CN105925636B - α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应在合成3-羟基氧化吲哚衍生物中的应用及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了α‑胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应在合成3‑羟基氧化吲哚衍生物中的应用及方法,在α‑胰凝乳蛋白酶的催化下能将通式1和通式2生成3‑羟基氧化吲哚衍生物,该方法的催化过程简单易操作,收率最高可达99%,表现出极佳的底物适应性,不但丰富了酶的多功能性的研究,也为3‑羟基氧化吲哚衍生物的合成提供了一条高效的合成途径。
Description
技术领域
本发明属于化学领域,涉及α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应在合成3-羟基氧化吲哚衍生物中的应用,还涉及制备3-羟基氧化吲哚衍生物的方法。
背景技术
吲哚因为其特殊的结构特征自1866年被发现以来,已经成为包括医药,香料,农业化学品,颜料和材料科学等诸多领域的研究热点,这些工作清楚地显示了吲哚在有机合成中所占有的重要地位。其中3-羟基氧化吲哚是许多天然产物以及药物研究中具有生物活性物质的重要片段。而其含有的杂环结构更是成为了天然产物合成中非常吸引人的一个重要因素。正是因为这类结构表现出来的药理活性和特殊的生物活性,引起了很多科学家的研究兴趣。许多用来合成3-羟基氧化吲哚的优秀方法相继被报道。
α-胰凝乳蛋白酶(α-Chymotrypsin from bovine pancreas)也被称作糜蛋白酶,是从牛的新鲜胰腺中提取分离出的肽链内切酶,是一种丝氨酸蛋白酶,能将与芳香烃或其他大型疏水性侧链(Tyr、Trp、Phe、Met、Leu)结合的肽从键的羧基端水解。作为一种被研究的很清楚的水解酶,α-胰凝乳蛋白酶的立体结构已被阐明,是由241个氨基酸残基组成的单一肽链,分子中包含5对二硫键。α-胰凝乳蛋白酶的分子量约为25KDa,最适pH为8-9,其活性位点为第57位的组氨酸、第102位的天冬氨酸和第195位的丝氨酸,由这三个活性位点组成的催化三联体结构起着催化中心的作用。
在合成具有天然产物类似结构的方法研究中,用简捷高效的方法合成目标产物一直以来是科学家们研究的兴趣所在。因此,为3-羟基氧化吲哚的合成提供一条高效的合成途径,也为丰富酶的多功能性的研究是非常必要的。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的之一在于提供α-胰凝乳蛋白酶在催化通式1和通式2的傅克反应生成3-羟基氧化吲哚衍生物中的应用;本发明的目的之二在于提供制备3-羟基氧化吲哚衍生物的方法。
为实现上述发明目的,本发明提供如下技术方案:
2、1、α-胰凝乳蛋白酶在有机溶液中催化通式1和通式2的单取代傅克反应生成3-羟基氧化吲哚衍生物中的应用:
R1任选为H或甲基;R2任选为H、F、Cl、Br、硝基、甲基或甲氧基;R3任选为H、Br或甲氧基;
所述有机溶液任选为正己烷溶液、甲苯溶液、氯仿溶液、四氢呋喃溶液、甲基叔丁基醚溶液、二氯甲烷溶液或1,2-二氯乙烷溶液。
优选的,R1任选为H或甲基;R2任选为H、F、Cl或硝基;R3任选为H或Br。
优选的,R1为H;R2任选为Cl或硝基;R3任选为H或Br。
更优选的,所述有机溶液为含水量为10~30%体积分数的有机溶液或含10~30%(v/v)磷酸缓冲液的有机溶液,所述磷酸缓冲液的pH为7.0~10.2。
2、制备3-羟基氧化吲哚衍生物的方法,其特征在于,包括如下步骤:
以通式1、通式2为底物,α-胰凝乳蛋白酶为催化剂,在有机溶液中,在25~40℃下搅拌反应,制得3-羟基氧化吲哚衍生物;
R1任选为H或甲基,R2任选为H、F、Cl、Br、硝基、甲基或甲氧基;R3任选为H、Br或甲氧基;
所述有机溶液任选为正己烷溶液、甲苯溶液、氯仿溶液、四氢呋喃溶液、甲基叔丁基醚溶液、二氯甲烷溶液或1,2-二氯乙烷溶液。
优选的,R1任选为H或甲基;R2任选为H、F、Cl或硝基;R3任选为H或Br。
优选的,R1为H;R2任选为Cl或硝基;R3任选为H或Br。
