CN105660605B - 一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法 - Google Patents

一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105660605B
CN105660605B CN201610133311.4A CN201610133311A CN105660605B CN 105660605 B CN105660605 B CN 105660605B CN 201610133311 A CN201610133311 A CN 201610133311A CN 105660605 B CN105660605 B CN 105660605B
Authority
CN
China
Prior art keywords
embryo
shape body
spoon shape
gamete
carrier
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610133311.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105660605A (zh
Inventor
李楠
李忻琳
韦立红
唐永梅
牟联俊
王丹
冯晶
罗婷
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Liuzhou Maternity and Child Healthcare Hospital
Original Assignee
Liuzhou Maternity and Child Healthcare Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Liuzhou Maternity and Child Healthcare Hospital filed Critical Liuzhou Maternity and Child Healthcare Hospital
Priority to CN201610133311.4A priority Critical patent/CN105660605B/zh
Publication of CN105660605A publication Critical patent/CN105660605A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105660605B publication Critical patent/CN105660605B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0278—Physical preservation processes
    • A01N1/0284—Temperature processes, i.e. using a designated change in temperature over time

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明涉及一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法，该方法使用的冷冻装置包括冷冻载体和用于装载配子或胚胎的勺状体，冷冻载体上开有多个通孔，勺状体放置在载体的通孔中并通过固定组件固定，勺状体的数量与载体通孔的数量相同；该方法包括以下步骤：A、在显微镜下，将经过冷冻保护的配子或胚胎装入勺状体的底部，然后迅速投入液氮中；B、在显微镜下，在液氮环境中，将勺状体置入冷冻载体的通孔中并通过固定组件固定；C、把冷冻载体放入支架后放入液氮罐；D、解冻步骤。本发明不仅能够提高冷冻效率，还大大节约用于购买液氮罐和液氮的花费。另外本发明勺状体厚实，且冷冻操作在显微镜下进行，不会造成胚胎或配子、卵母细胞丢失的现象。

