CN106520518A - 一种物种检疫鉴定中心的运行模式 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种物种检疫鉴定中心的运行模式。统一发放样品采集工具、样品采集管及其运输装置、样品采集信息记录表、物种鉴定系统客户端至一线口岸，样品采集，样品送检的前处理，送样，收样，送检样品物理信息的采集，样品DNA条形码的检测，结果反馈。本发明建立媒介生物DNA条形码检疫鉴定新模式以及标准化的采样、送样、检测等流程，实现输入性医学媒介生物的快速准确鉴定，解决了医学媒介生物尤其是媒介昆虫的检测受发育状态、肢体残缺的不全限制、近缘种难以准确鉴定、某些雌性昆虫无法鉴定以及输入性医学媒介生物由于缺少参考资料和参比标本无法准确快速鉴定的难题。

Description

一种物种检疫鉴定中心的运行模式
技术领域：
本发明属于口岸采样送样检测标准化领域，具体涉及一种物种检疫鉴定中心的运行模式。
背景技术：
输入性医学媒介生物及其传播的各种疾病对人类公共卫生危害非常严重，是世界最重要的公共卫生问题之一。全球一体化为输入性医学媒介生物及虫媒病的广范围、快速度的传播提供了机会；新发传染病不断出现，各种公共卫生风险一旦发生迅速传遍全球，对人类的生命健康带来前所未有的威胁，检疫风险显著加剧。但目前口岸现有的输入性医学媒介生物的传统形态鉴定方法存在很多问题，如无法鉴定若虫、雌虫等非成虫态媒介、肢体残肢不全的昆虫及近缘种，输入性媒介由于缺少参考资料和参比标本无法准确快速鉴定以及数据共享性差等。DNA条形码(DNA barcodes)是用线粒体基因组内一段标准的、短的DNA片段来鉴定物种的一项分子物种鉴定技术，具有广泛的应用前景，在物种鉴定、假牛羊肉、假鱼翅、以次充好等食品欺诈、中草药种类、生物多样性及濒危物种保护等研究领域具有一定的应用潜力。特别是在物种鉴定方面，借助互联网+可数字化共享成为该方法的一大优势，利用所建立的标准操作流程，并借助建成的大规模数据库，实现了大批量快速准确地鉴别物种。
口岸截获的输入性媒介生物的鉴定大多依赖传统的形态学分类，大多依赖成虫的形态特征进行鉴定，而口岸截获的往往是幼虫、卵、蛹等非成虫虫态。目前通常的做法是将幼虫、卵和蛹等饲养成成虫后再鉴定，鉴定周期长，存在着很大的公共卫生及生态隐患，且无法准确鉴定雌性、肢体残肢不全的昆虫及近缘种，但是输入性医学媒介的近缘种在携带的病原体上可能有很大的区别，对公共卫生安全的威胁风险不同，如果鉴定不准确极易引起防御过当浪费资源，或者防御不足产生危害公共卫生安全等问题，传统的鉴定手段已无法满足提高通关效率，降低通关成本，提升口岸通关和贸易便利化水平的要求。因此，全国各大口岸亟待开展医学媒介生物鉴定方法的技术转型升级、完成检测技术的革新。
发明内容：
本发明的目的是提供一种物种检疫鉴定中心的运行模式，以DNA条形码鉴定技术及相关分子生物学检测技术为基础，依托本单位独立建立的医学媒介生物DNA条形码数据库和公共数据库，运用输入性媒介生物DNA条形码检疫鉴定新模式，实现对输入性媒介生物的快速准确鉴定。
本发明的物种检疫鉴定中心的运行模式，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、统一发放样品采集工具、样品采集管及其运输装置、样品采集信息记录表、物种鉴定系统客户端至一线口岸，所述的样品采集工具包括一种便携耐用的野外采集昆虫工具、漏斗形昆虫采样装置、电动吸蚊器、双层叠帐、诱蚊器、粘鼠板、Ⅱ号鼠夹、鼠笼，所述的样品采集信息表包括输出国、启运港、中转港、到达港、货物类型和数量、货物包装种类和数量、启运时间、到港时间，所述的物种鉴定系统客户端是以物种检疫鉴定中心已有的GLIMS业务管理系统为基础的手机版APP或其他接口；
