CN105928920B - 一种基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法，属于生物分析技术领域。解决了现有技术中基于核酸适配体的检测方法灵敏度低、稳定性差、步骤繁琐、成本高等问题。本发明的方法第一次将具有聚集诱导发光性质的分子共价修饰于核酸适配体的两端，利用核酸适配体和细胞(或蛋白质)的特异性结合，使具有聚集诱导发光分子发出荧光信号，从而实现对细胞或蛋白质的快速、简便、廉价、稳定、灵敏、高选择性的检测，及对细胞的选择性成像。且该检测方法给出的是荧光增强的信号，不需要信号扩增就能达到很低的检测限，也不用另外修饰淬灭基团或合成淬灭材料，只需要探针和检测物两种物质，即混即测。

Description

一种基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法
技术领域
本发明属于生物分析技术领域，具体涉及一种基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法。
背景技术
生物分析技术是指用分析化学的方法检测、分析生命化学物质，从而对基础研究、药物开发、临床疾病诊断治疗、生命个体健康状态监控等提供信息依据。被分析的体系可以是几种简单化合物的混合，也可以是细胞等复杂系统。对分析手段的主要要求是：高灵敏度，高选择性，方法简单易行，费用低廉等。如今报道的生物分析的方法有很多，如荧光、电化学、化学发光、电化学发光、比色、表面增强拉曼散射、表面等离子共振等。其中，荧光检测法因其操作简单、相应迅速、灵敏度高而受到更多关注。
聚集诱导发光(aggregation-induced emission,AIE)是一种特殊的光学现象。具有某些特定结构(多为螺旋桨形结构)的荧光分子，当它们在溶液中以自由单体形式存在时由于分子内旋转将能量耗散而不发荧光；而以聚集体的形式存在时，由于分子内旋转被抑制而发出强烈的荧光。研究者们基于AIE现象，开发了许多生物分析的新方法。四苯乙烯(TPE)是一种经典的AIE分子。例如，本课题组利用TPE的非公价自组装，开发了检测酶活性的新方法(Anal.Chem.2014,86,9866-9872；CN 104195242 B)。
核酸适配体(aptamer)是通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)获得的具有特定序列的DNA或RNA短链，对于靶分子具有高度亲和力。它能够特异性的识别各种目标物质，如有机小分子，蛋白质，细胞等。相较于其他识别分子，核酸适配体更加稳定，且更容易用化学方法来合成和修饰，基于核酸适配体的生物分析新方法的建立是当下研究的热点。然而，目前文献报道的基于核酸适配体的检测方法(涵盖成像方法)，主要存在灵敏度低、稳定性差、步骤繁琐、成本高等问题。例如，一些方法为了达到较低的检测限，常常需要用到基于酶反应的信号扩增(如Chem.Commun.,2014,50,9547-9549)，这样一来费时费力，而且增加了成本，另外基于酶的信号扩增稳定性也不好。又如，一些方法将荧光基团共价修饰在核酸适配体末端，但是为了引起荧光信号的变化，需要分别修饰上荧光基团和淬灭基团，或是需要合成能淬灭荧光的纳米材料，(如Chem.Eur.J.,2005,11,4502-4508；Anal.Chem.,2014,86,9271-9277)，这样费时费力，且提高了成本，另外由于淬灭基团的荧光淬灭效率的限制，也限制的检测的灵敏度。
发明内容
本发明的目的是解决现有技术中基于核酸适配体的检测方法灵敏度低、稳定性差、步骤繁琐、成本高等问题，提供一种基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法。
本发明解决上述技术问题采取的技术方案如下。
一种基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法，步骤如下：
步骤一、将两端修饰了氨基的适配体溶于溶剂中，得到第一溶液；
所述适配体为细胞适配体或者蛋白适配体，溶剂为碳酸氢钠水溶液或碳酸氢钾水溶液；
步骤二、将化合物1溶于溶剂中，得到第二溶液；
所述化合物1的结构式为所述溶剂为二甲基亚砜(DMSO)或二甲基甲酰胺(DMF)；
步骤三、将第一溶液和第二溶液混合均匀，得到混合溶液，在35～40℃中放置12～36h，离心，取上清液通过反相高效液相色谱(HPLC)提纯，收集的产物，0℃以下真空干燥后，得到无色固体，即为两端共价修饰具有AIE性质分子的核酸适配体；
