CN105684970B - 一种丰年虫无节幼体的生产方法 - Google Patents

一种丰年虫无节幼体的生产方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于水产养殖领域，本发明公开了一种丰年虫无节幼体的生产方法，该方法包括丰年虫卵孵化方法和丰年虫无节幼体与丰年虫卵壳的分离方法；该方法采用海水进行孵化，海水加入L‑精氨酸和二丁基羟基甲苯，提高了孵化率；在孵化条件下，通过降低温度，可以很好的将丰年虫无节幼体与卵壳很好的分离，获得的丰年虫无节幼体存活率高。

Description

一种丰年虫无节幼体的生产方法
技术领域
本发明属于水产养殖技术领域，具体涉及一种丰年虫无节幼体的生产方法。
背景技术
丰年虫也叫卤虫，全称为丰年虫(Eubranchipus vernalis)盐水丰年虾，它是一种世界性分布广泛耐高盐的小型甲壳动物，可生存的温度范围为6-35℃，盐度范围为50‰-250‰，作为一种重要的饵料生物，一直受到人们的广泛的重视。水产养殖业，特别是育苗过程对丰年虫的需求量非常大，因为丰年虫养殖产量不高，丰年虫卵的价格一直居高不下，而使用者在购买丰年虫卵后自行孵化进行投喂。
丰年虫卵孵化时，一般使用盐度为28-33‰的海水孵化，水温为28-33℃，pH为8.0-8.2，溶氧为7mg/L，光照强度为2000Lux，孵化24小时。丰年虫卵孵化后，孵化化桶内有大量的丰年虫无节幼体及空卵壳，空卵壳带有大量的弧菌、丝状细菌。丰年虫无节幼体在使用过程中对水体及水产鱼虾苗最大的危害为大量的空卵壳带入养殖池塘，造成弧菌、丝状菌对水体的污染，再者，空卵壳的卵径为200-300μm，主要成分为含铁脂蛋白，容易被水产鱼虾的幼体摄食但无法消化吸收，甚至会堆积在肠道内导致幼体死亡，形成二次危害。所以使用者须将丰年虫无节幼体及卵壳进行分离，减少卵壳对水体及养殖动物的危害。
现有分离技术中，主要有以下几种：1.采用高温方法，用开水烫死丰年虫无节幼体，使丰年虫无节幼体死亡沉底，而卵壳上浮使二者分离，缺点是丰年虫无节幼体死亡，体内卵黄蛋白变性，有部分营养流失；2.采用盐度差方法，将丰年虫无节幼体放入纯淡水中，造成28-35‰的盐度差，因盐度差应激引起丰年虫无节幼体急剧休克沉底，进行分离，缺点超过半小时至一小时，休克的丰年虫容易死亡，造成营养流失；3.采用过滤网分离方法，利用丰年虫无节幼体与卵壳的大小差异，选用合适孔径的过滤网进行收集，缺点是因为丰年虫的无节幼体长度为500-700μm，宽度在180-250μm，不同培育时间的幼体长度不同，同批幼体又有先后孵化的个体，此方法过滤效果不好；4.采用过氧化氢溶液，在水中产生大量气泡，在气浮、比重等的作用下可以使卵壳浮在水体表面，进行分离。缺点是过氧化氢是一种强氧化剂，低剂量下分离效果不明显，高剂量下对丰年虫体的伤害巨大，极容易杀死丰年虫无节幼体，并使丰年虫无节幼体与卵壳黏连在一起，而且过氧化氢进入丰年虫体内带入池塘，鱼虾的无节幼体摄食后也会带来不良影响。因此，现急需一种迅速，有效，对虫体刺激不大的丰年虫无节幼体与卵壳的分离技术。
发明内容
基于上述原因，申请人经过多年的实验研究，得到一种新的丰年虫无节幼体的生产方法，该方法采用海水进行孵化，海水加入L-精氨酸和二丁基羟基甲苯，从而提高孵化率；在孵化条件下，通过降低温度，可以很好的将丰年虫无节幼体与卵壳很好的分离，获得的丰年虫无节幼体存活率高。
本发明通过下述技术方案实现的。
一种丰年虫无节幼体的生产方法，该方法包括丰年虫卵孵化方法和丰年虫无节幼体与丰年虫卵壳的分离方法。
其中丰年虫卵的孵化方法为：丰年虫卵在海水中进行孵化，其中丰年虫海水中的密度2.6-3.0mg/L；海水的盐浓度为16-18g/L，pH为7.0-8.0，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为25-30℃；白光照射，光照强度为500-1000Lux，海水中加入L-精氨酸和二丁基羟基甲苯；孵化时间16-24h。
其中海水中L-精氨酸为30-50mg/L。
其中海水中二丁基羟基甲苯为5-15mg/L。
其中丰年虫无节幼体与丰年虫卵壳的分离方法为：过筛得到孵化后丰年虫无节幼体，加入海水中密度1.5-2.0mg/L；海水的盐浓度为16-18g/L，pH为7.0-8.0，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为25-30℃，且海水中加入30-50mg/L L-精氨酸和5-15mg/L二丁基羟基甲苯；将水温降至5℃-10℃，静置10分钟-20分钟，将上层卵壳去掉，过筛，加入水温为25-30℃的海水中，得到丰年虫无节幼体，。
与现有的技术相比，本发明有如下优势：
(1)孵化方法简单，适合生产，有利于工业化生产，孵化率高，可以达到93％以上。
(2)孵化时采用海水，加入一定浓度的L-精氨酸和二丁基羟基甲苯，孵化原料简单，不增加成本。
(3)分离方法简单，采用孵化时的条件，降低温度，将丰年虫无节幼体与卵壳分离，升温后，丰年虫无节幼体存活率高，可以达到90％以上。
制备实施例
实施例1
丰年虫卵在海水中进行孵化，其中丰年虫海水中的密度2.6mg/L；海水的盐浓度为16g/L，pH为7.0，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为25℃；白光照射，且光照强度为500Lux，且海水中加入L-精氨酸和二丁基羟基甲苯；孵化时间16h，其中海水中L-精氨酸为50mg/L，其中海水中二丁基羟基甲苯为15mg/L；
过筛得到孵化后丰年虫无节幼体，加入海水中密度1.5mg/L；海水的盐浓度为16g/L，pH为7.0，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为25℃，且海水中加入50mg/L L-精氨酸和15mg/L二丁基羟基甲苯；将水温降至5℃℃，静置10分钟，将上层卵壳去掉，过筛，加入水温为25℃的海水中，得到丰年虫无节幼体。
实施例2
丰年虫卵在海水中进行孵化，其中丰年虫海水中的密度3.0mg/L；海水的盐浓度为18g/L，pH为8.0，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为30℃；白光照射，且光照强度为1000Lux，且海水中加入L-精氨酸和二丁基羟基甲苯；孵化时间24h，其中海水中L-精氨酸为30mg/L，其中海水中二丁基羟基甲苯为5mg/L；
过筛得到孵化后丰年虫无节幼体，加入海水中密度2.0mg/L；海水的盐浓度为18g/L，pH为8.0，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为30℃，且海水中加入50mg/L L-精氨酸和15mg/L二丁基羟基甲苯；将水温降至10℃，静置10分钟，将上层卵壳去掉，过筛，加入水温为30℃的海水，得到丰年虫无节幼体中。
实施例3
丰年虫卵在海水中进行孵化，其中丰年虫海水中的密度2.7mg/L；海水的盐浓度为16.5g/L，pH为7.5，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为26℃；白光照射，且光照强度为600Lux，且海水中加入L-精氨酸和二丁基羟基甲苯；孵化时间18h，其中海水中L-精氨酸为48mg/L，其中海水中二丁基羟基甲苯为14mg/L；
过筛得到孵化后丰年虫无节幼体，加入海水中密度1.6mg/L；海水的盐浓度为16.5g/L，pH为7.5，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为26℃；白光照射，且光照强度为600Lux，，且海水中加入48mg/L L-精氨酸和14mg/L二丁基羟基甲苯；将水温降至6℃，静置18分钟，将上层卵壳去掉，过筛，加入水温为26℃的海水中，得到丰年虫无节幼体。
实施例4
丰年虫卵在海水中进行孵化，其中丰年虫海水中的密度2.7mg/L；海水的盐浓度为17g/L，pH为7.5，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为28℃；白光照射，且光照强度为700Lux，且海水中加入L-精氨酸和二丁基羟基甲苯；孵化时间19h，其中海水中L-精氨酸为44mg/L，其中海水中二丁基羟基甲苯为12mg/L；
过筛得到孵化后丰年虫无节幼体，加入海水中密度1.8mg/L；海水的盐浓度为17g/L，pH为7.5，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为28℃，且海水中加入44mg/L L-精氨酸和12mg/L二丁基羟基甲苯；将水温降至8℃，静置5分钟，将上层卵壳去掉，过筛，加入水温为28℃的海水中，得到丰年虫无节幼体。
实施例5
丰年虫卵在海水中进行孵化，其中丰年虫海水中的密度2.9mg/L；海水的盐浓度为17.5g/L，pH为7.8，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为28℃；白光照射，且光照强度为850Lux，且海水中加入L-精氨酸和二丁基羟基甲苯；孵化时间21h，其中海水中L-精氨酸为35mg/L，其中海水中二丁基羟基甲苯为8mg/L；
过筛得到孵化后丰年虫无节幼体，加入海水中密度1.8mg/L；海水的盐浓度为17.5g/L，pH为7.8，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为28℃，且海水中加入35mg/L L-精氨酸和8mg/L二丁基羟基甲苯；将水温降至8℃，静置18分钟，将上层卵壳去掉，过筛，加入水温为28℃的海水，得到丰年虫无节幼体中。
实施例6
丰年虫卵在海水中进行孵化，其中丰年虫海水中的密度2.9mg/L；海水的盐浓度为18g/L，pH为7.5，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为30℃；白光照射，且光照强度为900Lux，且海水中加入L-精氨酸和二丁基羟基甲苯；孵化时间24h，其中海水中L-精氨酸为32mg/L，其中海水中二丁基羟基甲苯为6mg/L；
过筛得到孵化后丰年虫无节幼体，加入海水中密度2.0mg/L；海水的盐浓度为18g/L，pH为7.5，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为30℃，且海水中加入32mg/L L-精氨酸和6mg/L二丁基羟基甲苯；将水温降至8℃，静置15分钟，将上层卵壳去掉，过筛，加入水温为28℃的海水中，得到丰年虫无节幼体。
实施例7
丰年虫卵在海水中进行孵化，其中丰年虫海水中的密度2.8mg/L；海水的盐浓度为17g/L，pH为7.5，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为28℃；白光照射，且光照强度为750Lux，且海水中加入L-精氨酸和二丁基羟基甲苯；孵化时间20h，其中海水中L-精氨酸为40mg/L，其中海水中二丁基羟基甲苯为10mg/L；
过筛得到孵化后丰年虫无节幼体，加入海水中密度1.8mg/L；海水的盐浓度为17g/L，pH为7.5，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为28℃，且海水中加入40mg/L L-精氨酸和10mg/L二丁基羟基甲苯；将水温降至8℃，静置15分钟，将上层卵壳去掉，过筛，加入水温为28℃的海水中，得到丰年虫无节幼体。
实施例8
丰年虫卵在海水中进行孵化，其中丰年虫海水中的密度2.6mg/L；海水的盐浓度为18g/L，pH为8.0，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为30℃；白光照射，且光照强度为1000Lux，且海水中加入L-精氨酸和二丁基羟基甲苯；孵化时间19h，其中海水中L-精氨酸为46mg/L，其中海水中二丁基羟基甲苯为13mg/L；
