CN106467540B - 蝶啶酮衍生物作为flt3抑制剂的应用 - Google Patents
蝶啶酮衍生物作为flt3抑制剂的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及作为FLT3抑制剂的蝶啶酮衍生物及其应用。具体而言，本发明涉及下式I所示的化合物、含有下式I化合物的药物组合物及所述化合物在制备治疗FLT3介导的疾病或抑制FLT3的药物中的用途：
Description
技术领域
本发明涉及药物化学领域；具体地说，本发明涉及新型的蝶啶酮衍生物、其合成方法及其作为FMS样酪氨酸激酶3(FMS-like tyrosine kinase 3，FLT3)抑制剂在治疗FLT3介导的疾病，例如肿瘤中的应用。
背景技术
蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase)是一类催化ATP上γ-磷酸转移到蛋白特定氨基酸残基上的蛋白，在细胞内信号转导通路中占有非常重要的地位，并且调节着细胞生长、分化、死亡等一系列生理过程。已有资料表明，超过50％的原癌基因及其产物都具有蛋白酪氨酸激酶活性，它们的异常表达将导致细胞生命周期的紊乱，进而导致肿瘤的发生。此外，酪氨酸激酶的异常表达还与肿瘤的转移、化疗抗性等密切相关。
FMS样酪氨酸激酶3(FMS-like tyrosine kinase 3，FLT3)属于III型受体酪氨酸激酶家族，FLT3在造血细胞的增殖、分化及凋亡过程中起着重要作用(Oncogene,1993,8,815-822)。FLT3与FLT3配体结合之后，激活多个下游信号通路，包括STAT5、Ras/MAPK及PI3K/AKT通路。在大约三分之一的急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia，AML)患者中存在FLT3突变(Blood,2002,100,1532-1542)，包括近膜结构域14和(或)15号外显子的内部串联重复序列(FLT3-ITD)突变、酪氨酸激酶结构域的激活环中氨基酸的缺失或插入(FLT3-TKD)突变。此外，在急性白血病病例中存在FLT3高表达现象(Blood,2004,103,1901)，FLT3的过表达、FLT3-ITD突变及FLT3-TKD突变均会导致AML患者预后不良。由此，FLT3成为AML治疗的重要靶标。然而，到目前为止，尚无FLT3抑制剂被批准用于临床使用，众多处于临床试验阶段的FLT3抑制剂的临床效果仍不够理想。现有技术中的很多FLT3抑制剂抑制FLT3的IC50值达到数百、甚至数千nm，并无实际应用价值。因此，提高小分子激酶抑制剂临床有效率正成为当前抗肿瘤靶向药物研发的热点，最有前景的策略即为，开发同时靶向多个与疾病(肿瘤)发生相关的激酶的多靶点抑制剂。
综上所述，本领域急需高活性的新型FLT3抑制剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种高活性的新型FLT3抑制性化合物，以及包含这种化合物的药物组合物。
在第一方面，本发明提供式I所示的化合物或其药学上可接受的盐：
式中，
R1为氢、卤素、C1-C6烷氧基、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基；
R2选自氢、卤素、羟基、氨基、C1-C2的酰氨基、氨基取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺酰基氨基、氨基甲酰基、羧基、任选取代的烷氧甲酰基、任选取代的苯基、任选取代的哌嗪基、任选取代的N-烷基哌嗪基、任选取代的吗啉基、任选取代的哌啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的吡咯烷基、-NRaRb、任选取代的吡啶基；
R3选自氢、卤素、C1-C6烷氧基、羟基、任选取代的酰氧基、氨基、任选取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺酰基氨基、氨基甲酰基、羧基、任选取代的烷氧甲酰基、任选取代的苯基、任选取代的N-烷基哌嗪基、任选取代的吗啉基、任选取代的哌啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的吡咯烷基、-NRaRb、任选取代的吡啶基；
R5选自氢、卤素、C1-C6烷氧基、羟基、任选取代的酰氧基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺酰基氨基、氨基甲酰基、任选取代的N-烷基哌啶基氧基、羧基、任选取代的烷氧甲酰基、任选取代的苯基、任选取代的N-烷基哌嗪基、任选取代的吗啉基、任选取代的哌啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的吡咯烷基、-NRaRb、任选取代的吡啶基；
R6选自氢、卤素、C1-C6烷氧基、羟基、任选取代的酰氧基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺酰基氨基、氨基甲酰基、羧基、任选取代的烷氧甲酰基、任选取代的苯基、任选取代的N-烷基哌嗪基、任选取代的吗啉基、任选取代的哌啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的吡咯烷基、-NRaRb、任选取代的吡啶基；
R7选自氢、卤素、C1-C6烷氧基、羟基、任选取代的酰氧基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺酰基氨基、氨基甲酰基、羧基、任选取代的烷氧甲酰基、任选取代的苯基、任选取代的N-烷基哌嗪基、任选取代的吗啉基、任选取代的哌啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的吡咯烷基、-NRaRb、任选取代的吡啶基；
Ra和Rb各自独立选自烷基或链烯基；和
并且，当R5为C1-C6烷氧基，且R2或R3为氨基时，R6和R7不同时为氢。
在具体的实施方式中，R1为氢、卤素、C1-C3烷氧基、任选取代的C1-C3烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基；
R2选自氢、卤素、羟基、氨基、C1-C2的酰氨基、氨基取代的C1-C3烷基、CN、磺酸基、磺酰基氨基、羧基、任选取代的哌嗪基、任选取代的N-烷基哌嗪基、任选取代的吗啉基、任选取代的哌啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的吡咯烷基、-NRaRb、任选取代的吡啶基；
R3选自氢、卤素、C1-C3烷氧基、羟基、氨基、任选取代的C1-C3烷基、CN、磺酰基氨基、氨基甲酰基、羧基、任选取代的烷氧甲酰基、任选取代的苯基、-NRaRb；
R5选自氢、卤素、C1-C3烷氧基、羟基、任选取代的酰氧基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C3烷基、CN、磺酰基氨基、氨基甲酰基、任选取代的N-烷基哌啶基氧基、羧基、任选取代的烷氧甲酰基、任选取代的苯基、任选取代的N-烷基哌嗪基、任选取代的吗啉基、任选取代的哌啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的吡咯烷基、-NRaRb、任选取代的吡啶基；
