CN105708803A - 叶酸靶向水飞蓟素固体脂质纳米粒制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种叶酸靶向水飞蓟素固体脂质纳米粒制备方法，它是首先将叶酸-聚乙二醇3350-脑磷脂进行合成，再将叶酸修饰的水飞蓟素固体脂质体纳米粒进行制备。该发明将水飞蓟素制成固体脂质纳米粒并连接靶头叶酸，纳米粒静脉注射后具有靶向肺部的作用，叶酸修饰可使药物靶向肿瘤细胞，因此产生肺部肿瘤靶向作用，提高抗肿瘤药物的生物利用度，减少细胞毒副作用，治疗效果好，使患者能够减少痛苦，早日康复，本发明制备方法简便，对环境无污染，成本低，有利于推广应用。

Description

叶酸靶向水飞蓟素固体脂质纳米粒制备方法

技术领域

本发明是以叶酸为靶头制备叶酸靶向水飞蓟素固体脂质纳米粒。

背景技术

目前，肺癌已成为全世界死亡率最高的癌症，治疗肺癌的药物虽然较多，但都不能靶向给药，现国内无水飞蓟素叶酸靶向制剂，使药物直达病灶，在治疗时毒副作用大，即杀死了癌细胞，也杀死了正常细胞，患者治疗痛苦，体力下降，免疫功能低下，治疗效果差，患者所花医疗费用高，而且癌症不能达到治愈。

发明内容

本发明的目的在于克服上述缺点，提供一种叶酸靶向水飞蓟素固体脂质纳米粒制备方法，它是以叶酸为靶头，将水飞蓟素制成固体脂质纳米粒并连接靶头，采用静脉注射途径给药，使该制剂具有肺肿瘤的靶向性，本发明的目的是这样实现的，

将水飞蓟素制成固体脂质纳米粒并连接靶头叶酸，制成叶酸靶向的水飞蓟宾固体脂质纳米粒，

第一步、FA-PEG3350-DSPE（叶酸-聚乙二醇3350-脑磷脂）的合成

合成步骤如下：①分别称取65.8mgFA（叶酸）、350mgH₂N-PEG3350-NH₂（二氨基-聚乙二醇3350）、30mgNHS（羟基琥珀酸酰亚胺）、60mgDCC（N，N′-二环己基碳二亚胺）溶解于1mLDMSO（二甲基亚砜）中，依次加入，加入100μLTEA（三乙胺），N₂（氮气）保护、避光反应24h后50℃（500r·min^-1）反应6h，加入45mL冷氯仿混匀，旋转蒸发去除氯仿，残留少许液体，真空干燥得淡黄色固体FA-PEG3350-NH₂（氨基-叶酸-聚乙二醇3350），②50mgDSPE（脑磷脂）溶于2.5mLCHCl₃（三氯甲烷），15mgSUC（琥珀酸酐）溶于0.5mlDMSO（二甲基亚砜），转入前一体系①中，逐渐加入50μLTEA（三乙胺），500r·min^-1室温反应24h，残留少许液体，加入45mL无水冷丙酮沉淀，离心（12000r·min^-1，10min），反复清洗沉淀3次，真空干燥得SUC-DSPE（琥珀酸脑磷脂），③将SUC-DSPE（琥珀酸脑磷脂）溶解在10mLCHCl₃（三氯甲烷）中后转入前一体系②中，加入30mgDCC（N，N′-二环己基碳二亚胺）室温反应4h活化羧基，称取200mgFA-PEG3350-NH₂（氨基-叶酸-聚乙二醇3350）溶解在10mL的CHCl₃（三氯甲烷）中，加入40μLTEA，室温反应24h，冷丙酮沉淀并清洗产物，得产物FA-PEG3350-DSPE（叶酸-聚乙二醇3350-脑磷脂）；

