CN105699348A - 不同生长调节剂对北美冬青保花保果效应的研究方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种不同生长调节剂对北美冬青保花保果效应的研究方法，该方法通过设定处理、测定和数据分析，采用不同生长调节剂处理对北美冬青进行保花保果试验，得到北美冬青的净光合速率均随着不同的生长调节剂处理而不同的结论，并得出在北美冬青花蕾期喷施0.5％KH2PO3和0.1％尿素，盛花期喷施25mg/lGA3和0.3％硼砂或20～50mg/l6-BA，果熟期喷施25mg/lGA3和或2mg/lCPPU能显著提高北美冬青单株结果数，GA3和6-BA或CPPU组合喷施处理北美冬青，可提高北美冬青的光合速率、气孔导度、水份利用率等气体交换参数和PSⅡ有效光化学量子产量、光化学淬灭、PSⅡ实际光化学量子产量、电子传递速率等叶绿素荧光参数，有效提高北美冬青的保果率，对北美冬青生长调节剂的研制提供了理论依据。

Description

不同生长调节剂对北美冬青保花保果效应的研究方法
【技术领域】
本发明涉及北美冬青保花保果的技术领域，特别涉及一种不同生长调节剂对北美冬青保花保果效应的研究方法。
【背景技术】
北美冬青(Ilexverticillata)属冬青科冬青属多年生落叶灌木，原产美国东北部，多生长在沼泽、潮湿灌木区和池塘边。与冬青科大多常绿树种不同，其特点是冬季落叶。在欧美北美冬青作为切枝观果、景观美化等广泛栽培应用。国内每年从荷兰等国家大量进口北美冬青成品切枝，投放花卉市场，销售价格昂贵。自2006年我国引进北美冬青观赏品种以来，我国开展了北美冬青繁育与开发利用研究。但我国对北美冬青的研究主要局限于北美冬青的园艺性状观察、栽培技术、组织培养、扦插繁殖、容器育苗等方面研究。随着北美冬青栽培面积的扩大，北美冬青大量落花落果现象时有发生，这也是北美冬青发展的主要制约因素之一。
由于树体营养不足，花器官发育不全，种间的亲和差异，恶劣天气条件，管理水平低下等原因会造成果树的落花落果，轻则减产降质，重则绝产绝收。因此，深入研究果树的落花落果机理，查明落花落果原因，并采取积极的保花保果措施是目前果树生产中亟待解决的问题。
作为植物体内重要的代谢生理，光合作用为植物生长发育提供重要的物质和能量，是决定产量和品质的重要因素。研究表明，植物当遭受到环境胁迫时，植株细胞损伤，导致细胞膜结构紊乱，组织死亡，叶绿体结构受到破坏，叶绿素含量降低，引起光合作用的改变，导致光合速率明显下降，光合电子传递活力减弱，光合磷酸化作用受到抑制。关于生长调节剂对北美冬青光合作用的影响，尤其是对北美冬青叶绿素荧光动力学特性的影响研究尚未见报道，因此，有必要提出一种不同生长调节剂对北美冬青保花保果效应的研究方法，从光合色素含量、光合作用参数以及叶绿素荧光动力学特征入手，从不同层次探讨不同生长调节剂对北美冬青光合作用和叶绿素荧光特性的影响，旨在揭示不同生长调节剂与光合作用及相关指标之间的关系，并探讨其落花落果的原因，以期为北美冬青高效培育提供理论依据和参考指标。
【发明内容】
本发明的目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种不同生长调节剂对北美冬青保花保果效应的研究方法，其旨在解决现有技术中北美冬青保花保果效果较低，生长调节剂对北美冬青光合作用的影响研究较少的技术问题。
为实现上述目的，本发明提出了一种不同生长调节剂对北美冬青保花保果效应的研究方法，包括如下步骤：
步骤一、设定处理：
选取生长势一致、生长良好的北美冬青2年生盆栽苗30株，在实验基地中，分别于花蕾期、盛花期和果熟期对北美冬青进行保花保果剂处理，共设三个处理期，包括对照在内共设以下五种处理，具体处理方式见表1：
