CN103055972A - 一种新型毛细管电泳的微流控芯片及其制备方法 - Google Patents

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叶嘉明
沙俊
王晓东
聂富强
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Abstract

本发明涉及一种新型毛细管电泳的微流控芯片及其制备方法，该微流控芯片表面有微结构和微通道，原位制备了样品驱动的电渗泵，在分离主微通道的表面进行二氧化钛修饰，在电场的作用下，带电不同的待测物质实现分离。通过紫外光照二氧化钛修饰的分离主微通道，吸附在其表面的物质发生降解，从而提高了分离效率和准确性，主要应用于生物样品的分析等相关领域。该微流控芯片实现了生物混合溶液的快速分离和多次无差别分析检测，降低了试剂与样品的用量，减少了毛细管的更换频率，极大降低了毛细管电泳的分析成本，具有便携、经济、快速、高效的特点，为生物样品的分离相关领域提供了一种全新的分析技术。

Description

一种新型毛细管电泳的微流控芯片及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种新型毛细管电泳的微流控芯片及其制备方法，该微流控芯片表面有微结构和微通道，原位制备了样品驱动的电渗泵，在分离主微通道的表面进行二氧化钛修饰，在电场的作用下，带电不同的待测物质实现分离。通过紫外光照二氧化钛修饰的分离主微通道，吸附在其表面的物质发生降解，从而提高了分离效率和准确性，主要应用于生物样品的分析等相关领域。
背景技术
20世纪80年代后期，为了建立更类似于体内环境的培养体系，尽可能使体外环境与体内环境相吻合，从而使细胞间能相互沟通信息，相互支撑生长增殖，人们在细胞培养技术的基础上发展出了细胞共培养技术。细胞共培养技术是将2种或2种以上的细胞共同培养于同一环境中，由于其具有更好地反映体内环境的优点，所以这种方法被广泛应用于现代细胞研究中。
目前，细胞共培养技术最多应用于骨细胞和神经细胞。细胞共培养体系主要通过两种方法建立：①直接共培养体系，即将2种或2种以上的细胞同时或分别接种于同一孔中，不同种类的细胞之间直接接触；②间接共培养体系，即将2种或2种以上的细胞分别接种于不同的载体上，然后将这两种载体置于同一培养环境之中，使不同种类的细胞共用同一种培养体系而不直接接触。
共培养体系主要作用：诱导细胞向另一种细胞分化；诱导细胞自身分化；维持细胞功能和活力；调控细胞增殖；促进早期胚胎发育和提高代谢产物产量。从上世纪30年代开始，细胞培养逐渐成为研究人员实验过程中不可缺少的重要步骤，其载体工具：培养皿/培养瓶也逐步被大家所认可，成为了一种常规的实验耗材。虽然到目前为止，很多科学家认为培养皿/培养瓶的这种体外培养条件与体内生长环境有着显著的不同，但是由于没有更好的培养载体来改变这个现状，所以生物学家们也只能退而求次的默认这种情况的存在。但是近来，一种Petaka细胞培养系统的问世，获得美国、欧洲广大生物科学家的青睐，培养皿/培养瓶的一些致命缺陷又再一次被提及，成为研究人员热烈讨论的话题之一。
常规的细胞培养皿很难完成多种细胞的共培养，因此，发展一种便捷、快速、高效、低成本的多细胞培养技术，是细胞生物学等领域的迫切需求。近年来，微流控芯片分析技术已成为分析化学中一个重要的研究方向，是其中最活跃的一支，无论是在科研还是应用领域都获得了广泛的重视。微流控芯片作为一种新型的分析检测平台，具有高通量、集成化、多重平行分析、便携式、易操作、成本低等优点，已经在众多领域获得了广泛应用。然而，采用微流控芯片，在其表面制备微结构和微通道，依靠微通道中多层液体之间的层流效应驱动样品微流体，同时完成多种细胞的植入技术，目前在多种细胞共培养的应用领域尚未有实质性的突破。
多种细胞共培养微流控芯片能将2种或2种以上的细胞共同培养于同一环境中，能更真实地反映人体组织细胞之间的互相影响，有利于实验者观察细胞与细胞之间互相作用，特别是多个细胞对一个细胞的影响，也有利于快速筛选新药的疗效和毒性。
发明内容
