一种具有祛斑功能的化妆品
技术领域
本发明涉及一种具有祛斑功能的化妆品,用于祛斑功能的皮肤的化妆品。
背景技术
皮肤是人体的重要组成部分,更是直接表达人体健康与衰老的标志。当皮肤代谢旺盛,血液循环畅通,营养丰富时,则皮肤细腻、光滑、柔嫩,极富弹性,且不易出现皱纹和色斑。当皮肤代谢减弱,血液循环不畅,营养物质不良时,则皮肤会变得灰暗、衰老,且易产生皱纹及色斑。随着经济的发展和生活水平的提高,人们越来越重视皮肤的自然美白,祛斑是现行女性美容当前的最大问题,由于环境等多种原因导致脸上的色沉素在皮肤表层显现出来了,比如黄褐斑的出现多数与内分泌有关,尤其是和女性的雌性激素水平有关,而日晒和精神压力又会加重黄褐斑的颜色,这些都给爱美的女性带来烦恼,弹幕前市场上的祛斑化妆品,祛斑效率低,不彻底,而且容易反弹。所以急需改进技术,研宄一种祛斑化妆品,具有使用安全、作用温和、效果明的功效,而且祛斑彻底,可全面隔离紫外线损伤,防止色斑的形成。许多人期望通过美白护肤品的使用而得到白皙、光洁的皮肤,这就为抑制皮肤黑色素的合成,从而达到肌肤美白效果的各种美白化合物提供了广阔的应用前景,并且推动这类化妆品的生产销售。以往的美白化妆品多以化学药居多,但因其副作用大,已被许多国家禁止使用。因此,寻找高效、持久且对人体无副作用的天然美白祛斑制剂,已成为目前药学和化妆品领域研究的趋势。虽然我国中草药资源丰富、天然植物制药历史悠久,但是有关的科学开发与应用研究相对滞后。目前已有一些从中草药中分离的成分被广泛的应用于美白产品中,如熊果苷和甘草提取物等,经过反复研究与试用已经成为目前最常用的美白成分。也正因为看到了传统药物在美白领域的无限潜力,越来越多的人将寻找高效、持久的美白成分的目标集中在天然药物上。天然植物美白成分致敏率低、安全性高,有广阔的应用前景。
芦荟是百合科多年生草本植物,其中所含的成分十分复杂,现有的研究表明,芦荟叶中含有氨基酸、有机酸、维生素、多糖、蒽醌类物质及酶类、脂类、酚类等多种有效成分,具有健胃、消炎、抗菌、抗癌、提高免疫力等医疗和保健功能。芦荟作为一种古老的植物,极具有使用价值和经济价值,芦荟在中国医药方面的应用历史悠久,目前在美国、日本等发达国家都很重视芦荟的研究,开发和利用工作。经过多年的研究,发现芦荟内凝胶基体含有丰富的芦荟素,多糖、有机酸、蛋白质、多肽、游离氨基酸和多种维生素、微量元素,多种生物酶及甾类化合物等特定功能活性成份。这些有效成份,使芦荟具有很强的细胞渗透能力和低变应药物作用。因而芦荟凝胶是人体皮肤天然的渗透剂、表皮细胞促进湿润剂,细胞生长刺激剂。它的活性成份,经多种临床验证具有消炎、杀菌、防晒、抗紫外线,防腐、防溃疡和止血的治疗功能,它含有的多种营养成份具有营养皮肤、护发、生发的功效,它具有多种天然有机成份是皮肤天然的保湿剂,它含有的多种有效成份的协同,产生了具有免疫和免疫调节功能,抗自由基、抗内毒素功能。。但是,目前以芦荟为基础的化妆品开发尚未成熟,未有相关的运用。具有很大的应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种以芦荟提取多肽为主要活性成分的祛斑化妆品,利用提取出的芦荟多肽添加到化妆品配方中,配以其它辅料和组分制备而成的化妆品。经过测试该化妆品具有良好的抗衰老的功效。
本发明提出ー种外用的祛斑化妆品,其特征在于,由如下重量份的各组分构成:芦荟多肽0.1份,橄榄油2份,维生素E 0.5份,硫辛酸0.01份,谷胱甘肽0.1份,吡咯烷酮羧酸钠1份,甘油2份,乳酸钠1份,香精0.1份,5份纯化水。
本发明另外提供一种芦荟多肽的制备方法,(1)将芦荟清洗干净,绞碎,榨汁,加入木瓜蛋白酶和胰蛋白酶,加酶量20000IU/g芦荟,酶解温度50℃,pH值7.0,酶解时间2h,酶解完成后92℃灭酶13min;
(2)灭酶后的物料过滤除去不溶物,得到溶液,所得多肽溶液加入4%活性炭吸附脱色,用葡聚糖G-50(Sephadex G-50)进行多肽分离,20mmol/L HCl溶液洗脱,流速1.3mL/分钟,分别收集不同时间段的洗脱产物,调节溶液至pH7.0,10000转/分钟离心15分钟,经大孔树脂DA201-C脱盐处理后,真空浓缩,上清液冷冻干燥备用;经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),回收小分子量的条带,其中经过功能验证,共得到30个小肽的序列具有抗衰老的功能。根据色谱柱中不同的峰值分离时间,可以批量获得相应的小肽,也可人工合成所述的多肽。所述多肽的序列如SEQ ID NO:1-30所示。
本发明化妆品可用作制备防晒霜、防晒露、晒后产品、日霜、晚霜、面膜、润肤露、洗面奶、爽肤粉、眼状、发膜、护发素、精油以及在彩妆产品中,如除臭棒、香料棒、啫喱等,上述的产品由本行业熟知的技术制造。特别适用于制备霜剂、乳剂、凝胶、面膜膏剂。
本发明的有益效果是:
本发明的化妆品原料价格低廉,来源丰富。芦荟多肽与其他活性物质结合,能更好的滋养皮肤,有效预防及对抗皮肤斑纹的生成,增加皮肤弹性,延缓衰老。本发明采用芦荟多肽为原料制备得到的化妆品,天然、温和、对皮肤无刺激,而且多种活性物质协同作用于皮肤,其效果要优于普通化妆品。
优选实施方案的详细描述
以下实施例说明了本发明的各方面内容。他们仅用以说明,并不限定本发明的范围。
实施例1多肽的制备
(1)将芦荟清洗干净,绞碎,榨汁,加入木瓜蛋白酶和胰蛋白酶,加酶量20000IU/g芦荟,酶解温度50℃,pH值7.0,酶解时间2h,酶解完成后92℃灭酶13min;
