CN106173190A - 一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法，该方法包括菌种筛选、种子液制备、发酵培养液制备和复合菌酶发酵四个步骤，该方法首先通过菌种筛选、种子液制备和发酵培养液制备配置出包含枯草芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌的混合发酵培养液，然后将发酵底物(豆粕)采用上述配置得到的混合发酵培养液发酵处理，接着再用外源酶进行水解，最后经烘干后粉碎即得到所需要的大豆多肽蛋白饲料。与现有技术相比，本发明的工艺简单，易于大规模工业化生产，制备的大豆多肽蛋白饲料没有苦味和异味，口感好，溶解粘度小，小肽含量较高且质量好。
Description
技术领域
本发明涉及一种多肽蛋白原料的制备方法，具体涉及一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法。
背景技术
豆粕是动物日粮中最常用的植物性蛋白原料，但因为豆粕中存在多种抗营养因子,如大豆抗原蛋白和胰蛋白酶抑制因子等，大大地降低了豆粕在幼龄动物日粮中应用。因此，需要对豆粕进行加工，从而去除豆粕中的抗营养因子，提高豆粕的营养品质。目前，豆粕的加工工艺多样，国内主要以固态发酵为主，菌种多釆用芽孢菌、酵母菌、乳酸菌中一种或者几种的组合，发酵底物可以不经过灭菌过程直接加入发酵种子液，混合均匀后装入发酵设施发酵，经干燥制成发酵豆粕成品。固态发酵设备技术简易，但同时发酵工艺参数难检测和控制，操作消耗劳力多，强度大。酶解法利用酶定向分解的特性将大分子蛋白分解为小分子肽，但酶解法生产的多肽苦味较重，适口性差。
中国专利CN104186935A公开了一种复合菌液发酵豆粕的方法，该方法将纳豆芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌混合得到的菌液接到膨化豆粕中，混合好氧发酵，然后再将乳酸杆菌接入到发酵物中，混合厌氧发酵，得到了发酵豆粕。该专利虽然一定程度上解决了豆粕发酵不彻底、营养价值较低的技术问题，但是其制备的发酵豆粕口感较差，大分子蛋白含量较高，不易于动物吸收。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法，该制备方法包括以下步骤：
(1)菌种筛选：筛选菌种得到枯草芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌；
(2)种子液制备：
一级种子液制备：分别将各菌种接种到相应的种子培养基中培养，得到一级种子液，其中，将枯草芽孢杆菌接种至LB培养基中，于37℃、180rpm下培养24h，将酵母菌接种至马铃薯培养基中，于30℃、200rpm培养24h，将乳酸菌接种至MRS培养基中，于37℃静置培养24h；
二级种子液制备：将上述培养得到的一级种子液按照标记接种到各个发酵器中，发酵得到二级种子液，其中，
枯草芽孢杆菌一级种子接种到枯草芽孢杆菌第一发酵罐中，调节转速200转/min、通气量1m3/h，保持正压，37℃发酵24h；
酵母菌一级种子接种到酵母菌第一发酵罐中，调节转速200转/min、通气量1m3/h，保持正压，30℃发酵24h；
乳酸菌一级种子接种到乳酸菌玻璃瓶中，于37℃下发酵24h；
(3)发酵培养液制备：用种子管分别连接枯草芽孢杆菌第一发酵罐与枯草芽孢杆菌第二发酵罐，酵母菌第一发酵罐与酵母菌第二发酵罐，乳酸菌玻璃瓶与乳酸菌发酵罐，蒸汽灭菌30min，然后分别将枯草芽孢杆菌二级种子液输送至到枯草芽孢杆菌第二发酵罐，酵母菌二级种子液输送至酵母菌第二发酵罐，乳酸菌二级种子液输送至乳酸菌发酵罐，通蒸汽清洗种子管30min，然后液体发酵时间24h，制得发酵培养液；
(4)复合菌酶发酵：将发酵底物粉碎，加水搅拌混合均匀，再添加蔗糖，进行蒸煮灭菌，再降温至30～40℃，然后再加入步骤(3)制得的混合发酵培养液，搅拌混合均匀，并调节混合物料含水量至30～60％，于32～39℃下先好氧发酵6～10h，再厌氧发酵24～48h；发酵结束后，将发酵混合物料升温至50～55℃，再加入外源酶进行水解反应；水解完全后，加热混合物料，再低温烘干、粉碎，控制物料水分小于10％，即得到大豆多肽蛋白饲料。
