CN105758944A - 一种采用高效液相色谱检测护肤水中荧光增白剂的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种采用高效液相色谱检测护肤水中荧光增白剂的方法，包括有标准溶液配制、超声辅助提取、分散液液微萃取、以及高效液相色谱分析。本发明能够节省大量对人体有害的有机溶剂的使用，具有灵敏，准确，省时，稳定，精密度高，重现性好等优点，并且适合于大批量的检测护肤水样品。

Description

一种采用高效液相色谱检测护肤水中荧光增白剂的方法

[技术领域]

本发明涉及一种采用高效液相色谱检测护肤水中荧光增白剂的方法。

[背景技术]

荧光增白剂是一种荧光染料，又称为白色染料，是一种能吸收不可见的紫外光(波长300～400nm)，再激发出可见的蓝色或蓝紫色荧光(波长420～480nm)的复杂有机化合物。其可用以补充所应用产品的蓝紫光不足，并增加照射到产品上的光的总反射量，从而使肉眼看到的物质很白，达到增白增艳的效果。现今，世界上已生产的荧光增白剂约有15种类型，近400余种化合物。商品剂型有粉状物、液状物、悬浮分散液等，按离子属性分为阴离子性、阳离子性、非离子性。不同品种的荧光增白剂物化性能相异，使用条件、方法和对象也不一，不同品种的荧光增白剂也有不同的产品质量标准。我国自改革开放以来荧光增白剂工业有了大发展，先后开发出40余个品种的荧光增白剂，它们分属不同的化学结构类型，适用于不同纤维及其混纺织物和不同增白工艺。目前荧光增白剂已广泛地应用于纸张、塑料、皮革、洗涤剂等制造行业以及荧光探测、防伪印刷等高科技领域。

现今一些不法化妆品生产者习惯在化妆品中添加荧光增白剂，这是因为根据色彩学的“猜测”，我们是黄种人，基本肤色是黄光。如果可以掺杂一些蓝白光的光源，“黄+蓝白＝白”就会出现白色透亮的感觉。因此在洗面乳中添加荧光剂，可以出现“洗完就白”的感觉。在美白乳液、护肤水中添加荧光剂，就会出现“擦上就白”的感觉。追根究底，这些“感觉”并不真的改善皮肤，只是“虚伪地装饰肤色”的效果。皮肤是人体最大的器官，荧光增白剂与皮肤接触后，对皮肤黏膜或眼有强烈刺激作用，出现皮肤起皱、汗液减少、红肿瘙痒、感染出血、紫斑溃烂等症状，引发变态反应性皮炎或接触性皮炎等疾病，病程最短4小时，最长6天，一般停止接触便会逐渐消失。荧光增白剂中含有的一些特别活跃的分子，化学结构与DNA的化学结构类似，较容易迁移到角质层、血液里，它不像一般化学成分那样容易被分解，而是在人体内蓄积，产生许多有害的作用，大大削减人体免疫力，还会造成血液系统受损，引起溶血现象。荧光剂与伤口外的蛋白质结合，还会阻碍伤口的愈合。长期使用添加了大量的荧光增白剂的作业本会影响学生视力。荧光增白剂被人体吸收后，能使人体细胞出现变异性倾向，其毒性累积在肝脏或其他重要器官，成为潜在的致癌因素。国家卫生标准已明确规定:食品包装用原纸、餐具洗涤剂、食品工具设备用洗涤剂与洗涤消毒剂中均不得检出荧光性物质，但对于化妆品中荧光增白剂的使用未见规定。

本发明将分散液液微萃取技术运用于护肤水中荧光增白剂的检测，为了提高萃取效率，同时加入了超声萃取作为辅助，并通过关键影响因子的实验研究，确定了萃取过程最优化条件

[发明内容]

本发明克服了上述技术的不足，提供了一种采用高效液相色谱检测护肤水中荧光增白剂的方法，其适用于大批量检测护肤水样品。

为实现上述目的，本发明采用了下列技术方案：

(1)标准溶液配制：准确称取荧光增白剂353、85、113、351、71、162、140、135、199、393、220标准品约50.0mg，于各自的50mL容量瓶中，用三氯甲烷配制成质量浓度为1mg/mL的标准储备液，准确吸取储备液(353)7ml、(220)7ml、(85)4ml、(113)4ml、(351)0.1ml、(71)2ml、(162)1ml、(140)0.4ml、(135)0.1ml、(199)0.2ml、(393)1ml于100ml容量瓶中，并用乙腈定容至刻度，配制成11种荧光增白剂的混合溶液，然后进行高效液相色谱检测，绘制标准的高效液相色谱图；

(2)超声辅助提取：称取1.0g护肤水样品，用超纯水定容至5.0ml，50℃超声提取10min；加入0.25gNaCl，涡旋溶解2min，用NaOH溶液调pH至8.0，溶液移入10ml锥形离心管中；

