CN106248948B - 一种用于自动免疫荧光标记的便携式微流控装置及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于自动免疫荧光标记的便携式微流控装置及使用方法,本装置包括免疫磁珠三维混合模块和免疫磁珠自动控制模块,所述的免疫磁珠自动控制模块,由微流控芯片位置控制组件和永磁铁位置控制组件构成。本发明所述装置能够使整个免疫磁珠混合过程在室温条件下进行,且整个过程自动完成,且所述装置易于集成其他操作单元,有利于进一步构建实时现场分析检测系统,有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种自动免疫荧光标记技术,特别是一种用于自动免疫荧光标记的便携式微流控装置及其使用方法,该装置尤其适用于构建实时现场分析检测系统,并应用于特殊环境。
背景技术
免疫荧光技术(immunofluorescence)是指将免疫学方法(抗原、抗体特异性结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法,它是根据抗原、抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体);利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质和定位,以及利用定量技术测定含量。免疫荧光技术应用广泛,可以测定内分泌激素、蛋白质、多肽、核酸、神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、肿瘤标志物、血药浓度等各种生物活性物质。免疫荧光标记一般涉及多步反应、清洗过程,常规方法往往需要专业人员在实验室中进行,不仅耗时费力,难以自动化和便携化,而且精度偏低、重复性较差;自动化工作站则成本偏高、体积偏大,不适合现场应用。
发明内容
为解决上述问题,本发明设计一种用于自动免疫荧光标记的便携式微流控装置,该装置尤其适用于构建实时现场分析检测装置,并可应用于特殊环境。
为了实现上述目的,本发明公开一种用于自动免疫荧光标记的便携式微流控装置,其技术方案包括免疫磁珠三维混合模块和免疫磁珠自动控制模块,二者共同完成基于微流控芯片的自动免疫荧光标记过程。其中:
所述的免疫磁珠三维混合模块:包括相对应的两个平行设置的圆板,和垂直贯穿于两个圆板的转轴,所述转轴于圆板上偏离圆心的位置穿过;所述圆板上分别设置有若干磁体;所述磁体在每个圆板上均匀排布,并且所述磁体在垂直位置上相互交错;
所述的免疫磁珠自动控制模块,由微流控芯片位置控制组件和永磁铁位置控制组件构成。
对于上文所述的用于自动免疫荧光标记的便携式微流控装置中,所述磁体设置于圆板中,在每个圆板上沿边缘均匀排布,且在垂直位置上相互交错。
对于上文所述的用于自动免疫荧光标记的便携式微流控装置中,还包括与转轴配合的驱动电机和转轴底座。
对于上文所述的用于自动免疫荧光标记的便携式微流控装置中,所述的微流控芯片位置控制组件中还包括用于固定微流控芯片的夹子和位置控制步进电机。
对于上文所述的用于自动免疫荧光标记的便携式微流控装置中,所述的永磁铁位置控制组件中包括永磁铁、永磁铁底座和位置控制步进电机。
本发明的另一方面在于保护上文所述装置的使用方法,其包括以下步骤:
①在微流控芯片混合池中加入免疫磁珠和样品,试剂池加入相应试剂,间隔池中加入间隔试剂;
②启动免疫磁珠三维混合模块,通过驱动转轴带动两个圆板旋转,使嵌合于圆板中的磁体产生周期性的三维磁场,从而驱动微流控芯片混合池中的免疫磁珠进行三维运动,实现高效混合;
③步骤②完成后,免疫磁珠三维混合模块关闭,微流控芯片位置控制组件启动,将微流控芯片沿水平方向移动至永磁铁位置控制组件上方并远离混合磁场区域;
④步骤③完成后,永磁铁位置控制组件启动,并在微流控芯片下方水平移动,通过控制永磁铁的移动,带动微流控芯片中的免疫磁珠顺次通过混合池、间隔池和试剂池。完成自动清洗和免疫荧光标记过程。
本发明具有以下有益效果:
1、本发明采用免疫磁珠作为样品高效混合及操控的载体,以微流控芯片及便携式磁场控制装置作为自动免疫荧光标记的操作平台,该装置具有自动化、便携化、低成本、易进一步集成等优点,可用于实时现场分析检测。