R6选自氢、卤素、C1-C3烷氧基、羟基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C3烷基、CN、-NRaRb；
R7选自氢、卤素、C1-C3烷氧基、羟基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C3烷基、CN、氨基甲酰基、羧基、任选取代的烷氧甲酰基、-NRaRb；
Ra和Rb各自独立选自烷基。
在具体的实施方式中，R1为氢、卤素、C1-C3烷氧基、任选取代的C1-C3烷基；
R2选自氢、卤素、羟基、氨基、C1-C2的酰氨基、氨基取代的C1-C3烷基、CN、甲磺酰基氨基、任选取代的哌嗪基、任选取代的N-烷基哌嗪基、任选取代的吗啉基、任选取代的哌啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的吡咯烷基、-NRaRb、任选取代的吡啶基；
R3选自氢、卤素、C1-C3烷氧基、羟基、氨基、任选取代的C1-C3烷基、-NRaRb；
R5选自卤素、C1-C3烷氧基、羟基、任选取代的酰氧基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C3烷基、CN、磺酰基氨基、氨基甲酰基、任选取代的N-烷基哌啶基氧基、任选取代的N-烷基哌嗪基、-NRaRb；
R6选自氢、卤素、C1-C3烷氧基、羟基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C3烷基、-NRaRb；
R7选自氢、卤素、C1-C3烷氧基、羟基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C3烷基、-NRaRb；
Ra和Rb各自独立选自烷基。
在第二方面，本发明提供选自下组的化合物或其药学上可接受的盐：
在第三方面，本发明提供选自下组的化合物或其药学上可接受的盐：
在第四方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物含有本发明第一到第三方面所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
在优选的实施方式中，所述药物组合物是适于口服的剂型，包括但不限于片剂、溶液剂、混悬液、胶囊剂、颗粒剂、粉剂。
在第五方面，本发明提供本发明第一到第三方面所述的化合物在制备治疗或预防FLT3介导的疾病，或抑制FLT3的药物中的用途。
在具体的实施方式中，所述FLT3介导的疾病为癌症。
在具体的实施方式中，所述癌症选自下组：急性髓细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、急性前髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞白血病、慢性中性粒细胞白血病、急性未分化性白血病、退化发育性大细胞淋巴瘤、幼淋巴细胞性白血病、青少年粒单核细胞白血病、成人T细胞ALL、AML合并三谱系脊髓发育不良、混合谱系白血病、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常综合征、骨髓增生障碍、多发性骨髓瘤。
在具体的实施方式中，所述疾病为免疫性疾病。
在具体的实施方式中，所述免疫性疾病选自：关节炎、狼疮、炎性肠病、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、骨关节炎、斯蒂尔病、青少年关节炎、糖尿病、重症肌无力症、桥本甲状腺炎、奥德甲状腺炎、格雷夫斯病、类风湿性关节炎综合征、多发性硬化症、传染性神经元炎、急性传播性脑脊髓炎、阿狄森病、再生障碍性贫血、自身免疫性肝炎、视神经炎、银屑病、移植物抗宿主病、移植、输血过敏反应、变态反应、I型超敏反应、过敏性结膜炎、过敏性鼻炎、特应性皮炎。
在第六方面，本发明提供利用本发明第一到第三方面所述的化合物治疗或预防FLT3介导的疾病方法。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
发明人经过广泛而深入的研究，出乎意料地发现一批结构全新的蝶啶酮衍生物，这些衍生物具有良好的FLT3抑制活性以及肿瘤细胞抑制活性，其抑制FLT3的IC50值达到nM水平，优于现有技术中的FLT3抑制剂。在此基础上完成了本发明。
术语定义
本文中涉及到的一些基团定义如下：
本文中，“烷基”指碳链长度为1-10个碳原子的饱和的支链或直链烷基，优选的烷基包括长2-8个碳原子、1-6个碳原子、1-4个碳原子、3-8个碳原子、1-3个碳原子不等的烷基。烷基的例子包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、庚基等。烷基可以被1个或多个取代基取代，例如被卤素或卤代烷基取代。例如，烷基可以是被1-4个氟原子取代的烷基，或者烷基可以是被氟代烷基取代的烷基。
本文中，“烷氧基”指被烷基取代的氧基。优选的烷氧基是长1-6个碳原子的烷氧基，更优选为长1-4个或1-3个碳原子的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基等。
本文中，“链烯基”通常表示具有至少一个双键的单价烃基，通常含有2-8个碳原子，优选含有2-6个碳原子，可以是直链或支链。链烯基的例子包括但不限于乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基、己烯基等等。
本文中，“炔基”通常表示具有至少一个三键的单价烃基，通常含有2-8个碳原子，优选含有2-6个碳原子，更通常含有2-4个碳原子，可以是直链或支链。链烯基的例子包括乙炔基、丙炔基、异丙炔基、丁炔基、异丁炔基、己炔基等。
本文中，“卤素原子”或“卤素”指氟、氯、溴和碘。
“芳基”指含有6到14个碳原子的单环、双环或三环芳族基团，包括苯基、萘基、菲基、蒽基、茚基、茀基、四氢化萘基、二氢化茚基等。芳基可任选地被1-5个(例如，1、2、3、4或5个)选自以下的取代基取代：卤素、C1-4醛基、C1-6烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羟甲基、卤素取代的烷基(例如三氟甲基)、卤素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、C1-4烷氧基、乙氧甲酰基、N(CH3)和C1-4酰基等、杂环基或杂芳基等。
本文中，“芳烷基”指被芳基取代的烷基，例如被苯基取代的C1-C6烷基。芳烷基的例子包括但不限于芳基甲基、芳基乙基等，例如苄基、苯乙基等。
例如，芳基可以被1-3个选自以下的基团取代：卤素、-OH、C1-4烷氧基、C1-4烷基、-NO2、-NH2、-N(CH3)2、羧基、和乙氧甲酰基等。
