CN106442488B - 压载水中50μm以上生物活体检测方法 - Google Patents

压载水中50μm以上生物活体检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106442488B
CN106442488B CN201610775517.7A CN201610775517A CN106442488B CN 106442488 B CN106442488 B CN 106442488B CN 201610775517 A CN201610775517 A CN 201610775517A CN 106442488 B CN106442488 B CN 106442488B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ballast water
sampling bottle
organisms
solution
living organisms
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610775517.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106442488A (zh
Inventor
詹世杰
张灿
董晓林
靳双亭
王建
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Weihai Cosco Marine Heavy Industry Technology Co ltd
Original Assignee
Weihai Cosco Shipbuilding Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Weihai Cosco Shipbuilding Technology Co Ltd filed Critical Weihai Cosco Shipbuilding Technology Co Ltd
Priority to CN201610775517.7A priority Critical patent/CN106442488B/zh
Publication of CN106442488A publication Critical patent/CN106442488A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106442488B publication Critical patent/CN106442488B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

一种压载水中50μm以上生物活体检测方法，涉及船舶压载水检测方法,包括如下步骤：(1)使用网孔对角线长度不大于50μm的尼龙筛网过滤Am³的压载水，得浓缩液，将浓缩液装在采样瓶中；（2）向采样瓶中滴加中性红溶液、进行生物活体染色，摇匀后静置10min以上；(3)再向采样瓶中滴加乙酸钠溶液，摇匀；(4)向采样瓶中边滴加冰醋酸，边摇匀，直至液体颜色由黄色变为品红色；（5）取样品进行镜检计数，可见活体生物被染成品红色，死亡生物为无色或透明，得50μm以上生物活体个数。本发明操作简单、方便，检测耗时短、效率高，准确率高、结果可靠。

