CN105748545A - 三七转化皂苷、其抗真菌药物组合物及制备方法和应用 - Google Patents

三七转化皂苷、其抗真菌药物组合物及制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种三七转化皂苷、其抗真菌药物组合物及制备方法和应用，三七转化皂苷的主要制备步骤包括：高温处理、旋蒸、大孔树脂纯化富集和洗脱；所述组合物，包括以下重量份组分：三七转化皂苷0.5?50，及常规药用辅料或护理辅料50?99.5；具有良好的抑菌、杀菌的作用。本发明医药及皮肤护理产品从根本上杀灭致病真菌，对由皮肤真菌引起的手癣、脚癣、口腔溃疡及黑指甲等问题具有显著疗效，是一种安全无毒副作用的纯中药组合产品。

Description

三七转化皂苷、其抗真菌药物组合物及制备方法和应用
技术领域
本发明涉及皮肤用药物制剂，尤其涉及三七转化皂苷、其抗真菌药物组合物及制备方法和应用。
背景技术
皮肤癣菌是一组致病真菌，这些真菌侵入人体的皮肤、头发及指甲等角质组织引发体癣、脚气或者黑指甲。根据世界卫生组织WHO的数据统计，世界有四分之一的人口受到皮肤癣菌的影响，而在我国南方一项调查中发现，人群中的足癣发病率高达60％以上，其中絮状表皮癣菌、红色毛癣菌、须毛癣菌这三种真菌是导致人体脚气、灰指甲、体癣、股癣的主要原因。病原菌主要是通过接触病人等感染，少数为接触土壤感染，公用卫生用品间接接触感染主要是带菌的拖鞋和毛巾，被褥等。
皮肤癣菌通过分泌各种酶类，使自身适应在宿主组织内的生活。例如能产生弹力蛋白酶，能溶解酶蛋白，如角蛋白、弹力蛋白和胶原蛋白，从而癣菌可以侵入人体表皮。皮肤癣菌也产生其他酶，如能够裂解角蛋白双硫键并产生S-硫半肤酸和硫基丙胺酸的酶，角蛋白因为这种酶的碘化分解而变质，从而被非蛋白酶消化。
对于癣菌的治疗，大多数采用外用药即可。根据不同皮肤损害采用不同性质、不同剂型的药物。需要特别强调的是应保证用药的次数每天的次数和整个疗程的次数以及用药的连续性,如卡氏涂剂、冰醋酸、克霉哇、复方酮康哇霜和脚气灵软膏等。尽量避免使用刺激作用和剥脱作用强的配剂、软膏，如复方土模皮配、全量的复方苯甲酸软膏等，以免触发癣菌疹或造成细菌感染等并发症，范围较广泛者，可短期口服抗真菌药物配合治疗。西药抗真菌药品，如制霉菌素、二性霉素B、球红霉素、氟康唑、伊曲康唑等副作用大，价格昂贵，疗效亦不够理想。各种外用的抗真菌制剂对皮肤癣病亦很难根治。而目前抗真菌西药尤其是唑类药物耐药菌株的出现日益增多。
利用天然植物抑制皮肤真菌病的研究发展比较迅速，其中在临床范围常用的重要的天然药物有苦参、花椒、绿茶、茵陈、乌梅、黄柏、苍术等，以及像丁香酚一类的的单体抗菌剂。
三七，性温，味甘、微苦，归肝、胃经；具有散瘀止血，消肿定痛之功，用于咯血、吐血、衄血、便血、崩漏、外伤出血、胸腹刺痛、跌扑肿痛等症。熟三七则有补气补血、强身健体之功，在临床和民间多药食两用，主要用于血虚证，产后虚弱，气血不足等；也可用于身体虚弱，气血不足，症见面色苍白、头昏眼花、四肢无力、食欲不振。近期实验发现三七具有一定的抗真菌作用。
传统的三七皂苷转化产物的制备方法通常使用高温酸处理或者碱性处理、微生物降解处理和酶处理、以及化学层析这三种方法。但高温酸处理或者碱性处理需要应用酸碱，本身就存在安全性及环境污染等问题；微生物降解处理和酶处理虽然条件温和，但产品产出不稳定；化学层析常用的多使用有机溶剂，对人体和环境危害较大多数以被淘汰。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供三七转化皂苷、其抗真菌药物组合物及制备方法和应用，以克服上述现有技术的缺陷，主要有效成分三七转化皂苷，具有良好的抑菌、杀菌、除臭、防龋作用。
