CN105687214A - 姜黄素与替诺福韦二吡呋酯联合治疗乙型肝炎的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药领域，具体涉及姜黄素与替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐联合治疗乙型肝炎的用途，所述联合包括姜黄素与替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐不分次序先后单独给药，或姜黄素与替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐同时一并给药。

Description

姜黄素与替诺福韦二吡呋酯联合治疗乙型肝炎的用途

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及姜黄素与替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐联合治疗乙型肝炎的用途。

背景技术

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染引起的一种严重危害人类健康的传染病，全世界大约有20亿人感染过HBV，3.5亿携带HBV。乙型病毒性肝炎是一个世界范围的公共卫生难题，具有传染性强、传播途径复杂、流行面广、发病率高等特点。中国是HBV高感染、乙肝高流行国家。WHO已将中国划为慢性乙型病毒性肝炎高发地区。《2012年中华人民共和国卫生统计年鉴》披露：在28种传染病报告发病及死亡数统计中，病毒性肝炎高踞第五位，中国每年用于治疗乙型病毒性肝炎及其引发疾病的费用高达300-500亿元人民币。

替诺福韦二吡呋酯是替诺福韦的酯类前体药物，是一种无环类核苷酸逆转录酶抑制剂，具有广谱抗病毒作用，可抑制HBV聚合酶，从而抑制HBV病毒复制。替诺福韦二吡呋酯口服后水解为替诺福韦，替诺福韦被细胞激酶磷酸化成具有药理活性的代谢产物替诺福韦二磷酸，后者与5'-三磷酸脱氧腺苷酸竞争，参与病毒DNA的合成，进入病毒DNA后由于缺乏3'-羟基而导致DNA延长受阻，从而抑制病毒的复制。与同类药物相比，替诺福韦二吡呋酯用于乙型肝炎病毒(HBV)感染的预防或/和治疗，具有更高的安全性和更低的耐药性。目前，替诺福韦二吡呋酯富马酸盐(Tenofovirdisoproxilfumarate)的单方制剂已在国内外上市。

但是，由于替诺福韦二吡呋酯富马酸盐对由血清酶介导的水解反应高度敏感，不能有效增加作用部位药物浓度，导致口服剂量较大(150～300mg)，且在其代谢过程中释放两个当量的具有潜在毒性的甲醛，在临床治疗过程中发现乳酸性酸中毒，严重的肝肿大，以及脂肪代谢障碍等副作用。除此之外，单用替诺福韦二吡呋酯富马酸盐进行抗病毒预防或/和治疗通常要长时间给药(例如每日给药一至五年或者更久)。综上，由于会出现对替诺福韦二吡呋酯富马酸盐治疗方案的明显副作用及治疗时间长会导致不依从、减少剂量和停止治疗，以及病毒再活化和对其没有响应或者不能维持响应的患者，因此本领域依然存在乙型肝炎治疗方法改进的需求。

药物的联合使用以减毒增效的方法日渐得到人们认可与重视，开发更安全有效的抗乙肝复方药物将成为未来的发展方向。目前，已有多种包含替诺福韦二吡呋酯富马酸盐的复方制剂处于不同的开发阶段中，比如：替诺福韦二吡呋酯富马酸盐/恩曲他滨(Emtricitabine)、替诺福韦二吡呋酯富马酸盐/恩曲他滨/依法韦仑(Efavirenz)、替诺福韦二吡呋酯富马酸盐/恩曲他滨/盐酸利匹韦林(RilpivrineHCl)、替诺福韦二吡呋酯富马酸盐/恩曲他滨/埃替拉韦(Elvitegravir)/Cobicistat等复方制剂已在美国、欧盟、加拿大、澳大利亚等上市；替诺福韦二吡呋酯富马酸盐/拉米夫定(Lamivudine)、替诺福韦二吡呋酯富马酸盐/拉米夫定/依法韦仑等复方在国外正处于注册或注册前阶段。但是，采用上述复方制剂的治疗费相对比较高昂，部分患者可能难以承受较长治疗时间的经济负担，若能够提供一种能降低乙型肝炎治疗费用，并能显著增强疗效的治疗药物，亦具有重要的社会意义和经济效益。

姜黄素是中药姜黄发挥药理作用的主要活性成分，在印度、巴西、菲律宾、日本、韩国等地都有上千年的食用和药用记载。近年来，药物化学和药理学研究发现姜黄素具有抗肿瘤、抗血管生成、抗突变、抗菌抗病毒、抗氧化和神经保护等多种药理作用，且几乎没有明显的毒副作用。另外，姜黄素价格也相对低廉。广义的姜黄素通常称为姜黄色素，包括姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素等，而姜黄素是其中最重要的活性成分。以下未作特殊声明时，指的是广义上的姜黄素。专利文献CN1301535A及CN101028256A均提供了一种姜黄素在制备治疗乙型肝炎药物中的用途。但是姜黄素与替诺福韦二吡呋酯联合治乙型肝炎尚未见有报道。