优选的,所述有机溶剂任选为二氯甲烷或1,2-二氯乙烷。
优选的,所述有机溶液为含水量为10~30%体积分数的有机溶液或含10~30%(v/v)磷酸缓冲液的有机溶液,所述磷酸缓冲液的pH为7.0~10.2。
优选的,所述通式1和通式2的摩尔比为1:2.5~1:4。
优选的,α-胰凝乳蛋白酶的酶量为0.93~1.87kU。
本发明的有益效果在于:α-胰凝乳蛋白酶作为一种绿色环保的生物催化剂,可催化靛红(及其衍生物)和吲哚(及其衍生物)之间的反应,在有机溶液中通过傅克反应合成3-羟基氧化吲哚衍生物,得到了很高的收率(收率最高可达99%),并且表现出极佳的底物适应性。该方法扩大了α-胰凝乳蛋白酶在催化化学转化中的应用,不但丰富了酶的多功能性的研究,也为3-羟基氧化吲哚衍生物的合成提供了一条高效的合成途径。该方法的催化过程简单易操作,是有机合成3-羟基氧化吲哚衍生物的一种实用方法。
附图说明
图1为α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的时间进程(反应条件:靛红(0.30mmol),吲哚(0.90mmol),磷酸缓冲液(NaH2PO4-Na2HPO4,0.067M,pH 9.6,0.25mL),1,2-二氯乙烷(0.75mL),α-胰凝乳蛋白酶(0.93kU,固体粉末)在30℃条件下搅拌反应;收率通过硅胶柱层析分离后得到)。
图2为甲基靛红与2-甲基吲哚的傅克反应(反应条件:1-甲基靛红(0.30mmol),2-甲基吲哚(0.90mmol),磷酸缓冲液(NaH2PO4-Na2HPO4,0.067M,pH 9.6,0.25mL),1,2-二氯乙烷(0.75mL),α-胰凝乳蛋白酶(0.93kU,固体粉末)在30℃条件下搅拌反应60小时,收率通过硅胶柱层析分离后得到)。
图3为α-胰凝乳蛋白酶催化通式1与通式2反应生成3-羟基氧化吲哚衍生物反应式。
具体实施方式
下面将结合优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
一、α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应合成3-羟基氧化吲哚的溶剂的筛选
采用化合物1a(靛红)和化合物2a(吲哚)在不同溶剂中的反应作为模型反应进行α-胰凝乳蛋白酶在不同溶剂中催化效果的探究,对17种不同的溶剂进行了比较,实验结果见表1。
当选择溶剂如二甲基亚砜,N,N-二甲基甲酰胺这类极性非质子性溶剂(表1,序号1,2)的时候,并没有观察到反应的发生。而在二氯甲烷,1,2-二氯乙烷中(表1,序号14,15)反应的活性明显提高,均得到了73%的收率。在极性质子性溶剂甲醇与乙醇中(表1,序号16,17)反应选择性地生成了双吲哚取代的产物。基于此发现,对此溶剂控制产物生成的反应分别进行了研究。综上所述,选择1,2-二氯乙烷作为傅克反应合成3-羟基氧化吲哚衍生物的溶剂,而用甲醇和乙醇为双取代傅克反应的溶剂。实验结果见表1。
表1溶剂的筛选a
a反应条件:靛红(0.30mmol),吲哚(0.45mmol),去离子水(0.1mL),溶剂(0.9mL),α-胰凝乳蛋白酶(0.93kU,固体粉末)在25℃条件下搅拌反应。b收率通过硅胶柱层析分离后得到。
二、含水量对α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的影响
接下来,首先对发生在1,2-二氯乙烷中的傅克反应进行了一系列反应条件的探究(表2)。在之前大量的酶催化非专一性实验中发现,有机溶剂中适量水的加入能很大程度地影响酶催化反应的效果,因此,也研究了在1,2-二氯乙烷中不同水的含量对α-胰凝乳蛋白酶催化靛红和吲哚之间的单取代傅克反应的影响(表2)。当有机溶剂中的含水量从0增加到25%时(表2,序号1-6),目标产物的收率有一个明显的提升,从39%提升到了80%。继续逐渐增大含水量到60%的时候(表2,序号7-10),收率开始下降,推测可能是水量的增加影响了底物在反应体系中的溶解性从而造成收率的下降。因此,选择外加含水量为25%的1,2-二氯乙烷作为单取代反应的催化介质。
表2水含量对α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的影响a