Description

一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法
技术领域
本发明涉及一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法。
背景技术
现有方法使用的玻璃化冷冻载杆是由高分子材料制成的前端平整的冷冻叶片，在使用的过程中是将卵母细胞或者胚胎放在叶片上进行冷冻保存，同时也便于以后需要的时候进行解冻复苏，但是该载体装置是在正常的视力的监视下完成的，将带有卵母细胞或者胚胎的叶片用液氮进行快速冷冻，并在其外面套上塑料管，然后再次投入到冷冻液中进行保存。
应用上述载体装置时存在的问题是：由于液氮温度-196度，需要将存放胚胎的叶片装在较长的手柄上，由于叶片较软，必须在叶片外面加入套管，这样就造成载杆横截面较大且较长，胚胎冷冻载杆长达21厘米左右。
一个冷冻支架仅可以存放7根载杆。每个载杆只能存放1-2个胚胎或者卵母细胞，如果一个病人胚胎或者卵母细胞冷冻载杆数目大于7根，则这个支架只能放置一个病人的卵母细胞或者胚胎，存放效率极低，无法充分利用液氮罐的存储空间。由于液氮为-196度，在液氮罐中也会随时产生损耗，每2天都需要重新将液氮罐注满。这样就造成液氮罐和液氮的极大浪费。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：提供一种能够提高冷冻效率、避免造成胚胎或配子丢失的高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法，采用该方法能够大大节约用于购买液氮罐和液氮的花费，解决了上述现有技术存在的问题。
解决上述技术问题的技术方案是：一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法，该方法使用的冷冻装置包括冷冻载体和用于装载配子或胚胎的勺状体，所述的冷冻载体上开有多个通孔，勺状体放置在载体的通孔中并通过固定组件固定，勺状体的数量与载体通孔的数量相同；
该方法包括以下步骤：
A、在显微镜下，先将经过冷冻保护的配子或胚胎装入勺状体的底部，然后迅速投入液氮中；
B、在显微镜下，在液氮环境中，将勺状体置入冷冻载体的通孔中并通过固定组件固定；
C、把冷冻载体放入支架后放入液氮罐即完成冷冻过程；
D、解冻时将冷冻载体从液氮罐中拿出后再从支架中取出，将勺状体从冷冻载体上取出，放入解冻液中取出胚胎或配子即可。
所述的勺状体上还连接有手柄。
所述的固定组件是位于载体通孔附近的固定杆，所述的勺状体的手柄底端面开有与固定杆配合的凹槽，勺状体放置在载体的通孔中，勺状体的手柄的凹槽套紧在固定杆上。
所述固定组件包括设置在通孔边缘的齿Ⅰ和设置在勺状体底面的齿Ⅱ，勺状体放置在载体的通孔中，勺状体底面的齿Ⅱ位于通孔边缘的齿Ⅰ内并配合卡紧。
所述的勺状体内表面设置有防脱层。
所述的通孔的数量为3～10个。
所述的通孔旁的载体上设置有相应的数字标号。
所述的冷冻载体的一端设置有用于标记胚胎或配子信息的标记段。
由于采用上述方法，本发明具有以下有益效果：
1、现有方法使用的载体一个支架一般可以存放一至两个人的胚胎或配子、卵母细胞，即7根载体，效率较低。改进后方法采用的冷冻装置，一个冷冻载体有7个孔，如果一个人冻存胚胎或配子、卵母细胞不超过7孔，即可以存放一个人所有的胚胎或配子、卵母细胞。若一个支架放置5个冷冻载体，则效率提高了5倍。
2、本发明不仅提高了冷冻的效率，还将大大节约用于购买液氮罐和液氮的花费。
3、本发明采用的冷冻装置的勺状体与现有的叶片完全不同，叶片太薄会在液氮中晃动，碰到后会造成胚胎或卵母细胞丢失。而勺状体较硬且厚实，不会造成胚胎或配子、卵母细胞丢失的现象。
4、本发明冷冻过程中，在显微镜下将胚胎或者卵母细胞转入冷冻载体，整个过程均可以在显微镜下看到，在液氮中冷冻后直接装到冷冻载体上，避免造成胚胎或配子、卵母细胞地丢失。
下面，结合附图和实施例对本发明之一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法的技术特征作进一步的说明。
附图说明
图1：本发明实施例1使用的冷冻装置结构示意图。
图2：本发明实施例1使用的冷冻装置的冷冻载体结构示意图。
图3：图1的A部放大图。
图4：本发明实施例1使用的冷冻装置的勺状体结构示意图。
图5：本发明实施例2使用的冷冻装置的冷冻载体结构示意图。
图6：本发明实施例2使用的冷冻装置的冷冻载体尾端放大图。
图7：本发明实施例2使用的冷冻装置的勺状体结构示意图。
图中：1-冷冻载体，11-通孔，111-齿Ⅰ，12-标记段，2-勺状体，21-手柄，22-齿Ⅱ，3-数字标号，4-固定杆。
具体实施方式
实施例1：一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法，该方法使用的冷冻装置（如图1-图4所示）包括冷冻载体1和用于装载配子或胚胎的勺状体2，所述的勺状体内表面设置有一防脱层，所述的冷冻载体上开有7个通孔11，所述的通孔旁的载体上设置有相应的数字标号3。勺状体放置在载体的通孔中并通过固定组件固定，勺状体的数量与载体通孔的数量相同。所述的勺状体上还连接有手柄21。所述的固定组件是位于载体通孔11附近的固定杆4，所述的勺状体的手柄底端面开有与固定杆配合的凹槽，勺状体放置在载体的通孔中，勺状体的手柄21的凹槽套紧在固定杆4上；
该方法包括以下步骤：
A、在显微镜下，先将经过冷冻保护的配子或胚胎装入勺状体2的底部，然后迅速投入液氮中；
B、在显微镜下，在液氮环境中，用镊子或其他辅助工具将勺状体2置入冷冻载体的通孔11中并通过固定组件固定，由于液氮冷冻后，胚胎或配子会粘挂在勺状体上，因此勺状体内的胚胎不会丢失；
C、把冷冻载体1放入支架后放入液氮罐即完成冷冻过程；
D、解冻时将冷冻载体1从液氮罐中拿出后再从支架中取出，将勺状体2从冷冻载体上取出，放入解冻液中取出胚胎或配子即可。
实施例2：一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法，该方法使用的冷冻装置（如图5-图7所示）包括冷冻载体1和用于装载配子或胚胎的勺状体2，所述的勺状体内表面设置有一防脱层，所述的冷冻载体上开有7个通孔11，勺状体放置在载体的通孔中并通过固定组件固定，勺状体的数量与载体通孔的数量相同。所述固定组件包括设置在通孔边缘的齿Ⅰ111和设置在勺状体底面的齿Ⅱ22，勺状体放置在载体的通孔中，勺状体底面的齿Ⅱ位于通孔边缘的齿Ⅰ内并配合卡紧。本实施例的具体操作步骤与实施例1相同。
本发明各实施例中使用的冷冻装置，将冷冻载体设计为扁长的长方体，宽为5毫米，厚为2毫米，长为25cm，前端5cm作为标记胚胎或配子相关信息的标记段12（用于标识病人姓名、冷冻日期等），该标记段面积较大，可以标记更多的相关信息，提高记录的准确性，降低错误率。在标记段后3cm每隔1厘米有一个直径为3毫米的通孔。在孔的旁边标有1、2、3、4、5、6、7号。用于记录卵母细胞或者胚胎的号数。方便解冻找到该号的胚胎或者卵母细胞。设计通孔是为了固定载有卵母细胞或者胚胎的勺状体。
作为本发明各实施例的一种变换，所述的通孔的数量可以根据实际需要确定，一般为3～10个。
本发明各实施例中设置防脱层是为了增加胚胎或者配子与勺状体之间的摩擦力，使胚胎或者配子更容易粘挂在勺状体上。作为一种变换，若经液氮冷冻后，胚胎或配子能够顺利粘挂在勺状体上，也可以不设置防脱层。
作为本发明各实施例的一种变换，步骤C中，可在冷冻载体1外面套上塑料管，再放入支架中。