所述混合溶液中，两端修饰了氨基的适配体与化合物1的摩尔比小于1:2；
步骤四、将步骤三得到的两端共价修饰具有AIE性质分子的核酸适配体加入去离子水中，得到母液；
步骤五、将步骤四中的母液、待测物与pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液或者70～90％的血清混合，混合均匀后，检测混合物的荧光强度；
所述待测物为待测细胞或者待测蛋白质，两端共价修饰具有AIE性质分子的核酸适配体的检测浓度为2～5μM；
或者，
将步骤四中的母液、待测细胞与pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液或者70～90％的血清混合，混合均匀后，在2～8℃下放置20～60min，取混合物滴在载玻片上，利用激光扫描共聚焦显微镜拍摄细胞的荧光照片；
两端共价修饰具有AIE性质分子的核酸适配体的检测浓度为2～5μM。
优选的是，所述步骤一中，碳酸氢钠水溶液或碳酸氢钾水溶液的浓度为0.05～0.15M。
优选的是，所述步骤一中，第一溶液中，两端修饰了氨基的适配体的浓度为50～150μM。
优选的是，所述步骤二中，第二溶液中，化合物1的浓度为0.25～2.25mM。
优选的是，所述步骤三中，两端修饰了氨基的适配体与化合物1的摩尔比为1:(5～15)。
优选的是，所述步骤四中，母液的储存温度为在2～8℃。
优选的是，所述步骤五中，待测细胞的数量为100以上。
优选的是，所述步骤五中，将步骤四中的母液、待测细胞与pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液或者70～90％的血清混合，混合均匀后，在4℃下放置30min，然后滴在载玻片上。
优选的是，所述步骤五中，血清为80％。
优选的是，所述步骤五中，磷酸盐缓冲溶液的浓度为20mM。
优选的是，所述步骤五中，两端共价修饰具有AIE性质分子的核酸适配体的检测浓度为2.5μM。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
本发明的检测方法第一次将具有AIE性质的分子共价修饰于核酸适配体的两端，利用核酸适配体和细胞(或蛋白质)的特异性结合，使AIE分子发出荧光信号，从而实现对细胞(或蛋白质)进行快速、简便、廉价、稳定、灵敏、高选择性的检测及选择性的细胞成像；
该检测方法给出的是荧光增强的信号，比起荧光减弱的信号，灵敏度更高；
该方法不需要信号扩增就能达到很低的检测限，也不用另外修饰淬灭基团或合成淬灭材料，只需要探针和检测物两种物质，即混即测，经实验验证，在0～5000的Ramos细胞数量范围内，荧光强度和细胞数量成正比的线性关系，在没有任何信号扩增的情况下，最低可以检测到100个Ramos细胞；
从细胞成像结果能够看出，该检测方法成像效果清晰，荧光现象明显。
附图说明
图1为本发明的检测方法的原理图；
图2中，(a)为本发明实施例1的含有不同细胞数量的混合物的荧光光谱，(b)为实施例1的混合物的荧光强度随混合物中Ramos细胞数量变化图，(c)为(b)中Ramos细胞数量为0～5000的局部放大图；
图3为本发明实施例3的细胞检测选择性图；
图4为本发明实施例5的细胞的荧光成像图，(a)Ramos细胞的明场照片，(b)Ramos细胞的荧光照片，(c)CCRF-CEM细胞的明场照片，(d)CCRF-CEM细胞的荧光照片。
具体实施方式
为了进一步了解本发明，下面结合具体实施方式对本发明的优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本发明的特征和优点，而不是对本发明专利要求的限制。
本发明的检测方法，能够检测细胞、蛋白质等体积较大的生物物质。本发明的检测原理，如图1所示：以Ramos细胞为例，我们将TPE分子共价修饰于Ramos细胞的适配体两端，得到荧光探针TPE-aptamer。在水溶液中，TPE分子主要以单体形式存在，故只有微弱的荧光。当体系中加入Ramos细胞，Ramos适配体和Ramos细胞特异性结合，TPE分子的分子内旋转被抑制，故而发出强烈的荧光。如果加入其它细胞，Ramos适配体不发生特异性结合，将不会观察到荧光。我们利用这个原理对Ramos细胞进行选择性检测。同理，若将适配体的序列改为其他细胞(或蛋白质)的特异性识别，就能对其他的细胞(或蛋白质)进行选择性检测。
本发明的一种基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法，步骤如下：
步骤一、将两端修饰了氨基的适配体溶于碳酸氢钠水溶液或者碳酸氢钾水溶液中，得到第一溶液；
