CN106188291A - 抗白介素6抗体多肽及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制白介素6，减轻抑郁症状的多肽。其序列为SEQ ID NO：1是全新的序列，其有益效果在于，ELISA法测定抗白介素6抗体的效价结果显示，本发明多肽为高效价抗体。在体药理结果显示，本发明多肽能改善急性和慢性抑郁症模型动物的抑郁症状。可作为临床抑郁症有效的候选治疗方法。
Description
技术领域
本发明涉及抗白介素6抗体多肽及其应用，具体涉及具有抑制白介素6，减轻抑郁症状的多肽。
背景技术
抑郁症(抑郁障碍)是表现为超过两周持续并显著的情绪低落(每天的大多数时间)，兴趣下降，失眠(典型的为早醒)，食欲下降/体重减轻，疲乏，精力下降，自卑感，记忆下降/注意分散/做决定困难等症状的综合征。抑郁状态往往指那些还达不到抑郁症，病情相对较轻，症状相对较少的状态。
传统的三环类、四环类抗抑郁药和单胺氧化酶抑制剂由于不良反应较大，应用明显减少。目前临床上一线的抗抑郁药主要包括选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI，代表药物氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、氟伏沙明、西酞普兰和艾司西酞普兰)、5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI，代表药物文拉法辛和度洛西汀)、去甲肾上腺素和特异性5-羟色胺能抗抑郁药(NaSSA，代表药物米氮平)等。但是，这些药物都存在起效慢，停药后易复发的特点。因此，寻找新的治疗抑郁症的靶点，开发新型、有效的治疗抑郁症药物，显得尤为重要。
研究发现，具有抑郁症临床表现的患者，其大脑炎症的发生率高出正常人30％。由此提出了炎症细胞因子假说，细胞因子是机体免疫系统分泌的一类多肽类信号分子，广泛存在于机体免疫系统和神经系统中。当机体对损伤、感染和心理社会等应激因素产生免疫应答时，会通过分泌细胞因子参与机体多种功能的调节。越来越多的证据表明抑郁症的发生与炎症细胞因子的增加关系密切。从而，认为抗炎治疗可用于开发新的抑郁症治疗方法。
白细胞介素-6，简称白介素6(IL-6)，是一种细胞因子，属于白细胞介素的一种。它是由纤维母细胞、单核/巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、上皮细胞、角质细胞、以及多种瘤细胞所产生。白介素6能够刺激参与免疫反应的细胞增殖、分化并提高其功能。研究发现，当机体处于心理应激、躯体疾病和创伤感染等应激条件下，伴有Il 6升高等炎症反应。可见，白介素6抗体可治疗炎症相关疾病，如类风湿关节炎。
但是，未有研究报道白介素6抗体用于治疗抑郁症。而且，白介素6抗体本身的分子量较大，长期用于人体会产生中和反应，降低药效。因此，本发明提供了一种特异性强，纯度较高的小分子白介素6抗体多肽，抑制炎症反应，从而起到抗抑郁的作用。
发明内容
发明目的
本发明提供全新的序列，该序列抗白介素6抗体多肽，对抑郁症具有很好的疗效。
技术方案
抗白介素6抗体多肽，其特征在于其序列为SEQ ID NO：1。
抗白介素6抗体多肽在治疗抑郁症药物中的应用。
有益效果
利用固相合成法化学合成抗白介素6抗体多肽，该多肽具有全新的序列，该多肽可用于治疗抑郁症。ELISA法测定抗白介素6抗体的效价结果显示，本发明多肽的抗体效价为1：25000，为高效价抗体。在体药理结果显示，本发明的多肽能够减少小鼠悬尾实验中应激绝望模型小鼠的悬尾时间；也能减少小鼠强迫游泳实验中应激绝望模型小鼠的强迫游泳时间；同时，本发明的多肽能够减少慢性不可预测应激模型大鼠的觅食潜伏期，提高模型大鼠糖水实验中对糖水的摄取，与模型组相比，具有统计学差异。觅食潜伏期主要检测的是大鼠焦虑样行为，大鼠糖水偏好表明了大鼠的兴趣缺失倾向。由此可见，本发明多肽能改善急性和慢性抑郁症模型动物的抑郁症状。可作为临床抑郁症有效的候选治疗方法。
具体实施方式
多肽由上海生工吉尔合成。
实施例1