a反应条件:靛红(0.30mmol),吲哚(0.45mmol),去离子水(0-0.60mL),1,2-二氯乙烷(1.0-0.40mL),α-胰凝乳蛋白酶(0.93kU,固体粉末)在25℃条件下搅拌反应72h。b收率通过硅胶柱层析分离后得到。
三、缓冲溶液的pH对α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的影响
反应体系的pH对酶的催化活性具有重要影响。采用不同pH的磷酸缓冲溶液替代去离子水考察了不同酸碱的环境对于α-胰凝乳蛋白酶催化的模型反应的影响。结果如表3所示,当磷酸缓冲液的pH从弱酸性过渡到中性以及弱碱性的过程中,随着pH的增大,产物的收率随之增加,在pH为9.6的时候收率达到最高的83%(表3,序号8),继续增加缓冲液的碱性没有观察到收率的继续提升。所以,选择pH为9.6的磷酸缓冲液替代去离子水加入1,2-二氯乙烷中作为反应介质。α-胰凝乳蛋白酶天然最适pH为8-9,与该条件选择的pH值较为相近,说明在以1,2-二氯乙烷为溶剂的体系中酶的非天然催化活性与其天然活性所需的酸碱度较为相近。
表3缓冲溶液的pH对α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的影响a
a反应条件:靛红(0.30mmol),吲哚(0.45mmol),磷酸缓冲液(NaH2PO4-Na2HPO4,0.067M,pH 4.7-10.2,0.25mL),1,2-二氯乙烷(0.75mL),α-胰凝乳蛋白酶(0.93kU,固体粉末)在25℃条件下搅拌反应72h。b收率通过硅胶柱层析分离后得到。
四、底物摩尔比对α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的影响
反应体系中底物摩尔比的不同也会很大程度的影响到反应的结果。因此考察了本反应中靛红和吲哚的不同比例,得到的结果如表4中所示。首先,固定靛红的量为1当量,以吲哚的量为变量对反应进行了探究,从表4中可以清楚地看到当吲哚的量从1当量增加到3当量的时候(表4,序号1-5)反应产物的收率有着非常明显的增加,继续增大吲哚的量没有得到更高的收率(表4,序号6)。而固定吲哚为的1当量,增加靛红的量的时候反应的收率明显降低(表4,序号7-10)。综上结果所示,选择靛红与吲哚的摩尔比为1:3作为最佳底物摩尔比进行后续的研究。
表4底物摩尔比对α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的影响a
a反应条件:靛红(0.30-0.90mmol),吲哚(0.30-1.2mmol),磷酸缓冲液(NaH2PO4-Na2HPO4,0.067M,pH9.6,0.25mL),1,2-二氯乙烷(0.75mL),α-胰凝乳蛋白酶(0.93kU,固体粉末)在25℃条件下搅拌反应72h。
b收率通过硅胶柱层析分离后得到。
五、酶量对α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的影响
为了最大限度地利用催化剂的催化效率,对反应体系的酶量进行了筛选,以期使用最少的α-胰凝乳蛋白酶来催化此模型反应。考察了酶量从0.31kU递增到2.18kU的过程中对反应结果的影响(表5)。结果发现当酶量为0.93kU的时候得到了最高达93%的收率(表5,序号3),继续增加酶量其收率有了微小的降低,当酶量为2.18kU的时候收率有了明显的降低,仅得到80%的收率(表5,序号7)。因此,选择0.93kU作为最佳催化剂载量。
表5酶量对α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的影响a
a反应条件:靛红(0.30mmol),吲哚(0.90mmol),磷酸缓冲液(NaH2PO4-Na2HPO4,0.067M,pH 9.6,0.25mL),1,2-二氯乙烷(0.75mL),α-胰凝乳蛋白酶(0.31-2.18kU,固体粉末)在25℃条件下搅拌反应72h。b收率通过硅胶柱层析分离后得到。
六、温度对α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的影响