步骤(3)中枯草芽孢杆菌第二发酵罐中枯草芽孢杆菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：玉米淀粉1～5％，牛骨蛋白胨0.1～0.8％，豆粕1～2％，(NH4)4SO40.02～0.06％，轻质CaCO3 0.05～0.1％，其余为水，发酵培养基pH值为7.0～7.5；
酵母菌第二发酵罐中酵母菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：葡萄糖粉1～5％，(NH4)4SO4 0.1～0.5％，KH2PO4 0.05～0.1％，MgSO4·7H2O0.01～0.05％，酵母浸膏0.1～0.5％，其余为水，发酵培养基pH值为7.2；
乳酸菌发酵罐中乳酸菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：酵母浸膏1～5％，牛骨蛋白胨1～4％，葡糖糖粉1～4％，轻质CaCO3 0.1～0.5％，其余为水，发酵培养基pH值为7.0。
步骤(4)中所述的蔗糖的添加量为发酵底物质量的0.1～0.5％；所述的混合发酵培养液的接种量为发酵底物质量的5～10％；所述的外源酶的添加量为发酵底物质量的0.05～0.5％。
所述的混合发酵培养液为枯草芽孢杆菌发酵培养液、酵母菌发酵培养液和乳酸菌发酵培养液以质量比为2:1:1混合得到。
所述的外源酶包含蛋白酶、肽酶、半乳糖苷酶、淀粉酶、果胶酶、纤维素酶和植酸酶中的一种或多种，添加量为发酵底物质量的0.05～0.5％。
步骤(4)中水解完全后，混合物料于80℃下加热30min，再经低温烘干后粉碎。
本发明配置的混合发酵培养液中微生物的针对性强，能彻底破坏发酵底物(豆粕)中的抗营养因子，提高发酵豆粕中的有机酸，提高产品适口性，此外，采用外源酶，分解豆粕细胞壁，让蛋白酶与豆粕中的蛋白质充分接触，达到彻底降解。外加外源酶和微生物分泌复合酶系的酶解作用将豆粕中大分子蛋白降解为更易于动物吸收的小分子蛋白、多肽、小肽等。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
(1)采用物理脱细胞壁技术，外加外源酶和复合微生物菌种分泌的复合酶系与豆粕中的蛋白质及其他大分子营养物质充分接触，达到彻底降解；
(2)本产品生物活性小肽的生产率大幅提高，且本方法成成工艺简单，易于大规模工业化生产；
(3)适度的酶解使得制得的肽蛋白产品没有苦味和异味，口感好，溶解粘度小等优点，应用前景较好；
(4)本发明方法生产的肽蛋白产品中，小肽含量较高且质量好，小肽含量≥20％，粗蛋白含量≥52％，抗原蛋白降解率≥90％，胰蛋白酶抑制剂可降低≥95％。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法，该方法包括以下工艺步骤：取300kg豆粕，超微粉碎并混合均匀后，加70kg水拌料，蔗糖添加量为0.9kg，然后蒸煮灭菌，灭菌后的发酵底物温度降到30℃，将混合发酵培养菌液加入，搅拌均匀，混合过程中，调整物料含水量至40％，先向发酵罐中通入环境空气，以便建立需要条件，好氧发酵6h，接着厌氧发酵48h，发酵温度控制在32℃。发酵结束后，将发酵底物温度升至50℃，加入0.15kg外源酶进行水解反应；水解完毕后，物料于80℃加热30min，经低温烘干后粉碎，得到大豆多肽蛋白饲料。检测得到产品小肽含量小肽含量(三氯乙酸溶解，双缩脲显色反应)≥20％，抗原蛋白降解率≥90％，胰蛋白酶抑制剂可降低≥95％，最终产品具有令人愉快的风味和口感。
其中，发酵培养菌液为枯草芽孢杆菌发酵培养液、酵母菌发酵培养液和乳酸菌发酵培养液以质量比为2:1:1混合得到；外源酶包含蛋白酶、肽酶、半乳糖苷酶、淀粉酶、果胶酶、纤维素酶和植酸酶中的一种或多种，添加量为发酵底物质量的0.05～0.5％。
实施例2