其中，适配体为细胞适配体或者蛋白质，且在细胞适配体或者蛋白质适配体两端修饰氨基属于现有技术，第一溶液中，两端修饰了氨基的细胞适配体或者蛋白质适配体的浓度优选为50～150μM，碳酸氢钠水溶液或者碳酸氢钾水溶液的浓度优选为0.05～0.15M；
步骤二、将化合物1溶于DMSO中，得到第二溶液；
第二溶液中，化合物1的浓度优选为0.25～2.25mM，化合物1的结构式为化合物1为现有技术，可以通过三步有机反应得到(参考Chem.Commun.,2013,49,5325-5327；J.Org.Chem.,2004,69,3271-3275的方法)；
制备化合物1的反应结构式为：
步骤三、将第一溶液和第二溶液充分混合，得到的混合溶液中，两端修饰了氨基的适配体与化合物1的摩尔比小于1:2，优选1:(5～15)，将混合溶液在35～40℃中放置12～36h，离心，取上清液通过反相HPLC提纯，收集的产物，0℃以下真空干燥后，得到无色固体，即为两端共价修饰具有AIE性质的分子的核酸适配体；
步骤三的反应结构式如下：
步骤四、将步骤三得到的无色固体加入去离子水，得到已知浓度的母液，在2～8℃储存备用；
步骤五、将母液、待测物与pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液或者70～90％的血清混合均匀，得到混合物，混合物中两端共价修饰具有AIE性质分子的核酸适配体的最终浓度为2-5μM，优选2.5μM，检测混合物的荧光强度；
其中，待测物为待测细胞或者待测蛋白质，磷酸盐缓冲溶液优选20mM，血清优选80％，待测细胞的数量根据细胞的不同而不同，一般为100以上；
或者，
将步骤四中的母液、待测细胞与pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液或者70～90％的血清混合，混合均匀后，在2～8℃下放置20～60min，优选4℃下放置30min，得到混合物，混合物中两端共价修饰具有AIE性质分子的核酸适配体的最终浓度为2-5μM，优选2.5μM，取混合物滴在载玻片上，利用激光扫描共聚焦显微镜拍摄细胞的荧光照片；
其中，磷酸盐缓冲溶液优选20mM，血清优选80％，待测细胞的数量根据细胞的不同而不同，一般为100以上。
以下结合实施例及附图进一步说明本发明。
实施例1
一种基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测细胞的方法，步骤如下：
步骤一、将两端修饰了氨基的Ramos适配体(序列为5’-H2N-AAC ACC GGG AGG ATAGTT CGG TGG CTG TTC AGG GTC TCC TCC CGG TG-NH2-3’，从上海生工购得)溶于碳酸氢钠水溶液中(0.1M，250μL)，得到第一溶液，两端修饰了氨基的Ramos适配体的浓度为100μM；
步骤二、将化合物1溶于DMSO(250μL)中，得到第二溶液，化合物1的浓度为1mM；
步骤三、将第一溶液和第二溶液充分混合，在37℃中放置24h，离心，取上清液通过反相HPLC提纯，收集的产物，真空干燥后，得到无色固体，即TPE-aptamer；
步骤四、将TPE-aptamer溶于去离子水，得到母液，在4℃储存备用；
步骤五、分别将不同数量的Ramos细胞(0,100,200,500,1000,2000,3000,4000,5000,10000,15000,20000个)和母液溶于20mM的pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，充分混合，得到最终体积为100μL，TPE-aptamer的最终浓度为2.5μM的混合物，然后在室温下分别测定混合物的荧光光谱。
测定结果如图2所示，混合物的荧光强度随着溶液中Ramos细胞数量的增加而增强。在0～5000个Ramos细胞的数量范围内，细胞数量和荧光强度成正比的线性关系。在没有任何信号扩增的情况下，最低可以检测到100个Ramos细胞。
实施例2
一种基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测细胞的方法，步骤如下：
步骤一、将两端修饰了氨基的CCRF-CEM细胞适配体(序列为5’-ATC TAA CTG CTGCGC CGC CGG GAA AAT ACT GTA CGG TTA GA-3’)，溶于碳酸氢钠水溶液中(0.1M，250μL)，得到第一溶液，两端修饰了氨基的CCRF-CEM细胞适配体的浓度为100μM；
步骤二、将化合物1溶于DMSO(250μL)中，得到第二溶液，化合物1的浓度为1mM；