第二步、叶酸修饰的水飞蓟素固体脂质体纳米粒制备

2.0%单硬脂酸甘油酯加入少量无水乙醇助融，10mg水飞蓟宾，水浴加热70℃熔融，作为油相，油相中加入3%膜材（溶于氯仿），称取2.4%泊洛沙姆188，加入20mL蒸馏水超声溶解，称取0.8%脑磷脂，加入少量无水乙醇超声溶解后加入泊洛沙姆188中，作为水相，将水相加热至同温度后以10ml·min^-1的速度滴加至油相中，乳化10min后超声破碎（600w，8min,3s间隔），置于4℃水浴中固化，0.22μm滤膜过滤即得叶酸修饰水飞蓟宾固体脂质纳米粒（FA-SIL-SLN）。本发明将水飞蓟素制成固体脂质纳米粒并连接靶头叶酸，纳米粒静脉注射后具有靶向肺部的作用，叶酸修饰可使药物靶向肿瘤细胞，因此产生肺部肿瘤靶向作用，提高抗肿瘤药物的生物利用度，减少细胞毒副作用，治疗效果好，使患者能够减少痛苦，早日康复。固体脂质纳米粒，是一种以室温下为固态的天然或合成的脂质或类脂为基质，将药物包裹于类脂核中制成粒径约为50-1000nm的固体脂质粒子给药体系，是一种很有发展前景的新型载药系统。随着对肿瘤分子水平研究的不断深入，在肿瘤细胞表面发现了一系列受体，它们与肿瘤生长增殖密切相关并在肿瘤组织过度表达，它们与特异性抗体或配体结合可诱导细胞内化，这种肿瘤特异性的受体为肿瘤治疗提供了靶点，使传统的化疗药物和新发现的肿瘤特异性的配体或抗体结合，增强了药物的肿瘤选择性并减少药物的毒副作用，叶酸受体（folatereceptor,FR）是一种可以介导细胞内化，将叶酸摄取入真核细胞胞浆的一种高亲和力受体，在正常组织中极少表达，而在上皮组织来源的恶性肿瘤如肺癌、卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、结肠癌等组织中高度表达。本发明是以叶酸为靶头，将水飞蓟素制成固体脂质纳米粒并连接靶头，采用静脉注射途径给药，使该制剂具有肺肿瘤的靶向性，对水飞蓟素治疗药物研究与开发具有积极的意义，本发明制备方法简便，对环境无污染，成本低，有利于推广应用。

下面是本发明的具体实施例：

将水飞蓟素制成固体脂质纳米粒并连接靶头叶酸，制成叶酸靶向的水飞蓟宾固体脂质纳米粒，

第一步、FA-PEG3350-DSPE（叶酸-聚乙二醇3350-脑磷脂）的合成

合成步骤如下：①分别称取65.8mgFA（叶酸）、350mgH₂N-PEG3350-NH₂（二氨基-聚乙二醇3350）、30mgNHS（羟基琥珀酸酰亚胺）、60mgDCC（N，N′-二环己基碳二亚胺）溶解于1mLDMSO（二甲基亚砜）中，依次加入，加入100μLTEA（三乙胺），N₂（氮气）保护、避光反应24h后50℃（500r·min^-1）反应6h，加入45mL冷氯仿混匀，旋转蒸发去除氯仿，残留少许液体，真空干燥得淡黄色固体FA-PEG3350-NH₂（氨基-叶酸-聚乙二醇3350），②50mgDSPE（脑磷脂）溶于2.5mLCHCl₃（三氯甲烷），15mgSUC（琥珀酸酐）溶于0.5mlDMSO（二甲基亚砜），转入前一体系①中，逐渐加入50μLTEA（三乙胺），500r·min^-1室温反应24h，残留少许液体，加入45mL无水冷丙酮沉淀，离心（12000r·min^-1，10min），反复清洗沉淀3次，真空干燥得SUC-DSPE（琥珀酸脑磷脂），③将SUC-DSPE（琥珀酸脑磷脂）溶解在10mLCHCl₃（三氯甲烷）中，加入30mgDCC（N，N′-二环己基碳二亚胺）室温反应4h活化羧基，称取200mgFA-PEG3350-NH₂（氨基-叶酸-聚乙二醇3350）溶解在10mL的CHCl₃（三氯甲烷）中后转入前一体系②中，加入40μLTEA，室温反应24h，冷丙酮沉淀并清洗产物，得产物FA-PEG3350-DSPE（叶酸-聚乙二醇3350-脑磷脂）；