本文所用的“5元或6元杂环”包括但不限于含有1-3个选自O、S和N的杂原子的杂环基团，包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯烷基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噁唑基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哌啶基、吗啉基等。
本文所用“杂芳基”是指含有5-14个环原子，并且有6个、10个或14个电子在环体系上共用。而且所含环原子是碳原子和从氧、氮、硫中任选的1-3个杂原子。有用的杂芳基包括哌嗪基、吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、噻吩基、呋喃基、吡喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、包括但不限制于2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基、吡嗪基、嘧啶基等。
杂芳基或5元或6元杂环可任选地被1-5个(例如，1、2、3、4或5个)选自以下的取代基取代：卤素、C1-4醛基、C1-6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羟甲基、卤素取代的烷基(例如三氟甲基)、卤素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、C1-4烷氧基、乙氧甲酰基、N(CH3)和C1-4酰基。
本文中，“酰氧基”指结构式为“-O-C(O)-R”的基团，其中，R可选自烷基、链烯基和炔基。所述R可任选地被取代。
本文中，“酰氨基”指结构式为“-R’-NH-C(O)-R”的基团，其中，R’可选自键或烷基，R可选自烷基、链烯基、炔基、被NRaRb取代的烷基、被NRaRb取代的链烯基和NRaRb取代的炔基、被卤素取代的烷基、被氰基取代的链烯基、
其中，Ra和Rb可选自烷基或链烯基。
本文中，“磺酰基氨基”是指R-S(O)2-NH-所示基团，其中，R可选自C1-6，优选C1-3的烷基。在优选的实施方式中，“磺酰基氨基”是指甲磺酰基氨基。
本文中，“任选取代的”指其所修饰的取代基可任选地被1-5个(例如，1、2、3、4或5个)选自以下的取代基取代：卤素、C1-4醛基、C1-6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羟甲基、卤素取代的烷基(例如三氟甲基)、卤素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、C1-4烷氧基、乙氧甲酰基、N(CH3)和C1-4酰基。
本发明的化合物
本发明人合成了一批结构全新的蝶啶酮衍生物，与现有技术中的FLT3抑制剂相比，这些化合物具有良好的FLT3抑制活性以及肿瘤细胞抑制活性，其抑制FLT3的IC50值达到nM水平。
在具体的实施方式中，本发明的化合物是式I所示的化合物或其药学上可接受的盐：
式中，
R1为氢、卤素、C1-C6烷氧基、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基；
R2选自氢、卤素、羟基、氨基、C1-C2的酰氨基、氨基取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺酰基氨基、氨基甲酰基、羧基、任选取代的烷氧甲酰基、任选取代的苯基、任选取代的哌嗪基、任选取代的N-烷基哌嗪基、任选取代的吗啉基、任选取代的哌啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的吡咯烷基、-NRaRb、任选取代的吡啶基；
R3选自氢、卤素、C1-C6烷氧基、羟基、任选取代的酰氧基、氨基、任选取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺酰基氨基、氨基甲酰基、羧基、任选取代的烷氧甲酰基、任选取代的苯基、任选取代的N-烷基哌嗪基、任选取代的吗啉基、任选取代的哌啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的吡咯烷基、-NRaRb、任选取代的吡啶基；
R5选自氢、卤素、C1-C6烷氧基、羟基、任选取代的酰氧基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺酰基氨基、氨基甲酰基、任选取代的N-烷基哌啶基氧基、羧基、任选取代的烷氧甲酰基、任选取代的苯基、任选取代的N-烷基哌嗪基、任选取代的吗啉基、任选取代的哌啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的吡咯烷基、-NRaRb、任选取代的吡啶基；
R6选自氢、卤素、C1-C6烷氧基、羟基、任选取代的酰氧基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺酰基氨基、氨基甲酰基、羧基、任选取代的烷氧甲酰基、任选取代的苯基、任选取代的N-烷基哌嗪基、任选取代的吗啉基、任选取代的哌啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的吡咯烷基、-NRaRb、任选取代的吡啶基；
R7选自氢、卤素、C1-C6烷氧基、羟基、任选取代的酰氧基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺酰基氨基、氨基甲酰基、羧基、任选取代的烷氧甲酰基、任选取代的苯基、任选取代的N-烷基哌嗪基、任选取代的吗啉基、任选取代的哌啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的吡咯烷基、-NRaRb、任选取代的吡啶基；
Ra和Rb各自独立选自烷基或链烯基；和
并且，当R5为C1-C6烷氧基，且R2或R3为氨基时，R6和R7不同时为氢。
在优选的实施方式中，本发明化合物中的R1为氢、卤素、C1-C3烷氧基、任选取代的C1-C3烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基；R2选自氢、卤素、羟基、氨基、C1-C2的酰氨基、氨基取代的C1-C3烷基、CN、磺酸基、磺酰基氨基、羧基、任选取代的哌嗪基、任选取代的N-烷基哌嗪基、任选取代的吗啉基、任选取代的哌啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的吡咯烷基、-NRaRb、任选取代的吡啶基；R3选自氢、卤素、C1-C3烷氧基、羟基、氨基、任选取代的C1-C3烷基、CN、磺酰基氨基、氨基甲酰基、羧基、任选取代的烷氧甲酰基、任选取代的苯基、-NRaRb；R5选自氢、卤素、C1-C3烷氧基、羟基、任选取代的酰氧基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C3烷基、CN、磺酰基氨基、氨基甲酰基、任选取代的N-烷基哌啶基氧基、羧基、任选取代的烷氧甲酰基、任选取代的苯基、任选取代的N-烷基哌嗪基、任选取代的吗啉基、任选取代的哌啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的吡咯烷基、-NRaRb、任选取代的吡啶基；R6选自氢、卤素、C1-C3烷氧基、羟基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C3烷基、CN、-NRaRb；R7选自氢、卤素、C1-C3烷氧基、羟基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C3烷基、CN、氨基甲酰基、羧基、任选取代的烷氧甲酰基、-NRaRb；Ra和Rb各自独立选自烷基。