表1五种处理的具体处理方式
处理方法：
北美冬青2年生盆栽苗30株均分为5组，每组6株，每组对应一种处理方式，每种处理方式针对每个处理期有不同的处理，具体处理见表1；
步骤二、测定：
对经过步骤一处理后的30株北美冬青盆栽苗进行各项指标的测定，包括光合作用气体交换参数的测定、光响应曲线的测定和叶绿素荧光动力学参数的测定。
测定方法：
光合作用气体交换参数测定：使用开放气路，在晴天上午9:30-11:30，采用LI-6400便携式光合仪测定净光合速率(Pn，μmolCO2·m-2·s-1)，气孔导度(Gs，mmol·m-2·s-1)，胞间CO2浓度(Ci，μmol·mol-1)，气孔限制值(Ls)根据Berry公式进行计算。测定时选择红蓝光源叶室，使用开放式气路，叶室温度设定为25℃，空气相对湿度为60～70％，CO2浓度为400μmol/mol，光照强度为1000μmol·m-2·s-1，光量子通量密度800mol·m-2·s-1。每株测1片叶，每处理重复5次，取平均值，并标记叶片以便下一次测定；
光响应曲线测定：使用Li-6400便携式光合(美国Li-cor公司)，光源为18RGB人工光源，设置光合有效辐射强度(PAR)梯度为2000、1500、1000、500、300、100、50、20、10、0μmol·m-2·s-1测定所标记叶片的光响应曲线，叶片选择植株中上部成熟叶片。测定时，光强采用外界的实际光强(根据外源光温传感器显示的光照强度)，叶室温度控制在25℃，CO2浓度400μmol·mol-1，由CO2小钢瓶控制CO2浓度，相对湿度约50％，气体流速设置为400μmol·s-1，测定前用800μmol·m-2·s-1光强对叶片进行光诱导，使叶片活化。每个光强下稳定4mins记录数据，重复3～4次，取几次重复的平均值作为测定结果。根据光合助手计算出光响应曲线饱和光强(LSP)、最大净光合速率(Pmax)、光补偿点(LCP)和暗呼吸速率(Rd)；
叶绿素荧光动力学参数测定：各荧光参数采用PAM2500荧光仪测定。荧光测定采用荧光叶室，黑暗适应一晚，光化学活性光PFD为1400μmol·m-2·s-1，光照时间30min，饱和闪光PFD为7200μmol·m-2·s-1。测定前，均进行25mins以上的暗适应。首先测定最小荧光产量(F0)和最大荧光产量(Fm)，随后打开活化光，强度为800μmol·m-2·s-1，待荧光信号到达稳定后(5～6mins)打开饱和脉冲光，测定任意时间的实际荧光产量(F)和光适应下的最大荧光产量(Fm′)；然后测定快速光曲线，共11个光强梯度，每个光强照射20s后打开饱和脉冲光进行荧光淬灭分析，记录快速光响应曲线。初始荧光产量(Fo)，最大荧光产量(Fm)，PSⅡ最大光化学量子产量(Fv/Fm)，PSⅡ有效光化学量子产量(F’v/F’m)，光化学淬灭(qP)，非光化学淬灭(qN)，PSⅡ实际光化学量子产量(Y(II))，PSⅡ电子传递速率(ETR)均由仪器自动给出；
步骤三、数据分析：
采用SPSS软件进行统计分析，用光合助手(Photosynthesis)拟合曲线，采用Sigmaplot10.0作图，对测定的数据进行整理并分析。
作为优选，所述的步骤二的光合作用气体交换参数测定中Berry公式为Ls＝1-Ci/C0，式中C0为空气中CO2浓度。
作为优选，所述的步骤二的叶绿素荧光动力学参数测定中11个光强梯度，分别为788、622、477、366、274、201、144、104、67、9、5μmol·m-2s-1。
本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明提供的一种不同生长调节剂对北美冬青保花保果效应的研究方法，能够科学合理地量化不同生长调节剂对北美冬青保花保果效应，通过本方法用不同生长调节剂处理对北美冬青进行保花保果试验，得到北美冬青的净光合速率均随着不同的生长调节剂处理而不同的结论，并得出在北美冬青花蕾期喷施0.5％KH2PO3和0.1％尿素，盛花期喷施25mg·l-1GA3和0.3％硼砂或20～50mg·l-16-BA，果熟期喷施25mg·l-1GA3和或2mg·l-1CPPU能显著提高北美冬青单株结果数，GA3和6-BA或CPPU组合喷施处理北美冬青，可提高北美冬青的光合速率、气孔导度、水份利用率等气体交换参数和PSⅡ有效光化学量子产量、光化学淬灭、PSⅡ实际光化学量子产量、电子传递速率等叶绿素荧光参数，从而有效提高北美冬青的保果率，对提高北美冬青座果率和幼果保果率非植物生长调节剂的研制提供了理论依据。
本发明的特征及优点将通过实施例结合附图进行详细说明。
【附图说明】
图1是本发明不同生长调节剂处理对北美冬青叶片Pn的影响图；
图2是本发明不同生长调节剂处理对北美冬青叶片WUE的影响图；
图3是本发明不同生长调节剂处理对北美冬青叶片Gs的影响图；
图4是本发明不同生长调节剂处理对北美冬青叶片Ci的影响图；
图5是本发明不同生长调节剂处理对北美冬青叶片qP的影响图；
图6是本发明不同生长调节剂处理对北美冬青叶片NPQ的影响图；
图7是本发明不同生长调节剂处理对北美冬青叶片Y(II)的影响图；
图8是本发明不同生长调节剂处理对北美冬青叶片rETR的影响图。
【具体实施方式】
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面通过附图中及实施例，对本发明进行进一步详细说明。但是应该理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限制本发明的范围。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本发明的概念。
本发明实施例提供一种不同生长调节剂对北美冬青保花保果效应的研究方法，包括如下步骤：
步骤一、设定处理：
选取生长势一致、生长良好的北美冬青2年生盆栽苗30株，在实验基地中，分别于花蕾期、盛花期和果熟期对北美冬青进行保花保果剂处理，共设三个处理期。
在本发明实施例中，实验基地位于浙江省杭州市余杭区径山镇长乐村北美冬青种植基地，杭州市余杭区位于杭嘉湖平原南端，西依天目山，南濒钱塘江，是长江三角洲的圆心地。余杭地处北亚热带南缘季风气候区，冬夏长春秋短，温暖湿润，四季分明，光照充足，雨量充沛。年平均气温15.3℃-16.2℃，年平均雨量1150毫米至1550毫米。
实验包括对照在内共设以下五种处理，具体处理方式见表1：
表1五种处理的具体处理方式
处理方法：
北美冬青2年生盆栽苗30株均分为5组，每组6株，每组对应一种处理方式，每种处理方式针对每个处理期有不同的处理，具体处理见表1；
步骤二、测定：
对经过步骤一处理后的30株北美冬青盆栽苗进行各项指标的测定，包括光合作用气体交换参数的测定、光响应曲线的测定和叶绿素荧光动力学参数的测定。
测定方法：
光合作用气体交换参数测定：使用开放气路，在晴天上午9:30-11:30，采用LI-6400便携式光合仪测定净光合速率(Pn，μmolCO2·m-2·s-1)，气孔导度(Gs，mmol·m-2·s-1)，胞间CO2浓度(Ci，μmol·mol-1)，气孔限制值(Ls)根据Berry公式Ls＝1-Ci/C0(式中C0为空气中CO2浓度)进行计算。测定时选择红蓝光源叶室，使用开放式气路，叶室温度设定为25℃，空气相对湿度为60～70％，CO2浓度为400μmol/mol，光照强度为1000μmol·m-2·s-1，光量子通量密度800mol·m-2·s-1。每株测1片叶，每处理重复5次，取平均值，并标记叶片以便下一次测定；
光响应曲线测定：使用Li-6400便携式光合(美国Li-cor公司)，光源为18RGB人工光源，设置光合有效辐射强度(PAR)梯度为2000、1500、1000、500、300、100、50、20、10、0μmol·m-2·s-1测定所标记叶片的光响应曲线，叶片选择植株中上部成熟叶片。测定时，光强采用外界的实际光强(根据外源光温传感器显示的光照强度)，叶室温度控制在25℃，CO2浓度400μmol·mol-1，由CO2小钢瓶控制CO2浓度，相对湿度约50％，气体流速设置为400μmol·s-1，测定前用800μmol·m-2·s-1光强对叶片进行光诱导，使叶片活化。每个光强下稳定4mins记录数据，重复3～4次，取几次重复的平均值作为测定结果。根据光合助手计算出光响应曲线饱和光强(LSP)、最大净光合速率(Pmax)、光补偿点(LCP)和暗呼吸速率(Rd)；
叶绿素荧光动力学参数测定：各荧光参数采用PAM2500荧光仪测定。荧光测定采用荧光叶室，黑暗适应一晚，光化学活性光PFD为1400μmol·m-2·s-1，光照时间30min，饱和闪光PFD为7200μmol·m-2·s-1。测定前，均进行25mins以上的暗适应。首先测定最小荧光产量(F0)和最大荧光产量(Fm)，随后打开活化光，强度为800μmol·m-2·s-1，待荧光信号到达稳定后(5～6mins)打开饱和脉冲光，测定任意时间的实际荧光产量(F)和光适应下的最大荧光产量(Fm′)；然后测定快速光曲线，共11个光强梯度，分别为788、622、477、366、274、201、144、104、67、9、5μmol·m-2s-1，每个光强照射20s后打开饱和脉冲光进行荧光淬灭分析，记录快速光响应曲线。初始荧光产量(Fo)，最大荧光产量(Fm)，PSⅡ最大光化学量子产量(Fv/Fm)，PSⅡ有效光化学量子产量(F’v/F’m)，光化学淬灭(qP)，非光化学淬灭(qN)，PSⅡ实际光化学量子产量(Y(II))，PSⅡ电子传递速率(ETR)均由仪器自动给出；
步骤三、数据分析：
采用SPSS软件进行统计分析，用光合助手(Photosynthesis)拟合曲线，采用Sigmaplot10.0作图，对测定的数据进行整理并分析。
不同生长调节剂处理对北美冬青叶片LSP、LCP、Pn、AQY的影响见表1。
表1
指标 对照 处理1 处理2 处理3 处理4
LSP 629.3±36.1 798.0±47.6 1058.7±94.2 869.3±28.4 565.3±26.0
LCP 25.3±2.3 28.0±4.0 26.7±2.3 22.0±5.3 14.7±4.6
Pn 13.1±0.9 15.0±0.6 16.5±0.8 9.4±0.3 9.0±0.3
AQY 0.1±0.0 0.1±0.0 0.1±0.0 0.1±0.0 0.2±0.0
表1中，LSP为光饱和点；LCP为光补偿点；Pn为净光合速率；AQY为表观量子效率。
参阅图1和表1，随着光照强度的增加，不同处理北美冬青净光合速率(Pn)逐渐增加，且不同处理都有着相似的变化规律。当PAR在0～500μmol·m-2·s-1时，Pn随光强的增强迅速增加，此时PAR是北美冬青叶片光合作用的主要限制因子；当PAR＞500μmol·m-2·s-1时，Pn随PAR的增大其上升速度开始减慢，并逐渐趋于平缓，达到光饱和状态。与对照CK相比，处理1和处理2光合速率分别在PAR＝798和1058μmol·m-2·s-1时达到最大，Pn分别为15.0和16.5μmol·m-2·s-1，明显高于对照14.9％和26.7％；而处理3和处理4光合速率分别在PAR＝869和565μmol·m-2·s-1时达到最大，Pn分别为9.4和9.0μmol·m-2·s-1，明显低于对照28.0％和31.1％
LSP的变化幅度在一定程度上可以反映植物对环境的适应能力，处理3和处理4降低了LSP，表明处理3和处理4使北美冬青对强光的利用能力较弱，使叶片对光能利用范围变小，同时光能利用效率也降低，此时最大净光合速率(Pmax)也为最低，说明其对弱光的适应能力弱。植物光补偿点﹙LCP﹚和光饱和点﹙LSP﹚的高低则直接反映了植物对弱光的利用能力强弱。LCP代表了植物对弱光的适应能力，LCP值越低，表明植物对弱光的利用能力越强。与对照相比，处理1和处理2的LCP分别为28.0和26.7μmol·m-2·s-1，比对照高出10.7％和5.5％，而处理3和处理4的LCP分别为22.0和14.7μmol·m-2·s-1，比对照低13.0％和41.9％。表明不同处理条件下，北美冬青对弱光的利用能力是不同的。
表观量子效率(AQY)是光合作用中光能转化最大效率的一种度量，可以正确反映光合机构机能的变化，是自然状态下植物捕获光量子用于光合作用的能力。与对照相比，4种处理的北美冬青的AQY都有上升趋势，说明处理会使北美冬青对光的吸收能力增加。
参阅图2，与对照相比，4种处理的植株水分利用效率(WUE)显著增加，表明4种处理均促进了北美冬青的水分利用效率。
参阅图3，从图中可以看出，北美冬青的气孔导度(Gs)随着PAR的增加而逐渐增加。与对照相比，处理2的Gs总体较高，而处理1、3、4的Gs总体较低。
参阅图4，对于胞间CO2(Ci)来说，随着PAR的增加而逐渐下降，与对照相比，所有的处理Ci下降速度都高于对照。
不同生长调节剂处理对北美冬青叶片F0、Fv/Fm的影响见表2。
表2
处理 F0 Fm Fv/Fm
对照 0.26±0.01 0.82±0.00 0.69±0.01
处理1 0.25±0.01 0.87±0.05 0.71±0.01
处理2 0.26±0.01 1.05±0.06 0.75±0.01
处理3 0.24±0.00 0.81±0.02 0.71±0.01
处理4 0.25±0.02 0.90±0.05 0.72±0.01
初始荧光Fo是PSⅡ(PSⅡ)反应中心处于完全开放时的荧光产量。处理1和处理2的Fo值和对照相比没有下降，但处理3和处理4的Fo值和同期对照相比都降低，分别下降了7.0％和3.5％；Fm是PSⅡ反应中心处于完全关闭时的荧光产量，可反映经过PSⅡ的电子传递情况；Fv/Fm是PSⅡ最大光化学量子产量，反应的是PSⅡ反应中心内部光能转换效率。研究表明各个不同处理时北美冬青Fm、Fv/Fm分别和同期对照相比均变化不大，说明反应中心和经过PSⅡ的电子传递并没有受到明显的影响。
荧光淬灭分两种：光化学淬灭(qP)和非光化学淬灭(qN或NPQ)。qP反映的是被PSⅡ天线色素吸收来并用以光合作用的能量部分；qN是PSⅡ天线色素吸收来的光能不能用于光合电子传递而以热能的形式耗散掉的光能部分。
参阅图5和图6，与对照相比，随着PAR的逐渐增加，qP逐渐下降，但在处理条件下qP下降速度较慢，至834μmol·m-2·s-1时，处理1～处理4分别下降了66.6％、66.4％、69.2％、74.8％，而对照下降了77.2％。对NPQ来说，与对照相比，随着PAR的逐渐增加，NPQ逐渐增加，但处理条件下NPQ增加速度较快，至834μmol·m-2·s-1时，处理1～处理4分别增加了91.2％、78.0％、87.9％、82.9％，而对照只增加了75.4％。NPQ与qP直线性相关反映了qP和NPQ两者相互竞争的关系。当光强为0时，qP的值最大，而NPQ最小。随着光强增加，qP逐渐下降，而NPQ逐渐增加。这表明，相同光强下，qP愈大，在不同生长调节剂处理条件下北美冬青光合作用对光能的利用率愈大。
参阅图7，与对照相比，随着PAR的逐渐增加，Y(II)逐渐下降，但处理条件下降速度较快，至834μmol·m-2·s-1时，处理1～处理4分别下降了80.8％、84.1％、83.8％、84.9％，而对照只下降了70.8％。
参阅图8，PSⅡ电子传递速率(rETR)与植物光合速率有很强的线性关系，是表征植物光合能力高低的变量。与对照相比，随着PAR的逐渐增加，rETR逐渐增加，但处理条件增加速度较快，至834μmol·m-2·s-1时，处理1～处理4分别增加了9.9％、10.5％、9.0％、7.5％，而对照只增加了6.5％。
上述实验结果表明：Pn与ETR呈直线正相关关系，光照强度的变化对光合速率的影响和对电子传递速率的影响在一定程度上是一致的。但ETR光响应曲线临界点对应的光强和光饱和点对应的光强同一树种不同处理不同。以ETR光响应曲线临界点对应的光强排序：处理2最大，对照最小；而以光饱和点光强排序：处理4最小，处理2最大。这表明光强度对光合速率的影响和对ETR的影响不同，其反映了光合作用大小受多种因子影响，而ETR是影响光合作用大小的一个因子。
不同生长调节剂处理条件下北美冬青保花保果情况见表3。
表3
处理 单穗重 单粒重 单株结果数
ck 7.60a 0.38a 209a
处理1 7.86a 0.39a 409c
处理2 7.43a 0.37a 383c
处理3 8.06a 0.40a 301b
处理4 8.06a 0.40a 317b
从表3可以看出，与对照相比，不同生长调节剂处理可促进北美冬青结果。在不同生长调节剂处理条件下，北美冬青单穗重明显增加，处理1、处理3、处理4分别比对照增加了3.4％、6.0％、6.0％。对于单粒重来说，处理1、处理3、处理4分别比对照增加了2.6％、5.3％、5.3％。对于单株结果数来说，处理1、处理2、处理3、处理4分别比对照增加了95.7％、83.2％、44.0％、51.7％。但处理2条件下单穗重和单粒重分别比对照下降了2.2％和2.6％，但通过方差分析差异不显著。这表明不同生长调节剂处理可以明显促进北美冬青的单穗重，单粒重和单株结果数，起到了很好的保花保果作用。
综上，在北美冬青花蕾期喷施0.5％KH2PO3和0.1％尿素，盛花期喷施25mg·l-1GA3和0.3％硼砂或20～50mg·l-16-BA，果熟期喷施25mg·l-1GA3和或2mg·l-1CPPU能显著提高北美冬青单株结果数，在北美冬青GA3和6-BA或CPPU组合喷施处理北美冬青，可提高北美冬青的气体交换参数和叶绿素荧光参数，从而有效提高北美冬青的保果率，防止大量落果现象发生，同时对提高北美冬青座果率和幼果保果率非植物生长调节剂的研制起到了理论指导作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种不同生长调节剂对北美冬青保花保果效应的研究方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤一、设定处理：
选取生长势一致、生长良好的北美冬青2年生盆栽苗30株，在实验基地中，分别于花蕾期、盛花期和果熟期对北美冬青进行保花保果剂处理，共设三个处理期，包括对照在内共设以下五种处理，具体处理方式见表1：
表1五种处理的具体处理方式
处理方法：
北美冬青2年生盆栽苗30株均分为5组，每组6株，每组对应一种处理方式，
每种处理方式针对每个处理期有不同的处理，具体处理见表1；
步骤二、测定：
对经过步骤一处理后的30株北美冬青盆栽苗进行各项指标的测定，包括光合作用气体交换参数的测定、光响应曲线的测定和叶绿素荧光动力学参数的测定。
测定方法：
光合作用气体交换参数测定：使用开放气路，在晴天上午9:30-11:30，采用LI-6400便携式光合仪测定净光合速率(Pn，μmolCO2·m-2·s-1)，气孔导度(Gs，mmol·m-2·s-1)，胞间CO2浓度(Ci，μmol·mol-1)，气孔限制值(Ls)根据Berry公式进行计算。测定时选择红蓝光源叶室，使用开放式气路，叶室温度设定为25℃，空气相对湿度为60～70％，CO2浓度为400μmol/mol，光照强度为1000μmol·m-2·s-1，光量子通量密度800mol·m-2·s-1。每株测1片叶，每处理重复5次，取平均值，并标记叶片以便下一次测定；
光响应曲线测定：使用Li-6400便携式光合(美国Li-cor公司)，光源为18RGB人工光源，设置光合有效辐射强度(PAR)梯度为2000、1500、1000、500、300、100、50、20、10、0μmol·m-2·s-1测定所标记叶片的光响应曲线，叶片选择植株中上部成熟叶片。测定时，光强采用外界的实际光强(根据外源光温传感器显示的光照强度)，叶室温度控制在25℃，CO2浓度400μmol·mol-1，由CO2小钢瓶控制CO2浓度，相对湿度约50％，气体流速设置为400μmol·s-1，测定前用800μmol·m-2·s-1光强对叶片进行光诱导，使叶片活化。每个光强下稳定4mins记录数据，重复3～4次，取几次重复的平均值作为测定结果。根据光合助手计算出光响应曲线饱和光强(LSP)、最大净光合速率(Pmax)、光补偿点(LCP)和暗呼吸速率(Rd)；
叶绿素荧光动力学参数测定：各荧光参数采用PAM2500荧光仪测定。荧光测定采用荧光叶室，黑暗适应一晚，光化学活性光PFD为1400μmol·m-2·s-1，光照时间30min，饱和闪光PFD为7200μmol·m-2·s-1。测定前，均进行25mins以上的暗适应。首先测定最小荧光产量(F0)和最大荧光产量(Fm)，随后打开活化光，强度为800μmol·m-2·s-1，待荧光信号到达稳定后(5～6mins)打开饱和脉冲光，测定任意时间的实际荧光产量(F)和光适应下的最大荧光产量(Fm′)；然后测定快速光曲线，共11个光强梯度，每个光强照射20s后打开饱和脉冲光进行荧光淬灭分析，记录快速光响应曲线。初始荧光产量(Fo)，最大荧光产量(Fm)，PSⅡ最大光化学量子产量(Fv/Fm)，PSⅡ有效光化学量子产量(F’v/F’m)，光化学淬灭(qP)，非光化学淬灭(qN)，PSⅡ实际光化学量子产量(Y(II))，PSⅡ电子传递速率(ETR)均由仪器自动给出；
步骤三、数据分析：
采用SPSS软件进行统计分析，用光合助手(Photosynthesis)拟合曲线，采用Sigmaplot10.0作图，对测定的数据进行整理并分析。
2.如权利要求1所述的一种不同生长调节剂对北美冬青保花保果效应的研究方法，其特征在于：所述的步骤二的光合作用气体交换参数测定中Berry公式为Ls＝1-Ci/C0，式中C0为空气中CO2浓度。
3.如权利要求1所述的一种不同生长调节剂对北美冬青保花保果效应的研究方法，其特征在于：所述的步骤二的叶绿素荧光动力学参数测定中11个光强梯度，分别为788、622、477、366、274、201、144、104、67、9、5μmol·m-2s-1。
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