过筛得到孵化后丰年虫无节幼体，加入海水中密度2.0mg/L；海水的盐浓度为18g/L，pH为8.0，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为30℃，且海水中加入46mg/L L-精氨酸和13mg/L二丁基羟基甲苯；将水温降至6℃，静置18分钟，将上层卵壳去掉，过筛，加入水温为30℃的海水中，得到丰年虫无节幼体。
孵化率和存活率检测，见表1：
表1不同实施例孵化率和丰年虫无节幼体存活率
丰年虫卵定量方法：每罐丰年虫卵为425g，选取丰年虫卵三罐，打开包装后，用分析天平称取0.1g虫卵，放入100mL的淡水中，用胶头吸管反复吹打，使丰年虫卵均匀分布在水体中，然后取1mL水样，进行计数；共取样3次，每次取样前均需要反复吹打。将多次计数的结果进行统计分析后，换算出每罐丰年虫卵的数量。
设每罐丰年虫卵的数量为N(单位：颗/罐)，每0.1g丰年虫卵的数量为B(单位：颗)即N＝425*10*B＝119850000≈1.2×108颗/罐
孵化率检测方法：将一罐丰年虫卵(425g)放入500L容积的丰年虫孵化桶中，桶中放入400L海水，海水的余氯、氨氮及亚硝酸盐不能测出，按照试验设定的海水密度、盐度、pH、溶解氧浓度、水温、光照强度、孵化时间条件组合下孵化。在孵化完成后，对丰年虫进行分离，并将多余水分去除，待丰年虫进行分离、消毒、称重的工作后，记录下每罐丰年虫孵化完成后的重量，对收获的丰年虫取1g进行定量，并将1g丰年虫，放入100mL的淡水中，用胶头吸管反复吹打，使丰年虫均匀分布在水体中，然后取1mL水样，进行计数；每共取样3次，每次取样前均需要反复吹打。将多次计数的结果进行统计分析后，换算出收获的丰年虫的数量。
将每罐丰年虫收获的重量设为M(单位：斤)，每g湿重的丰年虫数量为n(单位：尾)，每罐丰年虫卵的数量为N(单位：个)，孵化率为F(单位：％)，即孵化率的计算公式如下：
存活率检测方法：对收获的丰年虫进行随机取样三次，每次取样为1g，将1g丰年虫置于海水中，观察其运动状态，能在海水中游动的定义为活虫；将沉底不能游动的丰年虫无节幼体取出，置于显微镜中观察，按以下标准进行存活率评定。
将每g湿重的丰年虫数量为n(单位：尾)，存活的丰年虫数量为h(单位：尾)，存活率为C(单位：％)，即存活率的计算公式如下：
C＝h/n*100％
本发明所述实施例包括但不限于上述。

Claims (1)

1.一种丰年虫无节幼体的生产方法，其特征在于该方法包括丰年虫卵孵化方法和丰年虫无节幼体与丰年虫卵壳的分离方法；
其中丰年虫卵的孵化方法为：丰年虫卵在海水中进行孵化，其中丰年虫海水中的密度2.6-3.0mg/L；海水的盐浓度为16-18g/L，pH为7.0-8.0，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为25-30℃；白光照射，光照强度为500-1000Lux，海水中加入L-精氨酸和二丁基羟基甲苯；孵化时间16-24h；其中海水中L-精氨酸为30-50mg/L；其中海水中二丁基羟基甲苯为5-15mg/L；
其中丰年虫无节幼体与丰年虫卵壳的分离方法为：过筛得到孵化后丰年虫无节幼体，加入海水中密度1.5-2.0mg/L；海水的盐浓度为16-18g/L，pH为7.0-8.0，溶解氧的浓度大于5mg/L，水温为25-30℃，且海水中加入30-50mg/L L-精氨酸和5-15mg/L二丁基羟基甲苯；将水温降至5℃-10℃，静置10分钟-20分钟，将上层卵壳去掉，过筛，加入水温为25-30℃的海水中，得到丰年虫无节幼体。
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