(3)分散液液微萃取：将分散剂1.0mL乙腈和萃取剂25μLCHCl3混合，用1mL的玻璃注射器迅速注入(2)的溶液中，轻晃离心管，混合形成水、乙腈、三氯甲烷的乳浊液，以4000r/min离心5min，离心后的下层溶液用50μL微型注射器取20μL，进行高效液相色谱检测；

(4)高效液相色谱检测的条件为色谱柱：InertsilPh-3，4.6mm×250mm，5μm；柱温：35℃；进样量：10μl；荧光检测器检测波长：发射波长λex:365nm，激发波长λem:430nm；流动相：A为20mmol乙酸铵溶液，B为甲醇，C为乙腈；流速为0.5mL/min；梯度洗脱：0～7min75％A相降至65％，13.8％B相升至19.3％；保持2min；9～25min65％A相降至40％，19.3％B相升至33％；25min～35.1min40％A相降至20％，33％B相升至44％；35.1min～40min20％A相降至0，44％B相升至55％；40min～43minA相升至75％，55％B相降至13.8％；保持5min。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、本方法对护肤水样品进行了超声辅助提取和分散液液微萃取，然后过行高效液相色谱检测，其只需少量分散剂、萃取剂，能够减少对检测人员的毒害作用，保护环境。

2、本方法对护肤水样品的前处理时间短，比传统的检测方法，节省了分析时间，因此适用于大批量检测护肤水样品。

3、采用本方法测定护肤水中荧光增白剂，灵敏度高，检测限为0.05mg/kg～3.5mg/kg。

[附图说明]

图1是11种荧光增白剂标准的高效液相色谱图，其中，图中标号1是荧光增白剂C.I.353；标号2是荧光增白剂C.I.220；标号3是荧光增白剂C.I.85；标号4是荧光增白剂C.I.113；标号5是荧光增白剂C.I.351；标号6是荧光增白剂C.I.71；标号7是荧光增白剂C.I.162；标号8是荧光增白剂C.I.140；标号9是荧光增白剂C.I.135；标号10是荧光增白剂C.I.199；标号11是荧光增白剂C.I.393。

图2是阴性空白样品色谱图。

图3是阴性样品加标色谱图

[具体实施方式]

以下结合附图通过实施例对本发明特征及其它相关特征作进一步详细说明，以便于同行业技术人员的理解：

本发明首先确定最优条件的控制参数，影响超声辅助萃取和分散液液微萃取效率的主要因素包括：萃取剂的类型和用量、超声时间、分散剂的用量、pH值和盐浓度的影响。

超声辅助萃取考察了不同萃取剂有氯苯、四氯化碳、二氯甲烷和三氯甲烷对回收率的影响，每组实验平行测定三次，结果表明，三氯甲烷作为萃取剂对目标物的回收率达到最大，二氯甲烷与分散剂无法形成稳定的两相体系；相同体积下不同的萃取剂所形成的沉积相的体积液不同，沉积相体积四氯化碳为25μL，氯苯为50μL，三氯甲烷为25μL，实验表明，三氯甲烷有较高的回收率，萃取效果最好，因此选用三氯甲烷作为萃取剂。

超声时间的确定：充足的超声时间能够保证足够的萃取效率，但是过长的时间存在导致分析物被破坏的可能，另外超声的热效应使得水温上升，这些都会对萃取效果产生影响。对萃取时间分别是4、8、10、12、16min的萃取效率进行考察，结果表明，10-16min时各目标物萃取效率基本保持不变，因此，本发明选择10min作为最优超声时间。

分散剂的用量考察了乙腈体积0.4～1.6mL对回收率的影响。分散剂体积为1.0mL时11种荧光增白剂回收率最高。这是因为分散剂体积较小时，萃取剂不能均匀分散在水相中，回收率低；分散剂体积较大时，分析物在水中的溶解度增大不易被萃取。因此实验选用乙腈的最佳体积为1.0mL。

pH值和盐浓度的影响pH值影响荧光增白剂分子在水溶液中的存在方式，进而影响到萃取效率，因此，以乙酸和NaOH溶液调节水样的酸度，考察酸性(pH＝4.0)、(pH＝6.0)中性(pH＝7.0)和碱性(pH＝8.0)、(pH＝10.0)条件对萃取效率的影响，发现pH＝8.0时萃取效最好。向超纯水溶液中加入NaCl(0.00～0.045g)，考察了盐效应对回收率的影响。实验表明，在加入0.00～0.020g的NaCl时，回收率随着盐浓度的增加而增加，并且在加入0.025gNaCl时回收率最大；加入0.025～0.045g的NaCl，回收率降低。这可能是因为增加离子强度，会降低目标化合物在水相的溶解度，提高其在有机相的分配系数；但当盐浓度过大时，样品溶液的粘度变大，目标物与盐离子之间的静电作用力增强，导致其传质能力降低，从而降低了回收率。因此，本实验选择加入0.025g的NaCl。