2、本发明通过微流控技术和机电一体化设备的方法,使整个免疫荧光标记过程可以在室温条件下进行,且全程快速、高效,无需专业人员操作,显著提高该免疫荧光标记方法的实用性。
附图说明
图1是用于自动免疫荧光标记的便携式微流控装置结构示意图;
图2免疫磁珠三维混合模块结构示意图;
图3是微流控芯片结构示意图;
图4免疫磁珠三维混合原理示意图;
图5微流控芯片位置控制组件结构侧视图;
图6永磁铁位置控制组件结构侧视图;
图7经辐射和自动免疫荧光标记后CD4淋巴细胞的辐射剂量-效应关系;
图中:1、免疫磁珠三维混合模块,11、上圆板,12、上圆板磁体;13、下圆板,14、下圆板磁体,15、转轴,16、驱动电机,17、转轴底座,2、微流控芯片位置控制组件,21、微流控芯片夹,22、微流控芯片位置控制步进电机,3、永磁铁位置控制组件,31、永磁铁,32、永磁铁位置控制步进电机,33、永磁铁底座,4、微流控芯片。
具体实施方式
下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明,但不以任何方式限制本发明。本发明所述装置的示意图中,结构尺寸均未标注,主要体现本装置的结构构造,实际生产使用过程中,可以根据需要调整结构比例和尺寸。
实施例1
下面结合附图对本发明作进一步描述。图1示出了本发明的整体结构框图,图2免疫磁珠三维混合模块结构示意图;由图可见,本发明由免疫磁珠三维混合模块1和免疫磁珠自动控制模块组成,其中,所述的免疫磁珠自动控制模块,由微流控芯片位置控制组件2和永磁铁位置控制组件3构成。此外,本装置使用过程中还有微流控芯片4。
其中,本发明所述免疫磁珠三维混合模块由上圆板11、下圆板13、上圆板磁铁12、下圆板磁铁14、转轴15、驱动电机16、转轴底座17和微流控芯片4组成。具体的,圆板11和圆板13相对应的水平平行设置,转轴15垂直贯穿于两个圆板,所述转轴15于圆板上偏离圆心的位置穿过;圆板通过转轴15由驱动电机16驱动;此微流控芯片中,用于混合免疫磁珠的混合池在本发明所述装置的磁场混合区域之内即可。双层圆板的直径为40mm,厚度为3mm,偏心距为3mm,圆板上各包括形状相同、对称分布的5个磁铁槽;磁铁槽直径5mm、高度6mm,安放直径5mm、高为6mm的钕铁硼永磁铁。本发明实施例中所使用的微流控芯片,其混合池位于微流控芯片的一端,为封闭结构,形状、长度和深度不限,所述圆板11和圆板13上分别设置有5个磁体;所述磁体在每个圆板上均匀排布,并且上圆板磁铁12、和下圆板磁铁14在垂直位置上相互交错;
所述的微流控芯片位置控制组件2包括用于固定微流控芯片的微流控芯片夹21和控制微流控芯片位置的滑台步进电机22;
所述永磁铁位置控制组件3中还包括永磁铁31、永磁铁位置控制步进电机32和永磁铁底座33。
实施例2
本实施例中所述的微流控芯片由常规方法制备:由底板层、通道层和加样孔层三块塑料(如PMMA)基片组成,采用雕刻机切割不同厚度的塑料板材和双面胶,按顺序进行组装,将组装好的芯片进行加热加压处理(如65℃,30min),即得到可用的微流控芯片。
图3为微流控芯片结构示意图,其中A为组装图;B为拆分图;其由上、中、下三层结构组成,中间层含有1个混合池和5个试剂池,分别加入样品、免疫磁珠以及免疫荧光标记所需各种试剂(如清洗缓冲液、荧光标记试剂等);试剂池之间为间隔池,其中加入间隔液以分隔相邻液池中不同的试剂。
由图3可知,利用本发明所述装置进行自动免疫荧光标记的方法,包括以下步骤:
A、微流控芯片准备。在微流控芯片样品池(左边第一个液池)中加入免疫磁珠和样品,其他液池加入相应试剂,最后在所有间隔池中加入间隔试剂;
B、将准备好的微流控芯片固定在微流控芯片夹上,启动免疫磁珠三维混合模块1,通过驱动转轴15带动两个圆板旋转,使嵌合于圆板中的磁体产生周期性的三维磁场,从而驱动微流控芯片混合池中的免疫磁珠进行三维运动,实现免疫磁珠与样品中抗原分子的高效混合;混合池在圆板间的磁场区域中完成混合后,在微流控芯片位置控制组件2控制下水平移动离开混合磁场区域,进入永磁铁自动控制区域,两种磁场的距离足够远,不会产生相互干扰。