本发明基于以下原理：
未处理的三七粗皂苷多含有多数为R1、Rg1、Re、Rb1、Rd等成分，这些成分具有良好的营养神经、提高免疫力的功效，但研究发现没有抑制细菌的作用，在高温高压的处理皂苷C-20位置会发生脱糖基的反应，化合物脱掉一个或几个糖基后，其整体的化合物极性降低，称之为人参低极性皂苷,因其在天然人参皂苷中含量较低，又称为人参稀有皂苷。经工艺处理得到的三七转化皂苷，Pk3、Rh4、Rh5等稀有皂苷的含量大幅度提高，低极性皂苷的得率在98％以上。研究发现这些中低极性皂苷能够抑真菌芽孢的形成，阻止真菌生长，因此有抑制和杀灭细菌的作用。
本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：
三七根转化皂苷，是通过以下制备方法制备而得的制剂，包括以下步骤：
(1)取三七根总皂苷，灭菌；
(2)取蒸馏水溶解三七根总皂苷，通过HP-20大孔树脂纯化富集，分别用水和95％的乙醇水洗脱，洗脱体积为1-5个柱体积；
(3)收集95％的乙醇洗脱成分，旋蒸温度50-80℃，真空度0.02-0.1MPa，旋蒸到无味，冷冻干燥，得95％乙醇洗脱的固体成分粉末，即得所述三七转化皂苷。
优选所述灭菌为在高压灭菌锅中高温处理2-5小时，处理温度为120-14℃。
本发明还提供了一种抗真菌药物组合物，包括以下重量份组分：所述三七根转化皂苷0.5-50，及常规制剂辅料50-99.5。
优选所述组分为以下重量份组分：三七根转化皂苷5-20，常规制剂辅料80-95。
更优选所述组分为以下重量份组分：三七根转化皂苷8，常规制剂辅料92。
本发明一种抗真菌药物组合物，优选所述的组合物为膏剂，所述制剂辅料包括以下重量份组分：三七转化皂苷0.5-50、聚氧乙烯醚鲸蜡基磷酸三酯2.0-10、5-粘二甲基硅油1.0-8.0、霍霍巴油5.0-20、十六醇3.0-9、角鲨烷8.0-30、丙烯酰胺二甲基牛磺酸铵共聚物1.1-4、尼泊金乙酯0.2-0.5、丙二醇2.0-6.0，纯化水补足100份。
优选所述的组合物为喷雾剂，所述辅料包括以下重量份组分：氯化钠0.2-0.5、EDTA(乙二胺四乙酸)0.030-0.060、pH为6.5的磷酸钠缓冲液0.3-0.6、多乙氧基醚0.30-0.60、水92-98。
优选所述的组合物为糊剂，所述辅料包括以下重量份组分：聚乙二醇14.45-15、甘油14.995-15、钙粉60-70。
本发明还提供了所述三七根转化皂苷在制备治疗抗菌药物组合物方面的应用，包括三七根转化皂苷和常规药物辅料，如作为口腔护理抗菌药物组合物、皮肤护理抗菌药物组合物方面的应用。
本发明采用上述技术方案具有以下有益效果：
(1)本发明首次发现三七根总皂苷转化产物对絮状表皮癣菌，红色毛癣菌，须毛癣菌等致病真菌具有极强的抑制生长作用，由于这种三七转化物不含抗生素、激素，对皮肤黏膜也没有刺激作用，因此可以作为有效成分应用到抗真菌的化妆中去。
(2)可以用于治疗，脚气，股癣，体癣，灰指甲等产品中去，对预防和治疗真菌引起的疾病效果明显。
(3)能从根本上杀灭致病病菌，除去皮肤癣菌加速皮肤恢复，不易复发，是一种安全，优质的抗真菌护理产品的有效物质。
附图说明
图1为三七皂苷转化前后HPLC对比图.