(2)灭酶后的物料过滤除去不溶物,得到溶液,所得多肽溶液加入4%活性炭吸附脱色,用葡聚糖G-50(Sephadex G-50)进行多肽分离,20mmol/L HCl溶液洗脱,流速1.3mL/分钟,分别收集不同时间段的洗脱产物,调节溶液至pH7.0,10000转/分钟离心15分钟,经大孔树脂DA201-C脱盐处理后,真空浓缩,上清液冷冻干燥备用;经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),回收小分子量的条带,其中经过功能验证,共得到30个小肽的序列具有抗衰老的功能。根据色谱柱中不同的峰值分离时间,可以批量获得相应的小肽,也可人工合成所述的多肽。所述多肽的序列如SEQ ID NO:1-30所示。分别命名为RFT-1~30。
实施例2化妆品的制备
分别取芦荟多肽HFP-1 0.1份,橄榄油2份,维生素E 0.5份,硫辛酸0.01份,谷胱甘肽0.1份,吡咯烷酮羧酸钠1份,甘油2份,乳酸钠1份,香精0.1份,充分搅拌使完全溶解,混匀,调节溶液的pH至5.5~6.5,最后用5份纯化水补足配方总量,除菌过滤,分装,即为成品化妆品。
实施例3化妆品HFP-2~30的制备
按照实施例2的方法,将芦荟多肽分别替换为HFP-2~30共29种形式,其余组分和制备方法和实施例2相同,制备得到所述化妆品。
实施例4对照化妆品的制备
按照实施例2的方法,其中不加入相应的芦荟多肽,其余组分和方法与实施例2相同,制备得到相应的化妆品。
实施例5安全性验证
试验材料和方法
动物:普通级实验动物大白兔。体查动物未见异常。
环境条件:室温:22℃-23℃,相对湿度:66%-68%;
试验方法:
依据《化妆品卫生规范》(2007年版)急性皮肤刺激性试验,试验前24小时,将试验动物背部脊柱两侧毛剪掉,去毛范围3厘米*3厘米。取受试无原性0.5克直接涂抹在右侧皮肤上,以洁净纱布覆盖,用无刺激性胶布固定2小时。另外一侧为阴性对照。除去受试物后的1小时、24小时、48小时72小时观察受试动物接触部位皮肤反应并做记录。
结论:
在本试验条件下,受试物含有芦荟多肽的化妆品对大白兔急性皮肤刺激试验按皮肤刺激强度分级为无刺激性。对照化妆品也无刺激性。
实施例6化妆品保湿度检测
MMV(moisturemeasurementvalue)法检测MMV值反映皮肤角质层结合水的能力。采用CM825型皮肤油水酸碱测试仪测试皮肤的水合作用。它的测定原理是由于角质层含有大量的电解质,存在水中的电解质具有导电性,这种现象也产生在皮肤表面,通过测试探头与皮肤接触后,电导率的变化来反映皮肤的水合状态。
受试者为健康无皮肤病的志愿者。试验条件为测试期间环境的温度和湿度恒定,温度为25℃±2℃,相对湿度为40%~60%。
选取健康无皮肤病的志愿者32名,进行测试。测试方法为:①确定左右前臂4块测试区域,区域面积为4cmX4cm,分别测试该区域的空白值。②将样本涂敷于测试区域,用量为2mg/cm2。③使用后120min进行最终的测试,每块区域测试5个点,取平均值。保湿效果评价的评价公式:相对保湿率/%=(P样t=x-P空白)/(P标t=x-P空白)X100%式中:P样t=x-使用一定时间后产品的电导率;P空白-未涂样品的电导率;P标t=x-使用一定时间后参照物的电导率,本发明的化妆品以及甘油比较的保湿率情况(%)结果如下表所示:
产品种类 |
保湿率 |
甘油 |
0.39 |
含有HFP-1多肽的化妆品 |
0.80 |
含有HFP-2多肽的化妆品 |
0.81 |
含有HFP-3多肽的化妆品 |
0.83 |
含有HFP-4多肽的化妆品 |
0.79 |
含有HFP-5多肽的化妆品 |
0.83 |
含有HFP-6多肽的化妆品 |
0.78 |
含有HFP-7多肽的化妆品 |
0.81 |
含有HFP-8多肽的化妆品 |
0.83 |
含有HFP-9多肽的化妆品 |
0.76 |
含有HFP-10多肽的化妆品 |
0.75 |
含有HFP-11多肽的化妆品 |
0.77 |
含有HFP-12多肽的化妆品 |
0.81 |
含有HFP-13多肽的化妆品 |
0.82 |
含有HFP-14多肽的化妆品 |
0.83 |
含有HFP-15多肽的化妆品 |
0.84 |
含有HFP-16多肽的化妆品 |
0.83 |
含有HFP-17多肽的化妆品 |
0.84 |
含有HFP-18多肽的化妆品 |
0.71 |
含有HFP-19多肽的化妆品 |
0.80 |
含有HFP-20多肽的化妆品 |
0.83 |
含有HFP-21多肽的化妆品 |
0.82 |
含有HFP-22多肽的化妆品 |
0.85 |
含有HFP-23多肽的化妆品 |
0.87 |
含有HFP-24多肽的化妆品 |
0.80 |
含有HFP-25多肽的化妆品 |
0.83 |
含有HFP-26多肽的化妆品 |
0.82 |
含有HFP-27多肽的化妆品 |
0.80 |
含有HFP-28多肽的化妆品 |
0.84 |
含有HFP-29多肽的化妆品 |
0.79 |
含有HFP-30多肽的化妆品 |
0.80 |
不含有HFP多肽的化妆品 |
0.64 |
从以上表格看,本发明的化妆品的保湿率明显高于甘油的保湿情况,同时也说明本发明的多肽对于提高化妆品的保湿效果具有显著的促进作用。
实施例7护肤霜美白效果检测
选择肤色较深的男女志愿者各31名,早晚洁面后对右脸用本发明的化妆品,进行早晚间隔12h的涂抹,左脸作为对照,只涂抹实施例4的化妆品,试用四周,根据感官评价填写试用评价表。最高分4分为效果显著,最低分为1,对比效果不明显。分别在第四周利用卡方进行统计。
产品种类 |
得分 |
甘油 |
1 |