本发明人在前期研究中分别用HepG22.2.15细胞(体外)和DHBV鸭乙肝模型(体内)，考察了姜黄素与替诺福韦二吡呋酯联合用药的抗HBV作用。实验结果表明本发明提供了一种新的，比现有的治疗方案更加有效的联合用药，治疗慢性乙型肝炎疾病的方法和思路。

发明内容

本发明的目的在于提供一种由姜黄素与替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐联合在制备治疗乙肝的药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：

治疗有效量的姜黄素与治疗有效量的替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐联合在制备治疗乙型肝炎的药物中的应用，所述联合包括姜黄素与替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐不分次序先后单独给药，或姜黄素与替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐同时一并给药。替诺福韦二吡呋酯药学上可接受的盐包括那些源于药学上可接受的无机和有机酸的盐。适当的酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富马酸、马来酸、磷酸、乙酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、对甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、柠檬酸、甲磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。其中替诺福韦二吡呋酯药学上可接受的盐优选富马酸盐。

在一些实施方案中，所述姜黄素与替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐的联合为复合包装形式。在一些实施方案中，该复合包装包含(1)以姜黄素为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成的制剂和(2)以替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成的制剂。其中，在一些实施方案中，上述制剂为口服制剂，适合口服给药的剂型包括片剂、膏剂、散剂、汤剂、丸剂、胶囊剂等。这些制剂中包含的姜黄素或替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐可以是固体粉末或颗粒；水性或非水性液体中的溶液或是混悬液；油包水或水包油的乳剂等。上述剂型可由姜黄素或替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐与一种或多种载体或辅料经由通用的药剂学方法制成。上述的载体需要与姜黄素或替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐或其他辅料兼容。对于固体制剂，常用的无毒载体包括但不限于甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、纤维素、葡萄糖、蔗糖等。用于液体制剂的载体包括水、生理盐水、葡萄糖水溶液、乙二醇和聚乙二醇等。姜黄素或替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐可与上述载体形成溶液或是混悬液。优选的，在一些实施方案中，该复合包装中姜黄素和替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐可分别为胶囊剂和/或片剂的形式，和/或总重为约50mg至约1000mg。在一些实施方案中，该复合包装中姜黄素和替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐可分别为胶囊剂和/或片剂的形式，和/或具有选自100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、500mg、600mg和/或800mg的总重。在一些实施方案中，该复合包装中姜黄素和替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐可分别为胶囊剂和/或片剂的形式，和/或总重为约400mg。在一些实施方案中，该复合包装中姜黄素和替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐可分别为胶囊剂和/或片剂的形式，和/或姜黄素与替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐具有选自10:1、5:1、2:1、1:1、1:2、1:5、1:10的质量分配比。在一些实施方案中，该复合包装中姜黄素和替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐可分别为胶囊剂和/或片剂的形式，和/或姜黄素与替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐具有选自5:1、2:1、1:1、1:2的质量分配比。在一些实施方案中，该复合包装中姜黄素和替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐可分别为胶囊剂和/或片剂的形式，和/或姜黄素与替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐具有2:1的质量分配比。

在一些实施方案中，本发明所述姜黄素与替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐联合的应用，联合的形式为含有姜黄素和替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐的复方药物组合物。所述复方药物组合物可以被制备成口服制剂，适合口服给药的剂型包括片剂、膏剂、散剂、汤剂、丸剂、胶囊剂等。这些制剂中包含上述复方药物组合物可以是固体粉末或颗粒；水性或非水性液体中的溶液或是混悬液；油包水或水包油的乳剂等。上述剂型可由上述复方药物组合物与一种或多种载体或辅料经由通用的药剂学方法制成。上述的载体需要与上述复方药物组合物或其他辅料兼容。对于固体制剂，常用的无毒载体包括但不限于甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、纤维素、葡萄糖、蔗糖等。用于液体制剂的载体包括水、生理盐水、葡萄糖水溶液、乙二醇或聚乙二醇等。上述复方药物组合物可与上述载体形成溶液或是混悬液。优选的，在一些实施方案中，上述复方药物组合物可制备成为胶囊剂和/或片剂的形式，和/或总重为约50mg至约1000mg。在一些实施方案中，上述复方药物组合物可制备成为胶囊剂和/或片剂的形式，和/或具有选自100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、500mg、600mg和/或800mg的总重。在一些实施方案中，上述复方药物组合物可制备成为胶囊剂和/或片剂的形式，和/或总重为约400mg。在一些实施方案中，上述复方药物组合物可制备成为胶囊剂和/或片剂的形式，和/或姜黄素与替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐具有选自10:1、5:1、2:1、1:1、1:2、1:5、1:10的质量分配比。在一些实施方案中，上述复方药物组合物可制备成为胶囊剂和/或片剂的形式，和/或姜黄素与替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐具有选自5:1、2:1、1:1、1:2的质量分配比。在一些实施方案中，上述复方药物组合物可制备成为胶囊剂和/或片剂的形式，和/或姜黄素与替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐具有2:1的质量分配比。

在本发明中，对于其他辅料或辅助性成分的用量和组合形式并没有任何限制。

为进行治疗，可把本发明的药物给予乙型肝炎患者，给药量足以预防，抑制或治愈乙肝。足以达到这一目的的量被定义为治疗有效量。用于这种用途的有效量取决于疾病的严重程度和患者自身免疫系统的一般状况。给药方案还可根据疾病状况和患者的状态而改变，通常每天给药一次或连续多次给药(例如，每隔4-6小时)，或由主治医生根据患者的情况决定。然而，应当注意，本发明不限于任何特定的剂量。

与现有技术相比，本发明有益效果在于：本发明所述的姜黄素与替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐的联合应用并不为先前技术所知，两种药物在有效量下的组合在治疗乙肝具有协同作用。两种药物联合使用可以降低替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐在治疗乙肝的使用剂量，从而起到增强疗效和降低其引起的副作用，为乙肝的治疗提供了新的思路。

具体实施方案

下述是结合具体实施例和实验例，进一步阐述本发明。但这些实施例仅限于说明本发明而不是用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体实验条件的实验方法，通常按照常规条件。

实施例1

一板铝塑泡罩含10个姜黄素胶囊制剂，每胶囊含姜黄素300mg；一板铝塑泡罩含10片，每片含替诺福韦二吡呋酯富马酸盐50mg，置同一包装内，依说明书联合使用。

实施例2

每西林瓶装含300mg姜黄素无菌冻干粉末，共10支；一板铝塑泡罩含10片替诺福韦二吡呋酯富马酸盐片剂，每片含替诺福韦二吡呋酯富马酸盐300mg，置同一包装内，依说明书联合使用。

实施例3

独立包装制剂含2只西林瓶，每瓶装含100mg姜黄素的无菌冻干粉末，内置说明书和瓶身贴标均注明此制剂为与10mg的替诺福韦二吡呋酯富马酸盐片剂联合使用。

独立包装制剂内置一板含10粒替诺福韦二吡呋酯富马酸盐片剂的铝塑泡罩，每片含10mg的恩替卡韦钠，内置说明书与铝塑板上均注明此制剂为与100mg姜黄素联合使用。

实施例4

每西林瓶装含10mg姜黄素无菌冻干粉末，共10支；一板铝塑泡罩含10片替诺福韦二吡呋酯富马酸盐片剂，每片含替诺福韦二吡呋酯富马酸盐100mg，置同一包装内，依说明书联合使用。

实施例5

一板铝塑泡罩含10个姜黄素胶囊制剂，每胶囊含姜黄素200mg；一板铝塑泡罩含10片，每片含替诺福韦二吡呋酯富马酸盐100mg，置同一包装内，依说明书联合使用。

实施例6

一板铝塑泡罩含10个姜黄素胶囊制剂，每胶囊含姜黄素30mg；一板铝塑泡罩含10片，每片含替诺福韦二吡呋酯富马酸盐300mg，置同一包装内，依说明书联合使用。

实施例7

一板铝塑泡罩含10个姜黄素胶囊制剂，每胶囊含姜黄素60mg；一板铝塑泡罩含10片，每片含替诺福韦二吡呋酯富马酸盐300mg，置同一包装内，依说明书联合使用。

实施例8

一板铝塑泡罩含10个姜黄素胶囊制剂，每胶囊含姜黄素150mg；一板铝塑泡罩含10片，每片含替诺福韦二吡呋酯富马酸盐300mg，置同一包装内，依说明书联合使用。

实施例9

一板铝塑泡罩含10个姜黄素胶囊制剂，每胶囊含姜黄素100mg；一板铝塑泡罩含10片，每片含替诺福韦二吡呋酯富马酸盐100mg，置同一包装内，依说明书联合使用。

以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。

试验例1：姜黄素与替诺福韦二吡呋酯富马酸盐联合抗乙型肝炎病毒的作用

一、实验方法：

(1)药液配制

试验药物先用DMSO溶解。

(2)试验药物的细胞毒性检测

HepG22.2.15细胞在96孔细胞培养板中培养48小时后，加入上述所配不同浓度含有试验药物的培养液，继续培养3天，用MTT法检测细胞存活率，确定试验药物对HepG22.2.15细胞的毒性。

(3)药物对HBV病毒抗原抑制作用检测

HepG22.2.15细胞在24孔细胞培养板中培养48小时后，加入所配不同浓度的含试验药物的培养液，继续培养3天，收集上清液，用HBsAg和HBeAg诊断试剂盒(ELISA)检测HBsAg和HBeAg；PCR免疫荧光法测定其HBV-DNA抑制活性。

二、实验结果：

与姜黄素各浓度组和替诺福韦二吡呋酯富马酸盐组比较，联合给药各组实验药物对HBsAg与HBeAg均具有良好的协同增强抑制作用且未见细胞毒性，见表1。

表1姜黄素与替诺福韦二吡呋酯富马酸盐联合抗乙型肝炎病毒的实验结果

试验例2：姜黄素与替诺福韦二吡呋酯富马酸盐联合对体内抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的药理活性评价。

一、实验方法：

(1)建模

采用健康成年的麻鸭产的蛋孵化的1日龄雏鸭，经腹腔注射0.2mlDHBV-DNA强阳性病毒血清。接种7d后，分别从胫静脉采血约0.2-0.3ml左右，装入一次性Eppendoff管中，整个过程注意不要交叉污染。4000rpm离心5min，取血清。-20℃保存备用。采用PCR法检测筛选出感染阳性鸭。

(2)实验分组及用药

经PCR法检测筛选出感染阳性鸭，饲养至13日龄作为实验动物进行药物治疗试验。将120只鸭随机分为12组，每组10只。

①模型组：等量的溶剂组；

②替诺福韦二吡呋酯富马酸盐组：替诺福韦二吡呋酯富马酸盐150mg/(kg·d)；

③姜黄素组：

30.0mg/(kg·d)剂量组；

75mg/(kg·d)剂量组；

150mg/(kg·d)剂量组；

300mg/(kg·d)剂量组

600mg/(kg·d)剂量组

④替诺福韦二吡呋酯富马酸盐与姜黄素联合给药组：

150mg/(kg·d)替诺福韦二吡呋酯富马酸盐+30.0mg/(kg·d)姜黄素剂量组；

150mg/(kg·d)替诺福韦二吡呋酯富马酸盐+75mg/(kg·d)姜黄素剂量组；

150mg/(kg·d)替诺福韦二吡呋酯富马酸盐+150mg/(kg·d)姜黄素剂量组；

150mg/(kg·d)替诺福韦二吡呋酯富马酸盐+300mg/(kg·d)姜黄素剂量组；

150mg/(kg·d)替诺福韦二吡呋酯富马酸盐+600mg/(kg·d)姜黄素剂量组；

以上各组均为灌胃给药。

各组每天早上8-9点钟左右灌胃给药，1天1次，连续14d，实验期间动物自由取食和饮水。并于用药前0d、用药7d、用药14d、停药7d(P7)时，分别从胫静脉采血，每只0.5ml左右，分离血清，于-20℃保存备用。

(3)DHBV-DNA的测定

鸭血清样品用32P-DHBVDNA探针作斑点杂交，X射线底片上得到放射自显影像，以酶标仪于490nm处测定其OD值，半定量计算DNA水平。

二、实验结果：

实验结果见表2。

表2姜黄素与替诺福韦二吡呋酯富马酸盐联合对鸭血清DHBV-DNA抑制率的影响

上述实验结果表明姜黄素与替诺福韦二吡呋酯富马酸盐联合具有显著的乙肝病毒协同抑制作用；因此，可将姜黄素与替诺福韦二吡呋酯富马酸盐联合用于制备抗病毒性乙肝的药物。

应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.治疗有效量的姜黄素与治疗有效量的替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐联合在制备治疗乙型肝炎的药物中的应用，所述联合包括姜黄素与替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐不分次序先后单独给药，或姜黄素与替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐同时一并给药。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述替诺福韦二吡呋酯药学上可接受的盐为替诺福韦二吡呋酯富马酸盐。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述姜黄素与替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐的联合为复合包装形式。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述复合包装形式，该复合包装包含(1)以姜黄素为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成的制剂和(2)以替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成的制剂。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述的制剂为口服制剂，其中，所述口服制剂的剂型选自片剂、膏剂、散剂、汤剂、丸剂、胶囊剂。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述复合包装形式，该复合包装中姜黄素和替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐可分别为胶囊剂和/或片剂的形式。

7.根据权利要求1所述的应用，所述姜黄素与替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐联合，联合的形式为含有姜黄素和替诺福韦二吡呋酯或其药学上可接受的盐的复方药物组合物。

8.根据权利要求1～7任意一项所述的应用，其特征在于姜黄素与替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐具有选自10:1、5:1、2:1、1:1、1:2、1:5、1:10的质量分配比。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于姜黄素与替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐具有选自5:1、2:1、1:1、1:2的质量分配比。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于姜黄素与替诺福韦二吡呋酯及其药学上可接受的盐具有2:1的质量分配比。