一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法，该方法包括以下工艺步骤：取500kg豆粕，超微粉碎并混合均匀后，加100kg水拌料，蔗糖添加量为2.5kg，然后蒸煮灭菌，灭菌后的发酵底物温度降到40℃，将混合菌液加入，搅拌均匀，混合过程中，调整物料含水量至50％，先向发酵罐中通入环境空气，以便建立需要条件，好氧发酵8h，接着厌氧发酵40h，发酵温度控制在32℃。发酵结束后，将发酵底物温度升至50℃，加入0.5kg外源酶进行水解反应；水解完毕后，物料于80℃加热30min，，经低温烘干后粉碎，得到大豆多肽蛋白饲料。检测得到产品小肽含量小肽含量(三氯乙酸溶解，双缩脲显色反应)≥20％，抗原蛋白降解率≥92％，胰蛋白酶抑制剂可降低≥95％，最终产品具有令人愉快的风味和口感。
其中，发酵培养菌液为枯草芽孢杆菌发酵培养液、酵母菌发酵培养液和乳酸菌发酵培养液以质量比为2:1:1混合得到；外源酶包含蛋白酶、肽酶、半乳糖苷酶、淀粉酶、果胶酶、纤维素酶和植酸酶中的一种或多种，添加量为发酵底物质量的0.05～0.5％。
实施例3
一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法，该方法包括以下工艺步骤：取200kg豆粕，超微粉碎并混合均匀后，加50kg水拌料，蔗糖添加量为0.2kg，然后蒸煮灭菌，灭菌后的发酵底物温度降到30℃，将混合菌液加入，搅拌均匀，混合过程中，调整物料含水量至60％，先向发酵罐中通入环境空气，以便建立需要条件，好氧发酵10h，接着厌氧发酵48h，发酵温度控制在32℃。发酵结束后，将发酵底物温度升至50℃，加入0.16kg外源酶进行水解反应；水解完毕后，物料于80℃加热30min，，经低温烘干后粉碎，得到大豆多肽蛋白饲料。检测得到产品小肽含量小肽含量(三氯乙酸溶解，双缩脲显色反应)≥20％，抗原蛋白降解率≥95％，胰蛋白酶抑制剂可降低≥96％，最终产品具有令人愉快的风味和口感。
其中，发酵培养菌液为枯草芽孢杆菌发酵培养液、酵母菌发酵培养液和乳酸菌发酵培养液以质量比为2:1:1混合得到；外源酶包含蛋白酶、肽酶、半乳糖苷酶、淀粉酶、果胶酶、纤维素酶和植酸酶中的一种或多种，添加量为发酵底物质量的0.05～0.5％。
实施例4
一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法，该方法包括以下工艺步骤：
(1)菌种筛选：筛选菌种得到枯草芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌；
(2)种子液制备：
一级种子液制备：分别将各菌种接种到相应的种子培养基中，其中，将枯草芽孢杆菌接种至LB培养基中，于37℃、180rpm下培养24h，将酵母菌接种至马铃薯培养基中，于30℃、200rpm培养24h，将乳酸菌接种至MRS培养基中，于37℃静置培养24h，得到一级种子液；
二级种子液制备：将上述培养得到的一级种子液按照标记接种到各个发酵器中，发酵得到二级种子液；其中，
枯草芽孢杆菌一级种子接种到15L的枯草芽孢杆菌第一发酵罐中，调节转速200转/min、通气量1m3/h，保持正压，37℃发酵24h；
酵母菌一级种子接种到15L的酵母菌第一发酵罐中，调节转速200转/min、通气量1m3/h，保持正压，30℃发酵24h；
乳酸菌一级种子接种到10L的乳酸菌玻璃瓶中，于37℃下发酵24h；
(3)发酵培养液制备：用硅胶种子管分别连接枯草芽孢杆菌第一发酵罐与枯草芽孢杆菌第二发酵罐，酵母菌第一发酵罐与酵母菌第二发酵罐，乳酸菌玻璃瓶与乳酸菌发酵罐，开蒸汽灭菌30min，关蒸汽，将种子液发酵罐的罐压调高，开种子液发酵罐阀门，利用蒸汽分别将枯草芽孢杆菌二级种子液压到枯草芽孢杆菌第二发酵罐，该发酵罐中枯草芽孢杆菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：玉米淀粉1％，牛骨蛋白胨0.1％，豆粕1.5％，(NH4)4SO4 0.02％，轻质CaCO3 0.08％，其余为水，发酵培养基pH值为7.0；