含有HFP-1多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-2多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-3多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-4多肽的化妆品 |
3 |
含有HFP-5多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-6多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-7多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-8多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-9多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-10多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-11多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-12多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-13多肽的化妆品 |
3 |
含有HFP-14多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-15多肽的化妆品 |
3 |
含有HFP-16多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-17多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-18多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-19多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-20多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-21多肽的化妆品 |
3 |
含有HFP-22多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-23多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-24多肽的化妆品 |
3 |
含有HFP-25多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-26多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-27多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-28多肽的化妆品 |
4 |
含有HFP-29多肽的化妆品 |
44 |
含有HFP-30多肽的化妆品 |
4 |
不含有HFP多肽的化妆品 |
2 |
通过检测发现,含有HFP-1~30多肽的化妆品在使用了四周后,右脸出现了明显的斑点淡化效果。以上数据说明本发明具有美白之功效。而右脸使用甘油的左右脸部没有显著差异,说明本发明的化妆品具有较为显著的美白功效。
实施例8HFP多肽对A375和Hacat共培养细胞黑素合成的影响
将A375细胞和Hacat细胞1:2的比例混合,调整细胞密度为4.5X I04个/mL接种在6孔板中,每孔2mL,在37℃及5%CO2下孵育24h。吸弃培养液,根据MTT实验结果选取200u g/mL多肽,每孔2mL,继续孵育48h,去掉培养液,用PBS清洗2次,吸弃培养液,加入0.25%胰酶ImL/孔消化后,加A ImLMEM培养液中止消化,制成细胞悬液,将细胞悬液收集到15mL离心管中,离心,弃上清液,加入I00u L浓度为lmol/L Na0H,37℃水浴lh,充分裂解细胞和溶解黑素颗粒。加入400u L双蒸水释稀,充分混匀后,以IOO u L/孔分别加至96孔板,每组设4个复孔,在490nm波长测定各孔OD值。黑素含量用A490值表示(结果见表)。黑素合成抑制率=[1_(实验组OD值/细胞数的平均值)/(阴性对照组OD值/细胞数的平均值)]X 100%。以丹参酚酸相同浓度作为对照。
结果显示:本发明化妆品所使用的多肽就有比丹参酚酸更好的对黑素合成均有抑制作用。能够很好的抑制皮肤细胞中黑色素的形成,进而避免了新的色斑的形成。
实施例9本发明临床试验及结果:
试验方法:选取安徽省合肥市年龄段在25岁到45岁的99名志愿者,其中男性36名,女性60名。
主要症状:雀斑、黄褐斑、太阳斑、肤色暗沉。志愿者被随机分为试验组30组(使用加入了HFP多肽的化妆品)和对照组三组组(不加HFP多肽的化妆品以及只有甘油的对照组、市场销售的产品对照组),每组3人。
试验组:每日洁面后,睡前将实施例2-3制备的化妆品敷于脸部20~30min,用温水洗净即可,不涂敷其他护肤品。试验期一个月。
对照组:每日洁面后,睡前在脸部皮肤上每组单独的分别涂覆市售某品牌美白祛斑化妆品、甘油组以及实施例4的化妆品20~30min,用温水洗净即可,不涂敷其他护肤品。试验期一个月。
评价标准:通过患者自述感受及电脑比对皮肤纹理图鉴定肤色美白程度及色斑淡化程度。有效:肤色提亮,色斑颜色减淡。无效:肤色及色斑与试验前无任何变化。
