CN105651946A - 赤子爱胜蚯蚓测定农药悬浮剂毒性的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种赤子爱胜蚯蚓测定农药悬浮剂毒性的方法，包括以下步骤：将农药悬浮剂溶解，配制成农药储备液；将农药储备液加入到土壤和水的混合物中配制成梯度浓度的试验液；挑选有生殖带的赤子爱胜蚯蚓，随机加入到试验液中，持续培养14d，于第7d、14d记录赤子爱胜蚯蚓的生物效应参数；根据赤子爱胜蚯蚓的生物效应参数计算农药悬浮剂对赤子爱胜蚯蚓的半数致死浓度LC50值，判断农药悬浮剂的毒性，具有易操作、实用性强、速度快、精确度高等优势，可初步判断出农药悬浮剂的毒性。

Description

赤子爱胜蚯蚓测定农药悬浮剂毒性的方法
技术领域
本发明涉及养殖技术领域，尤其涉及一种赤子爱胜蚯蚓测定农药悬浮剂毒性的方法。
背景技术
赤子爱胜蚯蚓(Eiseniafoetida)是世界范围内广泛分布的一种陆生环节动物，属于环节动物门寡毛纲正蚓科爱胜蚓属。赤子爱胜蚯蚓可以疏松土壤，改良土壤，提高土壤肥力，促进农业增产。它生命周期短，在20℃的条件下，孵化需要3～4周，7-8周即可发育成熟。它繁殖能力强，一条蚯蚓可以在一周内产2～5个蚓茧，每个蚓茧可孵化出几条蚯蚓。具有繁殖率高、适应性强，适宜人工养殖，对环境中的毒物敏感且试验方法简便等优点，因此受到众多国内外毒理学工作者的重视。现已成为一种标准试验生物，被广泛用于陆生生物毒理学的研究中。
目前，采用赤子爱胜蚯蚓作为农药悬浮剂毒性筛选模型的研究较少，缺乏相关的研究数据评估模型的实用性和可靠性。因此，提供一种易操作、实用性强的赤子爱胜蚯蚓筛选农药悬浮剂毒性的方法尤其重要。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种易操作、实用性强的赤子爱胜蚯蚓测定农药悬浮剂毒性的方法。
为解决上述技术问题，提供了一种赤子爱胜蚯蚓测定农药悬浮剂毒性的方法，包括以下步骤：
S1、将农药悬浮剂溶解，配制成农药储备液；
S2、将步骤S1中的所述农药储备液加入到土壤和水的混合物中配制成梯度浓度的试验液；
S3、挑选有生殖带的赤子爱胜蚯蚓，随机加入到步骤S2中所述的试验液中，持续培养14d，于第7d、14d记录赤子爱胜蚯蚓的生物效应参数；
S4、根据赤子爱胜蚯蚓的生物效应参数计算农药悬浮剂对赤子爱胜蚯蚓的半数致死浓度LC50值，判断农药悬浮剂的毒性。
上述的方法，优选的，所述步骤S3中挑选的所述赤子爱胜蚯蚓的体重为0.30g～0.60g。
上述的方法，优选的，所述步骤S3中所述生物效应参数为赤子爱胜蚯蚓的死亡率和中毒症状。
上述的方法，优选的，赤子爱胜蚯蚓的死亡的标准为：用针轻触赤子爱胜蚯蚓尾部无反应；所述中毒症状为：赤子爱胜蚯蚓出现了蠕动能力减弱。
上述的方法，优选的，所述步骤S3中，所述持续培养14d的培养条件为：温度20±1℃、湿度80％～85％、400Lux～800Lux光强连续光照。
上述的方法，优选的，所述步骤S3中所述赤子爱胜蚯蚓在加入所述试验液的前1天，将所述赤子爱胜蚯蚓在人工土壤中清肠。
上述的方法，优选的，所述步骤S4中，采用统计软件SPSS，以处理浓度的对数值为自变量x，以死亡率的机率值为因变量y，计算农药制剂对赤子爱胜蚯蚓的半数致死浓度LC50和95％置信限。
上述的方法，优选的，所述农药毒级判断标准为低毒(LC50＞10.0mga.i./kg干土)，中毒(1.00mga.i./kg干土＜LC50≤10.0mga.i./kg干土)，高毒(0.100mga.i./kg干土＜LC50≤1.00mga.i./kg干土)，剧毒(LC50≤0.100mga.i./kg干土)。