在酶催化反应中,温度对反应有着极其重要的影响。因为不同的温度会影响酶在反应体系中的催化活性与稳定性,因此探究温度对α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的影响很有必要。通过表6可以看到,当温度为40℃时,我们得到了最高97%的收率(表6,序号5),但是在30℃时也得到了96%的收率(表6,序号4)。而在60℃时收率有了一个大幅度的降低。因此,将30℃设置为此反应的最佳温度条件。
表6温度对α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的影响a
a反应条件:靛红(0.30mmol),吲哚(0.90mmol),磷酸缓冲液(NaH2PO4-Na2HPO4,0.067M,pH 9.6,0.25mL),1,2-二氯乙烷(0.75mL),α-胰凝乳蛋白酶(0.93kU,固体粉末)在不同温度条件下搅拌反应72h。b收率通过硅胶柱层析分离后得到。
七、α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的时间进程
在对α-胰凝乳蛋白酶催化的模型反应进行了一系列反应条件的优化后,紧接着在最优条件下对模型反应的时间进程进行了探索。如图1所示,在反应刚开始的36小时内单取代产物的收率迅速上升到88%,随后随着时间的延长收率也缓慢上升,当反应进行到60小时的时候达到了收率的最大值96%,随后继续延长反应的时间,其收率不再有所增加,呈下降趋势。
八、α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的对照实验
为了验证该模型反应确实是由α-胰凝乳蛋白酶催化发生,做了一系列的对照实验(表7)。首先,用牛血清白蛋白和鸡蛋清白蛋白代替α-胰凝乳蛋白酶(BPC),分别得到了22%和17%的收率(表7,序号12,13),说明了反应不是α-胰凝乳蛋白酶表面的氨基酸残基催化的。接着我们分别用尿素和盐酸胍对酶进行了2小时的预处理,并用处理过的酶催化傅克反应仅仅得到了14%与33%的收率(表7,序号2和4),而与此同时尿素和盐酸胍单独也可催化此反应并得到12%与20%的收率(表7,序号3和5)。为了进一步探索酶被处理过后的天然活性,对其做了酶活力的测定。结果显示被尿素处理过的酶活力仅剩9.3U/mg,而被盐酸胍处理过的酶活力也低到17.2U/mg,与未处理过的酶31U/mg的天然活力相比有明显下降。因为尿素和盐酸胍可以有效地破坏酶的三维空间结构,所以基于上述结果,我们认为酶的三维结构在催化该反应中起到了至关重要的作用。通过查阅相关文献得知α-胰凝乳蛋白酶的活性位点是由102位天冬氨酸(Asp-102),195位丝氨酸(Ser-195)和57位组氨酸(His-57)三者组成一个催化三联体的结构。于是分别对活性位点的三个不同的氨基酸残基进行了抑制处理。因为二环己基碳二亚胺(DCC)是天冬氨酸的特异性抑制剂,因此接下来用DCC对α-胰凝乳蛋白酶进行了2小时的处理,然后再用处理过的酶来催化该反应,发现目标产物的收率降到了43%而单独DCC催化得到了31%的单取代产物。焦碳酸二乙酯(DEPC)作为组氨酸的特异性抑制剂也被用来处理α-胰凝乳蛋白酶,被DEPC处理过的酶催化模型反应得到了21%的收率(表7,序号8),而DPEC本身可以催化得到13%的单取代产物(表7,序号9)。经过酶活力的测定我们发现被DPEC处理过的酶仅剩8.3U/mg的天然活力。最后,我们还用对甲苯磺酰氟(PMSF)这种丝氨酸抑制剂对酶进行了处理(表7,序号10),被PMSF处理过的酶催化模型反应只得到27%的收率,而PMSF单独可以催化得到21%的收率(表7,序号11),在测定酶活后我们发现其活力仅有4.4U/mg。综合以上实验结果可知,酶的三维结构和活性位点在催化傅克反应中起到了不可替代的作用。
表7 α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的对照实验a