在具体的实施方式中，本发明提供以下化合物或其药学上可接受的盐：
本发明的化合物具有良好的FLT3抑制活性以及肿瘤细胞抑制活性，其中多个化合物对FLT3的抑制IC50值甚至在10nM以下。
在具体的实施方式中，本发明提供式I所示的化合物或其药学上可接受的盐：
式中，
R1为氢、卤素、C1-C3烷氧基、任选取代的C1-C3烷基；
R2选自氢、卤素、羟基、氨基、C1-C2的酰氨基、氨基取代的C1-C3烷基、CN、甲磺酰基氨基、任选取代的哌嗪基、任选取代的N-烷基哌嗪基、任选取代的吗啉基、任选取代的哌啶基、任选取代的吡咯基、任选取代的吡咯烷基、-NRaRb、任选取代的吡啶基；
R3选自氢、卤素、C1-C3烷氧基、羟基、氨基、任选取代的C1-C3烷基、-NRaRb；
R5选自卤素、C1-C3烷氧基、羟基、任选取代的酰氧基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C3烷基、CN、磺酰基氨基、氨基甲酰基、任选取代的N-烷基哌啶基氧基、任选取代的N-烷基哌嗪基、-NRaRb；
R6选自氢、卤素、C1-C3烷氧基、羟基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C3烷基、-NRaRb；
R7选自氢、卤素、C1-C3烷氧基、羟基、氨基、任选取代的酰氨基、任选取代的C1-C3烷基、-NRaRb；
Ra和Rb各自独立选自烷基。
在优选的实施方式中，本发明提供选自下组的化合物或其药学上可接受的盐：
在上述化合物的基础上，本发明进一步提供一种药物组合物，该组合物含有治疗有效量的本发明的式I化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明化合物的药学上可接受的盐的例子包括但不限于无机和有机酸盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、扁桃酸盐和草酸盐；以及与碱例如钠羟基、三(羟基甲基)胺基甲烷(TRIS，胺丁三醇)和N-甲基葡糖胺形成的无机和有机碱盐。
虽然每个人的需求各不相同，本领域技术人员可确定本发明药物组合物中每种活性成分的最佳剂量。一般情况下，本发明的化合物或其药学上可接受的盐，对哺乳动物每天口服给药，药量按照约0.0025到50毫克/公斤体重。但最好是每公斤口服给药约0.01到10毫克。例如，单位口服剂量可以包括约0.01到50毫克，最好是约0.1到10毫克的本发明化合物。单位剂量可给予一次或多次，每天为一片或多片，每片含有约0.1到50毫克，合宜地约0.25到10毫克的本发明化合物或其溶剂化物。
本发明的药物组合物可被配制成适合各种给药途径的制剂形式，包括但不限于被配制成用于肠外，皮下，静脉，肌肉，腹腔内，透皮，口腔，鞘内，颅内，鼻腔或外用途径给药的形式，用于治疗肿瘤和其他疾病。给药量是有效地改善或消除一个或多个病症的药量。对于特定疾病的治疗，有效量是足以改善或以某些方式减轻与疾病有关的症状的药量。这样的药量可作为单一剂量施用，或者可依据有效的治疗方案给药。给药量也许可治愈疾病，但是给药通常是为了改善疾病的症状。一般需要反复给药来实现所需的症状改善。药的剂量将根据病人的年龄，健康与体重，并行治疗的种类，治疗的频率，以及所需治疗效益来决定。
本发明的药物制剂可以给予任何哺乳动物，只要他们能获得本发明化合物的治疗效果。在这些哺乳动物中最为重要的是人类。
本发明的化合物或其药物组合物可用于治疗各种由FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)介导的疾病。本文中，由FLT3介导的疾病为各种癌症、免疫性疾病。所述癌症包括但不限于急性髓细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、急性前髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞白血病、慢性中性粒细胞白血病、急性未分化性白血病、退化发育性大细胞淋巴瘤、幼淋巴细胞性白血病、青少年粒单核细胞白血病、成人T细胞ALL、AML合并三谱系脊髓发育不良、混合谱系白血病、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常综合征、骨髓增生障碍、多发性骨髓瘤。所述免疫性疾病包括但不限于关节炎、狼疮、炎性肠病、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、骨关节炎、斯蒂尔病、青少年关节炎、糖尿病、重症肌无力症、桥本甲状腺炎、奥德甲状腺炎、格雷夫斯病、类风湿性关节炎综合征、多发性硬化症、传染性神经元炎、急性传播性脑脊髓炎、阿狄森病、再生障碍性贫血、自身免疫性肝炎、视神经炎、银屑病、移植物抗宿主病、移植、输血过敏反应、变态反应、I型超敏反应、过敏性结膜炎、过敏性鼻炎、特应性皮炎。
本发明的药物制剂可用已知的方式制造。例如，由传统的混合，制粒，制锭，溶解，或冷冻干燥过程制造。制造口服制剂时，可结合固体辅料和活性化合物，选择性研磨混合物。如果需要或必要时加入适量助剂后，加工颗粒混合物，获得片剂或锭剂芯。
合适的辅料特别是填料，例如糖类如乳糖或蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制剂或钙磷酸盐，例如磷酸三钙或磷酸氢钙；以及粘结剂，例如淀粉糊、包括玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可增加崩解剂，比如上面提到的淀粉，以及羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、或褐藻酸或其盐，如海藻酸钠。辅助剂特别是流动调节剂和润滑剂，例如，硅石、滑石、硬脂酸盐类，如镁硬脂酸钙、硬脂酸或聚乙二醇。如果需要，可以給锭剂核芯提供可以抵抗胃液的合适包衣。为此，可以应用浓缩糖类溶液。这个溶液可以含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛，漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了制备耐胃液的包衣，可使用适当的纤维素溶液，例如醋酸纤维素邻苯二甲酸或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸。可向药片或锭剂核芯的包衣加入染料或色素。例如，用于识别或为了表征活性成分剂量的组合。