所述1，R1；2，Rg1/Re；3，Rb1；4，Rd；5，Pk3；6，Rh4；7，Rh5；其中，1-三七根总皂苷，2-三七转化皂苷(低极性皂苷)
具体实施方式
实施例1
如图1所示三七转化皂苷图谱的制备方法如下：
(1)三七根总皂苷，在高压灭菌锅中高温处理2小时，处理温度为120℃；
(2)适当蒸馏水溶解后，通过HP-20大孔树脂纯化富集，分别用水和95％的乙醇水洗脱，洗脱体积为5个柱体积；
(3)收集95％的乙醇洗脱成分，旋蒸温度50℃，真空度0.02Pa，旋蒸到无味，冷冻干燥，并得到95％乙醇水洗脱固体成分粉末；得到所述三七转化皂苷。
(4)经工艺处理得到的三七转化皂苷：Pk324.9％、Rh435.5％、Rh520.2％等稀有皂苷的含量大幅度提高，其中转化后的稀有人参皂苷含量在70％以上。
实施例2
三七转化皂苷制备方法，包括以下步骤：
(1)三七根总皂苷，在高压灭菌锅中高温处理5小时，处理温度为140℃；
(2)适当蒸馏水溶解后，通过HP-20大孔树脂纯化富集，分别用水和95％的乙醇水洗脱，洗脱体积为1个柱体积；
(3)收集95％的乙醇洗脱成分，旋蒸温度80℃，真空度0.1MPa，旋蒸到无味，冷冻干燥，并得到95％乙醇水洗脱固体成分粉末；得到所述三七转化皂苷。
实施例3
三七转化皂苷制备方法，包括以下步骤：
(1)三七根总皂苷，在高压灭菌锅中高温处理3.5小时，处理温度为130°C；
(2)适当蒸馏水溶解后，通过HP-20大孔树脂纯化富集，分别用水和95％的乙醇水洗脱，洗脱体积为3个柱体积；
(3)收集95％的乙醇洗脱成分，旋蒸温度60℃，真空度0.06MPa，旋蒸到无味，冷冻干燥，并得到95％乙醇水洗脱固体成分粉末；得到所述三七转化皂苷。
实施例4
含实施例1三七转化皂苷药物组合物抑菌实验
(1)实验菌种
絮状表皮癣菌(ATCC52066)，红色毛癣菌(ATCC28188)，须毛癣菌(ATCC9533)。(2)操作步骤：
a.取上述三种致病真菌，接种于沙氏培养基上，在厌氧培养箱中，38℃，培养72小时。
b.取二次活化后的菌液，用沙氏液体培养基稀释到108CFU/mL。
c.将稀释后的菌液加入到96孔板中，每孔加入100微升，此后按二倍稀释法加入100微升用二甲基亚砜(DMSO)溶解的三七根总皂苷和转化后皂苷，以加入等量的二甲基亚砜DMSO的作为对照，放入培养箱，在37℃条件下培养24-72小时；
d.根据长菌情况来确定其最小抑菌浓度MIC和最小杀菌浓度MFC。
(3)实验结果
表1.转化前后三七根总皂苷的抗菌活性
*MIC,最小抑菌浓度；MFC,最小杀菌浓度
文献查阅和实验验证，没有转化的三七根皂苷不具有抑制细菌的作用；转化后三七根总皂苷对皮肤致病真菌有了较强的抑制作用。
实施例5
一种抗真菌外用膏剂
取原料(克)：三七转化皂苷15，基质辅料99.5。
所述基质配比方法(份)：聚氧乙烯醚鲸蜡基磷酸三酯2.0、5-粘二甲基硅油1.0、霍霍巴油5.0、十六醇3.0、角鲨烷8.0、丙烯酰胺二甲基牛磺酸铵共聚物1.1、尼泊金乙酯0.2、丙二醇2.0，纯化水补足100。
制备抗真菌外用制品制备：取活性成分三七转化皂苷，基质在80±5℃搅拌混合乳化，陆续加入适量甘油稀释液、凯松水溶液搅拌混合使乳化，放冷，陈化后即得成品。
该抗真菌外用制品以三七转化后皂苷为有效物质，中药三七具有美白、延缓衰老，抗炎，止痛功效，根据实验所知外用又可以抑制致病菌的生长，是一种安全，优质的天然植物药外用制品。
实施例6
一种抗真菌外用膏剂
取原料(克)：三七转化皂苷0.5，基质辅料80。
所述基质配比方法(份)：聚氧乙烯醚鲸蜡基磷酸三酯10、5-粘二甲基硅油8.0、霍霍巴油20、十六醇9、角鲨烷30、丙烯酰胺二甲基牛磺酸铵共聚物4、尼泊金乙酯0.5、丙二醇6.0，纯化水补足100。
制备方法：同实施例5。
实施例7
一种抗真菌外用膏剂
取原料(克)：三七转化皂苷20，基质辅料92。
所述基质配比方法(份)：聚氧乙烯醚鲸蜡基磷酸三酯6、5-粘二甲基硅油5、霍霍巴油13、十六醇6、角鲨烷20、丙烯酰胺二甲基牛磺酸铵共聚物2.5、尼泊金乙酯0.3、丙二醇4，纯化水补足100。