(2)、进行样品采集：如若发现活体标本，放置于-20℃冰箱中冷冻处理，待其死亡后，依据检测需求，将标本保存于对应的样品采集管中，已死亡的个体或残肢同样依据不同的检测需求装入不同的样品采集管中，采集样品后需填写步骤(1)的样品采集信息记录表，并扫描样品采集管上的唯一性条码标识将样品单号录入至物种鉴定系统，对采样现场和采集的样本进行拍照记录，记录采集现场的环境情况，了解样本入境的方式；
(3)、样品送检的前处理：根据采集到样本的种类以及口岸的意愿，可选择整体样本送检或者组织送检，蝇类、蚤类、螨类、蜱类体积较小的媒介生物，可以直接将标本保存在含样品保存剂的样品采集管中，对于身体表面鳞片较多，而且鳞片形成的体表花纹具有重要分类意义的生物，以送干制标本为宜，如果需要进行病原体尤其是RNA病原体的检测，则需尽快将样品低温处死，在覆盖一层保鲜膜的冰盘中快速分拣种类，以液氮或干冰冷冻方式2小时之内送实验室检测，或者将新鲜采集并分拣后的样品放入无液氮RNA样品储存液中，尽快送实验室检测；如果口岸需保存标本，也可取标本部分组织保存于含样品保存剂的样品采集管中，取样的原则是对标本的外部形态破坏降到最低，标本的其余部分在做好唯一性条码标识后，贴上与送检样品采集管上的一一对应的条码标志和样品采集标签，所述的样品采集标签包括采集地、采集时间、采集人和采集管对应的条码标志，妥善保管，以备后用；
(4)、送样：将已采样的样品采集管放入专门的样品采集管运输装置中，附上填写完整的步骤(2)的采集信息记录表通过邮寄或者专人送达的方式将标本送至物种检疫鉴定中心；
(5)、收样：物种检疫鉴定中心在样品送达后，扫描唯一性条码标志录入单号，并将步骤(2)的采集信息记录表内容录入物种鉴定系统，同时物种鉴定系统更新检测进度，将收样信息发至送样口岸物种鉴定系统客户端，口岸物种鉴定系统客户端可随时登录系统查看进度；
(6)、送检样品物理信息的采集：物种检疫鉴定中心利用双面观显微装置及昆虫无损照相的装置对采集标本的图像等物理信息进行处理，并录入系统；
(7)、样品DNA条形码的检测：提取DNA，采用通用的DNA条形码基因片段对送检样本进行检测鉴定，对于难区分的近缘种，物种检疫鉴定中心将联合采用线粒体COI、COII、12S、16S和Cytb基因、核糖体ITS2基因多基因联合对送检的样本进行准确的鉴定。利用医学媒介生物携带病原体快速检测技术，采用改进的媒介生物携带细菌性病原体的NGS检测前处理方法，分别获得单个媒介生物体内外携带的细菌性病原体DNA，使用筛选的用于鉴定媒介生物携带细菌性病原体的最佳可变区或多个可变区组合，利用优化的PCR扩增方法，并采用新一代测序平台，一次性高通量的检测医学媒介生物携带细菌性病原体，实现对输入性医学媒介生物的DNA条形码鉴定及携带病原体的检测，或采用特异性引物检测输入性媒介生物所携带的病毒性病原体或者寄生虫；
(8)、结果反馈：物种检疫鉴定中心通过物种鉴定系统将鉴定结果推送反馈至口岸GLIMS业务管理系统客户端，并按委托方的要求返还样本，寄送检测报告，或者在征得送检方同意的前提下将样品保存在物种检疫鉴定中心。
优选，所述的样品采集管，有大、中、小三种规格，直径分别为60mm、30mm、10mm，分别适用于不同大小的医学媒介生物，包括盖子、管体、泡沫填充、昆虫针及唯一性条码标识，所述的泡沫填充需填充于管体最下部，所述的唯一性条码标识被印刷于管体外壁上，所述的泡沫填充可被样品保存剂来替代，制成可密封保存的液体浸泡采集管，所述的样品保存剂为非冻型组织DNA保存液或无液氮RNA样品储存液。
优选，所述的采集管运输装置也有大、中、小三种规格，分别适用于不同大小的采集管，包括上盖、箱体、采集管固定槽及卡扣，所述的卡扣位于上盖的边缘位置，所述的采集管固定槽陈列在箱体内，箱体内部放置有冷冻液，可较长时间位置-20℃的环境。
