CN106236004B - 一种具有防止细菌残留功能的胃镜 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有防止细菌残留的胃镜。在该胃镜的表面涂上一层具有杀菌作用抗菌肽层，所述的抗菌肽具有较好的杀死幽门螺杆菌等细菌的功能。所述的胃镜制备简单，成本低廉，具有较好的杀菌效果，适宜于大规模的推广，能够有效的降低患者间交叉感染的风险，减少患者焦虑情绪，具有很好的应用前景。

Description

一种具有防止细菌残留功能的胃镜

技术领域

本发明属于医疗器材领域，具体的说，涉及一种载缓释抗菌肽涂层的医用胃镜及其制备方法。

背景技术

目前，消化内科对于上消化道疾病一般采用胃镜检查，胃镜是一种价值较昂贵的医疗器械，主要用于对食道、胃及十二指肠疾病的诊断与治疗。胃镜主要由镜身、操作部及光源组成，使用时将镜身插进患者的食道、胃及十二指肠，通过借助微型CCD荧屏显示对病灶进行细致观察，或通过其他辅助设备获得病灶面清晰图象，以帮助医生对患者病情做出准确及时的诊断与治疗。胃镜检查时，先对咽部局部麻醉，然后患者通过上下牙齿咬住口圈，将胃镜插入管缓缓从口腔插入消化道内，前端装有内视镜，对消化道疾病进行检查窥视。

根据相关规定，使用过的胃镜需要彻底清洗、消毒后，才能再次应用于临床，目前的清洗方法是将胃镜放入清洗池或全自动内镜清洗机内清洗消毒，干燥后即使用时。由于在做胃镜检查时，胃镜从咽喉部进入食道、胃和十二指肠处需要较长时间，这样插入管大部分裸露在外，容易被空气中悬浮的病原微生物污染，尤其是反复进镜和退镜的情况下，更增加了患者的心理负担。而且消毒后的胃镜储存在镜柜中，第二天使用前需要重新清洗消毒，增加了洗消人员的负担。

现有技术中对胃镜结构进行改进，以避免细菌的污染，但是该方法只能够针对空气中的病原微生物进行清除，对于残留在胃镜内部的患者体内的病原菌并不能够起到彻底的杀灭作用。

抗菌肽是一类对细菌具有很强杀菌效果的小多肽，自上世纪80年代以来，抗菌肽作为生物天然免疫的组成成分之一开始为人们所发现和认识，其后不断有新的抗菌肽在各种生物中发现并被认为是抗感染治疗的未来药物。它具有携带正电荷、极少耐药、杀菌谱广、种类繁多、对哺乳动物细胞毒性低等特点。抗菌肽的作用机制不同于传统的抗生素，病原菌不易对其产生耐药性，而且，一些抗菌肽对病原菌有很强的杀菌活性，因此有望利用抗菌肽杀灭细菌特别是幽门螺杆菌。而将该抗菌肽用于胃镜的表面膜的涂覆，即可实现胃镜的表面杀菌的效果。

发明内容

本发明的目的就是针对现有技术存在的缺陷，提供一种结构简单，设计合理，既防止患者在胃镜检查过程中产生交叉感染，也防止胃镜本身携带病原菌的交叉感染，减轻患者心理负担的胃镜。

本发明的目的之一在于提供一种强力抗感染和抑制细菌形成的载缓释抗菌肽涂层医用胃镜。

本发明的目的之二在于提供一种载缓释抗菌肽涂层医用胃镜的制造方法。

本发明是这样实现的：

一种载缓释抗菌肽涂层医用胃镜，包括胃镜本体，其特征在于：所述胃镜插入管的内外表面均包覆有抗菌肽缓释层，所述抗菌肽缓释层为结合有抗菌肽聚合物涂层。

上述抗菌素缓释层厚度为5～30μm。

本发明的其中一个技术方案提供一种胃镜抗菌肽表面涂层的制备方法，将胃镜的插入管浸入聚乙烯亚胺的水溶液，该水溶液中聚乙烯亚胺的浓度为5-10mg/mL，含0.14mol/L NaCl中往复振荡浸泡40分钟，会在胃镜插入管的内外表面形成聚合物底层；然后置于100mL质量百分比浓度为0.01％的4，4’-二苯基二硫醇的甲醇溶液中反应5小时，反应后的插入管经甲醇充分浸洗后真空干燥，与RWPSNQFDQHICSLGFAI或RTHMKRHDRRNMYTTVDP任一所示的抗菌肽分别在辣根过氧化物酶和过氧化氢作用下反应，得到表面键合抗菌多肽的胃镜插入管。当胃镜插入管与细菌细胞接触时，插入管表面的二硫键断裂，还原释放多肽，发挥杀菌作用。

本发明另外提供一种抗菌肽的制备方法，所述的抗菌肽RWPSNQFDQHICSLGFAI或RTHMKRHDRRNMYTTVDP为申请人通过获得的海参基因组序列，寻找其中具有潜在编码功能的小开放阅读框，将这些小开放阅读框分别翻译出对应的氨基酸序列，利用三维结构分析软件从中筛选抗菌肽，根据预测筛选的抗菌肽序列，利用固相合成法合成其中的部分多肽，并且使C端酰胺化，N端不含有蛋氨酸，制备抗菌肽，进行相应的功能验证，筛选得到了2个抗菌肽。