制备方法：同实施例5。
实施例8
一种抗真菌外用护理喷雾剂
原料(kg)：三七根转化皂苷0.9、氯化钠0.5、EDTA(乙二胺四乙酸)0.060、pH为6.5的磷酸钠缓冲液0.6、多乙氧基醚0.60、水98。
制备方法：将EDTA和多乙氧基醚按照配比加入水中，加热到60℃，加入三七根转化皂苷和氯化钠，待冷却到室温时加入磷酸钠缓冲液(pH6.5)，加入水补足100kg，混合均匀，经过罐装，高温灭菌，得到三七根转化皂苷喷雾剂。
实施例9
一种抗真菌外用护理喷雾剂
原料(kg)：三七根转化皂苷0.78、氯化钠0.2、EDTA(乙二胺四乙酸)0.03、pH6.5磷酸钠缓冲液0.3、多乙氧基醚0.3、水92。
制备方法：将EDTA和多乙氧基醚按照配比加入水中，加热到80℃，加入三七根转化皂苷和氯化钠，待冷却到室温时加入磷酸钠缓冲液，加入水补足100kg，混合均匀，经过罐装，高温灭菌，得到三七根转化皂苷喷雾剂。
实施例10
一种抗真菌外用护理喷雾剂
原料(kg)：三七根转化皂苷0.8，辅料包括以下重量份组分：氯化钠0.3、EDTA(乙二胺四乙酸)0.04、pH为6.5的磷酸钠缓冲液0.5、多乙氧基醚0.5、水95。
制备方法：同实施例9。
实施例11
一种抗真菌糊剂
取以下原料(kg)：三七根转化皂苷4，聚乙二醇15、甘油15、钙粉66。或者：
取以下原料(kg)：三七根转化皂苷4，聚乙二醇12、甘油12、钙粉70。
或者：取以下原料(kg)：三七根转化皂苷8，聚乙二醇14.45、甘油14.995、钙粉60。
制备方法：分别将聚乙二醇、甘油、三七根转化皂苷按重量比例混合，加热到40℃，搅拌混合，再将钙粉加入其中搅拌均匀后即得糊剂。

Claims (9)

1.三七根转化皂苷，是通过以下制备方法制备而得的制剂，包括以下步骤：
(1)取三七根总皂苷，灭菌；
(2)取蒸馏水溶解三七根总皂苷，通过HP-20大孔树脂纯化富集，分别用水和95％的乙醇水洗脱，洗脱体积为1-5个柱体积；
(3)收集95％的乙醇洗脱成分，旋蒸温度50-80℃，真空度0.02-0.1MPa，旋蒸到无味，冷冻干燥，得95％乙醇洗脱的固体成分粉末，即得所述三七转化皂苷。
2.根据权利要求1所述的三七根转化皂苷，所述灭菌为在高压灭菌锅中高温处理2-5小时，处理温度为120-14℃。
3.一种抗真菌药物组合物，包括以下重量份组分：权利要求1-2之一所述的三七根转化皂苷0.5-50，及常规制剂辅料50-99.5。
4.根据权利要求3所述的一种抗真菌药品组合物，所述组分为以下重量份组分：三七根转化皂苷5-20，常规制剂辅料80-95。
5.根据权利要求4所述的一种抗真菌药物组合物，所述组分为以下重量份组分：三七根转化皂苷8，常规制剂辅料92。
6.根据权利要求3所述的一种抗真菌药物组合物，所述的组合物为膏剂，所述制剂辅料包括以下重量份组分：三七转化皂苷0.5-50、聚氧乙烯醚鲸蜡基磷酸三酯2.0-10、5-粘二甲基硅油1.0-8.0、霍霍巴油5.0-20、十六醇3.0-9、角鲨烷8.0-30、丙烯酰胺二甲基牛磺酸铵共聚物1.1-4、尼泊金乙酯0.2-0.5、丙二醇2.0-6.0，纯化水补足100份。
7.根据权利要求3所述的一种抗真菌化妆品及药品组合物，所述的组合物为喷雾剂，所述辅料包括以下重量份组分：氯化钠0.2-0.5、EDTA(乙二胺四乙酸)0.030-0.060、pH为6.5的磷酸钠缓冲液0.3-0.6、多乙氧基醚0.30-0.60、水92-98。
8.根据权利要求3所述的一种抗真菌药物组合物，所述的组合物为糊剂，所述辅料包括以下重量份组分：聚乙二醇14.45-15、甘油14.995-15、钙粉60-70。
9.权利要求1-2之一三七根转化皂苷在制备治疗抗真菌药物方面的应用，包括三七根转化皂苷和常规药物辅料。
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