酵母菌二级种子液压到酵母菌第二发酵罐，该发酵罐中酵母菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：葡萄糖粉3％，(NH4)4SO4 0.1％，KH2PO4 0.05％，MgSO4·7H2O 0.05％，酵母浸膏0.2％，其余为水，发酵培养基pH值为7.2；
乳酸菌二级种子液压到乳酸菌发酵罐，该发酵罐中乳酸菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：酵母浸膏1％，牛骨蛋白胨4％，葡糖糖粉2％，轻质CaCO30.2％，其余为水，发酵培养基pH值为7.0；
然后关闭阀门，通蒸汽清洗接种管30min，液体发酵时间24h，每4h镜检一次菌种状态，发酵完全后，将枯草芽孢杆菌发酵培养液、酵母菌发酵培养液和乳酸菌发酵培养液以质量比为2:1:1混合得到混合菌液；
(4)复合菌酶发酵：取500kg豆粕，超微粉碎并添加100kg水搅拌混合均匀，再添加蔗糖0.5kg，进行蒸煮灭菌，将灭菌后的混合物料降温至40℃，然后再加入25kg混合菌液，并搅拌混合均匀，混合过程中，调节混合物料含水量至30％，接着先好氧发酵10h，再厌氧发酵24h，发酵温度为32℃；发酵结束后，将发酵混合物料升温至55℃，再加入0.25kg蛋白酶、肽酶、半乳糖苷酶、淀粉酶、果胶酶、纤维素酶和植酸酶中的一种或多种外源酶，添加量为发酵底物质量的0.05～0.5％。
进行水解反应；水解完全后，混合物料于80℃加热30min，再低温烘干、粉碎，控制物料水分小于10％，即得到大豆多肽蛋白饲料。
实施例5
一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法，该方法包括以下工艺步骤：
(1)菌种筛选：筛选菌种得到枯草芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌；
(2)种子液制备：
一级种子液制备：分别将各菌种接种到相应的种子培养基中，其中，将枯草芽孢杆菌接种至LB培养基中，于37℃、180rpm下培养24h，将酵母菌接种至马铃薯培养基中，于30℃、200rpm培养24h，将乳酸菌接种至MRS培养基中，于37℃静置培养24h，得到一级种子液；
二级种子液制备：将上述培养得到的一级种子液按照标记接种到各个发酵器中，发酵得到二级种子液；其中，
枯草芽孢杆菌一级种子接种到15L的枯草芽孢杆菌第一发酵罐中，调节转速200转/min、通气量1m3/h，保持正压，37℃发酵24h；
酵母菌一级种子接种到15L的酵母菌第一发酵罐中，调节转速200转/min、通气量1m3/h，保持正压，30℃发酵24h；
乳酸菌一级种子接种到10L的乳酸菌玻璃瓶中，于37℃下发酵24h；
(3)发酵培养液制备：用硅胶种子管分别连接枯草芽孢杆菌第一发酵罐与枯草芽孢杆菌第二发酵罐，酵母菌第一发酵罐与酵母菌第二发酵罐，乳酸菌玻璃瓶与乳酸菌发酵罐，开蒸汽灭菌30min，关蒸汽，将种子液发酵罐的罐压调高，开种子液发酵罐阀门，利用蒸汽分别将枯草芽孢杆菌二级种子液压到枯草芽孢杆菌第二发酵罐，该发酵罐中枯草芽孢杆菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：玉米淀粉5％，牛骨蛋白胨0.8％，豆粕1％，(NH4)4SO4 0.06％，轻质CaCO3 0.05％，其余为水，发酵培养基pH值为7.5；
酵母菌二级种子液压到酵母菌第二发酵罐，该发酵罐中酵母菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：葡萄糖粉1％，(NH4)4SO4 0.5％，KH2PO4 0.1％，MgSO4·7H2O0.01％，酵母浸膏0.1％，其余为水，发酵培养基pH值为7.2；
乳酸菌二级种子液压到乳酸菌发酵罐，该发酵罐中乳酸菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：酵母浸膏5％，牛骨蛋白胨1％，葡糖糖粉1％，轻质CaCO30.1％，其余为水，发酵培养基pH值为7.0；