步骤三、将第一溶液和第二溶液充分混合，在37℃中放置24h，离心，取上清液通过反相HPLC提纯，收集的产物，真空干燥后，得到两端共价修饰具有AIE性质分子的核酸适配体；
步骤四、将步骤三得到的两端共价修饰具有AIE性质的分子的核酸适配体溶于去离子水，得到母液，在4℃储存备用；
步骤五、分别将不同数量的CCRF-CEM细胞(0,100,200,500,1000,2000,3000,4000,5000,10000,15000,20000个)和和母液溶于20mM的pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，充分混合，得到最终体积为100μL，两端共价修饰具有AIE性质的分子的核酸适配体的最终浓度为2.5μM的混合物，然后在室温下分别测定混合物的荧光光谱。
结果表明，混合物的荧光强度随着溶液中CCRF-CEM细胞数量的增加而增强。
实施例3
一种基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测细胞的方法，步骤如下：
步骤一、将两端修饰了氨基的Ramos适配体(序列为5’-H2N-AAC ACC GGG AGG ATAGTT CGG TGG CTG TTC AGG GTC TCC TCC CGG TG-NH2-3’，从上海生工购得)溶于碳酸氢钠水溶液中(0.1M，250μL)，得到第一溶液，两端修饰了氨基的Ramos适配体的浓度为100μM；
步骤二、将化合物1溶于DMSO(250μL)中，得到第二溶液，化合物1的浓度为1mM；
步骤三、将第一溶液和第二溶液充分混合，在37℃中放置24h，离心，取上清液通过反相HPLC提纯，收集的产物，真空干燥后，得到无色固体，即TPE-aptamer；
步骤四、将TPE-aptamer溶于去离子水，得到母液，在4℃储存备用；
步骤五、分别将数量为20000的Ramos、Hela、CCRF-CEM、A929细胞和母液溶于20mM的pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，充分混合，得到最终体积为100μL，TPE-aptamer的最终浓度为2.5μM的混合物，然后在室温下分别测定混合物的荧光光谱。
测定结果如图3所示，可以看出，除了Ramos细胞，其他几种细胞均不能引起TPE-aptamer的荧光的明显增强，说明本发明的检测方法对所检测的细胞有很强的选择性。
实施例4
一种基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测细胞的方法，步骤如下：
步骤一、将两端修饰了氨基的Ramos适配体(序列为5’-H2N-AAC ACC GGG AGG ATAGTT CGG TGG CTG TTC AGG GTC TCC TCC CGG TG-NH2-3’，从上海生工购得)溶于碳酸氢钠水溶液中(0.05M，250μL)，得到第一溶液，两端修饰了氨基的Ramos适配体的浓度为50μM；
步骤二、将化合物1溶于DMSO(250μL)中，得到第二溶液，化合物1的浓度为0.25mM；
步骤三、将第一溶液和第二溶液充分混合，在35℃中放置36h，离心，取上清液通过反相HPLC提纯，收集的产物，真空干燥后，得到无色固体，即TPE-aptamer；
步骤四、将TPE-aptamer溶于去离子水，得到母液，在2℃储存备用；
步骤五、分别将不同数量的Ramos细胞(0,100,200,500,1000,2000,3000,4000,5000,10000,15000,20000个)和母液溶于70％的血清中，充分混合，得到最终体积为100μL，TPE-aptamer的最终浓度为2.0μM的混合物，然后在室温下分别测定混合物的荧光光谱。
测定结果表明，混合物的荧光强度随着溶液中Ramos细胞数量的增加而增强。在0～4000个Ramos细胞的数量范围内，细胞数量和荧光强度成正比的线性关系。
实施例5
一种基于聚集诱导发光和核酸适配体的细胞成像的方法，步骤如下：
步骤一、将两端修饰了氨基的Ramos适配体(序列为5’-H2N-AAC ACC GGG AGG ATAGTT CGG TGG CTG TTC AGG GTC TCC TCC CGG TG-NH2-3’，从上海生工购得)溶于碳酸氢钠水溶液中(0.1M，250μL)，得到第一溶液，两端修饰了氨基的Ramos适配体的浓度为100μM；
步骤二、将化合物1溶于DMSO(250μL)中，得到第二溶液，化合物1的浓度为1mM；