Description

压载水中50μm以上生物活体检测方法
技术领域
本发明涉及船舶携带的压载水中生物活体的检测方法，详细讲是一种操作简单、方便，检测耗时短、效率高，准确率高、结果可靠的压载水中50μm以上生物活体检测方法。
背景技术
我们知道，全球船舶每年携带的压载水约有120亿吨，压载水和压载舱的沉积物中含有大量的生物，包括细菌、藻类、原生动物、浮游生物及其他生物。全球每天存在于船舶压载水中随船舶被扩散到世界各地海域的海洋生物约有7000种。许多细菌和浮游生物经过数月的航程仍存活于压载水及其沉积物中，当船舶到港口装货时，这些生物随着压载水被排放到港口国水域。届时排放的生物可能会捕食本地物种，改变当地物种的生活环境，甚至取代而代之，减少本地生物的多样性，直至整个生态系统的破坏。同时，船舶排放的压载水中携带某些致病细菌、病毒和微藻类，可能降低海产品产量等直接经济损失，也会给人类健康带来威胁。因此，随着国际贸易和航海运输业的快速发展，压载水在国际间的装载和排放不断增多，所携带外来生物和病菌造成的卫生、环保和海洋生态问题越来越受到国际海事组织和世界各港口国的关注。根据《船舶压载水和沉积物控制和管理国际公约》D-2标准，活体生物尺寸在50μm以上的生物个体浓度小于10个/m³，在10-50μm范围内的生物个体浓度小于10个/ml。可见，公约标准中要求的是活体生物浓度，这就要求必须在短时间内将压载水中种类繁多的生物种类区分死活，并将生物的个数进行加和。但在现有的检测技术条件下，这是一个很大的挑战。
然而现阶段对于压载水中50μm以上生物的检测方法上，缺乏规范、准确率高的方法，为此方面的科研工作造成了一定的难度。现有技术在检测50μm以上浮游生物活体时，一般使用镜检目测的方法，该法通常耗时长、繁琐且主观性强、准确率低，对于检测结果很难正确检验核实。而且还有较高的成本和对使用者可能造成有毒有害的弊端，其检测效果和结果重复性也较差。因此，需要一种简便、高准确率和结果可靠的压载水中50μm以上生物的检测方法。
发明内容
本发明的目的是解决上述现有技术的不足，提供一种操作简单、方便，检测耗时短、效率高，准确率高、结果可靠的压载水中50μm以上生物活体检测方法。
本发明解决上述现有技术的不足所采用的技术方案是：
一种压载水中50μm以上生物活体检测方法，其特征在于包括如下步骤：
(1) 在船舶排放压载水时，使用网孔对角线长度不大于50μm的尼龙筛网过滤Am³的压载水、将其浓缩至0.01%Am³-0.05%Am³，得浓缩液，将浓缩液装在采样瓶中；
（2）向采样瓶中滴加中性红溶液、进行生物活体染色，摇匀后静置10min；
(3)再向采样瓶中滴加乙酸钠溶液，摇匀；增加死细胞的膜通透性；
(4)向采样瓶中边滴加冰醋酸，边摇匀，直至液体颜色由黄色变为品红色；
（5）取样品进行镜检计数，可见活体生物被染成品红色，死亡生物为无色或透明，得50μm以上生物活体个数。
本发明中第(1)步中所述的船舶排放压载水时，使用网孔对角线长度45-50μm的尼龙筛网过滤1-10m³的压载水、将其浓缩至150-2000ml，得浓缩液；
本发明中第(2)步中所述的向采样瓶中滴加的中性红溶液优选：向采样瓶中滴加采样瓶内液体体积0.02-0.05倍的、浓度为0.5-1.2％（体积百分比）的中性红溶液、进行生物活体染色；
本发明中第(3)步中所述的向采样瓶中滴加乙酸钠溶液优选：向采样瓶中滴加采样瓶中液体体积0.03-0.05倍的、浓度为0.8-2mol/L的乙酸钠溶液。
本发明中当第(3)步完成后，如果不能及时通过镜检来检测水样中的生物，向第(3)步制得的液体内添加甲醛溶液（质量百分比）进行样品固定；可以镜检前再进行第（4）步、第（5）步。
本发明中所述的甲醛溶液为第(3)步制得的液体体积的2-5%的浓度为10-15%（质量百分比）的甲醛溶液。
本发明中所述的中性红学名“3-氨基-7-甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐”，是一种弱碱性 pH 指示剂，变色范围 pH6.4～8.0之间（由红变黄）。由于浮游生物细胞内含有液泡、食物泡或伸缩泡等膜泡，在中性或微碱性环境中，活细胞能大量吸收中性红并向膜泡中排泌，膜泡在一般情况下呈酸性反应，因此，进入膜泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现红色，在这种情况下，原生质一般不着色；死细胞由于原生质变性凝固，细胞液不能维持在液泡内，用中性红染色后，不产生液泡着色现象。中性红会在细胞质中形成结晶，使细胞质产生暗红色，对判断细胞颜色形成干扰，而乙酸钠能够增加死细胞的膜通透性，乙酸能够溶解中性红结晶使中性红从细胞质中透出细胞膜，减少干扰。
本发明与现有技术相比，操作方法可以极易区分50μm以上生物的存活状态，减少人为观察的主观误差，检测耗时短，准确性高，且溶液配制简单，成本较低、效果明显。
具体实施方式
实施例1
一种压载水中50μm以上生物活体检测方法，包括如下步骤：
(1) 在船舶排放压载水时，使用网孔对角线长度45μm的尼龙筛网过滤1m³的压载水、将其浓缩至150ml，得150ml的浓缩液，1m³压载水内的50μm以上生物被富集到此150ml浓缩液内，将过浓缩液装在500ml采样瓶中；
（2）向采样瓶中添加50mL的经煮沸冷却后的压载水；
（3）向采样瓶中滴加6ml、1％（体积百分比）的中性红溶液、进行生物活体染色，摇匀后静置15min；
(4)再向采样瓶中滴加8mL的1mol/L乙酸钠溶液，摇匀；
(5)向采样瓶中边滴加冰醋酸，边摇匀，直至液体颜色由黄色变为品红色；
（6）取样品进行镜检计数，可见活体生物被染成品红色，死亡生物为无色或透明，得50μm以上生物活体个数。
实施例2
一种压载水中50μm以上生物活体检测方法，包括如下步骤：
(1) 在船舶排放压载水时，使用网孔对角线长度50μm的尼龙筛网过滤2m³的压载水、将其浓缩至350ml，得350ml的浓缩液，2m³压载水内的50μm以上生物被富集到此350ml浓缩液内，将过浓缩液装在1000ml采样瓶中；
（2）向采样瓶中滴加13ml、0.8％（体积百分比）的中性红溶液、进行生物活体染色，摇匀后静置20min；
(3)再向采样瓶中滴加20mL的1.2mol/L乙酸钠溶液，摇匀；
(4)向采样瓶中边滴加冰醋酸，边摇匀，直至液体颜色由黄色变为品红色；
（5）取样品进行镜检计数，可见活体生物被染成品红色，死亡生物为无色或透明，得50μm以上生物活体个数。
实施例3
一种压载水中50μm以上生物活体检测方法，包括如下步骤：
(1) 在船舶排放压载水时，使用网孔对角线长度48μm的尼龙筛网过滤5m³的压载水、将其浓缩至600ml，得600ml的浓缩液，5m³压载水内的50μm以上生物被富集到此600ml浓缩液内，将过浓缩液装在2000ml采样瓶中；
（2）向采样瓶中滴加28ml、1.2％（体积百分比）的中性红溶液、进行生物活体染色，摇匀后静置12min；
(3)再向采样瓶中滴加30mL的2mol/L乙酸钠溶液，摇匀；
(4)向采样瓶中边滴加冰醋酸，边摇匀，直至液体颜色由黄色变为品红色；
（5）取样品进行镜检计数，可见活体生物被染成品红色，死亡生物为无色或透明，得50μm以上生物活体个数。
上述实施例中，当向采样瓶中滴加乙酸钠溶液后，如果不能及时通过镜检来检测水样中的生物，向第液体内添加其体积的2-5%、质量百分比为10-15%的甲醛溶液进行样品固定；可以镜检前再进行其余步骤。
本发明中所述的中性红学名“3-氨基-7-甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐”，是一种弱碱性 pH 指示剂，变色范围 pH6.4～8.0之间（由红变黄）。由于浮游生物细胞内含有液泡、食物泡或伸缩泡等膜泡，在中性或微碱性环境中，活细胞能大量吸收中性红并向膜泡中排泌，膜泡在一般情况下呈酸性反应，因此，进入膜泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现红色，在这种情况下，原生质一般不着色；死细胞由于原生质变性凝固，细胞液不能维持在液泡内，用中性红染色后，不产生液泡着色现象。中性红会在细胞质中形成结晶，使细胞质产生暗红色，对判断细胞颜色形成干扰，而乙酸钠能够增加死细胞的膜通透性，乙酸能够溶解中性红结晶使中性红从细胞质中透出细胞膜，减少干扰。
本发明与现有技术相比，操作方法可以极易区分50μm以上生物的存活状态，减少人为观察的主观误差，检测耗时短，准确性高，且溶液配制简单，成本较低、效果明显。

Claims (6)

1.一种压载水中50μm以上生物活体检测方法，其特征在于包括如下步骤：
(1) 在船舶排放压载水时，使用网孔对角线长度不大于50μm的尼龙筛网过滤Am³的压载水、将其浓缩至0.01%Am³-0.05%Am³，得浓缩液，将浓缩液装在采样瓶中；
(2)向采样瓶中滴加中性红溶液、进行生物活体染色，摇匀后静置10min以上；
(3)再向采样瓶中滴加乙酸钠溶液，摇匀；乙酸钠能够增加死细胞的膜通透性；
(4)向采样瓶中边滴加冰醋酸，边摇匀，乙酸溶解中性红结晶、使中性红从死细胞的细胞质中透出细胞膜，直至液体颜色由黄色变为品红色；
(5) 取样品进行镜检计数，可见活体生物被染成品红色，死亡生物为无色或透明，得50μm以上生物活体个数。
2.根据权利要求1所述的压载水中50μm以上生物活体检测方法，其特征在于第(1)步中所述的船舶排放压载水时，使用网孔对角线长度35-50μm的尼龙筛网过滤0.6-10m³的压载水、将其浓缩至100-2000ml，得浓缩液。
3.根据权利要求1或2所述的压载水中50μm以上生物活体检测方法，其特征在于第(2)步中所述的向采样瓶中滴加的中性红溶液为：向采样瓶中滴加采样瓶内液体体积0.02-0.05倍的、浓度为0.5-1.2％体积百分比的中性红溶液、进行生物活体染色。
4.根据权利要求3所述的压载水中50μm以上生物活体检测方法，其特征在于第(3)步中所述的向采样瓶中滴加乙酸钠溶液为：向采样瓶中滴加采样瓶中液体体积0.03-0.05倍的、浓度为0.8-2mol/L的乙酸钠溶液。
5.根据权利要求3所述的压载水中50μm以上生物活体检测方法，其特征在于当第(3)步完成后，如果不能及时通过镜检来检测水样中的生物，向第(3)步制得的液体内添加甲醛溶液进行样品固定；镜检前再进行第(4)步、第(5)步。
6.根据权利要求5所述的压载水中50μm以上生物活体检测方法，其特征在于所述的甲醛溶液为第(3)步制得的液体体积的2-5%、浓度为10-15%质量百分比的甲醛溶液。
CN201610775517.7A 2016-08-31 2016-08-31 压载水中50μm以上生物活体检测方法 Active CN106442488B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610775517.7A CN106442488B (zh) 2016-08-31 2016-08-31 压载水中50μm以上生物活体检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610775517.7A CN106442488B (zh) 2016-08-31 2016-08-31 压载水中50μm以上生物活体检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106442488A CN106442488A (zh) 2017-02-22
CN106442488B true CN106442488B (zh) 2019-12-10

Family

ID=58091610

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610775517.7A Active CN106442488B (zh) 2016-08-31 2016-08-31 压载水中50μm以上生物活体检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106442488B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107271630A (zh) * 2017-07-13 2017-10-20 大连海事大学 一种压载水中浮游生物在线检测装置及方法
CN107543907A (zh) * 2017-09-08 2018-01-05 大连海事大学 一种实时监测和检测船舶压载水水质的装置