抗白介素6抗体多肽的效价测定。
抗白介素6抗体多肽的效价测定采用ELISA法。步骤：(1)抗原包被：人白介素6作为抗原，用包被液l：8000稀释，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板中。4℃放置过夜，洗涤液洗3次；(2)封闭：加l00μL/孔封闭液(含1％牛血清白蛋白，0.1％Tween20的PBS)，室温放置1h，用洗涤液洗3次；(3)将本发明多肽稀释成不同的浓度梯度，(4)将不同浓度梯度的本发明多肽及空白阴性对照品分别加入到反应板中，l00μL/孔，37℃，反应2h，用洗涤液洗3次；(5)加酶标抗抗体：兔抗鼠IgG-HRP，用封闭液l：8000稀释，100μL/孔，加盖37℃恒温箱温育1h，用洗涤液洗3次；(6)显色：TMB底物溶液100μL/孔，室温暗处放置10min；(7)终止反应：加50μL/孔终止液；(8)用酶标仪测定450nm处吸光值，当检测样品吸光度/阴性样品吸光度>2.5时，为阳性反应，以检测阳性反应的最大稀释度为待测样品的效价。结果显示本发明多肽的效价为1：25000。
实施例2
抗白介素6抗体多肽对小鼠强迫游泳应激绝望模型的影响。
采用ICR小鼠作为受试动物，取50只小鼠，雌雄各半，体重为18-22g，随机分为5组：高剂量组、中剂量组、低剂量组，阳性对照组，空白组，每组l0只。治疗组皮下注射本发明多肽，剂量分别为40、20、10mg/Kg，对照组氟西汀，剂量为10mg/Kg，空白组给予生理盐水，连续给药7天。第7天给药后1h，小鼠进行强迫游泳实验，小鼠在20-25℃水中强迫游泳6min，记录后4min内不动时间，不动时间，即为小鼠在水中停止挣扎，仅将头露出水面漂浮的时间，以此评价本发明多肽对小鼠强迫游泳应激绝望模型的影响。
表1本发明多肽对小鼠强迫游泳应激绝望模型的影响
*p<0.05，**p<0.01与空白组相比
本发明多肽对小鼠强迫游泳应激绝望模型结果如表1显示：本发明多肽能够减少小鼠强迫游泳时间，在剂量在10-40mg/Kg时呈剂量依赖性，与空白组相比，具有统计学差异。
实施例3
抗白介素6抗体多肽对小鼠悬尾应激绝望模型的影响。
采用ICR小鼠作为受试动物，取50只小鼠，雌雄各半，体重为18-22g，随机分为5组：高剂量组、中剂量组、低剂量组，阳性对照组，空白组，每组l0只。治疗组皮下注射本发明多肽，剂量分别为40、20、10mg/Kg，对照组氟西汀，剂量为10mg/Kg，空白组给予生理盐水，连续给药7天。第7天给药后1h，小鼠进行悬尾实验，将小鼠用胶带固定在其尾部距末端约1cm处，使小鼠保持悬挂状态6min，记录后4min的不动时间，以此评价本发明多肽对小鼠悬尾应激绝望模型的影响。
表2本发明多肽对小鼠悬尾应激绝望模型的影响
*p<0.05，**p<0.01与空白组相比
本发明多肽对小鼠悬尾应激绝望模型结果如表2显示：本发明多肽能够减少小鼠悬尾时间，在剂量在10-40mg/Kg时呈剂量依赖性，与空白组相比，具有统计学差异。
实施例4
抗白介素6抗体多肽对大鼠慢性不可预测应激模型的影响。
采用SD大鼠作为受试动物，取60只大鼠，雌雄各半，体重为180-220g，随机分为6组，高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性对照组、模型组、空白组，每组l0只。建立大鼠慢性不可预测应激模型：应激内容为：束缚4h；湿垫料过夜；摇晃1h(160r/min)；禁食12h；冰水游泳4℃，10min；饲养笼倾斜45°过夜；夹尾1min；拥挤过夜(8只/笼)。白天使用两种应激，夜晚使用一种应激，连续应激4周。最后一次刺激后给药。给药方案：治疗组皮下注射本发明多肽，剂量分别为40、20、10mg/Kg，对照组氟西汀，剂量为10mg/Kg，空白组给予生理盐水，连续给药7天。第7天给药后1h，大鼠进行新奇觅食潜伏期实验和糖水偏好实验，以此评价本发明多肽对大鼠慢性不可预测应激模型的影响。新奇觅食潜伏期实验即：实验动物在进行24h禁食后，将动物置于一个长×宽×高为76.5cm×76.5cm×40cm的旷场中，旷场中间放有一定量的食物，动物从旷场的一角放入，观察动物在5min内成功觅食所花费的时间。同时试验后测量动物在5min内消耗的食物总重量，以此作为参考来判断实验动物饥饿程度是否一致。糖水偏好实验即：在糖水检测前用1％的糖水让动物适应48h，禁水4h后将动物置于放有两个相同水瓶的饲养笼中。这两只水瓶一只盛有1％的糖水，另一只装有自来水。记录1h内每只大鼠分别饮用糖水和自来水的体积。糖水偏好＝饮用的糖水体积/(饮用的糖水体积+自来水总体积)×100％。
表3本发明多肽对大鼠慢性不可预测应激模型的影响
*p<0.05，**p<0.01与模型组相比
本发明多肽对大鼠慢性不可预测应激模型结果如表3显示：本发明多肽能够减少模型组大鼠的觅食潜伏期，提高慢性不可预测应激模型大鼠糖水实验中对糖水的摄取，与模型组相比，具有统计学差异。觅食潜伏期主要检测的是大鼠焦虑样行为，大鼠糖水偏好表明了大鼠的兴趣缺失倾向。由此可见，本发明多肽能改善慢性不可预测应激模型大鼠的抑郁症状。
SEQUENCE LISTING
<110> 苏州普罗达生物科技有限公司
<120> 抗白介素6抗体多肽及其应用
<130>
<160> 1
<170> Patent In version 3.3
<210> 1
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Met Asn Ser Leu Gln Ala Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Arg
1 5 10 15
Asn Gly Asn Arg Tyr Tyr Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
20 25 30
Thr
Claims (2)
1.抗白介素6抗体多肽，其特征在于其序列为SEQ ID NO：1。
2.抗白介素6抗体多肽在治疗抑郁症药物中的应用。
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| CN201610763206.9A CN106188291A (zh) | 2016-08-30 | 2016-08-30 | 抗白介素6抗体多肽及应用 |
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|---|---|
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Citations (2)
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| CN103102393A (zh) * | 2013-01-30 | 2013-05-15 | 北京大学 | 一种多肽及其在制备抑郁症治疗药物中的应用 |
| CN103251951A (zh) * | 2013-01-16 | 2013-08-21 | 南方医科大学 | P2x2受体的激动剂或开通剂在制备抗抑郁和/或抗焦虑药物中的应用 |
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2016
- 2016-08-30 CN CN201610763206.9A patent/CN106188291A/zh active Pending
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|---|---|---|---|---|
| CN103251951A (zh) * | 2013-01-16 | 2013-08-21 | 南方医科大学 | P2x2受体的激动剂或开通剂在制备抗抑郁和/或抗焦虑药物中的应用 |
| CN103102393A (zh) * | 2013-01-30 | 2013-05-15 | 北京大学 | 一种多肽及其在制备抑郁症治疗药物中的应用 |
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