因此，本发明还提供一种治疗FLT3介导的疾病的方法，该方法包括给予需要的对象以本发明的化合物或药物组合物。
给药方法包括但不限于本领域周知的各种给药方法，可根据患者的实际情况加以确定。这些方法包括但不限于肠外，皮下，静脉，肌肉，腹腔内，透皮，口腔，鞘内，颅内，鼻腔或外用途径给药。
本发明也包括本发明化合物在制备治疗FLT3介导的疾病用的药物中的用途。
以下结合具体实施案例对本发明的技术方案进一步描述，但以下实施案例不构成对本发明的限制，所有依据本发明的原理和技术手段采用的各种施用方法，均属于本发明范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
材料与方法
本发明的蝶啶酮类化合物的合成如下所示：
在以下的实施例中将进一步举例说明本发明(Journal of Medicinal Chemistry2013,56(20)，7821-7837)。这些实施例仅用于说明本发明，但不以任何方式限制本发明。
试剂和条件：(a)ArNH2,DIPEA,1,4-dioxane,r.t.；(b)ArNH2,DIPEA,1,4-dioxane,r.t.；(c)Pd/C,H2,EtOH；(d)R2COCOOEt,HOAc,EtOH,reflux；(e)trifluoroacetic acide,CH2Cl2,0℃ to r.t.；(f)acyl chloride,Et3N,CH2Cl2,0℃ to r.t.or acyl chloride,1-Methyl-2-pyrrolidinone,CH3CN,0℃ to r.t.
上述制备流程中，R1-R4的定义如上文所述。本领域技术人员可根据实际制备需要，采用本领域常规获得的各种起始化合物为原料，制备本发明的化合物。
实施例1
上述步骤a-f的具体合成方法如下：
(4-(2-氯-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成(步骤a)
称取2,4-二氯-5-硝基嘧啶(190mg，0.98mmol)，加入6mL 1,4-二氧六环，置于25mL圆底烧瓶中，室温下搅拌，取(4-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.96mmol)、N,N-二异丙基乙胺(137mg，1.06mmol)溶于4mL 1,4-二氧六环，缓慢滴加到上述反应液中，滴加完后继续在室温下搅拌1小时左右，TLC监测反应完全转化。旋转蒸发除溶剂，粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1，v/v)分离，得到(4-(2-氯-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯橙色固体301mg，产率82％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.38(s,1H),9.47(s,1H),9.12(s,1H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.39(d,J＝8.4Hz,2H),1.49(s,9H).LC-MS计算值C15H17ClN5O4[M+H]+366.09,实验值366.00。
(4-(2-(4-甲氧基苯基氨基)-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成(步骤b)
称取(4-(2-氯-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.14mmol)、对甲氧基苯胺(17mg，0.14mmol)、N,N-二异丙基乙胺(18mg，0.18mmol)置于10mL圆底烧瓶中，加入5mL 1,4-二氧六环，室温下搅拌4小时，TLC跟踪至原料完全转化。旋转蒸发除去溶剂，粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝4:1，v/v)纯化，得到(4-(2-(4-甲氧基苯基氨基)-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯黄色固体51mg，产率82％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.32(s,1H),10.27(s,1H),9.47(s,1H),9.04(s,1H),7.49(d,J＝8.8Hz,2H),7.45(d,J＝8.8Hz,2H),7.40(d,J＝8.8Hz,2H),6.75(d,J＝8.8Hz,2H),3.73(s,3H),1.50(s,9H)。
(4-(5-氨基-2-(4-甲氧基苯基氨基)嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成(步骤c)
称取(4-(2-(4-甲氧基苯基氨基)-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(45mg，0.10mmol)置于50mL圆底烧瓶中，加入20mL乙醇、5mg钯碳(10％Pd)，通入氢气，室温下搅拌过夜。反应结束后，抽滤，将滤液旋干，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝5:1，v/v)纯化，得到(4-(5-氨基-2-(4-甲氧基苯基氨基)嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯淡粉色固体30mg，产率83％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.23(s,1H),8.42(s,1H),8.10(s,1H),7.62(d,J＝9.2Hz,2H),7.56(s,1H),7.53(d,J＝9.2Hz,2H),7.40(d,J＝8.8Hz,2H),6.77(d,J＝8.8Hz,2H),3.70(s,3H),1.48(s,9H)。
(4-(2-(4-甲氧基苯基氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成(步骤d)
称取(4-(5-氨基-2-(4-甲氧基苯基氨基)嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(30mg,0.07mmol)置于10mL圆底烧瓶中，加入0.29mL冰醋酸、5mL无水乙醇，然后加入乙醛酸乙酯(50％甲苯溶液)(16mg，0.08mmol)，加热至回流搅拌过夜。反应结束后，有固体析出，抽滤，滤饼用乙醇、氨水、去离子水洗涤，干燥。粗产物经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝50:1，v/v)分离纯化，得到(4-(2-(4-甲氧基苯基氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)氨基甲酸叔丁酯黄色固体18mg，产率76％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.08(s,1H),9.64(s,1H),8.83(s,1H),8.02(s,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,2H),7.30-7.28(m,4H),6.62(br,2H),3.67(s,3H),1.52(s,9H)。
8-(4-氨基苯基)-2-(4-甲氧基苯基)-7(8H)-蝶啶酮的合成(步骤e)
称取(4-(2-(4-甲氧基苯基氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(18mg,0.04mmol)置于5mL圆底烧瓶中,加入2mL二氯甲烷，0℃下搅拌，加入0.5mL三氟乙酸。然后继续在0℃下搅拌1小时，室温下搅拌1小时。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液中和至溶液偏碱性，用二氯甲烷萃取(3×50mL)，有机相用去离子水、饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，将溶剂旋干。粗产物经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30:1，v/v)分离纯化，得到8-(4-氨基苯基)-2-(4-甲氧基苯基)-7(8H)-蝶啶酮黄色固体12mg，产率85％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.05(s,1H),8.81(s,1H),8.00(s,1H),7.40(d,J＝7.2Hz,2H),6.98(d,J＝8.4Hz,2H),6.73(d,J＝8.0Hz,2H),6.67(br,2H),5.44(s,2H),3.70(s,3H).HRMS(ESI)计算值C19H17N6O2[M+H]+361.1413,实验值361.1417。
N-(4-(2-((4-甲基苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)蝶啶基)苯基)甲基磺酰胺(化合物001)的合成(步骤f)
称取8-(4-氨基苯基)-2-(4-甲氧基苯基)-7(8H)-蝶啶酮(100mg,0.277mmol)，三乙胺(0.232mL，1.662mmol)置于25mL圆底烧瓶中，加入15mL无水二氯甲烷，冰浴下搅拌。称取甲基磺酰氯(0.172mL，2.216mmol)溶于2mL的二氯甲烷中，将其缓慢滴加到上述反应液当中，滴加完后冰浴下继续搅拌1小时，室温搅拌过夜。TLC跟踪至原料完全转化。旋干溶剂，加入饱和碳酸氢钠溶液中和至溶液偏碱性，用二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥。粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝100:50:1，v/v)纯化，得到N-(4-(2-((4-甲基苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)蝶啶基)苯基)甲基磺酰胺黄色固体54mg，产率47％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.11(br,1H),8.84(s,1H),8.03(s,1H),7.40(s,4H),7.31(br,2H),6.66(br,2H),3.69(s,3H),3.12(s,3H).HRMS(ESI)计算值C20H19N6O4S[M+H]+439.1189,实验值439.1187。
以下化合物均按照上述步骤a-f的方法合成得到：
8-(4-氨基苯基)-2-(4-甲氧基-2-甲基苯基)-7(8H)-蝶啶酮(化合物002)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.13(s,1H),8.72(s,1H),7.95(s,1H),7.21(s,1H),6.94(d,J＝8.0Hz,2H),6.72(s,1H),6.65(d,J＝8.4Hz,2H),6.60(s,1H),5.33(br,2H),3.72(s,3H),2.13(s,3H).HRMS(ESI)计算值C20H19N6O2[M+H]+375.1569,实验值375.1573。
8-(4-氨基苯基)-2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-7(8H)-蝶啶酮(化合物003)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.13(s,1H),8.84(s,1H),8.03(s,1H),7.60(s,1H),7.38(s,1H),6.98(d,J＝8.4Hz,2H),6.87(s,1H),6.72(d,J＝8.4Hz,2H),5.39(br,2H),3.79(s,3H).HRMS(ESI)计算值C19H16ClN6O2[M+H]+395.1023,实验值395.1027。
8-(4-氨基苯基)-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7(8H)-蝶啶酮(化合物004)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.14(s,1H),8.85(s,1H),8.03(s,1H),7.42(s,1H),7.19(s,1H),6.98(d,J＝8.4Hz,2H),6.89(s,1H),6.72(d,J＝8.4Hz,2H),5.38(br,2H),3.77(s,3H).HRMS(ESI)计算值C19H16FN6O2[M+H]+379.1319,实验值379.1323。
N-(4-(2-(4-甲氧基苯基氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)乙酰胺(化合物005)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.23(s,1H),10.10(s,1H),8.85(s,1H),8.04(s,1H),7.78(d,J＝7.2Hz,2H),7.34(d,J＝7.6Hz,4H),6.61(s,2H),3.67(s,3H),2.13(s,3H).HRMS(ESI)计算值C21H19N6O3[M+H]+403.1519,实验值403.1500。
8-(3-氨基苯基)-2-((4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物006)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.01(s,1H),8.81(s,1H),7.99(s,1H),7.35(d,J＝7.2Hz,2H),7.22(t,J＝8.0Hz,1H),6.75(d,J＝7.2Hz,1H),6.66(br,2H),6.52(br,1H),6.48(d,J＝8.0Hz,1H),5.35(s,2H),3.02(br,4H),2.46-2.44(m,4H),2.23(s,3H).HRMS(ESI)计算值C23H25N8O[M+H]+429.2151,实验值429.2151。
