显。提示石斛蛋白与石斛多糖组增强小鼠免疫力的作用。

（2）对胸腺的影响

结果显示：石斛蛋白与石斛多糖组、石斛组、石斛多糖组能增加小鼠的胸腺重量。与正常组和模型组比较，石斛蛋白与石斛多糖组能明显加胸腺的重量，与石斛多糖组、石斛提取物组相比较作用也较明显；提示石斛蛋白与石斛多糖组有增强小鼠免疫力的作用。

（3）对骨髓细胞抑制作用的影响

结果显示：石斛蛋白与石斛多糖组、石斛组、石斛多糖组与正常组和模型组比较，前三组均能明显对抗环磷酰胺造成的骨髓细胞抑制作用；石斛蛋白与石斛多糖组较石斛多糖组、石斛提取物组作用明显，提示石斛蛋白与石斛多糖组有增强小鼠免疫力的作用。

（4）体重的影响

结果显示：与模型组比较，石斛蛋白与石斛多糖组能明显增加正常小鼠和免疫低下小鼠的体重，提示石斛蛋白与石斛多糖组有增强小鼠免疫力的作用。

以上实验数据和结果可以表明，本发明所得饮品能显著增强小鼠免疫力。

二、对小鼠镇咳作用研究

取小鼠50只，随机分成5组：（1）生理盐水组；（2）复方甘草片组（天津力生制药股份有限公司）；（3）石斛提取物组；（4）石斛蛋白提取物组；（5）石斛多糖提取物组；（6）石斛蛋白与石斛多糖复合组（实施例3）。

每日灌胃给药1次，连续6天，于末次给药1 h后，用浓氨水诱导法观察镇咳作用。小鼠吸人浓氨水气雾后，刺激呼吸道感受器，反射性引起咳嗽。凡能抑制咳嗽中枢或降低呼吸道感受器敏感性的药物均有镇咳作用。以小鼠腹肌收缩并张大口为咳嗽动作指征，分别对照各组小鼠有无咳嗽反应：

表2 预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品对小鼠镇咳功能的影响

三、抑菌作用

将致病菌白色葡萄球菌、大肠杆菌接种于普通培养基，乙型溶血性链球菌、肺炎球菌接种于血培养基。用打孔法分别把石斛提取物组、石斛蛋白提取物组、石斛多糖提取物组、石斛蛋白与石斛多糖复合组（实施例3）制成1.0%的水溶液备用，注人孔内，24 h后观察结果：

表3 预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品抑菌作用（抑菌环mm）

四、饮品感官品分表

表4 预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品的感官分析

石斛多糖添加量（%）与感官评分

柠檬酸添加量（%）与感官评分

具体实施方式

下面将通过实施例对本发明作进一步的描述，这些描述并不是要对本发明内容作进一步的限定。本领域的技术人员应理解，对本发明内容的技术特征所做的等同替换，或相应的改进，仍属于本发明的保护范围之内。

实施例1

（1）石斛蛋白提取物的制备

一定重量份石解粉末，液氮研磨，加入1.5g/20mL磷酸盐缓冲液，浸泡12 h，过500目筛，得磷酸盐缓冲液提取物，所得石斛药渣收集，烘干，备用；向上述得到的提取物液中加入25%的硫酸铵，放置过夜后离心，转速6000 r/min，离心5min后除去沉淀，留上清液；上清液中加入硫酸铵至溶液浓度60%，放置过夜后离心，转速6000 r/min，离心5 min后除上清液，得石斛蛋白沉淀。用磷酸盐缓冲液溶解沉淀后装入截留分子量范围7000-10000的透析袋，透析36 h，冻干，粉碎成极细粉，得石斛蛋白提取物。