步骤三、将第一溶液和第二溶液充分混合，在37℃中放置24h，离心，取上清液通过反相HPLC提纯，收集的产物，真空干燥后，得到无色固体，即TPE-aptamer；
步骤四、将TPE-aptamer溶于去离子水，得到母液，在4℃储存备用；
步骤五、分别将数量为10000的Ramos、CCRF-CEM细胞和母液溶于20mM的pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，充分混合，得到最终体积为100μL，TPE-aptamer的最终浓度为2.5μM的混合物，将混合物在4℃下放置30min，然后分别滴在载玻片上，利用激光扫描共聚焦显微镜拍摄细胞的荧光照片。
结果如图4所示，Ramos细胞可以观察到明显的蓝色荧光而CCRF-CEM细胞则不行，说明本发明的检测方法可用于选择性的细胞成像。
实施例6
基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测蛋白质的方法：
步骤一、将两端修饰了氨基的溶菌酶的适配体(序列为5’-ATC AGG GCT AAA GAGTGC AGA GTT ACT TAG-3’)溶于碳酸氢钠水溶液中(0.1M，250μL)，得到第一溶液，两端修饰了氨基的溶菌酶的适配体的浓度为100μM；
步骤二、将化合物1溶于DMSO(250μL)中，得到第二溶液，化合物1的浓度为1mM；
步骤三、将第一溶液和第二溶液充分混合，在37℃中放置24h，离心，取上清液通过反相HPLC提纯，收集的产物，真空干燥后，得到两端共价修饰具有AIE性质的分子的核酸适配体；
步骤四、将两端共价修饰具有AIE性质的分子的核酸适配体溶于去离子水，得到母液，在4℃储存备用；
步骤五、分别将不同质量的溶菌酶和母液溶于20mM的pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，充分混合，得到最终体积为100μL，两端共价修饰具有AIE性质的分子的核酸适配体的最终浓度为2.5μM，溶菌酶的浓度分别为0,0.1,0.2,0.5,1,2,5,10,20,50,100nM的混合物，然后在室温下分别测定混合物的荧光光谱。
结果表明，混合物的荧光强度随着溶液中溶菌酶浓度的增加而增强。
实施例7
基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测蛋白质的方法：
步骤一、将两端修饰了氨基的血小板衍生因子的适配体(序列为5’-AGG CTA CGGCAC GTAGAG CAT CAC CAT GAT CCT-3’)，溶于碳酸氢钠水溶液中(0.1M，250μL)，得到第一溶液，两端修饰了氨基的血小板衍生因子的浓度为100μM；
步骤二、将化合物1溶于DMSO(250μL)中，得到第二溶液，化合物1的浓度为1mM；
步骤三、将第一溶液和第二溶液充分混合，在37℃中放置24h，离心，取上清液通过反相HPLC提纯，收集的产物，真空干燥后，得到两端共价修饰具有AIE性质的分子的核酸适配体；
步骤四、将两端共价修饰具有AIE性质的分子的核酸适配体溶于去离子水，得到母液，在4℃储存备用；
步骤五、分别将不同质量的血小板衍生因子和母液溶于20mM的pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，充分混合，得到最终体积为100μL，两端共价修饰具有AIE性质的分子的核酸适配体的最终浓度为2.5μM，血小板衍生因子的浓度分别为0,0.1,0.2,0.5,1,2,5,10,20,50,100nM的混合物，在室温下分别测定混合物的荧光光谱。
结果表明，混合物的荧光强度随着溶液中血小板衍生因子浓度的增加而增强。
实施例8
基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测蛋白质的方法：
步骤一、将两端修饰了氨基的血小板衍生因子的适配体(序列为5’-AGG CTA CGGCAC GTAGAG CAT CAC CAT GAT CCT-3’)，溶于碳酸氢钠水溶液中(0.15M，250μL)，得到第一溶液，两端修饰了氨基的血小板衍生因子的浓度为100μM；
步骤二、将化合物1溶于DMSO(250μL)中，得到第二溶液，化合物1的浓度为2.25mM；
步骤三、将第一溶液和第二溶液充分混合，在40℃中放置12h，离心，取上清液通过反相HPLC提纯，收集的产物，真空干燥后，得到两端共价修饰具有AIE性质的分子的核酸适配体；
步骤四、将两端共价修饰具有AIE性质的分子的核酸适配体溶于去离子水，得到母液，在8℃储存备用；