本发明的目的是提供了一种新型毛细管电泳的微流控芯片及其制备方法，该微流控芯片表面有微结构和微通道，原位制备了样品驱动的电渗泵，在分离主微通道的表面进行二氧化钛修饰，在电场的作用下，带电不同的待测物质实现分离。通过紫外光照二氧化钛修饰的分离主微通道，吸附在其表面的物质发生降解，从而提高了分离效率和准确性，主要应用于生物样品的分析等相关领域。
为实现上述目的，本发明采用以下的操作步骤：
(1)用计算机辅助设计软件设计和绘制微流控芯片中各层芯片的微结构和微通道图形。
(2)通过微加工技术在各层微流控芯片基材表面和粘性薄膜上加工所需的微结构和微通道，包括进样孔、分离主通道和分离分通道。
(3)将三段(1厘米，直径150微米)的毛细管预埋入电渗泵微槽中，用环氧胶进行密封与固定。
(4)将二氧化钛溶液注入分离主微通道中，通过物理吸附进行固定，去除残留的二氧化钛溶液。
(5)利用双层粘性薄膜，将各层微流控芯片对齐、粘合、加压封合，组成新型毛细管电泳的微流控芯片。
本发明中，新型毛细管电泳的微流控芯片的芯片基材可以是PMMA、PC、PVC、COC、铜、铝、不锈钢、硅片、玻璃圆片，也可是市售的各类普通CD光盘。
本发明中，新型毛细管电泳的微流控芯片和粘性薄膜的微结构和微通道可以通过数控铣刻、激光刻蚀、LIGA技术、模塑法、热压法、化学腐蚀制备，也可用软刻蚀技术制备。
本发明中，新型毛细管电泳的微流控芯片是由两层芯片组成，各层芯片之间用粘性薄膜贴合，粘性薄膜可以是双层力致粘性薄膜，也可是普通双面胶薄膜。
本发明中，新型毛细管电泳的微流控芯片上的样品溶液的驱动依靠电渗泵产生的电渗流。
本发明中，新型毛细管电泳的微流控芯片的分离主微通道进行了二氧化钛的表面修饰。
本发明中，新型毛细管电泳的微流控芯片的清洗通过紫外光照二氧化钛修饰的分离主微通道，进行吸附物质的降解和去除。
本发明提出的新型毛细管电泳的微流控芯片及其制备方法，操作简单、实现了生物样品的多次无差别的检测，降低了试剂与样品的用量，减少了毛细管的更换频率，极大降低了毛细管电泳的分析成本，具有便携、经济、快速、高效的特点，在生物样品的分离相关领域中具有良好的应用前景。
附图说明
图1.新型毛细管电泳的微流控芯片的结构示意图。
a.电压控制面板，b.电渗泵，c.二氧化钛修饰表面，d.紫外光照，e.紫外检测窗口。
具体实施方案
实施例1
用计算机辅助设计软件设计和绘制离心式微流控芯片的两层芯片的微结构和微通道图形。利用数控CNC系统加工制备两层聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)芯片的微结构和微通道，分别用自来水、蒸馏水清洗各层芯片，并用乙醇擦拭芯片表面残留的指纹、油渍等污渍。在双面胶薄膜上，用刻字机加工制备所需的微结构和微通道。将三段(1厘米，直径150微米)的毛细管预埋入电渗泵微槽中，用环氧胶进行密封与固定。将二氧化钛溶液注入分离主微通道中，通过物理吸附进行固定，去除残留的二氧化钛溶液。将两层芯片小心对齐、粘合、加压封合，制成新型毛细管电泳的微流控芯片。将多种蛋白质样品溶液注入进样注入孔，施加电场，溶液在电渗泵驱动下进入分离主微通道，在电场的作用下，电荷不同的蛋白质待测物的移动速度不同，从而实现分离，进入检测窗口后，分别被检测出其含量。
实施例2
用计算机辅助设计软件设计和绘制离心式微流控芯片的两层芯片的微结构和微通道图形。利用数控CNC系统加工制备两层圆片状聚碳酸酯(PC)芯片的微结构和微通道，分别用自来水、蒸馏水清洗各层芯片，并用乙醇擦拭芯片表面残留的指纹、油渍等污渍。在双面胶薄膜上，用刻字机加工制备所需的微结构和微通道。将三段(1厘米，直径150微米)的毛细管预埋入电渗泵微槽中，用环氧胶进行密封与固定。将二氧化钛溶液注入分离主微通道中，通过物理吸附进行固定，去除残留的二氧化钛溶液。将两层芯片小心对齐、粘合、加压封合，制成新型毛细管电泳的微流控芯片。将多种多肽样品溶液注入进样注入孔，施加电场，溶液在电渗泵驱动下进入分离主微通道，在电场的作用下，电荷不同的多肽待测物的移动速度不同，从而实现分离，进入检测窗口后，分别被检测出其含量。