C、基于微流控芯片的自动免疫荧光标记。微流控芯片位置控制组件2启动,将微流控芯片沿水平方向移动至永磁铁位置控制组件3上方后,永磁铁位置控制组件3启动,并在微流控芯片下方水平移动,通过控制永磁铁31的移动,带动微流控芯片中的免疫磁珠顺次通过混合池、间隔池和试剂池。完成自动清洗和免疫荧光标记过程。
以下结合图4示意图,详述免疫磁珠三维混合原理:
将装有样品与免疫磁珠的微流控芯片的混合池放置于本发明所述免疫磁珠三维混合模块的上圆板11、下圆板13之间的磁场区域中,启动驱动电机16后,上圆板11、下圆板13同时绕转轴15开始转动,当转动圆板时,位于两层圆板之间的微流控芯片4混合池内产生周期性渐变的三维磁场,使混合池内的磁珠做三维S型运动,进而实现免疫磁珠与样品(如细胞)的高效、快速混合,显著提高磁珠与细胞的结合率。经过1/2个周期,免疫磁珠从样品池一端沿着空间S型运动至样品池另一端(见图4,a-f),其运动轨迹如图4(g、h)所示。
图5和图6分别为微流控芯片位置控制组件2和永磁铁位置控制组件3示意图。
设定程序,当样品与免疫磁珠充分混合后,启动图5中的微流控芯片位置控制组件2,微流控芯片4自动从免疫磁珠三维混合模块1处移至指定位置,随后启动永磁铁位置控制步进电机32,按预定程序移动永磁铁31,从而控制免疫磁珠依次经过不同的液池、并与相应的试剂充分混合,完成自动清洗和免疫荧光标记过程。
实施例3
采用本发明的装置对接受不同剂量紫外辐射的人体CD4淋巴细胞进行自动免疫荧光标记,在微流控芯片左端样品池中加入辐照后的细胞和包被抗体的磁珠;在第二~第六个液池中分别加入细胞固定液、PBS缓冲液、破膜液(内含荧光标记抗体)、冲洗液和免疫磁珠解离溶液;最后在各间隔池加入间隔试剂。按既定程序即可完成免疫磁珠与细胞的高效混合及细胞的自动免疫荧光标记过程,全程在室温下进行且无需专业人员操作,图7为处理后CD4淋巴细胞的辐射剂量-效应关系,表明在实验范围内显示良好的线性关系。
Claims (6)
1.一种用于自动免疫荧光标记的便携式微流控装置,其特征在于:包括免疫磁珠三维混合模块和免疫磁珠自动控制模块,其中:
所述的免疫磁珠三维混合模块:包括相对应的两个平行设置的圆板,和垂直贯穿于两个圆板的转轴,所述转轴于圆板上偏离圆心的位置穿过;所述圆板上分别设置有若干磁体;所述磁体在每个圆板上均匀排布,并且所述磁体在垂直位置上相互交错;
所述的免疫磁珠自动控制模块,由微流控芯片位置控制组件和永磁铁位置控制组件构成;
所述微流控芯片由上、中、下三层结构组成,中间层含有1个混合池和5个试剂池;试剂池之间为间隔池;用于混合免疫磁珠的混合池在本发明所述装置的磁场混合区域之内。
2.根据权利要求1所述的用于自动免疫荧光标记的便携式微流控装置,其特征在于:所述磁体嵌合于圆板中,在每个圆板上沿边缘均匀排布,且在垂直位置上相互交错。
3.根据权利要求1所述的用于自动免疫荧光标记的便携式微流控装置,其特征在于:还包括与转轴配合的驱动电机和转轴底座。
4.根据权利要求1所述的用于自动免疫荧光标记的便携式微流控装置,其特征在于:微流控芯片位置控制组件中还包括用于固定微流控芯片的夹子和位置控制步进电机。
5.根据权利要求1所述的用于自动免疫荧光标记的便携式微流控装置,其特征在于:永磁铁位置控制组件中还包括永磁铁、永磁铁底座和位置控制步进电机。
6.如权利要求1所述装置的使用方法,其特征在于:包括以下步骤:
①在微流控芯片混合池中加入免疫磁珠和样品,试剂池加入相应试剂,间隔池中加入间隔试剂;
②启动免疫磁珠三维混合模块,通过驱动转轴带动两个圆板旋转,使设置于圆板中的磁体产生周期性的三维磁场,从而驱动微流控芯片混合池中的免疫磁珠进行三维运动,实现高效混合;
③步骤②完成后,免疫磁珠三维混合模块关闭,微流控芯片位置控制组件启动,将微流控芯片沿水平方向移动至永磁铁位置控制组件上方;
④步骤③完成后,永磁铁位置控制组件启动,并在微流控芯片下方水平移动,通过控制永磁铁的移动,带动微流控芯片中的免疫磁珠顺次通过混合池、间隔池和试剂池,完成自动清洗和免疫荧光标记过程。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |