CN106191168B - 一种以木质纤维素为原料制备高浓度发酵糖溶液的方法 - Google Patents
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Abstract
一种以木质纤维素为原料制备高浓度发酵糖溶液的方法,其特征在于,包括以下操作步骤:(1)木质纤维素以固态形式进行辐照预处理,以破坏木质纤维素的化学和物理结构,有助于后续物料粉碎和糖化;(2)辐照预处理后物料经粉碎后进行第一步水解糖化,在溶液中进行催化降解,固体残渣回收进行第二步酶解糖化;(3)第二步酶解糖化,是将固体残渣用纤维素酶进一步水解,得到富含葡萄糖的高浓度发酵糖溶液;本发明中,木质纤维素辐照预处理后容易粉碎,所需能耗降低3倍以上,时间缩短2倍以上,传质效果佳,适合物料高装载量的水解糖化,有利于降低操作成本。纤维素固体残渣很容易被酶解,葡萄糖、总糖浓度是目前文献报道最高。
Description
技术领域
本发明属于再生资源循环利用和生物质能源领域,具体涉及一种以木质纤维素为原料制备高浓度发酵糖的方法。
背景技术
近年来,社会对资源的需求与日俱增,传统化石资源储量逐渐减少,满足不了人类社会可持续发展的需要;另一方面,燃烧化石资源造成的环境污染和温室效应,也带来了严重的环境和社会问题。因此,寻求清洁可再生的“资源替代”和“过程替代”已经迫在眉睫。生物质是地球上储量最丰富的可再生资源库,可代替石油生产各种生物燃料和生物基化学品,产生良好的环境效益。譬如,生物乙醇代替汽油,可有效地降低温室气体排放量;生物乳酸可用作为生物兼容和可降解的医用材料。2004年,美国能源部指出,由生物质制取糖类化合物,是非常重要的平台化合物,然后通过生物炼制技术可以转化为各种各样的化学和生物产品:燃料替代品如乙醇,烷烃等;材料替代品如乳酸,丁二酸等;食品替代品如木糖醇,山梨糖醇等等。
通过查阅专利和文献报道,我们发现,木质纤维素制糖是决定木质纤维素生物炼制放大成本的关键步骤,至今仍存在诸多挑战。木质纤维素生物质中碳水化合物包含纤维素和半纤维素,其中纤维素是葡萄糖单体经过β1-4糖苷键聚合而成,约占30-40%,半纤维素主要成分是木聚糖,还包含少量的葡萄糖、阿拉伯糖、甘露糖等,约占15-33%。目前,阻碍木质纤维素生物炼制产业化的困难在于,纤维素和半纤维素水解效率低,水解液中糖浓度不高,后续发酵目标产物浓度低,分离成本大。以生物乙醇发酵为例,工业化纤维素乙醇浓度要求达到40g/L以上,意味着水解液中糖浓度理论上至少需要80g/L。因此,高浓度可发酵糖溶液的制备,是木质纤维素生物炼制工程化的关键所在。
提高木质纤维素水解液中糖浓度和发酵目标产物产量的方法,主要集中于原料预处理和发酵过程优化。国外文献(DOI:10.1039/c5ee03718b,2016)报道了以玉米秸秆为原料,通过脱乙酰化-机械精炼和纤维素酶水解,制得总糖浓度为230g/L的水解液,酵母发酵后,乙醇浓度86g/L。国外文献(DOI:10.1039/c5ee02940f,2015)报道了一种以玉米秸秆为原料,通过离子液体预处理,分批补料(物料装载量~30%),同步糖化发酵技术,乙醇浓度41g/L。国内文献(DOI:10.13880/j.cnki.65-1174/n.2015.01.005,2015)报道了以棉花秸秆为原料,通过浓度为2.3%稀硫酸预处理,水解时间为55min,得到可发酵糖产量最高为11.81g/100g棉花秸秆。发明专利(CN101899479A,2010)公布了一种以农业废弃物为原料,通过稀酸高温蒸煮预处理、脱毒、脱色、离子交换、浓缩等工艺步骤,制备了高浓度糖液,用于木糖醇的生产。专利(CN103467532A,2013)公开了一种以玉米芯为原料,通过稀酸预处理和闪蒸喷爆的技术路线,制备木糖溶液。专利(CN102766703A,2012)公布了一种以甲酸,乙酸和卤素盐催化木质纤维素,制备高浓度糖液的方法,糖浓度高为90.0-130g/L。
可以看出,目前公开有关木质纤维素制备高浓度糖溶液的专利和文献,技术上往往存在工艺操作过程繁杂(包括预处理、水解、浓缩等工艺)、水解时外加催化剂(如稀酸或离子液体等)、反应条件苛刻(反应温度≥200℃)、发酵糖浓度低(葡萄糖最高浓度~130g/L)、装载量少(固载量≤30%)等不足。针对上述问题,本发明提供了一种原料固相辐照预处理,继而通过高物料一次水解和二次酶解糖化,可获得高浓度发酵木糖和葡萄糖溶液的方法。本发明整个水解过程,无需添加酸催化剂,绿色经济。