第二步、叶酸修饰的水飞蓟素固体脂质体纳米粒制备

2.0%单硬脂酸甘油酯加入少量无水乙醇助融，10mg水飞蓟宾，水浴加热70℃熔融，作为油相，油相中加入3%膜材（溶于氯仿），称取2.4%泊洛沙姆188，加入20mL蒸馏水超声溶解，称取0.8%脑磷脂，加入少量无水乙醇超声溶解后加入泊洛沙姆188中，作为水相，将水相加热至同温度后以10ml·min^-1的速度滴加至油相中，乳化10min后超声破碎（600w，8min,3s间隔），置于4℃水浴中固化，0.22μm滤膜过滤即得叶酸修饰水飞蓟宾固体脂质纳米粒（FA-SIL-SLN）。

本药所含成分分析及配伍禁忌：

本制剂以水飞蓟素为指标成分，采用HPLC方法检测。水飞蓟素为中药水飞蓟种子提取的黄酮类物质，无配伍禁忌。

Claims (1)

1.一种叶酸靶向水飞蓟素固体脂质纳米粒制备方法，其特征在于：将水飞蓟素制成固体脂质纳米粒并连接靶头叶酸，制成叶酸靶向的水飞蓟宾固体脂质纳米粒，

第一步、FA-PEG3350-DSPE（叶酸-聚乙二醇3350-脑磷脂）的合成

合成步骤如下：①分别称取65.8mgFA（叶酸）、350mgH₂N-PEG3350-NH₂（二氨基-聚乙二醇3350）、30mgNHS（羟基琥珀酸酰亚胺）、60mgDCC（N，N′-二环己基碳二亚胺）溶解于1mLDMSO（二甲基亚砜）中，依次加入，加入100μLTEA（三乙胺），N₂（氮气）保护、避光反应24h后50℃（500r·min^-1）反应6h，加入45mL冷氯仿混匀，旋转蒸发去除氯仿，残留少许液体，真空干燥得淡黄色固体FA-PEG3350-NH₂（氨基-叶酸-聚乙二醇3350），②50mgDSPE（脑磷脂）溶于2.5mLCHCl₃（三氯甲烷），15mgSUC（琥珀酸酐）溶于0.5mlDMSO（二甲基亚砜），转入前一体系①中，逐渐加入50μLTEA（三乙胺），500r·min^-1室温反应24h，残留少许液体，加入45mL无水冷丙酮沉淀，离心（12000r·min^-1，10min），反复清洗沉淀3次，真空干燥得SUC-DSPE（琥珀酸脑磷脂），③将SUC-DSPE（琥珀酸脑磷脂）溶解在10mLCHCl₃（三氯甲烷）中，加入30mgDCC（N，N′-二环己基碳二亚胺）室温反应4h活化羧基，称取200mgFA-PEG3350-NH₂（氨基-叶酸-聚乙二醇3350）溶解在10mL的CHCl₃（三氯甲烷）中后转入前一体系②中，加入40μLTEA，室温反应24h，冷丙酮沉淀并清洗产物，得产物FA-PEG3350-DSPE（叶酸-聚乙二醇3350-脑磷脂）；

第二步、叶酸修饰的水飞蓟素固体脂质体纳米粒制备

2.0%单硬脂酸甘油酯加入少量无水乙醇助融，10mg水飞蓟宾，水浴加热70℃熔融，作为油相，油相中加入3%膜材（溶于氯仿），称取2.4%泊洛沙姆188，加入20mL蒸馏水超声溶解，称取0.8%脑磷脂，加入少量无水乙醇超声溶解后加入泊洛沙姆188中，作为水相，将水相加热至同温度后以10ml·min^-1的速度滴加至油相中，乳化10min后超声破碎（600w，8min,3s间隔），置于4℃水浴中固化，0.22μm滤膜过滤即得叶酸修饰水飞蓟宾固体脂质纳米粒（FA-SIL-SLN）。