Claims (10)

1.一种新型毛细管电泳的微流控芯片及其制备方法，其特征在于该微流控芯片表面有微结构和微通道，原位制备了样品驱动的电渗泵，在分离主微通道的表面进行二氧化钛修饰，在电场的作用下，带电不同的待测物质实现分离。通过紫外光照二氧化钛修饰的分离主微通道，吸附在其表面的物质发生降解，从而提高了分离效率和准确性。
2.按权利要求1所述的新型毛细管电泳的微流控芯片及其制备方法，其特征在于，其制作步骤如下：
(1)用计算机辅助设计软件设计和绘制微流控芯片中各层芯片的微结构和微通道图形。
(2)通过微加工技术在各层微流控芯片基材表面和粘性薄膜上加工所需的微结构和微通道，包括进样孔、分离主通道和分离分通道。
(3)将三段(1厘米，直径150微米)的毛细管预埋入电渗泵微槽中，用环氧胶进行密封与固定。
(4)将二氧化钛溶液注入分离主微通道中，通过物理吸附进行固定，去除残留的二氧化钛溶液。
(5)利用双层粘性薄膜，将各层微流控芯片对齐、粘合、加压封合，组成新型毛细管电泳的微流控芯片。
3.按权利要求1或2所述的新型毛细管电泳的微流控芯片及其制备方法，其特征在于，这种新型毛细管电泳芯片的核心功能器件是微流控芯片，此芯片以电渗泵产生的电渗流作为混合溶液流动的驱动力，可以批量生产、多次利用、灵活设计与组装。
4.按权利要求1或2所述的新型毛细管电泳的微流控芯片及其制备方法，其特征在于，这种新型毛细管电泳芯片上的微结构和微通道是通过数控铣刻、激光刻蚀、LIGA技术、模塑法、热压法、化学腐蚀、软刻蚀技术的微加工方法在芯片基材表面制备，尺寸在微米级别。
5.按权利要求1或2所述的新型毛细管电泳的微流控芯片及其制备方法，其特征在于，这种新型毛细管电泳芯片是由两层芯片叠加而成，构成三维立体的微结构和微通道网络。
6.按权利要求1或2所述的新型毛细管电泳的微流控芯片及其制备方法，其特征在于，这种新型毛细管电泳芯片可以在一块芯片上制作多组微结构和微通道，构成多组分离单元，可同时分离多组混合溶液，提高了单位时间的平行分离能力。
7.按权利要求1或2所述的新型毛细管电泳的微流控芯片及其制备方法，其特征在于，这种新型毛细管电泳芯片通过施加一定的电场完成分离主微通道中生物样品混合溶液的分离。
8.按权利要求1或2所述的新型毛细管电泳的微流控芯片及其制备方法，其特征在于，这种新型毛细管电泳芯片对分离主微通道的表面进行了二氧化钛修饰处理，在紫外光照下，降解和去除吸附物，实现自我修复。
9.按权利要求1或2所述的新型毛细管电泳的微流控芯片及其制备方法，其特征在于，这种新型毛细管电泳芯片适合生物样品混合溶液多次分离。
10.按权利要求1或2所述的新型毛细管电泳的微流控芯片及其制备方法，其特征在于，这种新型毛细管电泳芯片具有便携、经济、快速、高效、平行分离能力高、样品交叉污染几率小，在生物样品分离所涉及的众多相关领域具有广泛的应用前景。
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