8-(4-氨基苯基)-2-((4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物007)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.98(s,1H),8.79(s,1H),7.99(s,1H),7.33(d,J＝6.4Hz,2H),6.98(d,J＝8.4Hz,2H),6.74(d,J＝8.4Hz,2H),6.68(br,2H),5.43(s,2H),3.05-3.03(m,4H),2.48-2.46(m,4H),2.24(s,3H).HRMS(ESI)计算值C23H25N8O[M+H]+429.2151,实验值429.2151。
8-(4-氨基苯基)-2-((3-氯-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物008)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.13(br,1H),8.85(s,1H),8.03(s,1H),7.60(s,1H),7.37(d,J＝7.6Hz,1H),6.97(d,J＝8.4Hz,2H),6.89(d,J＝7.6Hz,1H),6.71(d,J＝8.4Hz,2H),5.38(s,2H),2.89(br,4H),2.47(br,4H),2.34(s,3H).HRMS(ESI)计算值C23H24ClN8O[M+H]+463.1762,实验值463.1710。
8-(4-氨基苯基)-2-((3-氟-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物009)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.13(br,1H),8.84(s,1H),8.02(s,1H),7.32(d,J＝12.4Hz,1H),7.19(d,J＝7.2Hz,1H),6.97(d,J＝8.4Hz,2H),6.77(br,1H),6.72(d,J＝8.4Hz,2H),5.39(s,2H),2.92-2.90(m,4H),2.45(br,4H),2.22(s,3H).HRMS(ESI)计算值C23H24FN8O[M+H]+447.2057,实验值447.2057。
8-(4-氨基苯基)-2-((3-甲基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物010)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.94(br,1H),8.80(s,1H),7.99(s,1H),7.36(br,1H),7.18(d,J＝6.4Hz,1H),6.97(d,J＝8.4Hz,2H),6.79(d,J＝8.4Hz,1H),6.71(d,J＝8.4Hz,2H),5.37(s,2H),2.76-2.74(m,4H),2.47(br,4H),2.24(s,3H),2.06(s,3H).HRMS(ESI)计算值C24H27N8O[M+H]+443.2308，实验值443.2301。
8-(4-氨基苯基)-2-((3-甲氧基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物011)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.94(br,1H),8.81(s,1H),7.99(s,1H),7.09(s,2H),6.97(d,J＝8.4Hz,2H),6.70(d,J＝8.4Hz,2H),6.60(br,1H),5.41(s,2H),3.56(s,3H),2.87(br,4H),2.43(br,4H),2.21(s,3H).HRMS(ESI)计算值C24H27N8O2[M+H]+459.2257,实验值459.2256。
8-(4-氨基苯基)-2-((3-甲基-4-(1-甲基-4-氧代哌啶基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物012)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.97(br,1H),8.81(s,1H),7.99(s,1H),7.36(d,J＝2.0Hz,1H),7.16(br,1H),6.97(d,J＝8.8Hz,2H),6.70(d,J＝8.4Hz,3H),5.39(s,2H),4.37(s,1H),2.92(s,2H),2.75(s,2H),2.01(s,6H),1.81-1.71(m,2H),1.34-1.19(m,1H).HRMS(ESI)计算值C25H28N7O2[M+H]+458.2304,实验值458.2289。
N-(4-(2-(4-(4-甲基-1-哌嗪基)氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶酮)苯基)乙酰胺(化合物013)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.44(s,1H),10.05(s,1H),8.82(s,1H),8.02(s,1H),7.80(d,J＝8.0Hz,2H),7.32(d,J＝8.4Hz,2H),7.25(br,2H),6.64(br,2H),3.24(br,4H),3.05(br,4H),2.64(s,3H),2.15(s,3H).HRMS(ESI)计算值C25H27N8O2[M+H]+471.2257,实验值471.2213。
N-(4-(2-((4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)蝶啶基)苯基)甲基磺酰胺(化合物014)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.02(s,1H),8.82(s,1H),8.02(s,1H),7.42-7.37(m,4H),7.26(br,2H),6.66(br,2H),3.13(s,3H),3.07(br,4H),2.54(br,4H),2.29(s,3H)。HRMS(ESI)计算值C24H27N8O3S[M+H]+507.1927,实验值507.1926。
8-(4-氨基苯基)-2-((4-(4-甲基-1-哌嗪基)苄基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物015)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.99(s,1H),8.82(s,1H),8.01(s,1H),7.55(d,J＝8.0Hz,2H),7.32(d,J＝8.4Hz,2H),7.20(s,2H),6.59(s,2H),3.86(s,2H),3.00-2.99(m,4H),2.44-2.41(m,4H),2.21(s,3H).HRMS(ESI)计算值C24H27N8O[M+H]+443.2308,实验值443.2304。