然后关闭阀门，通蒸汽清洗接种管30min，液体发酵时间24h，每4h镜检一次菌种状态，发酵完全后，将枯草芽孢杆菌发酵培养液、酵母菌发酵培养液和乳酸菌发酵培养液以质量比为2:1:1混合得到混合菌液；
(4)复合菌酶发酵：取200kg豆粕，超微粉碎并添加50kg水搅拌混合均匀，再添加蔗糖1kg，进行蒸煮灭菌，将灭菌后的混合物料降温至30℃，然后再加入20kg混合菌液，并搅拌混合均匀，混合过程中，调节混合物料含水量至60％，接着先好氧发酵6h，再厌氧发酵48h，发酵温度为39℃；发酵结束后，将发酵混合物料升温至50℃，再加入1kg蛋白酶、肽酶、半乳糖苷酶、淀粉酶、果胶酶、纤维素酶和植酸酶中的一种或多种外源酶，添加量为发酵底物质量的0.05～0.5％。；水解完全后，混合物料于80℃加热30min，再低温烘干、粉碎，控制物料水分小于10％，即得到大豆多肽蛋白饲料。
实施例6
一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法，该方法包括以下工艺步骤：
(1)菌种筛选：筛选菌种得到枯草芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌；
(2)种子液制备：
一级种子液制备：分别将各菌种接种到相应的种子培养基中，其中，将枯草芽孢杆菌接种至LB培养基中，于37℃、180rpm下培养24h，将酵母菌接种至马铃薯培养基中，于30℃、200rpm培养24h，将乳酸菌接种至MRS培养基中，于37℃静置培养24h，得到一级种子液；
二级种子液制备：将上述培养得到的一级种子液按照标记接种到各个发酵器中，发酵得到二级种子液；其中，
枯草芽孢杆菌一级种子接种到15L的枯草芽孢杆菌第一发酵罐中，调节转速200转/min、通气量1m3/h，保持正压，37℃发酵24h；
酵母菌一级种子接种到15L的酵母菌第一发酵罐中，调节转速200转/min、通气量1m3/h，保持正压，30℃发酵24h；
乳酸菌一级种子接种到10L的乳酸菌玻璃瓶中，于37℃下发酵24h；
(3)发酵培养液制备：用硅胶种子管分别连接枯草芽孢杆菌第一发酵罐与枯草芽孢杆菌第二发酵罐，酵母菌第一发酵罐与酵母菌第二发酵罐，乳酸菌玻璃瓶与乳酸菌发酵罐，开蒸汽灭菌30min，关蒸汽，将种子液发酵罐的罐压调高，开种子液发酵罐阀门，利用蒸汽分别将枯草芽孢杆菌二级种子液压到枯草芽孢杆菌第二发酵罐，该发酵罐中枯草芽孢杆菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：玉米淀粉2％，牛骨蛋白胨0.5％，豆粕2％，(NH4)4SO4 0.04％，轻质CaCO3 0.1％，其余为水，发酵培养基pH值为7.2；
酵母菌二级种子液压到酵母菌第二发酵罐，该发酵罐中酵母菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：葡萄糖粉5％，(NH4)4SO4 0.3％，KH2PO4 0.08％，MgSO4·7H2O0.04％，酵母浸膏0.5％，其余为水，发酵培养基pH值为7.2；
乳酸菌二级种子液压到乳酸菌发酵罐，该发酵罐中乳酸菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：酵母浸膏1.5％，牛骨蛋白胨2％，葡糖糖粉2％，轻质CaCO3 0.3％，其余为水，发酵培养基pH值为7.0；
然后关闭阀门，通蒸汽清洗接种管30min，液体发酵时间24h，每4h镜检一次菌种状态，发酵完全后，将枯草芽孢杆菌发酵培养液、酵母菌发酵培养液和乳酸菌发酵培养液以质量比为2:1:1混合得到混合菌液；
(4)复合菌酶发酵：取400kg豆粕，超微粉碎并添加80kg水搅拌混合均匀，再添加蔗糖1.2kg，进行蒸煮灭菌，将灭菌后的混合物料降温至35℃，然后再加入24kg混合菌液，并搅拌混合均匀，混合过程中，调节混合物料含水量至50％，接着先好氧发酵8h，再厌氧发酵36h，发酵温度为35℃；发酵结束后，将发酵混合物料升温至52℃，再加入0.4kg蛋白酶、肽酶、半乳糖苷酶、淀粉酶、果胶酶、纤维素酶和植酸酶中的一种或多种外源酶，添加量为发酵底物质量的0.05～0.5％；水解完全后，混合物料于80℃加热30min，再低温烘干、粉碎，控制物料水分小于10％，即得到大豆多肽蛋白饲料。