实施例

(1)标准溶液配制：准确称取荧光增白剂353、85、113、351、71、162、140、135、199、393、220标准品约50.0mg，于各自的50mL容量瓶中，用三氯甲烷配制成质量浓度为1mg/mL的标准储备液，准确吸取储备液(353)7ml、(220)7ml、(85)4ml、(113)4ml、(351)0.1ml、(71)2ml、(162)1ml、(140)0.4ml、(135)0.1ml、(199)0.2ml、(393)1ml于100ml容量瓶中，并用乙腈定容至刻度，配制成11种荧光增白剂的混合溶液，然后进行高效液相色谱检测，绘制标准的高效液相色谱图；

(2)超声辅助提取：称取1.0g护肤水样品，用超纯水定容至5.0ml，50℃超声提取10min；加入0.25gNaCl，涡旋溶解2min，用NaOH溶液调pH至8.0，溶液移入10ml锥形离心管中；

(3)分散液液微萃取：将分散剂1.0mL乙腈和萃取剂25μLCHCl3混合，用1mL的玻璃注射器迅速注入(2)的溶液中，轻晃离心管，混合形成水、乙腈、三氯甲烷的乳浊液，以4000r/min离心5min，离心后的下层溶液用50μL微型注射器取20μL，进行高效液相色谱检测；

(4)高效液相色谱检测的条件为色谱柱：InertsilPh-3，4.6mm×250mm，5μm；柱温：35℃；进样量：10μl；荧光检测器检测波长：发射波长λex:365nm，激发波长λem:430nm；流动相：A为20mmol乙酸铵溶液，B为甲醇，C为乙腈；流速为0.5mL/min；梯度洗脱：0～7min75％A相降至65％，13.8％B相升至19.3％；保持2min；9～25min65％A相降至40％，19.3％B相升至33％；25min～35.1min40％A相降至20％，33％B相升至44％；35.1min～40min20％A相降至0，44％B相升至55％；40min～43minA相升至75％，55％B相降至13.8％；保持5min。

3种样品中11种荧光增白剂含量的检测结果表明：B号样品中检出荧光增白剂199，检出量为5.92mg/g，A和C样品中未检出11种荧光增白剂。

通过对加标阴性护肤水样品的重复检验，相对标准偏差(RSD)(n＝6)为：1.23～6.48％，以3倍信噪比(S/N)对应的目标物浓度作为检测限(LOD)，浓度范围在0.05～35mg/kg，表1给出了加标阴性样品的精密度实验结果。

表1阴性样品加标回收率和相对标准偏差

Claims (1)

1.一种采用高效液相色谱检测护肤水中荧光增白剂的方法，其特征在于包括：

(1)标准溶液配制：准确称取荧光增白剂353、85、113、351、71、162、140、135、199、393、220标准品约50.0mg，于各自的50mL容量瓶中，用三氯甲烷配制成质量浓度为1mg/mL的标准储备液，准确吸取储备液(353)7ml、(220)7ml、(85)4ml、(113)4ml、(351)0.1ml、(71)2ml、(162)1ml、(140)0.4ml、(135)0.1ml、(199)0.2ml、(393)1ml于100ml容量瓶中，并用乙腈定容至刻度，配制成11种荧光增白剂的混合溶液，然后进行高效液相色谱检测，绘制标准的高效液相色谱图；

(2)超声辅助提取：称取1.0g护肤水样品，用超纯水定容至5.0ml，50℃超声提取10min；加入0.25gNaCl，涡旋溶解2min，用NaOH溶液调pH至8.0，溶液移入10ml锥形离心管中；

(3)分散液液微萃取：将分散剂1.0mL乙腈和萃取剂25μLCHCl3混合，用1mL的玻璃注射器迅速注入(2)的溶液中，轻晃离心管，混合形成水、乙腈、三氯甲烷的乳浊液，以4000r/min离心5min，离心后的下层溶液用50μL微型注射器取20μL，进行高效液相色谱检测；

(4)高效液相色谱检测的条件为色谱柱：InertsilPh-3，4.6mm×250mm，5μm；柱温：35℃；进样量：10μl；荧光检测器检测波长：发射波长λex:365nm，激发波长λem:430nm；流动相：A为20mmol乙酸铵溶液，B为甲醇，C为乙腈；流速为0.5mL/min；梯度洗脱：0～7min75％A相降至65％，13.8％B相升至19.3％；保持2min；9～25min65％A相降至40％，19.3％B相升至33％；25min～35.1min40％A相降至20％，33％B相升至44％；35.1min～40min20％A相降至0，44％B相升至55％；40min～43minA相升至75％，55％B相降至13.8％；保持5min。