a反应条件:靛红(0.30mmol),吲哚(0.90mmol),磷酸缓冲液(NaH2PO4-Na2HPO4,0.067M,pH 9.6,0.25mL),1,2-二氯乙烷(0.75mL),α-胰凝乳蛋白酶(0.93kU,固体粉末)在30℃条件下搅拌反应72h。b收率通过硅胶柱层析分离后得到。c活力定义:在温度为25℃,pH为7.8的条件下,每分钟水解1μmol N-苯甲酰-L-酪氨酸乙酯的酶量为1U。d将30mg的酶溶于8M的尿素溶液(将480mg尿素溶于1mL去离子水中)于室温下搅拌处理2小时后将水通过冻干除去。e将30mg的酶溶于6mM的盐酸胍溶液(将573.18mg盐酸胍溶于1mL去离子水中)于室温下搅拌处理2小时后将水通过冻干除去。f将30mg的酶溶于1mM的DCC溶液(将206mg DCC溶于1mL去离子水中)于室温下搅拌处理2小时后将水通过冻干除去。g将30mg的酶溶于0.3mM的DEPC溶液(将43.4μL DEPC溶于1mL pH为8.04的磷酸缓冲液中)于室温下搅拌处理2小时后将水通过冻干除去。h将30mg的酶溶于0.6mM的PMSF溶液(将104.5mg PMSF溶于1mL四氢呋喃中)于室温下搅拌处理2小时后将有机溶剂旋干。
九、α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的底物扩展
在对模型反应进行了条件优化以后,为了探究α-胰凝乳蛋白酶催化该反应的底物适用性,不同取代类型的靛红与不同取代类型的吲哚被用于该酶催化的傅克反应。从表8可以看出α-胰凝乳蛋白酶对傅克反应有着极其出色的催化效果,具有不同类型取代的靛红和吲哚之间均得到了令人非常满意的收率。除了表8中所列出的底物之外,还用α-胰凝乳蛋白酶催化了1-甲基靛红与2-甲基吲哚之间的反应(图2),在60个小时的反应之后得到了85%的收率,表现出良好的催化能力。遗憾的是,当尝试用1-甲基取代的吲哚与不同取代的靛红进行反应时,并未检测到有对应产物的生成。即便如此,α-胰凝乳蛋白酶对于发生在1,2-二氯乙烷中的单取代傅克反应依然显示出了相当出色的底物适应性。
表8 α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应的底物扩展a
a反应条件:1(0.30mmol),2(0.90mmol),磷酸缓冲液(NaH2PO4-Na2HPO4,0.067M,pH9.6,0.25mL),1,2-二氯乙烷(0.75mL),α-胰凝乳蛋白酶(0.93kU,固体粉末)在30℃条件下搅拌反应。b收率通过硅胶柱层析分离后得到。
十、α-胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应生成3-羟基氧化吲哚衍生物的实验
根据上述优化条件获得α-胰凝乳蛋白酶催化通式1与通式2反应生成3-羟基氧化吲哚衍生物(图3),其最佳条件为:在10mL的圆底烧瓶中依次加入0.3mmol通式1的化合物,0.9mmol通式2的化合物,0.75mL 1,2-二氯乙烷,0.25mL磷酸缓冲液(0.067M,pH 9.6),0.93kUα-胰凝乳蛋白酶,在30℃下搅拌反应,用薄层色谱进行反应的监测。反应结束后,将酶过滤掉,用乙酸乙酯洗涤滤饼使得产品都溶于滤液中,随后用无水硫酸钠干燥滤液,将滤液浓缩后得粗产品,然后将粗产品通过快速柱色谱法纯化得到单取代目标产物(石油醚:乙酸乙酯=1:1-1:3)。
获得的产物经氢核磁共振波谱法检测,数据如下:
化合物(3a):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.97(s,1H),10.31(s,1H),7.35(dd,J=14.6,8.1Hz,2H),7.28–7.22(m,2H),7.08(d,J=2.5Hz,1H),7.05–7.01(m,1H),6.96(td,J=7.5,0.7Hz,1H),6.91(d,J=7.7Hz,1H),6.90–6.85(m,1H),6.33(s,1H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ178.95,142.21,137.33,133.96,129.47,125.45,125.21,124.02,122.11,121.48,120.82,118.90,115.96,111.97,110.12,75.43.