（2）石斛多糖提取物的制备

加水煎煮提取蛋白后所得石斛药渣2次，提取时间1.5小时每次，加水量为药渣10倍，得到提取液合并，减压浓缩至相对密度为1.10（60 ℃）的浓缩液；加入浓度为70%的乙醇2倍，沉淀，静置过夜（其中乙醇加入倍数以体积计），将所得醇液过滤，收集沉淀，得粗多糖提取物；将所得粗多糖提取物中加入30倍去离子水，加热搅拌使其充分溶解；加入0.5倍体积丙酮萃取2次，取水层，减压浓缩至相对密度为1.10（60 ℃）的浓缩液后过D310R树脂柱，用2V体积的100%-30%比例水-乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。浓缩，冻干，粉碎成极细粉，得石斛多糖提取物。

（3）预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品制备

石斛蛋白提取物1%，石斛多糖提取物1%，柠檬酸0.1%、山梨酸0.01%、海藻酸丙二醇酯0.01%，余量为去离子水，120 r/min搅拌15 min，得搅拌液，加入酸味剂，搅拌2 min，溶解后，500目筛过滤，加入防腐剂和稳定剂，低速搅拌2 min，500目筛过滤，灭菌，灌装，冷却后检验，即得。

实施例2

（1）石斛蛋白提取物的制备

一定重量份石解粉末，液氮研磨，加入2.5 g/20mL磷酸盐缓冲液，浸泡20h，过500目筛，得磷酸盐缓冲液提取物，所得石斛药渣收集，烘干，备用；向上述得到的提取物液中加入30%的硫酸铵，放置过夜后离心，转速7000 r/min，离心10 min后除去沉淀，留上清液；上清液中加入硫酸铵至溶液浓度90%，放置过夜后离心，转速7000 r/min，离心10 min后除上清液，得石斛蛋白沉淀。用磷酸盐缓冲液溶解沉淀后装入截留分子量范围7000-10000的透析袋，透析48 h，冻干，粉碎成极细粉，得石斛蛋白提取物。

（2）石斛多糖提取物的制备

加水煎煮提取蛋白后所得石斛药渣4次，提取时间3.5小时每次，加水量为药渣30倍，得到提取液合并，减压浓缩至相对密度为1.30（60 ℃）的浓缩液；加入浓度为90%的乙醇2倍，沉淀，静置过夜（其中乙醇加入倍数以体积计），将所得醇液过滤，收集沉淀，得粗多糖提取物；将所得粗多糖提取物中加入80倍去离子水，加热搅拌使其充分溶解；加入1倍体积丙酮萃取3次，取水层，减压浓缩至相对密度为1.30（60 ℃）的浓缩液后过DEAE-纤维素树脂柱树脂柱，用3 V体积的100%-40%比例水-乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。浓缩，冻干，粉碎成极细粉，得石斛多糖提取物。

（3）预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品制备

石斛蛋白提取物10%，石斛多糖提取物10%，苹果酸1%、苯甲酸0.02%、卡拉胶0.02%，余量为去离子水，150 r/min搅拌20 min，得搅拌液，加入酸味剂，搅拌4 min，溶解后，500目筛过滤，加入防腐剂和稳定剂，低速搅拌3 min，500目筛过滤，灭菌，灌装，冷却后检验，即得。

实施例3

1）石斛蛋白提取物的制备

一定重量份石解粉末，液氮研磨，加入2.0 g/20mL磷酸盐缓冲液，浸泡18 h，过500目筛，得磷酸盐缓冲液提取物，所得石斛药渣收集，烘干，备用；向上述得到的提取物液中加入26%的硫酸铵，放置过夜后离心，转速7000 r/min，离心8 min后除去沉淀，留上清液；上清液中加入硫酸铵至溶液浓度80%，放置过夜后离心，转速7000 r/min，离心8 min后除上清液，得石斛蛋白沉淀。用磷酸盐缓冲液溶解沉淀后装入截留分子量范围7000-10000的透析袋，透析40 h，冻干，粉碎成极细粉，得石斛蛋白提取物。

（2）石斛多糖提取物的制备

加水煎煮提取蛋白后所得石斛药渣3次，提取时间2.5小时每次，加水量为药渣25倍，得到提取液合并，减压浓缩至相对密度为1.25（60 ℃）的浓缩液；加入浓度为90%的乙醇2倍，沉淀，静置过夜（其中乙醇加入倍数以体积计），将所得醇液过滤，收集沉淀，得粗多糖提取物；将所得粗多糖提取物中加入50倍去离子水，加热搅拌使其充分溶解；加入0.6倍体积丙酮萃取3次，取水层，减压浓缩至相对密度为1.30（60 ℃）的浓缩液后过D310R树脂柱，用2 V体积的100%-40%比例水-乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。浓缩，冻干，粉碎成极细粉，得石斛多糖提取物。

（3）预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品制备

石斛蛋白提取物2%，石斛多糖提取物5%，柠檬酸0.25%、山梨酸0.01%、果胶0.01%，余量为去离子水，150 r/min搅拌16 min，得搅拌液，加入酸味剂，搅拌4 min，溶解后，500目筛过滤，加入防腐剂和稳定剂，低速搅拌3 min，500目筛过滤，灭菌，灌装，冷却后检验，即得。

实施例4

预防雾霾伤害的含有石斛提取物的片剂制备

石斛蛋白提取物与石斛多糖提取物制备同实施例3，

实施例3石斛蛋白提取物20g，实施例3石斛多糖提取物75g，糖粉30g，羟甲淀粉钠5g，硬脂酸镁2.5g，滑石粉2.5g，乙醇90%适量。将上述除90％乙醇和硬脂酸镁外的辅料过60～80目筛后，混匀，再与实施例3所制备的石斛蛋白提取物与石斛多糖提取物，向所得混合物中加入适量的95%乙醇，制成软材，挤压过20～24目筛制粒，40℃至65℃干燥1小时至 4小时，过20目筛整粒，灌于胶囊中，制得1000粒。

Claims

1.一种预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品，其是由如下重量份的原料组成：石斛蛋白提取物1%-10%，石斛多糖提取物1%-10%，酸味剂0.1%-1%、防腐剂0.01%-0.02%、稳定剂0.01%-0.02%，余量为去离子水。

2.如权利要求1所述的一种预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品，其特征在于，是由如下重量份的原料组成：石斛蛋白提取物2%-5%，石斛多糖提取物3%-7%，酸味剂0.1%-0.35%、防腐剂0.01%-0.015%、稳定剂0.01%-0.015%，余量为去离子水。

3.如权利要求1所述的一种预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品，其特征在于，是由如下重量份的原料组成：石斛蛋白提取物2%-4%，石斛多糖提取物3%-6%，酸味剂0.1%-0.25%、防腐剂0.01%-0.015%、稳定剂0.01%-0.015%，余量为去离子水。

4.如权利要求1所述的一种预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品，其特征在于，所述石斛蛋白和石斛总多糖提取自：金钗石斛、铁皮石斛、霍山石斛、鼓槌石斛或流苏石斛中的一种或几种，优选的，提取自铁皮石斛。

5.如权利要求1所述的一种预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品，其特征在于，所述酸味剂可选自柠檬酸、苹果酸、酒石酸等，所述防腐剂可选自山梨酸、苯甲酸；所述稳定剂选自海藻酸丙二醇酯、卡拉胶、果胶等。

6.如权利要求1-5任一项所述预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品，其特征在于，还可以制成其他口服剂型如软胶囊、含片、固体饮料、颗粒剂。

7.一种制备预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品的方法，其特征在于，所述石斛蛋白制备方法包括以下步骤：

8.一种制备预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品的方法，其特征在于，所述石斛多糖制备方法包括以下步骤：

9.一种预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品的制备方法，其特征在于，其制备步骤包括：

（4）上述过滤液，灭菌，灌装，冷却后检验，即得。

10.一种所述预防雾霾伤害的含有石斛提取物的饮品在制备提高人体免疫力的产品中的应用，其特征在于，能够用于呼吸道细菌、病毒等病原体所致的抵抗力下降。