2-((4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-8-(4-(1-哌嗪基)苯基)-7(8H)蝶啶酮(化合物016)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.01(s,1H),8.81(s,1H),8.00(s,1H),7.26(d,J＝6.8Hz,2H),7.20(d,J＝8.8Hz,2H),7.12(d,J＝8.8Hz,2H),6.58(s,2H),3.19-3.17(m,4H),3.02-3.00(m,4H),2.90-2.88(m,4H),2.45-2.43(m,4H),2.22(s,3H).HRMS(ESI)计算值C27H32N9O[M+H]+498.2730,实验值498.2728。
实施例2
生物活性测试部分
本发明提供的化合物对FLT3激酶活性的体外抑制效果实验如下进行，其中FLT3购自BPS，以MLN518、AC220作为对照化合物，对照化合物购自Selleck，两结构分别如下：
激酶测试：配制1x激酶基质缓冲液和终止缓冲液。1x激酶基质缓冲液：50mMHEPES，pH 7.5，0.0015％Brij-35，10mM氯化镁，2mM DTT；终止缓冲液：100mM HEPES，pH7.5，0.0015％Brij-35，0.2％Coating Reagent#3，50mM EDTA。配制化合物溶液。将化合物溶于100％DMSO，配制成50倍最终的最高抑制浓度的溶液。首先，向孔板中加入100μL待测化合物，并在同一96孔板的两个空白孔中，分别加入100μL 100％DMSO作为无化合物和无激酶对照，此孔板作为原始孔板(1号板，96孔板)；其次，过渡孔板(2号板，96孔板)，从1号板中转移10μL溶液到2号板中，再加入90μL的1x激酶缓冲液，将中间孔板振摇10分钟。最后，准备分析孔板(3号板，384孔板)，从2号板每个孔中取出5μL溶液到3号板中，并做重复对照。加10μL2.5x激酶溶液，10μL 2.5x肽溶液，到3号板中，在28℃孵育一段时间后，加入25μL的终止缓冲液以结束反应。在Caliper上采集实验数据，并将实验数据转换成抑制率，抑制百分率＝(Max-Conversion)/(Max-Min)*100，“Max”代表DMSO对照，“Min”代表低对照。
细胞培养：细胞株由美国菌种保藏中心(ATCC)获得，按照ATCC提供的方法培养。具体如下，MV4-11、K562、Wi38细胞分别用含10％的胎牛血清的IMDM、RPMI-1640、MEM培养基，置于37℃二氧化碳培养箱中培养；其中，MV4-11是FLT3-ITD突变细胞株，而FLT3-ITD突变是临床中急性髓系白血病的致癌驱动基因突变，k562和WI-38是无FLT3表达的细胞株，K562是慢性粒细胞白血病，WI-38是正常组织肺纤维原细胞，后两株细胞用于评测药物的选择性。
细胞活性测试：悬浮细胞，本申请中为MV4-11和K562细胞，在每孔3-8×103细胞的96孔板上进行培养，每个孔中加入100μL的培养基，然后加入10μL的化合物(一式三份)，在37℃下培养72h。细胞培养完以后，在每一孔板中加入20μL的5mg/mL MTT试剂再继续培养4h，加入50μL三联液(5％异丙醇-10％SDS-12mmol/L HCl)来溶解氧化产物。在CO2培养箱中过夜。用多功能酶标仪Synergy 2测570nm处OD值。按照以下公式计算被测化合物对癌细胞生长的抑制率：肿瘤抑制率＝(A570nm对照孔-A570nm给药孔)/A570nm对照孔×100％。
贴壁细胞，本申请为Wi38细胞，在每孔2–7×103细胞的96孔板上进行培养24h，同样在培养基中加入相同当量的化合物。72h培养以后，倾去培养液，用10％预冷的TCA固定固定细胞。4℃放置1h后用蒸馏水洗涤5次，空气中自然干燥。在加入由1％冰醋酸配制的SRB4mg/mL溶液100μL，室温染色15min，去上清，用1％冰醋酸洗涤5次，空气干燥。最后加入150μL/孔10mM Tris-HCl，用多功能酶标仪Synergy 2在560nm处检测OD值。每组实验设三复孔。按照以下公式计算被测化合物对癌细胞生长的抑制率：肿瘤抑制率＝(A560nm对照孔-A560nm给药孔)/A560nm对照孔×100％
测试结果如下表1。
表1化合物对FLT3激酶和细胞抑制活性
讨论：
从表1所示结果可以看出，与现有的FLT3抑制剂-MLN518以及AC220等相比，本发明的化合物对于FLT3激酶表现出优异的抑制活性，大多数化合物对FLT3激酶的抑制IC50值在10nM以下。
此外，从细胞抑制活性可以看出，本发明化合物同时具备相当优异的选择性。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (9)
1.选自下组的化合物或其药学上可接受的盐：
2.一种药物组合物，所述药物组合物含有权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
3.权利要求1所述的化合物在制备治疗或预防FLT3介导的疾病，或抑制FLT3的药物中的用途。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述FLT3介导的疾病为癌症。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述癌症选自下组：急性髓细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞白血病、慢性中性粒细胞白血病、急性未分化性白血病、退化发育性大细胞淋巴瘤、幼淋巴细胞性白血病、青少年粒单核细胞白血病、成人T细胞ALL、AML合并三谱系脊髓发育不良、混合谱系白血病、骨髓增生异常综合征、骨髓增生障碍、多发性骨髓瘤。
6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述癌症是急性前髓细胞白血病。
7.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述疾病为免疫性疾病。
8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述免疫性疾病选自：关节炎、狼疮、炎性肠病、斯蒂尔病、糖尿病、重症肌无力症、桥本甲状腺炎、奥德甲状腺炎、格雷夫斯病、类风湿性关节炎综合征、多发性硬化症、传染性神经元炎、急性传播性脑脊髓炎、阿狄森病、再生障碍性贫血、自身免疫性肝炎、视神经炎、银屑病、移植物抗宿主病、输血过敏反应、变态反应、I型超敏反应、过敏性结膜炎、过敏性鼻炎、特应性皮炎。
9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述免疫性疾病是青少年关节炎、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎或骨关节炎。
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