化合物(3b):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.19(s,1H),7.35(dt,J=17.6,7.3Hz,4H),7.17–6.97(m,4H),6.88(t,J=7.4Hz,1H),6.50(s,1H),3.17(s,3H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ177.17,143.59,137.35,133.28,129.62,125.40,124.78,124.15,122.83,121.51,120.77,118.98,115.63,112.02,108.95,75.17,26.43.
化合物(3c):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.11(s,1H),11.08(s,1H),8.26(d,J=8.6Hz,1H),8.09(s,1H),7.53(d,J=8.0Hz,1H),7.38(d,J=8.1Hz,1H),7.13(d,J=9.4Hz,2H),7.08(t,J=7.5Hz,1H),6.95(t,J=7.5Hz,1H),6.76(s,1H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ178.97,148.61,142.82,137.44,134.77,126.88,125.25,124.37,121.84,120.75,120.51,119.31,114.45,112.20,110.50,75.05.
化合物(3d):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.03(s,1H),10.49(s,1H),7.37(dd,J=14.7,8.1Hz,2H),7.31(dd,J=8.3,1.7Hz,1H),7.22(d,J=1.5Hz,1H),7.11(d,J=2.1Hz,1H),7.05(t,J=7.5Hz,1H),6.96–6.87(m,2H),6.52(s,1H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ178.52,141.02,137.32,135.97,129.34,126.16,125.16,124.07,121.66,120.56,119.14,115.21,112.09,111.69,75.48.
化合物(3e):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.03(s,1H),10.49(s,1H),7.37(dd,J=14.7,8.1Hz,2H),7.31(dd,J=8.3,1.7Hz,1H),7.22(d,J=1.5Hz,1H),7.11(d,J=2.1Hz,1H),7.05(t,J=7.5Hz,1H),6.96–6.87(m,2H),6.52(s,1H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ178.52,141.02,137.32,135.97,129.34,126.16,125.16,124.07,121.66,120.56,119.14,115.21,112.09,111.69,75.48.
化合物(3f):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.87(s,1H),7.32(t,J=7.7Hz,1H),7.24(d,J=7.3Hz,1H),7.19(d,J=8.1Hz,1H),7.06(d,J=7.8Hz,1H),6.99(t,J=7.4Hz,1H),6.90(t,J=7.5Hz,2H),6.73(t,J=7.5Hz,1H),6.33(s,1H),3.17(s,3H),2.38(s,3H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ177.33,143.47,135.36,133.91,129.55,127.08,124.89,122.86,120.30,119.61,118.76,110.76,109.82,108.96,76.09,26.39,13.70.