实施例7
一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法，该方法包括以下工艺步骤：
(1)菌种筛选：筛选菌种得到枯草芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌；
(2)种子液制备：
一级种子液制备：分别将各菌种接种到相应的种子培养基中，其中，将枯草芽孢杆菌接种至LB培养基中，于37℃、180rpm下培养24h，将酵母菌接种至马铃薯培养基中，于30℃、200rpm培养24h，将乳酸菌接种至MRS培养基中，于37℃静置培养24h，得到一级种子液；
二级种子液制备：将上述培养得到的一级种子液按照标记接种到各个发酵器中，发酵得到二级种子液；其中，
枯草芽孢杆菌一级种子接种到15L的枯草芽孢杆菌第一发酵罐中，调节转速200转/min、通气量1m3/h，保持正压，37℃发酵24h；
酵母菌一级种子接种到15L的酵母菌第一发酵罐中，调节转速200转/min、通气量1m3/h，保持正压，30℃发酵24h；
乳酸菌一级种子接种到10L的乳酸菌玻璃瓶中，于37℃下发酵24h；
(3)发酵培养液制备：用硅胶种子管分别连接枯草芽孢杆菌第一发酵罐与枯草芽孢杆菌第二发酵罐，酵母菌第一发酵罐与酵母菌第二发酵罐，乳酸菌玻璃瓶与乳酸菌发酵罐，开蒸汽灭菌30min，关蒸汽，将种子液发酵罐的罐压调高，开种子液发酵罐阀门，利用蒸汽分别将枯草芽孢杆菌二级种子液压到枯草芽孢杆菌第二发酵罐，该发酵罐中枯草芽孢杆菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：玉米淀粉2％，牛骨蛋白胨0.5％，豆粕2％，(NH4)4SO4 0.04％，轻质CaCO3 0.1％，其余为水，发酵培养基pH值为7.2；
酵母菌二级种子液压到酵母菌第二发酵罐，该发酵罐中酵母菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：葡萄糖粉5％，(NH4)4SO4 0.3％，KH2PO4 0.08％，MgSO4·7H2O0.04％，酵母浸膏0.5％，其余为水，发酵培养基pH值为7.2；
乳酸菌二级种子液压到乳酸菌发酵罐，该发酵罐中乳酸菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：酵母浸膏1.5％，牛骨蛋白胨2％，葡糖糖粉4％，轻质CaCO3 0.5％，其余为水，发酵培养基pH值为7.0；
然后关闭阀门，通蒸汽清洗接种管30min，液体发酵时间24h，每4h镜检一次菌种状态，发酵完全后，将枯草芽孢杆菌发酵培养液、酵母菌发酵培养液和乳酸菌发酵培养液以质量比为2:1:1混合得到混合菌液；
(4)复合菌酶发酵：取400kg豆粕，超微粉碎并添加60kg水搅拌混合均匀，再添加蔗糖1.6kg，进行蒸煮灭菌，将灭菌后的混合物料降温至35℃，然后再加入20kg混合菌液，并搅拌混合均匀，混合过程中，调节混合物料含水量至45％，接着先好氧发酵10h，再厌氧发酵36h，发酵温度为35℃；发酵结束后，将发酵混合物料升温至55℃，再加入0.4kg蛋白酶、肽酶、半乳糖苷酶、淀粉酶、果胶酶、纤维素酶和植酸酶中的一种或多种外源酶，添加量为发酵底物质量的0.05～0.5％；水解完全后，混合物料于80℃加热30min，再低温烘干、粉碎，控制物料水分小于10％，即得到大豆多肽蛋白饲料。
检测实施例4～7所制得的大豆多肽蛋白饲料，得到，产品中小肽含量(三氯乙酸溶解，双缩脲显色反应)≥20％，抗原蛋白降解率≥90％，胰蛋白酶抑制剂可降低≥95％，最终产品具有令人愉快的风味和口感。
Claims (6)
1.一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：
(1)菌种筛选：筛选菌种得到枯草芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌；
(2)种子液制备：
