CN105850730A - 植物材料的表面消毒方法 - Google Patents

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唐宁
张边江
陈全战
王立科
杨平
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Nanjing Xiaozhuang University
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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor

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  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
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Abstract

本发明提供了一种安全、有效的植物材料(植物外植体)表面的消毒方法。该方法将待消毒的植物外植体放置在带有滤网或滤膜的滤芯中，然后通过高速离心使植物材料表面的微生物在离心力作用下转移到离心管底部，从而达到除菌的目的。方法简单有效，不污染环境，有望在实验中广泛采用。

Description

植物材料的表面消毒方法
技术领域
本发明涉及生物技术，尤其涉及一种植物材料的表面消毒方法。
背景技术
植物组织培养技术，是植物细胞工程学、遗传学、植物生理学、生物化学与分子生物学研究的重要基本技术。植物组织培养技术不仅仅用于快速繁殖，在单倍体育种、种质保存、生理学研究和基因转化等方面也有着广泛的用途。在植物组织培养中始终贯穿着一个无菌的概念，一个植物外植体在接种之前，必须先通过表面消毒然后才能获得无菌材料。
传统的用于植物外植体接种前消毒的方法是：把外植体在消毒溶液或者有毒气体下处理。这种方法的缺点是：1.操作繁琐；2.有毒成分渗透到植物组织内部后，对后续培养造成不利影响；3.使用过的有毒废液污染环境。
发明内容
本发明的目的，就是为了解决上述现有技术存在的问题，提供一种植物材料的表面消毒方法。
为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：一种植物材料的表面消毒方法，包括以下步骤：
步骤一、将待消毒的植物材料在流动的自来水下清洗干净；
步骤二、将清洗干净的植物材料转移到滤芯并置于第一个离心管中，离心管和滤芯都加满水，然后在12000rpm-20000rpm下高速离心10-15分钟；
步骤三、将装有植物材料的滤芯转移到第二个离心管中，离心管和滤芯都加满无菌水，在12000rpm下高速离心5分钟，重复3次；
步骤四、将步骤三中装有植物材料的滤芯转移到第三个离心管中，然后用无菌水把滤芯装满，并在12000rpm下高速离心2分钟，重复3次，最终得到无菌的植物材料。
步骤二到步骤四在无菌设备上操作。
各离心管均经高压灭菌后使用。
步骤二到步骤三中使用的滤芯底部设有滤网，滤网的孔径为0.5-1毫米。
步骤四中使用的滤芯底部设有滤膜，滤膜的孔径为50-100微米。
本发明提供了一种安全、有效的植物材料(植物外植体)的表面消毒方法。本方法将待消毒的植物外植体放置在带有滤网或滤膜的滤芯中，然后通过高速离心使植物材料表面的微生物在离心力作用下转移到离心管底部，从而达到除菌的目的。方法简单有效，不污染环境，有望在实验中广泛采用。
具体实施方式
本发明植物材料的表面消毒方法是，首先将待消毒的植物外植体在流动的自来水下清洗，洗掉肉眼可见的泥沙和其它污物；然后植物材料转移到带有滤芯(滤芯底部设有滤网，滤网的孔径为0.5-1毫米)的离心管中，离心管和滤芯都加满水，然后在12000rpm-20000rpm下高速离心10-15分钟；接着将装有植物材料的滤芯转移到另一个干净的离心管中，离心管和滤芯都加满无菌水，然后在12000rpm下高速离心5分钟；重复三次。然后将带有植物材料的滤芯(滤芯底部设有滤膜，滤膜的孔径为50-100微米)转移到另一个空的干净离心管中，用无菌水把滤芯装满，并在12000rpm下高速离心2分钟，重复三次，最终得到无菌的外植体。
上述步骤二到步骤四必须在超净工作台等无菌设备上操作；
上述步骤二到步骤四使用的离心管，须高压灭菌后使用，其体积视植物外植体的大小而定。
申请人按照上述方法对温莪术块茎，小蔓长春花叶片和大豆种子进行了接种前表面消毒，离心管体积为20毫升，滤芯体积为10毫升。滤芯中滤膜的孔径为100μm，上述材料消毒后，全部接种MS固体培养基，结果温莪术块茎污染率50％，小蔓长春花污染率20％，大豆种子无一例污染。
本实施例中使用的方法，适用于大部分植物的外植体接种前表面消毒，具有很大的应用价值。

Claims (5)

1.一种植物材料的表面消毒方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、将待消毒的植物材料在流动的自来水下清洗干净；
步骤二、将清洗干净的植物材料转移到滤芯并置于第一个离心管中，离心管和滤芯都加满水，然后在12000rpm-20000rpm下高速离心10-15分钟；
步骤三、将装有植物材料的滤芯转移到第二个离心管中，离心管和滤芯都加满无菌水，在12000rpm下高速离心5分钟，重复3次；
步骤四、将步骤三中装有植物材料的滤芯转移到第三个离心管中，然后用无菌水把滤芯装满，并在12000rpm下高速离心2分钟，重复3次，最终得到无菌的植物材料。
2.根据权利要求1所述的植物材料的表面消毒方法，其特征在于：步骤二到步骤四在无菌设备上操作。
3.根据权利要求1所述的植物材料的表面消毒方法，其特征在于：各离心管均经高压灭菌后使用。
4.根据权利要求1所述的植物材料的表面消毒方法，其特征在于：步骤二到步骤三中使用的滤芯底部设有滤网，滤网的孔径为0.5-1毫米。
5.根据权利要求1所述的植物材料的表面消毒方法，其特征在于：步骤四中使用的滤芯底部设有滤膜，滤膜的孔径为50-100微米。
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CN201453700U (zh) * 2009-06-05 2010-05-12 重庆大学 外植体表面灭菌装置
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