化合物(3g):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.24(s,1H),10.50(s,1H),7.78(s,1H),7.35(dd,J=5.5,3.1Hz,2H),7.28(s,1H),7.19(d,J=8.6Hz,1H),7.03(d,J=1.9Hz,1H),6.94(d,J=8.3Hz,1H),6.60(s,1H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ178.32,141.03,136.09,135.38,129.57,127.30,126.30,125.65,125.21,124.25,123.54,115.04,114.13,111.80,75.26.
化合物(3h):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.20(s,1H),10.36(s,1H),7.75(s,1H),7.35(d,J=8.6Hz,1H),7.30(t,J=6.9Hz,2H),7.19(dd,J=8.6,1.4Hz,1H),7.02(dd,J=9.6,4.9Hz,2H),6.93(d,J=7.9Hz,1H),6.45(s,1H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ178.71,142.15,136.05,133.39,129.71,127.45,125.57,125.26,124.10,123.66,122.28,115.80,114.01,111.70,110.19,75.17.
化合物(3i):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.83(s,1H),10.32(s,1H),7.32–7.20(m,3H),7.03(d,J=2.0Hz,1H),6.99(t,J=7.4Hz,1H),6.93(d,J=7.7Hz,1H),6.87(d,J=1.1Hz,1H),6.72(dd,J=8.7,1.9Hz,1H),6.33(s,1H),3.64(s,3H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ178.89,153.24,142.18,133.84,132.50,129.48,125.86,125.28,124.68,122.13,115.53,112.46,111.34,110.00,103.24,75.42,55.68.
化合物(3j):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.32(s,1H),11.08(s,1H),8.29(dd,J=8.6,1.3Hz,1H),8.14(s,1H),7.95(s,1H),7.37(d,J=8.6Hz,1H),7.23(d,J=8.6Hz,1H),7.13(d,J=8.6Hz,1H),7.06(d,J=1.6Hz,1H),6.81(s,1H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ178.75,148.58,142.92,136.22,134.15,127.37,127.03,125.92,124.44,123.81,120.69,114.24,111.96,110.54,74.83.
化合物(3k):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.22(s,1H),7.82(s,1H),7.43–7.33(m,3H),7.20(d,J=8.6Hz,1H),7.15–7.06(m,2H),6.96(s,1H),6.51(s,1H),3.15(s,3H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ176.90,143.59,136.07,132.66,129.84,127.54,125.68,124.84,124.19,123.91,122.95,115.47,114.03,111.77,109.07,74.91,26.44.
化合物(3l):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.94(s,1H),10.23(s,1H),7.33(d,J=8.3Hz,2H),7.12(d,J=2.3Hz,1H),7.02(dd,J=15.8,6.8Hz,3H),6.86(t,J=7.5Hz,1H),6.80(d,J=8.3Hz,1H),6.30(s,1H),2.20(s,3H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ178.99,139.69,137.30,134.03,130.92,129.67,125.81,125.39,123.94,121.48,120.67,118.93,116.12,111.95,109.84,75.53,21.16.
化合物(3m):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.18(s,1H),10.25(s,1H),7.71(s,1H),7.33(d,J=8.6Hz,1H),7.17(d,J=8.6Hz,1H),7.09(d,J=7.2Hz,2H),7.03(d,J=1.5Hz,1H),6.82(d,J=8.0Hz,1H),6.38(s,1H),2.26(s,3H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ178.74,139.65,136.03,133.46,131.08,129.87,127.39,125.83,125.54,124.04,123.53,115.92,113.99,111.64,109.91,75.26,21.18.
化合物(3n):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.90(s,1H),10.22(s,1H),7.26(d,J=8.6Hz,1H),7.07(s,1H),6.88(d,J=18.5Hz,4H),6.73(d,J=8.2Hz,1H),6.39(s,1H),3.69(s,3H),3.65(s,3H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ178.85,155.45,153.28,135.45,135.11,132.54,125.84,124.73,115.57,114.18,112.49,112.14,111.33,110.46,103.24,75.87,55.96,55.71.