Claims (8)

1.一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法，其特征在于：该方法使用的冷冻装置包括冷冻载体（1）和用于装载配子或胚胎的勺状体（2），所述的冷冻载体上开有多个通孔（11），勺状体放置在载体的通孔中并通过固定组件固定，勺状体的数量与载体通孔的数量相同；
该方法包括以下步骤：
A、在显微镜下，先将经过冷冻保护的配子或胚胎装入勺状体（2）的底部，然后迅速投入液氮中；
B、在显微镜下，在液氮环境中，将勺状体（2）置入冷冻载体的通孔（11）中并通过固定组件固定；
C、把冷冻载体（1）放入支架后放入液氮罐即完成冷冻过程；
D、解冻时将冷冻载体（1）从液氮罐中拿出后再从支架中取出，将勺状体（2）从冷冻载体上取出，放入解冻液中取出胚胎或配子即可。
2.根据权利要求1所述的一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法，其特征在于：所述的勺状体上还连接有手柄（21）。
3.根据权利要求2所述的一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法，其特征在于：所述的固定组件是位于载体通孔（11）附近的固定杆（4），所述的勺状体的手柄底端面开有与固定杆配合的凹槽，勺状体放置在载体的通孔中，勺状体的手柄（21）的凹槽套紧在固定杆（4）上。
4.根据权利要求1所述的一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法，其特征在于：所述固定组件包括设置在通孔边缘的齿Ⅰ（111）和设置在勺状体底面的齿Ⅱ（22），勺状体放置在载体的通孔中，勺状体底面的齿Ⅱ位于通孔边缘的齿Ⅰ内并配合卡紧。
5.根据权利要求1-4任一项所述的一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法，其特征在于：所述的勺状体内表面设置有防脱层。
6.根据权利要求1-4任一项所述的一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法，其特征在于：所述的通孔的数量为3～10个。
7.根据权利要求1-4任一项所述的一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法，其特征在于：所述的通孔旁的载体上设置有相应的数字标号（3）。
8.根据权利要求1-4任一项所述的一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法，其特征在于：所述的冷冻载体（1）的一端设置有用于标记胚胎或配子信息的标记段（12）。
CN201610133311.4A 2016-03-09 2016-03-09 一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法 Active CN105660605B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610133311.4A CN105660605B (zh) 2016-03-09 2016-03-09 一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610133311.4A CN105660605B (zh) 2016-03-09 2016-03-09 一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105660605A CN105660605A (zh) 2016-06-15
CN105660605B true CN105660605B (zh) 2018-07-31

Family

ID=56307266

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610133311.4A Active CN105660605B (zh) 2016-03-09 2016-03-09 一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105660605B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110622955B (zh) * 2019-09-26 2021-06-25 郑州大学第三附属医院(河南省妇幼保健院) 一种用于组织冷冻技术的装置
NL2034217B1 (en) * 2023-02-23 2023-09-20 Ma Bo Thawing plant for frozen embryos