步骤五、分别将不同质量的血小板衍生因子和母液溶于90％的血清中，充分混合，得到最终体积为100μL，两端共价修饰具有AIE性质的分子的核酸适配体的最终浓度为5.0μM，血小板衍生因子的浓度分别为0,0.1,0.2,0.5,1,2,5,10,20,50,100nM的混合物，在室温下分别测定混合物的荧光光谱。
结果表明，混合物的荧光强度随着溶液中血小板衍生因子浓度的增加而增强。

Claims (10)

1.一种基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法，其特征在于，步骤如下：
步骤一、将两端修饰了氨基的适配体溶于溶剂中，得到第一溶液；
所述适配体为细胞适配体或者蛋白适配体，溶剂为碳酸氢钠水溶液或碳酸氢钾水溶液；
步骤二、将化合物1溶于溶剂中，得到第二溶液；
所述化合物1的结构式为所述溶剂为二甲基亚砜或二甲基甲酰胺；
步骤三、将第一溶液和第二溶液混合均匀，得到混合溶液，在35～40℃中放置12～36h，离心，取上清液通过反相高效液相色谱提纯，收集产物，0℃以下真空干燥后，得到无色固体，即为两端共价修饰具有AIE性质分子的核酸适配体；
所述混合溶液中，两端修饰了氨基的适配体与化合物1的摩尔比小于1:2；
步骤四、将步骤三得到的两端共价修饰具有AIE性质分子的核酸适配体加入去离子水中，得到母液；
步骤五、将步骤四中的母液、待测物与pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液或者70～90％的血清混合，混合均匀后，检测混合物的荧光强度；
所述待测物为待测细胞或者待测蛋白质，两端共价修饰具有AIE性质分子的核酸适配体的检测浓度为2～5μM；
或者，
将步骤四中的母液、待测细胞与pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液或者70～90％的血清混合，混合均匀后，在2～8℃下放置20～60min，取混合物滴在载玻片上，利用激光扫描共聚焦显微镜拍摄细胞的荧光照片；
所述两端共价修饰具有AIE性质分子的核酸适配体的检测浓度为2～5μM。
2.根据权利要求1所述的基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法，其特征在于，所述步骤一中，碳酸氢钠水溶液或碳酸氢钾水溶液的浓度为0.05～0.15M。
3.根据权利要求1所述的基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法，其特征在于，所述步骤一中，第一溶液中，两端修饰了氨基的适配体的浓度为50～150μM。
4.根据权利要求1所述的基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法，其特征在于，所述步骤二中，第二溶液中，化合物1的浓度为0.25～2.25mM。
5.根据权利要求1所述的基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法，其特征在于，所述步骤三中，两端修饰了氨基的适配体与化合物1的摩尔比为1:(5～15)。
6.根据权利要求1所述的基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法，其特征在于，所述步骤四中，母液的储存温度为在2～8℃。
7.根据权利要求1所述的基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法，其特征在于，所述步骤五中，待测细胞的数量为100以上。
8.根据权利要求1所述的基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法，其特征在于，所述步骤五中，将步骤四中的母液、待测细胞与pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液或者70～90％的血清混合，混合均匀后，在4℃下放置30min，然后滴在载玻片上。
9.根据权利要求1所述的基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法，其特征在于，所述步骤五中，血清为80％，磷酸盐缓冲溶液的浓度为20mM。
10.根据权利要求1所述的基于聚集诱导发光和核酸适配体的检测方法，其特征在于，所述步骤五中，两端共价修饰具有AIE性质分子的核酸适配体的检测浓度为2.5μM。
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