化合物(3o):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.26(s,1H),10.41(s,1H),7.80(s,1H),7.36(d,J=8.6Hz,1H),7.21(d,J=8.6Hz,1H),7.14(dd,J=10.4,4.6Hz,2H),7.05(d,J=2.0Hz,1H),6.93(dd,J=9.1,4.1Hz,1H),6.60(s,1H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ178.65,159.37,157.80,138.28,136.09,135.08,127.36,125.66,124.23,123.62,116.05,115.90,115.20,114.08,112.92,112.76,111.81,111.09,75.48.
化合物(3p):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.92(s,1H),10.53(s,1H),7.44(dd,J=8.2,1.8Hz,1H),7.36(d,J=1.7Hz,1H),7.26(d,J=8.8Hz,1H),7.05(d,J=2.0Hz,1H),6.90(d,J=8.3Hz,1H),6.87(d,J=1.9Hz,1H),6.72(dd,J=8.8,2.2Hz,1H),6.51(s,1H),3.64(s,3H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ178.35,153.38,141.50,136.26,132.53,132.16,127.89,125.65,124.78,114.78,113.78,112.66,112.19,111.46,103.01,75.47,55.73.
化合物(3q):
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.79(s,1H),10.20(s,1H),7.22(d,J=8.7Hz,1H),7.05(d,J=6.0Hz,3H),6.81(dd,J=11.4,5.0Hz,2H),6.69(dd,J=8.7,2.1Hz,1H),6.26(s,1H),3.61(s,3H),2.22(s,3H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ178.94,153.23,139.72,133.90,132.50,130.90,129.63,125.84,124.66,115.67,112.43,111.26,109.75,103.18,75.52,55.68,21.16.
最后说明的是,以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述,但本领域技术人员应当理解,可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变,而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。
Claims (10)
1.α-胰凝乳蛋白酶在有机溶液中催化通式1和通式2的单取代傅克反应生成3-羟基氧化吲哚衍生物中的应用:
R1任选为H或甲基;R2任选为H、F、Cl、Br、硝基、甲基或甲氧基;R3任选为H、Br或甲氧基;
所述有机溶液任选为正己烷溶液、甲苯溶液、氯仿溶液、四氢呋喃溶液、甲基叔丁基醚溶液、二氯甲烷溶液或1,2-二氯乙烷溶液。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述R1任选为H或甲基;R2任选为H、F、Cl或硝基;R3任选为H或Br。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述R1为H;R2任选为Cl或硝基;R3任选为H或Br。
4.制备3-羟基氧化吲哚衍生物的方法,其特征在于,包括如下步骤:
以通式1、通式2为底物,α-胰凝乳蛋白酶为催化剂,在有机溶液中,在25~40℃下搅拌反应,制得3-羟基氧化吲哚衍生物;
R1任选为H或甲基,R2任选为H、F、Cl、Br、硝基、甲基或甲氧基;R3任选为H、Br或甲氧基;
所述有机溶液任选为正己烷溶液、甲苯溶液、氯仿溶液、四氢呋喃溶液、甲基叔丁基醚溶液、二氯甲烷溶液或1,2-二氯乙烷溶液。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:所述R1任选为H或甲基;R2任选为H、F、Cl或硝基;所述通式R3任选为H或Br。
6.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:所述R1为H;R2任选为Cl或硝基;R3任选为H或Br。
7.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:所述有机溶液任选为二氯甲烷溶液或1,2-二氯乙烷溶液。
8.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:所述有机溶液为含水量为10~30%体积分数的有机溶液或含10~30%(v/v)磷酸缓冲液的有机溶液,所述磷酸缓冲液的pH为7.0~10.2。
9.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:所述通式1和通式2的摩尔比为1:2.5~1:4。
10.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:α-胰凝乳蛋白酶的酶量为0.93~1.87kU。
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