样品采集管和采集管运输装置解决了目前采集装置不统一、不方便保存标本和送样检测的问题，可以直接将唯一性条码标识印刷在采集管上，从而解决贴标签模糊不清或易脱落的问题；采集管运输装置与采集管大小配套使用，可固定采集管，卡扣设计方便采集管的放入，扣紧后可保证运输过程中采集管不易摇晃及洒落，解决了目前已有的送样装置非定制不统一、运输不用型号和外观的采集管产生摇晃等情况导致标本损坏的问题。
优选，所述的漏斗形昆虫采样装置，包括漏斗形装置和广口瓶，所述的漏斗形装置中间开口，边缘光滑，并卡扣在广口瓶上，所述的广口瓶内壁光滑。
所述的漏斗形昆虫采样装置使用时，需将广口瓶埋入地下，瓶口几乎与地面齐平，放诱饵于广口瓶底部，然后将漏斗形装置卡住瓶口处即可，昆虫被诱饵诱导通过漏斗形装置的底口钻进广口瓶中，由于广口瓶内壁光滑，故昆虫不易逃脱且能够在被检测前保持形体的完整性。
优选，步骤(3)所述的取标本部分组织，有以下要求：对于媒介昆虫，采集一条腿保存在样品采集管中，对于鼠类，剪2cm的鼠尾、鼠肝或鼠肺保存在样品采集管中，对于体积非常小的寄生性医学媒介生物，如螨、蜱、蚤，如果是活体，将媒介生物饥饿处理，放入样品采集管中，如果是死亡个体，则直接放入样品采集管中。饥饿处理是为了减少由于吸食寄主的血液对检测结果造成污染。
优选，步骤(7)所述的多基因联合，具体步骤为：分别从样本取1条后足，进行基因组DNA提取，PCR扩增所用引物为：COⅠ：GGT CAA CAA ATC ATA AAG ATATTGG，TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA；COII：CCTCGTCGTTATTCAGATTATCCTGA，TCAGGATAATCTGAATAACGTCGACC；12S：TTAGGTGAAAGCGACGGGCGAT，AATTTGTGCCAGCAGYCGCGGT；16S：CGCCTGTTTATCAAAAACAT，CCGGTCTGAACTCAGATCACGT；Cytb：GGWTAYGTWYTWCCWTGRGGWCARAT，GCRTAWGCRAAWARRAARTAYCAYTCWGG；ITS2：GCATCGATGAAGAACGCAGC，GCTGCGTTCTTCATCGATGC，PCR反应体系：10×PCR buffer 5μl20μmol/L浓度的正向引物2.5μl，10μmol/L浓度的dNTP 1.5μl，Ex-TaqDNA聚合酶1μl，模板DNA2μl，无菌水定容到50μl；扩增条件：94℃变性5min；94℃40s，54℃40s，72℃1min，反应40个循环；72℃延伸10min；PCR结束后将PCR产物进行两端双向测序，序列分析与比对测序结果经校对无误后用于后续分析，所得序列上传至GenBank，将序列在GenBank和BOLD中进行序列比对，进行种类鉴定，用软件进行分析，以Kimura 2-parameter模式构建邻接法系统树，辅助进行种类的鉴定。
所述的便携耐用的野外采集昆虫工具，其结构及使用方法如中国专利ZL201520094555.7所示。所述的电动吸蚊器、双层叠帐、诱蚊器、粘鼠板、Ⅱ号鼠夹、鼠笼、非冻型组织DNA保存液、无液氮RNA样品储存液均可在市面上购买得到。
步骤(1)所述的物种鉴定系统拥有软件著作权，软著登字第0564334。
所述的双面观显微装置其结构及使用方法如中国专利ZL201420701647.2所示，所述的昆虫无损照相的装置其结构及使用方法如中国专利ZL201520006169.8所示。