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101149366A (zh) * 2007-10-16 2008-03-26 李红玉 一种快速定量线虫死亡率的新方法
CN101201312A (zh) * 2006-12-15 2008-06-18 北京林业大学 一种中性红染色法检测藻细胞活性的方法
CN102305732A (zh) * 2011-05-19 2012-01-04 上海海洋大学 船舶压载水的排放取样方法及装置
CN102323266A (zh) * 2011-05-30 2012-01-18 上海海洋大学 压载水排放浮游植物活体的鉴别方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101201312A (zh) * 2006-12-15 2008-06-18 北京林业大学 一种中性红染色法检测藻细胞活性的方法
CN101149366A (zh) * 2007-10-16 2008-03-26 李红玉 一种快速定量线虫死亡率的新方法
CN102305732A (zh) * 2011-05-19 2012-01-04 上海海洋大学 船舶压载水的排放取样方法及装置
CN102323266A (zh) * 2011-05-30 2012-01-18 上海海洋大学 压载水排放浮游植物活体的鉴别方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
乙酸对重组大肠杆菌BL21产酶的影响及作用机理研究;戴琨 等;《生物技术通报》;20150531;第31卷(第5期);209-210页章节2.3-2.5 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN106442488A (zh) 2017-02-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Villacorte Algal blooms and membrane based desalination technology
CN106442488B (zh) 压载水中50μm以上生物活体检测方法
Spisla et al. Extreme levels of ocean acidification restructure the plankton community and biogeochemistry of a temperate coastal ecosystem: a mesocosm study
WO2018041215A1 (zh) 船舶压载水中10-50um生物快速检测方法及装置
CN106442920A (zh) 一种船舶压载水排放实时监控装置及方法
Agouru et al. Studies on the range of plankton in River Benue, North central, Nigeria, Western Africa
Agustí et al. Consequences of UV‐enhanced community respiration for plankton metabolic balance
Mostajir et al. Microbial food web structural and functional responses to oyster and fish as top predators
Dong et al. A study on treatment efficacy of ballast water treatment system applying filtration+ membrane separation+ deoxygenation technology during shipboard testing
Tsiola et al. Ocean acidification and viral replication cycles: frequency of lytically infected and lysogenic cells during a mesocosm experiment in the NW Mediterranean Sea
US11977068B2 (en) Method for testing ecotoxicity of disinfection by-products
CN109187367B (zh) 一种偏振光流控片压载水微藻活性检测装置与方法
Liang et al. Field determination and ecological health risk assessment of trace metals in typical mariculture area of China
Welschmeyer et al. A portable, sensitive plankton viability assay for IMO shipboard ballast water compliance testing
CN102128779A (zh) 非外置鞘液流式细胞术在线分析藻类和有色可溶性有机物的方法
CN109406504A (zh) 一种水中氨氮快速检测固体粉末试剂及试剂盒
CN103484523A (zh) 一种微囊藻群体细胞的计数方法
Adeyemi Preliminary census of zooplanktons and phytoplanktons community of Ajeko stream, Iyale, North Central Nigeria
CN102323266A (zh) 压载水排放浮游植物活体的鉴别方法
CN111413479B (zh) 水质检测方法和系统
Ma et al. Seasonal and spatial variability of virioplanktonic abundance in Haihe River, China
CN206033759U (zh) 船舶压载水中10‑50um生物快速检测装置
KR101879752B1 (ko) 처리수 내 생존생물 분석 방법
CN102384887A (zh) 船舶压载水微藻活体分级计数装置
CN104140947B (zh) 一种船舶压载舱沉积物中活体细胞的分离方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20180205

Address after: 100020 Building 9, courtyard 1, No. 15 Guanghua Road, Chaoyang District, Beijing City, 908

Applicant after: COSCO Shipbuilding Industry Co., Ltd.

Address before: 264200 Shandong, Weihai, Shandong Province, Huancui District, Zhang Cun town, Shenyang Middle Road, Changjiang street intersection

Applicant before: WEIHAI COSCO SHIPBUILDING TECHNOLOGY CO., LTD.

Applicant before: Zhan Shijie

TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20191114

Address after: 264200, Shandong District, Weihai City, Huancui Town, Shenyang Road, Yangtze River Street intersection

Applicant after: WEIHAI COSCO SHIPBUILDING TECHNOLOGY CO., LTD.

Address before: 100020 Building 9, courtyard 1, No. 15 Guanghua Road, Chaoyang District, Beijing City, 908

Applicant before: COSCO Shipbuilding Industry Co., Ltd.

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CP03 Change of name, title or address
CP03 Change of name, title or address

Address after: No.19, Shenyang South Road, Zhangcun Town, Huancui District, Weihai City, Shandong Province 264200

Patentee after: Weihai COSCO marine heavy industry technology Co.,Ltd.

Address before: 264200 intersection of Changjiang street, Shenyang Middle Road, Zhangcun Town, Huancui District, Weihai City, Shandong Province

Patentee before: WEIHAI COSCO SHIPBUILDING TECHNOLOGY Co.,Ltd.