试验结果如下:
产品种类 |
有效率(%) |
甘油组 |
0 |
含有HFP-1多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-2多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-3多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-4多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-5多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-6多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-7多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-8多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-9多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-10多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-11多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-12多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-13多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-14多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-15多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-16多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-17多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-18多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-19多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-20多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-21多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-22多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-23多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-24多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-25多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-26多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-27多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-28多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-29多肽的化妆品 |
100 |
含有HFP-30多肽的化妆品 |
100 |
不含有HFP多肽的化妆品 |
30 |
市售化妆品 |
30 |
试验组有效率100%。对照组有效率较低。试验组中没有一例出现皮肤过敏、不适等现象。可见,本发明的祛斑化妆品具有明显优于市售产品的美白祛斑效果。
下面通过具体病例对本发明的美白祛斑化妆品的疗效做进一步验证。
病例1:张某某,女,24岁。面部出现黄褐斑2年之久,经用多种方法治疗,未见起效。使用实施例1的化妆品I个月后,斑块消退大部,继续使用I个月,皮肤变得美白红润,细腻有光泽。追访一年未见反弹。
病例2:陈某某,女,33岁,面部产后出现雀斑近2年,用实施例2中的含有HFP-10的化妆品I个月后,雀斑大部消退,皮肤明显改善,继续使用I个月后雀斑全部消除,皮肤变得美白红润,雀斑无复发。
其余多肽化妆品具有相同的祛斑效果,再此不一一赘述。
序列表
〈110〉孟繁好
〈120〉一种具有祛斑功能的化妆品
〈160〉30
〈210〉1
〈211〉18
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-1
PVIWVMMPPHWQIWKRGG
〈210〉2
〈211〉18
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-2
LHHIGQQNKGQARRWQER
〈210〉3
〈211〉17
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-3
ITAIDGRFTRPATTLEP
〈210〉4
〈211〉16
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-4
HYQPHPHEWIDATPSS
〈210〉5
〈211〉17
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-5
GTKRERCGEVDEDGRMH
〈210〉6
〈211〉16
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-6
WFAMHWMLQCWWNLVM
〈210〉7
〈211〉18
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-7
HESWAGLWKNQYAPKRQD
〈210〉8
〈211〉18
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-8
HMMQTRKHIAKCGQGFWQ
〈210〉9
〈211〉17
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-9
EGMDQELWSVGRLPPFW
〈210〉10
〈211〉16
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-10
ARNQTHMDQACYQCCR
〈210〉11
〈211〉17
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-11
HKIIRNRKHDQKHELQT
〈210〉12
〈211〉16
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-12
TYKFLERPWTRESTQN
〈210〉13
〈211〉18
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-13
LWRIHCPNQMQRWMSLDH
〈210〉14
〈211〉18
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-14
SKFQCWRWNHLQECKIQT
〈210〉15
〈211〉17
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-15
GEPSRAHTCKMRWQTRH
〈210〉16
〈211〉16
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-16
HIAPEPSEWHTHHGQN
〈210〉17
〈211〉17
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-17
APKGRGTYLHGYKATAG
〈210〉18
〈211〉16
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-18
LRWWDDYAAHHQAEVL
〈210〉19
〈211〉18
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-19
RVVMRGKRWVTSHQSVWF
〈210〉20
〈211〉17
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-20
HYGQAWSMQSQISRCVS
〈210〉21
〈211〉16
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-21
SKPDPRGSLTHKSDQY
〈210〉22
〈211〉17
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-22
VWQMIQSIRIAKNYWKT
〈210〉23
〈211〉16
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-23
WDYNTCESCQVIKPNQ
〈210〉24
〈211〉18
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-24
CRLLYWARQKQNVWPWRN
〈210〉25
〈211〉18
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-25
VFHDWSRHTRHMLSGYSF
〈210〉26
〈211〉18
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-26
AKYLSIHHRYLWPRAIRW
〈210〉27
〈211〉17
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-27
GQFRCRPTLTRQDSLLC
〈210〉28
〈211〉16
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-28
PTPMACQPQMPAEPGT
〈210〉29
〈211〉17
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-29
WQCCYRKSGCWQTTTWP
〈210〉30
〈211〉16
〈212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400〉RFT-30
QSPHRTWSPGSHQWLP