本发明的有益效果在于：本方法制备的带有抗菌肽涂层的胃镜，具有防止胃镜插入管在患者体内使用后携带了该患者体内的病菌，进而导致其他患者发生交叉感染，从而导致细菌感染发生的风险，具有极大的应用前景和重要的社会价值。该发明可以大面积的推广，既能节省消毒的成本，又能降低患者的焦虑感。

具体实施方式

实施例1胃镜涂覆层的制备

将胃镜的插入管充分清洗、消毒后，依次分别在蒸馏水、丙酮、70％乙醇、超纯水中超声清洗5分钟、10分钟、10分钟、5分钟后，再用过氧乙烷熏蒸灭菌处理后，浸入聚乙烯亚胺的水溶液，该水溶液中聚乙烯亚胺的浓度为10mg/mL，含0.14mol/L NaCl中往复振荡浸泡40分钟，会在胃镜插入管的内外表面形成聚合物底层；然后置于100mL质量百分比浓度为0.01％的4，4’-二苯基二硫醇的甲醇溶液中反应5小时，反应后的插入管经甲醇充分浸洗后真空干燥，与SJ-1抗菌肽：RWPSNQFDQHICSLGFAI或SJ-2抗菌肽：RTHMKRHDRRNMYTTVDP分别在辣根过氧化物酶和过氧化氢作用下反应，得到表面键合抗菌多肽的胃镜插入管，分别命名为SJ-1胃镜和SJ-2胃镜。

实施例2抗菌肽的效果验证

将SJ-1多肽用蒸馏水溶解成浓度为2mg/mL，采用琼脂糖扩散法进行抗菌活性检测。琼脂糖扩散法中使用的菌株为大肠杆菌、金黄葡萄球菌、幽门螺杆菌、粘质沙雷菌的组合。菌株复苏后，接种于普通LB培养基37℃过夜培养后，(白色假丝酵母接种于PD培养基中30℃过夜培养)分别取50μL菌液涂布于LB固体培养基。静置带菌液吸收后，分别加入浓度为2mg/mL的多肽溶液10μL。37℃培养16小时后，观察抑菌圈的有无和大小。同时观察抑菌圈一周内是否有变化，判断抑菌时间长短。结果见下表。

+表示具有抑菌圈。

所述的二个多肽具有较大的抑菌圈。同时观察抑菌圈一周之内具有持续扩大的趋势，并且抑菌时间较长。

通过本领域最常用的细菌抑菌浓度测定多肽的最小抑菌浓度，将多肽配置成为一定储存液以备使用。利用微量肉汤稀释法测定几种抗菌肽的最小抑菌浓度。以0.01％乙酸(含0.2％BSA)作为稀释液，使用二倍稀释法依次配置系列梯度的抗菌肽溶液。取上述溶液100μL置于96孔细胞培养板中，然后分别添加等体积的待测菌液(10⁶个/mL)于各孔中。分别设置阳性对照(含有菌液而不含有抗菌肽)和阴性对照(既不含菌液也不含肽)。37℃恒温培养20小时，以肉眼未见孔底部有混浊现象的即为最小抑菌浓度。通过检测结果如下：

从以上结果可以看出，二个多肽具有较好的抑制细菌生长的效果，并且抑菌效果显著。

实施例3抗菌肽的溶血活性

采集人或者兔的新鲜血液1mL，肝素抗凝后溶解到PBS溶液中，1000g离心5min，收集红细胞；用PBS洗涤3遍，再用10ml PBS重悬；取100μL红细胞悬液与100μL用PBS溶解的不同浓度的抗菌肽溶液混合均匀，在37℃培养箱内恒温孵育1小时；1小时后取出，4℃条件下1000g离心5min；取出上清液用酶标仪在540nm处测光吸收值；每组取平均值，并比较分析。其中100μL PBS作为阴性对照；100μL 0.2％Tritonx-100作为阳性对照。结果发现，二个抗菌肽分别在1500μg/mL的浓度下均没有发生溶血现象，具有极大的应用空间。

实施例4含有多肽涂层的胃镜的抗菌性检测

将实施例1制备得到的两种胃镜以及没有多肽涂层的普通胃镜，分别给予具有幽门螺杆菌阳性的胃病患者使用，使用后，通过常规的清洗方式进行清洗。之后，在无菌的环境中，将胃镜内外表面分别置于PBS水环境中震荡、冲洗45min，然后通过滤菌膜过滤水体，将滤菌膜表面用培养基冲洗，37℃培养24小时，之后检测发现，采用实施例1制备得到的二种胃镜中没有检测到细菌的存在，而没有多肽涂层的普通胃镜中检测到了幽门螺杆菌的存在，这也说明，多肽涂层具有较好的抑制细菌在胃镜插入管中残留的功能。

Claims (2)

1.一种具有抗菌肽涂层的医用胃镜，包括胃镜本体，其特征在于：所述胃镜插入管的内外表面均包覆有抗菌肽缓释层，所述抗菌肽缓释层为结合有抗菌肽聚合物涂层，所述抗菌肽的序列为RWPSNQFDQHICSLGFAI或RTHMKRHDRRNMYTTVDP。

2.RWPSNQFDQHICSLGFAI或RTHMKRHDRRNMYTTVDP的多肽在作为抗菌肽缓释层用于制备医 用胃镜中的应用。