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1961482A1 (en) * 2005-12-16 2008-08-27 Ngk Insulators, Ltd. Catalyst carrier
CN202311020U (zh) * 2011-12-05 2012-07-11 戴志俊 一种胚胎玻璃化冷冻载体
CN203851692U (zh) * 2014-06-01 2014-10-01 戴志俊 玻璃化冷冻专用皿
CN203913154U (zh) * 2014-06-27 2014-11-05 龙文 生物材料玻璃化冷冻保存承载工具
CN204014881U (zh) * 2014-07-28 2014-12-17 上海长征医院 一种简便式人类配子和胚胎玻璃化冷冻复苏装置
CN204653528U (zh) * 2015-05-08 2015-09-23 遵义医学院附属医院 一种新型开放式胚胎玻璃化冷冻装置
CN204837023U (zh) * 2015-06-04 2015-12-09 青岛洪珠农业机械有限公司 一种薯类播种机上的微型薯取种勺组合体
CN204888506U (zh) * 2015-07-22 2015-12-23 柳州市妇幼保健院 一种高效的生物材料冻存载体装置
CN205005790U (zh) * 2015-08-25 2016-02-03 柳州市妇幼保健院 新型胚胎玻璃化冷冻载杆

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1961482A1 (en) * 2005-12-16 2008-08-27 Ngk Insulators, Ltd. Catalyst carrier
CN202311020U (zh) * 2011-12-05 2012-07-11 戴志俊 一种胚胎玻璃化冷冻载体
CN203851692U (zh) * 2014-06-01 2014-10-01 戴志俊 玻璃化冷冻专用皿
CN203913154U (zh) * 2014-06-27 2014-11-05 龙文 生物材料玻璃化冷冻保存承载工具
CN204014881U (zh) * 2014-07-28 2014-12-17 上海长征医院 一种简便式人类配子和胚胎玻璃化冷冻复苏装置
CN204653528U (zh) * 2015-05-08 2015-09-23 遵义医学院附属医院 一种新型开放式胚胎玻璃化冷冻装置
CN204837023U (zh) * 2015-06-04 2015-12-09 青岛洪珠农业机械有限公司 一种薯类播种机上的微型薯取种勺组合体
CN204888506U (zh) * 2015-07-22 2015-12-23 柳州市妇幼保健院 一种高效的生物材料冻存载体装置
CN205005790U (zh) * 2015-08-25 2016-02-03 柳州市妇幼保健院 新型胚胎玻璃化冷冻载杆

Also Published As

Publication number Publication date
CN105660605A (zh) 2016-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Hiraoka et al. Blastocoele collapse by micropipetting prior to vitrification gives excellent survival and pregnancy outcomes for human day 5 and 6 expanded blastocysts
JP6114185B2 (ja) 改良された顕微操作ならびに保管装置および方法
CN105660605B (zh) 一种高效配子/胚胎玻璃化冷冻解冻方法
Gibbons et al. A simple vitrification technique for sheep and goat embryo cryopreservation
Katkov et al. Kinetic vitrification of spermatozoa of vertebrates: what can we learn from nature?
Kyono et al. A transportation network for human ovarian tissue is indispensable to success for fertility preservation
Zimkus et al. Integrating current methods for the preservation of amphibian genetic resources and viable tissues to achieve best practices for species conservation
CN106489914A (zh) 一种冷冻载杆
CN205611616U (zh) 一种高效玻璃化配子/胚胎冷冻装置
Saragusty Directional freezing for large volume cryopreservation
CN101589707A (zh) 辅助生殖技术中胚胎和卵子玻璃化冷冻载体装置
CN203985778U (zh) 一种胚胎玻璃化冷冻装置
CN210929356U (zh) 一种封闭式卵巢组织冷冻装置
Fathi et al. Development of 4-cell mouse embryos after re-vitrification
Abdussamad et al. Temporary storage of bovine semen cryopreserved in liquid nitrogen on dry ice and refreezing of frozenthawed semen
JP2016067807A (ja) ストロー管、並びに精液又は受精卵の凍結保存方法
Silber et al. Applying clinically proven human techniques for contraception and fertility to endangered species and zoo animals: a review
CN105230605B (zh) 玻璃化冷冻载体
CN216722872U (zh) 玻璃化冷冻载体
CN204499261U (zh) 一种免支架微型冷冻载体
CN201894150U (zh) 胚胎冷冻麦管支架
CN207948733U (zh) 一种液氮罐内生物样品贮存装置
Keros et al. Cryopreservation of mammalian oocytes: slow cooling and vitrification as successful methods for cryogenic storage
Bondioli Cryopreservation of bovine embryos
KR102278277B1 (ko) 유리화 동결을 위한 보존 용기 및 이를 이용한 유리화 방법

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant