CN106279413A - 抗肿瘤坏死因子抗体多肽及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制肿瘤坏死因子，减轻重度抑郁症状的多肽。其序列为SEQ ID NO：1是全新的序列，其有益效果在于，ELISA法测定抗肿瘤坏死因子抗体的效价结果显示，本发明多肽的抗体效价高。药理结果显示，本发明多肽能改善急性和慢性抑郁症模型动物的抑郁症状。可作为临床重度抑郁症有效的候选治疗方法。
Description
技术领域
本发明涉及抗肿瘤坏死因子抗体多肽及其应用，具体涉及具有抑制肿瘤坏死因子，减轻重度抑郁症状的多肽。
背景技术
重度抑郁症由患者个体内遗传系统(基因)存在异常引起的，以持久自发性情绪低落为主的一系列抑郁症状。表现为社交能力障碍、不合群、离群、情绪低落、躯体不适、食欲不振等特点。严重可伴有自杀。患者的智力意识清楚而正常。重型抑郁症患者会出现悲观厌世、绝望、幻觉妄想、功能减退、并伴有严重的自杀企图，甚至自杀行为。对人类健康构成严重威胁，因此必须高度重视。情绪障碍：患者心境不良，情绪消沉，或焦虑、烦躁、坐立不安；对日常活动丧失兴趣，丧失愉快感，整日愁眉苦脸，忧心忡忡；精力减退，常常感到持续性疲乏；认为活着没有意思，严重者感到绝望无助，生不如死，度日如年，大部分患者有着结束自己生命的意念。因此，重症抑郁症给人类带来的极大的疾病负担。
目前的治疗方法，常用的有药物治疗、物理治疗及心理治疗等。可根据不同的抑郁情况，合理选择使用。目前仍把三环类抗抑郁药作为治疗抑郁症的一线药。一线药物治疗中，各种三环类抗抑郁药疗效不相上下，临床可根据抑郁及镇静作用强弱、副作用和患者的耐受情况进行选择。丙咪嗪和去甲丙咪嗪镇静作用弱，适用于精神运动性迟滞的抑郁患者。阿米替林、多虑平镇静作用较强，可适用于焦虑、激越和失眠患者。但三环类药物抗胆碱能和心血管副作用较大，应用时需注意。因此，寻找新的治疗抑郁症的靶点，开发新型、有效的治疗重度抑郁症药物，显得尤为重要。
研究发现，具有抑郁症临床表现的患者，其大脑炎症的发生率高出正常人30％。由此提出了炎症细胞因子假说，细胞因子是机体免疫系统分泌的一类多肽类信号分子，广泛存在于机体免疫系统和神经系统中。当机体对损伤、感染和心理社会等应激因素产生免疫应答时，会通过分泌细胞因子参与机体多种功能的调节。越来越多的证据表明抑郁症的发生与炎症细胞因子的增加关系密切。从而， 认为抗炎治疗可用于开发新的抑郁症治疗方法。
α肿瘤坏死因子(TNFα)是一种主要由巨噬细胞和单核细胞产生的促炎细胞因子，并参与正常炎症反应和免疫反应。研究发现，当机体处于心理应激、躯体疾病和创伤感染等应激条件下，伴有TNFα升高等炎症反应。可见，α肿瘤坏死因子抗体可治疗炎症相关疾病，如类风湿关节炎。
但是，未有研究报道α肿瘤坏死因子抗体用于治疗重度抑郁症。而且，α肿瘤坏死因子抗体本身的分子量较大，长期用于人体会产生中和反应，降低药效。因此，本发明提供了一种特异性强，纯度较高的小分子α肿瘤坏死因子抗体多肽，抑制炎症反应，从而起到抗重度抑郁的作用。
发明内容
发明目的
本发明提供全新的序列，该序列抗肿瘤坏死因子抗体多肽，对重度抑郁症具有很好的疗效。
技术方案
抗肿瘤坏死因子抗体多肽，其特征在于其序列为SEQ ID NO：1。
抗肿瘤坏死因子抗体多肽在治疗重度抑郁症药物中的应用。
有益效果
利用固相合成法化学合成抗肿瘤坏死因子抗体多肽，该多肽具有全新的序列，该多肽可用于治疗抑郁症。ELISA法测定抗肿瘤坏死因子抗体的效价结果显示，本发明多肽的抗体效价为1：160000，效价高。在体药理结果显示，本发明的多肽能够减少小鼠悬尾实验中应激绝望模型小鼠的悬尾时间；也能减少小鼠强迫游泳实验中应激绝望模型小鼠的强迫游泳时间；同时，本发明的多肽能够减少模型组大鼠的觅食潜伏期，提高慢性不可预测应激模型大鼠糖水实验中对糖水的摄取，与模型组相比，具有统计学差异。由此可见，本发明多肽能改善急性和慢性抑郁症模型动物的抑郁症状。可作为临床重度抑郁症有效的候选治疗方法。
具体实施方式
多肽由上海生工吉尔合成。
实施例1
抗肿瘤坏死因子抗体多肽的效价测定。
抗肿瘤坏死因子抗体的效价测定采用ELISA法。步骤：(1)抗原包被：人肿瘤坏死因子作为抗原，用包被液l：8000稀释，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板中。4℃放置过夜，洗涤液洗3次；(2)封闭：加l00μL/孔封闭液(含1％牛血清白蛋白，0.1％Tween20的PBS)，室温放置1h，用洗涤液洗3次；(3)将本发明多肽稀释成不同的浓度梯度，(4)将不同浓度梯度的本发明多肽及空白阴性对照品分别加入到反应板中，l00μL/孔，37℃，反应2h，用洗涤液洗3次；(5)加酶标抗抗体：兔抗鼠IgG-HRP，用封闭液l：8000稀释，100μL/孔，加盖37℃恒温箱温育1h，用洗涤液洗3次；(6)显色：TMB底物溶液100μL/孔，室温暗处放置10min；(7)终止反应：加50μL/孔终止液；(8)用酶标仪测定450nm处吸光值，当检测样品吸光度/阴性样品吸光度>2.5时，为阳性反应，以检测阳性反应的最大稀释度为待测样品的效价。结果显示本发明多肽的抗体效价为1：160000。
实施例2
抗肿瘤坏死因子抗体多肽对小鼠强迫游泳应激绝望模型的影响。
采用ICR小鼠作为受试动物，取50只小鼠，雌雄各半，体重为18-22g，随机分为5组：高剂量组、中剂量组、低剂量组，阳性对照组，空白组，每组l0只。治疗组皮下注射本发明多肽，剂量分别为36、18、9mg/Kg，对照组氟西汀，剂量为10mg/Kg，空白组给予生理盐水，连续给药7天。第7天给药后1h，小鼠进行强迫游泳实验，小鼠在20-25℃水中强迫游泳6min，记录后4min内不动时间，不动时间，即为小鼠在水中停止挣扎，仅将头露出水面漂浮的时间，以此评价本发明多肽对小鼠强迫游泳应激绝望模型的影响。
表1本发明多肽对小鼠强迫游泳应激绝望模型的影响
*p<0.05，**p<0.01与空白组相比
本发明多肽对小鼠强迫游泳应激绝望模型结果如表1显示：本发明多肽能够减少小鼠强迫游泳时间，在剂量在9-36mg/Kg时呈剂量依赖性，与空白组相比，具有统计学差异。
实施例3
抗肿瘤坏死因子抗体多肽对小鼠悬尾应激绝望模型的影响。
采用ICR小鼠作为受试动物，取50只小鼠，雌雄各半，体重为18-22g，随机分为5组：高剂量组、中剂量组、低剂量组，阳性对照组，空白组，每组l0只。治疗组皮下注射本发明多肽，剂量分别为36、18、9mg/Kg，对照组氟西汀，剂量为10mg/Kg，空白组给予生理盐水，连续给药7天。第7天给药后1h，小鼠进行悬尾实验，将小鼠用胶带固定在其尾部距末端约1cm处，使小鼠保持悬挂状态6min，记录后4min的不动时间，以此评价本发明多肽对小鼠悬尾应激绝望模型的影响。
表2本发明多肽对小鼠悬尾应激绝望模型的影响
*p<0.05，**p<0.01与空白组相比
本发明多肽对小鼠悬尾应激绝望模型结果如表2显示：本发明多肽能够减少小鼠悬尾时间，在剂量在9-36mg/Kg时呈剂量依赖性，与空白组相比，具有统计学差异。
实施例4
抗肿瘤坏死因子抗体多肽对大鼠慢性不可预测应激模型的影响。
采用SD大鼠作为受试动物，取60只大鼠，雌雄各半，体重为180-220g，随机分为6组，高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性对照组、模型组、空白组，每组l0只。建立大鼠慢性不可预测应激模型：应激内容为：束缚4h；湿垫料过夜；摇晃1h(160r/min)；禁食12h；冰水游泳4℃，10min；饲养笼倾斜45°过夜；夹尾1min；拥挤过夜(8只/笼)。白天使用两种应激，夜晚使用一种应激，连续应激4周。最后一次刺激后给药。给药方案：治疗组皮下注射本发明多肽，剂量分别为36、18、9mg/Kg，对照组氟西汀，剂量为10mg/Kg，空白组给予生理盐水，连续给药7天。第7天给药后1h，大鼠进行新奇觅食潜伏期实验和糖水偏好实验，以此评价本发明多肽对大鼠慢性不可预测应激模型的影响。新奇觅食潜伏期实验即：实验动物在进行24h禁食后，将动物置于一个长×宽×高为76.5cm×76.5cm×40cm的旷场中，旷场中间放有一定量的食物，动物从旷场的一角放入，观察动物在5min内成功觅食所花费的时间。同时试验后测量动物在5min内消耗的食物总重量，以此作为参考来判断实验动物饥饿程度是否一致。糖水偏好实验即：在糖水检测前用1％的糖水让动物适应48h，禁水4h后将动物置于放有两个相同水瓶的饲养笼中。这两只水瓶一只盛有1％的糖水，另一只装有自来水。记录1h内每只大鼠分别饮用糖水和自来水的体积。糖水偏好＝饮用的糖水体积/(饮用的糖水体积+自来水总体积)×100％。
表3本发明多肽对大鼠慢性不可预测应激模型的影响
| 药物 | 剂量 | 动物数(n) | 觅食潜伏期(min) | 糖水偏好(％) | |
| 模型组 | —— | —— | 10 | 1.56±0.34 | 34.37±5.71 |
| 阳性组 | 氟西汀 | 10mg/Kg | 10 | 3.76±0.43** | 67.65±15.44** |
| 高剂量组 | 本发明多肽 | 36mg/Kg | 10 | 3.53±0.35** | 73.64±30.14** |
| 中剂量组 | 本发明多肽 | 18mg/Kg | 10 | 3.05±0.54** | 59.75±12.05** |
| 低剂量组 | 本发明多肽 | 9mg/Kg | 10 | 2.72±0.47** | 52.41±20.42 |
*p<0.05，**p<0.01与模型组相比。
SEQUENCE LISTING
<110> 苏州普罗达生物科技有限公司
<120> 抗肿瘤坏死因子抗体多肽及其应用
<130>
<160> 1
<170> Patent In version 3.3
<210> 1
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ala Val Tyr Leu Gln Met Thr
1 5 10 15
Asp Leu Arg Thr Glu Asp
20
Claims (2)
1.抗肿瘤坏死因子抗体多肽，其特征在于其序列为SEQ ID NO：1。
2.抗肿瘤坏死因子抗体多肽在治疗重度抑郁症药物中的应用。
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2016
- 2016-08-30 CN CN201610764051.0A patent/CN106279413A/zh active Pending
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