发明内容
本发明目的是提供一种辐照预处理木质纤维素,高物料水解糖化,制备高浓度可发酵糖溶液的方法。
为实现上述目的,本发明以木质纤维素为原料,经由辐照预处理,高物料水解和酶解糖化,制备高浓度C5和C6可发酵糖溶液。主要包括以下操作步骤:
1.木质纤维素切成大块(5-10cm),以固相形式进行高能辐照预处理,破坏木质纤维素化学和物理结构,促进后续粉碎和水解糖化。
(2)辐照预处理后物料经粉碎后进行第一步水解糖化,在溶液中进行催化降解,水解液过滤得到富含木糖的高浓度发酵糖,发酵糖浓度为100g/L以上,固体残渣回收进行第二步酶解糖化;水解糖化温度为100-200℃,水解时间为0.5-2h;
(3)第二步酶解糖化,是将固体残渣用纤维素酶进一步水解,得到富含葡萄糖的高浓度发酵糖溶液;发酵糖溶液浓度达200g/L;纤维素酶用量为1-50mg酶蛋白/g纤维素;酶解糖化温度为40-60℃,酶解时间为24-96h。
其中,第一步水解糖化溶液是指纯水、水与有机溶剂混合物,含酸水溶液中的任何一种。
所述方法,其中,高浓度发酵糖溶液是指,生物质第一步水解糖化时,富含木糖的发酵总糖浓度可达128g/L,纤维残渣第二步酶解糖化时,富含葡萄糖的发酵总糖浓度可达257g/L。
所述方法,其中,木质纤维素包括林业废弃物、农业废弃物和工业废弃物等生物质。
所述方法,其中,辐照预处理射线种类包含γ-辐射、电子、等离子体等任何一种。
所述方法,其中,辐射剂量范围为100-2000kGy。
所述方法,其中的,木质纤维素辐照预处理后,以高物料比进行第一步水解糖化,水解体系包括去离子纯水、有机溶剂/水混合溶液、稀酸水溶液等中的任何一种。
所述方法,其中,第一步水解糖化时,物料浓度为15-50wt.%,水解糖化温度为100-190℃,水解时间为0.5-2h。
所述方法,其中,稀酸水溶液中,酸的种类为硫酸、盐酸、乙酸、甲酸、固体酸等中的任何一种,酸浓度为1-50mM。
所述方法,其中,有机溶剂/水混合体系中,有机溶剂包括乙醇、四氢呋喃、γ-戊内酯、二恶烷、乙腈、丙酮等中的任何一种,水与有机溶剂体积比为1:9-9:1。
所述方法,其中,高物料酶解糖化时,所用酶为纤维素酶、半纤维素酶、葡聚糖酶等中的一种或一种以上混合酶。
所述方法,其中,酶用量为1-50mg酶蛋白/g纤维素。酶解糖化温度为40-60℃,酶解时间为24-96h。
本发明的积极作用
相对于已报道文献和专利,本发明具有以下积极作用:
1.本发明中,木质纤维素辐照预处理后容易粉碎,所需能耗降低3倍以上,时间缩短2倍以上,粉碎颗粒粒径更小,在高物料条件下黏度较低,传质效果佳,适合物料高装载量的水解糖化,有利于降低操作成本。
2.本发明中,木质纤维素辐照预处理后产生的乙酰基酸位点,具有自催化降解特性,无需添加外来催化剂,在温和条件下,半纤维素水解转化率为99%,第一步水解后,总糖浓度为73-127g/L。
3.本发明中,纤维素固体残渣很容易被酶解,纤维素酶解率为90-99%,葡萄糖最高浓度为204.5g/L,总糖最高浓度为257g/L,是目前文献报道最高。
附图说明
图1木质纤维素辐照预处理后粉碎所需能耗、时间及其粒径大小。
图2芦苇辐照预处理后的粒径分布、黏度大小和自催化降解效果。
图3 X射线光电子能谱分析芦苇辐照预处理前后的O/C质量比和化学态。
图4芦苇辐照预处理后的水解糖化物料衡算。
图5一种以木质纤维素为原料制备高浓度发酵糖溶液的技术路线。
具体实施方式
结合以下具体实施例,进一步解释本发明,仅以5种不同木质纤维素为原料,采用60Co-γ辐照预处理,通过一次水解和二次酶解,制备高浓度发酵木糖和葡萄糖为例,来说明本发明的具体实施方式,而非用于限定本发明的范围。
案例1:木质纤维素辐照预处理后,一次水解糖化制备高浓度还原糖溶液,主要实验步骤和结果如下:
1.自然干燥的木质纤维素原料,包含芦苇,玉米芯,甘蔗渣,松木,桉木切成5-10cm碎片,用60Co-γ辐照预处理,辐照剂量约为800kGy,每次处理原料2000g,处理时间20d,之后,用粉碎机(DFY-1000C,大德药机)粉碎过60目筛子,备用。
2.采用激光粒度分析仪(MASTERSIZER 2000,MALVERN)和旋转黏度计(HB DV-II,BROOKFIELD)测定原料碎粒径和高物料条件下的黏度,采用酸碱滴定法和X射线光电子能谱测定(ESCALAB 250,ThermoFisher Scientific)分析原料的化学结构变化。
3.从图1可以看出,与未处理木质纤维素相比,辐照预处理后原料,粉碎所需能耗降低了3-4倍,时间缩短了2-4倍,粉碎颗粒粒径更小。
4.从图2可以看出,辐照原料粉碎后,粒径集中于29.4μm,未处理原料粉碎后,粒径主要为117.0μm。辐照原料粉碎后,堆积密度增加了2倍,在物料浓度是未辐照原料2倍条件下,剪切黏度低10倍以上。
5.从表1和图3看出,辐照预处理后,原料发生了氧化,O/C质量浓度比增加了17%,原料中酸位点增加了2-5倍。
6.采用以下2种方法,进行高物料浓度的第一步水解糖化,制备高浓度还原糖溶液:
方法1:辐照预处理生物质以一定物料比与去离子水混合(见表2),在500ml反应釜中,反应1小时,反应结束后,冷却至40℃以下,过滤,分别收集滤液和固体残渣,滤液即为富含木糖水溶液,用高效液相色谱(ALLTECH 1500)分析糖类组成及其含量。
方法2:辐照预处理生物质以一定的物料比与水/γ-戊内酯(GVL,体积比6:4)混合(见表2),170℃条件下,在500ml反应釜中,反应1小时,反应结束后,通冷凝水将反应釜温度降到40℃以下,反应物用布氏漏斗过滤,得滤液和残渣。残渣用水洗后,60℃烘箱干燥48h,保藏备用。滤液用等体积乙酸乙酯萃取3次,合并萃取液,静置分相,有机相用于回收γ-戊内酯(Sigma,V900552),水相即为富含木糖水溶液,用高效液相色谱(ALLTECH 1500)分析糖类组成及其含量。
7.从表2可以看出,木质纤维素经过辐照预处理后,都很容易降解,秸秆类原料半纤维素转化率为96-99%,软硬木类半纤维素转化率~85%,总发酵糖溶液浓度为75-128g/L。
表1辐照对木质纤维素酸密度的影响。
表2辐照木质纤维素的第一步水解效果与还原糖浓度
案例2:纤维素残渣高物料二次酶解糖化,制备高浓度发酵糖溶液,主要实验步骤和结果如下:
1.案例1得到的纤维素固体残渣按表3中的物料浓度,与浓度50mM,pH5.0柠檬酸缓冲液(北京化工厂)混合,加入纤维素酶(Sigma,C9748),加酶量为20mg酶蛋白/g纤维素,在200rpm,50℃摇床(IS-RDV1,CRYSTAL)中反应96小时,水解液10,000×g离心10分钟,上清液即为高葡萄糖浓度溶液,含量采用高效液相色谱测定。
2.从表3可以看出,经过案例1水解糖化后残渣,纤维素酶解效果显著,纤维素和半纤维素转化率为90-99%,总发酵糖浓度高为173-257g/L。
表3纤维素残渣的第二步酶解效果与还原糖浓度
案例3.以芦苇生物质为例,分析生物质辐照预处理后,第一步水解和第二步酶解糖化,纤维素和半纤维素降解的物料衡算,主要实验步骤和结果如下:
1.以辐照芦苇为原料,根据案例1和案例2实验数据,建立纤维素、半纤维素、C5和C6等物质的衡算模型。
2.如图4所示,1kg芦苇中含有373g葡聚糖和171g木聚糖,经过两步高物料糖化后,分别得到413g葡萄糖和可溶性低聚葡萄糖,181g木糖和可溶性低聚木糖。C6得率为理论值的99%,C5得率为理论值的93%。
Claims (1)
1.一种以木质纤维素为原料制备高浓度发酵糖溶液的方法,其特征在于,包括以下操作步骤:
(1)木质纤维素以固态形式进行辐照预处理,以破坏木质纤维素的化学和物理结构,有助于后续物料粉碎和糖化;所述木质纤维素为玉米芯、甘蔗或芦苇;所述辐照预处理为用60Co-γ辐照预处理,辐照剂量为800kGy,每次处理原料2000g,处理时间20d,之后,用粉碎机粉碎过60目筛子,备用;
(2)辐照预处理后物料经粉碎后进行第一步水解糖化,水解糖化的溶液为水与γ-戊内酯的混合液,其体积比为6:4;水解液过滤得到富含木糖的高浓度发酵糖,发酵糖浓度为100g/L以上,固体残渣回收进行第二步酶解糖化;水解糖化温度为100-200℃,水解时间为0.5-2h;
(3)第二步酶解糖化,是将固体残渣用纤维素酶进一步水解,得到富含葡萄糖的高浓度发酵糖溶液;发酵糖溶液浓度达200g/L;纤维素酶用量为20-50mg酶蛋白/g纤维素;酶解糖化温度为40-60℃,酶解时间为24-96h。
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