一级种子液制备：分别将各菌种接种到相应的种子培养基中培养，得到一级种子液，其中，将枯草芽孢杆菌接种至LB培养基中，于37℃、180rpm下培养24h，将酵母菌接种至马铃薯培养基中，于30℃、200rpm培养24h，将乳酸菌接种至MRS培养基中，于37℃静置培养24h；
二级种子液制备：将上述培养得到的一级种子液按照标记接种到各个发酵器中，发酵得到二级种子液，其中，
枯草芽孢杆菌一级种子接种到枯草芽孢杆菌第一发酵罐中，调节转速200转/min、通气量1m3/h，保持正压，37℃发酵24h；
酵母菌一级种子接种到酵母菌第一发酵罐中，调节转速200转/min、通气量1m3/h，保持正压，30℃发酵24h；
乳酸菌一级种子接种到乳酸菌玻璃瓶中，于37℃下发酵24h；
(3)发酵培养液制备：用种子管分别连接枯草芽孢杆菌第一发酵罐与枯草芽孢杆菌第二发酵罐，酵母菌第一发酵罐与酵母菌第二发酵罐，乳酸菌玻璃瓶与乳酸菌发酵罐，蒸汽灭菌30min，然后分别将枯草芽孢杆菌二级种子液输送至到枯草芽孢杆菌第二发酵罐，酵母菌二级种子液输送至酵母菌第二发酵罐，乳酸菌二级种子液输送至乳酸菌发酵罐，通蒸汽清洗种子管30min，然后液体发酵时间24h，制得发酵培养液；
(4)复合菌酶发酵：将发酵底物粉碎，加水搅拌混合均匀，再添加蔗糖，进行蒸煮灭菌，再降温至30～40℃，然后再加入步骤(3)制得的混合发酵培养液，搅拌混合均匀，并调节混合物料含水量至30～60％，于32～39℃下先好氧发酵6～10h，再厌氧发酵24～48h；发酵结束后，将发酵混合物料升温至50～55℃，再加入外源酶进行水解反应；水解完全后，加热混合物料，再低温烘干、粉碎，控制物料水分小于10％，即得到大豆多肽蛋白饲料。
2.根据权利要求1所述的一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中枯草芽孢杆菌第二发酵罐中枯草芽孢杆菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：玉米淀粉1～5％，牛骨蛋白胨0.1～0.8％，豆粕1～2％，(NH4)4SO40.02～0.06％，轻质CaCO30.05～0.1％，其余为水，发酵培养基pH值为7.0～7.5；
酵母菌第二发酵罐中酵母菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：葡萄糖粉1～5％，(NH4)4SO40.1～0.5％，KH2PO40.05～0.1％，MgSO4·7H2O0.01～0.05％，酵母浸膏0.1～0.5％，其余为水，发酵培养基pH值为7.2；
乳酸菌发酵罐中乳酸菌发酵培养基包括以下重量百分比含量的组分：酵母浸膏1～5％，牛骨蛋白胨1～4％，葡糖糖粉1～4％，轻质CaCO30.1～0.5％，其余为水，发酵培养基pH值为7.0。
3.根据权利要求1所述的一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述的蔗糖的添加量为发酵底物质量的0.1～0.5％；所述的混合发酵培养液的接种量为发酵底物质量的5～10％；所述的外源酶的添加量为发酵底物质量的0.05～0.5％。
4.根据权利要求3所述的一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法，其特征在于，所述的混合发酵培养液为枯草芽孢杆菌发酵培养液、酵母菌发酵培养液和乳酸菌发酵培养液以质量比为2:1:1混合得到。
5.根据权利要求1所述的一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法，其特征在于，所述的外源酶包含蛋白酶、肽酶、半乳糖苷酶、淀粉酶、果胶酶、纤维素酶和植酸酶中的一种或多种，添加量为发酵底物质量的0.05～0.5％。
6.根据权利要求1所述的一种大豆多肽蛋白饲料的制备方法，其特征在于，步骤(4)中水解完全后，混合物料于80℃下加热30min，再经低温烘干后粉碎。
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