步骤(7)所述的提取DNA，对于整体或组织较大的样品，取部分组织研磨后，提取样品组织的基因组DNA，对于个体非常小的媒介生物，参考中国专利ZL201310375667.5的方法提取DNA，直接获得DNA条形码片段。参考中国专利申请201610147895.0的方法，在不破坏凭证标本的前提下，获取蜱螨这些微小媒介生物的DNA条形码数据，所述的组织研磨。使用中国专利ZL201420855384.0的抛弃型微量生物组织研磨工具。
目前，物种鉴定中心已经收集了全国大陆28个省份的口岸及周边地区的近400种7万余头媒介生物，原始取得DNA条形码数据万余条。本发明建立媒介生物DNA条形码检疫鉴定新模式，实现输入性医学媒介生物的快速准确鉴定。解决了医学媒介生物尤其是媒介昆虫的检测受发育状态、肢体残缺的不全限制、近缘种难以准确鉴定、某些雌性昆虫无法鉴定以及输入性医学媒介生物由于缺少参考资料和参比标本无法准确快速鉴定的难题，为防控输入性媒介生物入侵，保障我国公共卫生和生态安全提供技术支持。
本发明建立了标准化的采样、送样、检测等流程，保证了样品或样品组织的统一不会被污染，从而更加高效、准确的获得鉴定结果。
附图说明：
图1是大号采集管的结构示意图，A为装有泡沫填充的干制样品保存管，B为带有样品保存剂的液体浸泡采集管；
图2是中号采集管的结构示意图，A为装有泡沫填充的干制样品保存管，B为带有样品保存剂的液体浸泡采集管；
图3是小号采集管的结构示意图，A为装有泡沫填充的干制样品保存管，B为带有样品保存剂的液体浸泡采集管
图4是采集管运输装置的结构示意图；
图5是漏斗形昆虫采样装置的结构示意图；
其中，1：盖子，2：管体，3：昆虫针；4：条码标识；5：泡沫填充；6：样品保存剂；7：上盖；8：箱体；9：采集管固定槽；10：卡扣；11：漏斗形装置；12：广口瓶；13：底口。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
物种检疫鉴定中心的运行模式，包括以下步骤：
(1)、统一发放样品采集工具、样品采集管及其运输装置、样品采集信息记录表、物种鉴定系统客户端至一线口岸，所述的样品采集工具包括一种便携耐用的野外采集昆虫工具(参考中国专利ZL201520094555.7)、漏斗形昆虫采样装置、电动吸蚊器(天牌)、双层叠帐(YWJC-01DZ)、诱蚊器、粘鼠板(15×15cm)(达豪)、Ⅱ号鼠夹、鼠笼(18×18×38cm)，所述的样品采集信息表包括输出国、启运港、中转港、到达港、货物类型和数量、货物包装种类和数量、启运时间、到港时间，所述的物种鉴定系统客户端是以物种检疫鉴定中心已有的GLIMS业务管理系统为基础的手机版APP或其他接口；
(2)、进行样品采集：如若发现活体标本，放置于-20℃冰箱中冷冻处理，待其死亡后，依据检测需求，将标本保存于对应的样品采集管中，已死亡的个体或残肢同样依据不同的检测需求装入不同的样品采集管中，采集样品后需填写步骤(1)的样品采集信息记录表，并扫描样品采集管上的唯一性条码标识将样品单号录入至物种鉴定系统，对采样现场和采集的样本进行拍照记录，记录采集现场的环境情况，了解样本入境的方式；
(3)、样品送检的前处理：根据采集到样本的种类以及口岸的意愿，可选择整体样本送检或者组织送检，蝇类、蚤类、螨类、蜱类体积较小的媒介生物，可以直接将标本保存在含样品保存剂的样品采集管中，对于身体表面鳞片较多，而且鳞片形成的体表花纹具有重要分类意义的生物，以送干制标本为宜，如果需要进行病原体尤其是RNA病原体的检测，则需尽快将样品低温处死，在覆盖一层保鲜膜的冰盘中快速分拣种类，以液氮或干冰冷冻方式2小时之内送实验室检测，或者将新鲜采集并分拣后的样品放入无液氮RNA样品储存液(RNAfixer GK3132)(上海捷瑞生物工程有限公司)中，尽快送实验室检测；如果口岸需保存标本，也可取标本部分组织保存于含样品保存剂的样品采集管中，取样的原则是对标本的外部形态破坏降到最低，标本的其余部分在做好唯一性条码标识后，贴上与送检样品采集管上的一一对应的条码标志和样品采集标签，所述的样品采集标签包括采集地、采集时间、采集人和采集管对应的条码标志，妥善保管，以备后用；
(4)、送样：将已采样的样品采集管放入专门的样品采集管运输装置中，附上填写完整的步骤(2)的采集信息记录表通过邮寄或者专人送达的方式将标本送至物种检疫鉴定中心；
(5)、收样：物种检疫鉴定中心在样品送达后，扫描唯一性条码标志录入单号，并将步骤(2)的采集信息记录表内容录入物种鉴定系统，同时物种鉴定系统更新检测进度，将收样信息发至送样口岸物种鉴定系统客户端，口岸物种鉴定系统客户端可随时登录系统查看进度；
(6)、送检样品物理信息的采集：物种检疫鉴定中心利用双面观显微装置(参考中国专利ZL201420701647.2)及昆虫无损照相的装置(参考中国专利ZL201520006169.8)对采集标本的图像等物理信息进行处理，并录入系统；
(7)、样品DNA条形码的检测：提取DNA，对于整体或组织较大的样品，取部分组织研磨后，提取样品组织的基因组DNA，对于个体非常小的媒介生物，参考中国专利ZL201310375667.5的方法提取DNA，直接获得DNA条形码片段，参考中国专利申请201610147895.0的方法，在不破坏凭证标本的前提下，获取蜱螨这些微小媒介生物的DNA条形码数据，所述的组织研磨。使用中国专利ZL201420855384.0的抛弃型微量生物组织研磨工具；然后采用通用的DNA条形码基因片段对送检样本进行检测鉴定(鉴定方法参考岳巧云，邱德义，胡佳，等.DNA条形码—医学媒介生物快速准确鉴定的利器[J].检验检疫学刊，2013(5):60)，对于难区分的近缘种，物种检疫鉴定中心将联合采用线粒体COI、COII、12S、16S和Cytb基因、核糖体ITS2基因多基因联合对送检的样本进行准确的鉴定，利用医学媒介生物携带病原体快速检测技术(具体方法参考陈健等《NGS法检测大头金蝇携带细菌性病原体的研究》)，采用改进的媒介生物携带细菌性病原体的NGS检测前处理方法，分别获得单个媒介生物体内外携带的细菌性病原体DNA，使用筛选的用于鉴定媒介生物携带细菌性病原体的最佳可变区或多个可变区组合(具体方法参考Chakravorty S,Helb D,Burday M,etal.A detailed analysis of 16S ribosomal RNA gene segments for the diagnosisof pathogenic bacteria[J].Journal of microbiological methods,2007,69(2):330-339.)，利用优化的PCR扩增方法并采用新一代测序平台(Illumina(HiSeq 2500/4000)测序平台，深圳华大基因公司)，一次性高通量的检测医学媒介生物携带细菌性病原体，实现对输入性医学媒介生物的DNA条形码鉴定及携带病原体的检测，或采用特异性引物检测输入性媒介生物所携带的病毒性病原体或者寄生虫(具体方法参考杨美芬,王玉明,黄永坤,等.用细菌16S rRNA荧光定量PCR法检测肠道菌群的变化[J].中国微生态学杂志,2006,18(4):266-269)；
(8)、结果反馈：物种检疫鉴定中心通过物种鉴定系统将鉴定结果推送反馈至口岸GLIMS业务管理系统客户端，并按委托方的要求返还样本，寄送检测报告，或者在征得送检方同意的前提下将样品保存在物种检疫鉴定中心。
所述的样品采集管，有大、中、小三种规格(分别如图1、2、3所示)，直径分别为60mm、30mm、10mm，分别适用于不同大小的医学媒介生物，包括盖子1、管体2、泡沫填充5、昆虫针3及唯一性条码标识4，所述的泡沫填充5需填充于管体2最下部，所述的唯一性条码标识4被印刷于管体2外壁上，所述的泡沫填充5可被样品保存剂6来替代，制成可密封保存的液体浸泡采集管，所述的样品保存剂6为非冻型组织DNA保存液或无液氮RNA样品储存液。
所述的采集管运输装置也有大、中、小三种规格，分别适用于不同大小的采集管，如图4所示，包括上盖7、箱体8、采集管固定槽9及卡扣10，所述的卡扣10位于上盖7的边缘位置，所述的采集管固定槽9陈列在箱体8内，箱体8内部放置有冷冻液，可较长时间位置-20℃的环境。
样品采集管和采集管运输装置解决了目前采集装置不统一、不方便保存标本和送样检测的问题，可以直接将唯一性条码标识印刷在采集管上，从而解决贴标签模糊不清或易脱落的问题；采集管运输装置与采集管大小配套使用，可固定采集管，卡扣设计方便采集管的放入，扣紧后可保证运输过程中采集管不易摇晃及洒落，解决了目前已有的送样装置非定制不统一、运输不用型号和外观的采集管产生摇晃等情况导致标本损坏的问题。
所述的漏斗形昆虫采样装置，如图5所示，包括漏斗形装置11和广口瓶12，所述的漏斗形装置11中间开口，边缘光滑，并卡扣在广口瓶12上，所述的广口瓶12内壁光滑。
所述的漏斗形昆虫采样装置使用时，需将广口瓶埋入地下，瓶口几乎与地面齐平，放诱饵于广口瓶底部，然后将漏斗形装置卡住瓶口处即可，昆虫被诱饵诱导通过漏斗形装置的底口13钻进广口瓶中，由于广口瓶内壁光滑，故昆虫不易逃脱且能够在被检测前保持形体的完整性。
步骤(3)所述的取标本部分组织，有以下要求：对于媒介昆虫，采集一条腿保存在样品采集管中，对于鼠类，剪2cm的鼠尾、鼠肝或鼠肺保存在样品采集管中，对于体积非常小的寄生性医学媒介生物，如螨、蜱、蚤，如果是活体，将媒介生物饥饿处理，放入样品采集管中，如果是死亡个体，则直接放入样品采集管中。饥饿处理是为了减少由于吸食寄主的血液对检测结果造成污染。
步骤(7)中的多基因联合鉴定，具体方法为：分别从样本取1条后足，采用TIANGEN公司生产的Universal Genomic DNA Extraction试剂盒(编号：DP302-02)，按照试剂盒的使用手册进行基因组DNA提取。PCR扩增所用引物为：COⅠ：GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG，TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA；COII：CCTCGTCGTTATTCAGATTATCCTGA，TCAGGATAATCTGAATAACGTCGACC；12S：TTAGGTGAAAGCGACGGGCGAT，AATTTGTGCCAGCAGYCGCGGT；16S：CGCCTGTTTATCAAAAACAT，CCGGTCTGAACTCAGATCACGT；Cytb:GGWTAYGTWYTWCCWTGRGGWCARAT，GC RTAWGCRAAWARRAARTAYCAYTCWGG；ITS2：GCATCGATGAAGAACGCAGC，GCTGCGTTCTTCATCGATGC。由宝生物工程(大连)有限公司合成。Ex-Taq DNA聚合酶、dNTP等PCR试剂均从TIANGEN公司购置。PCR反应体系(50μl)：10×PCRbuffer 5μl；正向引物(20μmol/L)2.5μl；dNTP(10mmol/L)1.5μl；Ex-TaqDNA聚合酶1μl；模板DNA 2μl；无菌水定容到50μl。扩增条件：94℃变性5min；94℃40s，54℃40s，72℃1min，反应40个循环；72℃延伸10min。PCR结束后将PCR产物送上海立菲科技有限公司进行两端双向测序。序列分析与比对测序结果经校对无误后用于后续分析。所得序列上传至GenBank，将序列在GenBank和BOLD中进行序列比对，进行种类鉴定。用Mega 6.06软件进行分析，以Kimura 2-parameter模式构建邻接法系统树，辅助进行种类的鉴定。

Claims (6)

1.物种检疫鉴定中心的运行模式，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、统一发放样品采集工具、样品采集管及其运输装置、样品采集信息记录表、物种鉴定系统客户端至一线口岸，所述的样品采集工具包括一种便携耐用的野外采集昆虫工具、漏斗形昆虫采样装置、电动吸蚊器、双层叠帐、诱蚊器、粘鼠板、Ⅱ号鼠夹、鼠笼，所述的样品采集信息表包括输出国、启运港、中转港、到达港、货物类型和数量、货物包装种类和数量、启运时间、到港时间，所述的物种鉴定系统客户端是以物种检疫鉴定中心已有的GLIMS业务管理系统为基础的手机版APP或其他接口；
(2)、进行样品采集：如若发现活体标本，放置于-20℃冰箱中冷冻处理，待其死亡后，依据检测需求，将标本保存于对应的样品采集管中，已死亡的个体或残肢同样依据不同的检测需求装入不同的样品采集管中，采集样品后需填写步骤(1)的样品采集信息记录表，并扫描样品采集管上的唯一性条码标识将样品单号录入至物种鉴定系统，对采样现场和采集的样本进行拍照记录，记录采集现场的环境情况，了解样本入境的方式；
(3)、样品送检的前处理：样品送检的前处理：根据采集到样本的种类以及口岸的意愿，可选择整体样本送检或者组织送检，蝇类、蚤类、螨类、蜱类体积较小的媒介生物，可以直接将标本保存在含样品保存剂的样品采集管中，对于身体表面鳞片较多，而且鳞片形成的体表花纹具有重要分类意义的生物，以送干制标本为宜，如果需要进行病原体尤其是RNA病原体的检测，则需尽快将样品低温处死，在覆盖一层保鲜膜的冰盘中快速分拣种类，以液氮或干冰冷冻方式2小时之内送实验室检测，或者将新鲜采集并分拣后的样品放入无液氮RNA样品储存液中，尽快送实验室检测；如果口岸需保存标本，也可取标本部分组织保存于含样品保存剂的样品采集管中，取样的原则是对标本的外部形态破坏降到最低，标本的其余部分在做好唯一性条码标识后，贴上与送检样品采集管上的一一对应的条码标志和样品采集标签，所述的样品采集标签包括采集地、采集时间、采集人和采集管对应的条码标志，妥善保管，以备后用；
(4)、送样：将已采样的样品采集管放入专门的样品采集管运输装置中，附上填写完整的步骤(2)的采集信息记录表通过邮寄或者专人送达的方式将标本送至物种检疫鉴定中心；
(5)、收样：物种检疫鉴定中心在样品送达后，扫描唯一性条码标志录入单号，并将步骤(2)的采集信息记录表内容录入物种鉴定系统，同时物种鉴定系统更新检测进度，将收样信息发至送样口岸物种鉴定系统客户端，口岸物种鉴定系统客户端可随时登录系统查看进度；
(6)、送检样品物理信息的采集：物种检疫鉴定中心利用双面观显微装置及昆虫无损照相的装置对采集标本的图像等物理信息进行处理，并录入系统；
(7)、样品DNA条形码的检测：提取DNA，采用通用的DNA条形码基因片段对送检样本进行检测鉴定，对于难区分的近缘种，物种检疫鉴定中心将联合采用线粒体COI、COII、12S、16S和Cytb基因、核糖体ITS2基因多基因联合对送检的样本进行准确的鉴定，利用医学媒介生物携带病原体快速检测技术，采用改进的媒介生物携带细菌性病原体的NGS检测前处理方法，分别获得单个媒介生物体内外携带的细菌性病原体DNA，使用筛选的用于鉴定媒介生物携带细菌性病原体的最佳可变区或多个可变区组合，利用优化的PCR扩增方法，并采用新一代测序平台，一次性高通量的检测医学媒介生物携带细菌性病原体，实现对输入性医学媒介生物的DNA条形码鉴定及携带病原体的检测，或采用特异性引物检测输入性媒介生物所携带的病毒性病原体或者寄生虫；
(8)、结果反馈：物种检疫鉴定中心通过物种鉴定系统将鉴定结果推送反馈至口岸GLIMS业务管理系统客户端，并按委托方的要求返还样本，寄送检测报告，或者在征得送检方同意的前提下将样品保存在物种检疫鉴定中心。
2.根据权利要求1所述的物种检疫鉴定中心的运行模式，其特征在于，所述的样品采集管，有大、中、小三种规格，直径分别为60mm、30mm、10mm，分别适用于不同大小的医学媒介生物，包括盖子(1)、管体(2)、泡沫填充(5)、昆虫针(3)及唯一性条码标识(4)，所述的泡沫填充(5)需填充于管体(2)最下部，所述的唯一性条码标识(4)被印刷于管体(2)外壁上，所述的泡沫填充(5)可被样品保存剂(6)来替代，制成可密封保存的液体浸泡采集管，所述的样品保存剂(6)为非冻型组织DNA保存液或无液氮RNA样品储存液。
3.根据权利要求1所述的物种检疫鉴定中心的运行模式，其特征在于，所述的采集管运输装置也有大、中、小三种规格，分别适用于不同大小的采集管，包括上盖(7)、箱体(8)、采集管固定槽(9)及卡扣(10)，所述的卡扣(10)位于上盖(7)的边缘位置，所述的采集管固定槽(9)陈列在箱体(8)内，箱体(8)内部放置有冷冻液，可较长时间位置-20℃的环境。
4.根据权利要求1所述的物种检疫鉴定中心的运行模式，其特征在于，所述的漏斗形昆虫采样装置，包括漏斗形装置(11)和广口瓶(12)，所述的漏斗形装置(11)中间开口，边缘光滑，并卡扣在广口瓶(12)上，所述的广口瓶(12)内壁光滑。
5.根据权利要求1所述的物种检疫鉴定中心的运行模式，其特征在于，步骤(3)所述的取标本部分组织，有以下要求：对于媒介昆虫，采集一条腿保存在样品采集管中，对于鼠类，剪2cm的鼠尾、鼠肝或鼠肺保存在样品采集管中，对于体积非常小的寄生性医学媒介生物，如螨、蜱、蚤，如果是活体，将媒介生物饥饿处理，放入样品采集管中，如果是死亡个体，则直接放入样品采集管中。
6.根据权利要求1所述的物种检疫鉴定中心的运行模式，其特征在于，步骤(7)所述多基因联合，具体步骤为：分别从样本取1条后足，进行基因组DNA提取，PCR扩增所用引物为：COⅠ：GGT CAA CAA ATC ATA AAG ATATTGG，TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA；COII：CCTCGTCGTTATTCAGATTATCCTGA，TCAGGATAATCTGAATAACGTCGACC；12S：TTAGGTGAAAGCGACGGGCGAT，AATTTGTGCCAGCAGYCGCGGT；16S：CGCCTGTTTATCAAAAACAT，CCGGTCTGAACTCAGATCACGT；Cytb：GGWTAYGTWYTWCCWTGRGGWCARAT，GCRTAWGCRAAWARRAARTAYCAYTCWGG；ITS2：GCATCGATGAAGAACGCAGC，GCTGCGTTCTTCATCGATGC，PCR反应体系：10×PCR buffer 5μl20μmol/L浓度的正向引物2.5μl，10μmol/L浓度的dNTP1.5μl，Ex-TaqDNA聚合酶1μl，模板DNA 2μl，无菌水定容到50μl；扩增条件：94℃变性5min；94℃40s，54℃40s，72℃1min，反应40个循环；72℃延伸10min；PCR结束后将PCR产物进行两端双向测序，序列分析与比对测序结果经校对无误后用于后续分析，所得序列上传至GenBank，将序列在GenBank和BOLD中进行序列比对，进行种类鉴定，用软件进行分析，以Kimura 2-parameter模式构建邻接法系统树，辅助进行种类的鉴定。
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