上述的方法，优选的，所述赤子爱胜蚯蚓筛选农药悬浮剂毒性的方法还设有空白对照组，所述空白对照组以土壤和水的混合物作为试验液培养赤子爱胜蚯蚓，所述空白对照组死亡率不超过10％则证明实验结果可信。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
本发明提供了一种操作简便、实用性强的赤子爱胜蚯蚓测定农药悬浮剂毒性的方法；该方法可初步判断出农药悬浮剂的毒性，速度快，精确度高。
具体实施方式
以下结合具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的保护范围。
实施例
以下实施例中所采用的材料和仪器均为市售。
实施例1：
一种本发明的赤子爱胜蚯蚓测定农药悬浮剂毒性的方法，包括以下步骤：
1、试验液配制
称取30％吡唑醚菌酯悬浮剂0.8333g，用蒸馏水溶解并定容至50mL容量瓶中，得到浓度为5.00mga.i./mL的储备液。
实验组：取5份1500g的人工土壤(干重)，用移液器向1500g人工土壤(干重)中分别移取2.787、3.900、5.46、7.65、10.71、15.00mL上述储备液得到混合物(标号为1、2、3、4、5)。在分别向混合物1～5中加入447、446、445、442、439、435mL的蒸馏水，充分搅拌使药液、土壤和水混合均匀，得到浓度分别为9.29、13.0、18.2、25.5、35.7、50.0mga.i./kg干土的试验液。将上述每组试验液平均分为三份，作为平行样，分别盛装于1L的标本瓶中。
空白对照组(CK)：称取1500g的人工土壤(干重)，用量筒向1500g人工土壤(干重)中加入450mL的蒸馏水，充分搅拌后平均分为三份，分别盛装于1L的标本瓶中。
2、染毒
挑选体重0.30～0.60g有生殖带的健康赤子爱胜蚯蚓于试验开始前1天在人工土壤中清肠，然后随机加入到标本瓶中，每个标本瓶中加入10条赤子爱胜蚯蚓。
3、试验数据记录
在染毒开始时及染毒开始后14d内每天测定并记录环境的温度、湿度、光照强度等。测得试验期间环境的温度为：20.1℃～20.8℃，湿度为81.2％～82.2％，光照强度为645～657Lux，并在该光照强度下连续光照。
于染毒后7d、14d观察并记录赤子爱胜蚯蚓的中毒症状和死亡数，将观察结果记录于表1中。
表1：30％吡唑醚菌酯悬浮剂对蚯蚓急性毒性试验数据记录表
同时，在14d的试验期间，赤子爱胜蚯蚓出现了蠕动能力减弱，尸体腐烂，死亡等生物效应。
4、数据处理
采用统计软件SPSS12.0，以处理浓度的对数值为自变量x，以(校正)死亡率的机率值为因变量y，建立毒力回归方程。计算30％吡唑醚菌酯悬浮剂对蚯蚓的半数致死浓度LC50和95％置信限，具体的计算结果参见表2。
表2：30％吡唑醚菌酯悬浮剂对蚯蚓急性毒性试验结果表
通过上述方法计算得到30％吡唑醚菌酯悬浮剂对蚯蚓急性毒性LC50(14d)为26.8mga.i./kg干土，95％置信限为23.7～30.5mga.i./kg干土。
5、结果评价
根据LC50值判断农药毒级。毒性分级标准为：低毒(LC50＞10.0mga.i./kg干土)，中毒(1.00mga.i./kg干土＜LC50≤10.0mga.i./kg干土)，高毒(0.100mga.i./kg干土＜LC50≤1.00mga.i./kg干土)，剧毒(LC50≤0.100mga.i./kg干土)。
在实施例的试验条件下，30％吡唑醚菌酯悬浮剂对蚯蚓急性毒性的LC50(14d)为26.8mga.i./kg干土，大于10.0mga.i./kg干土，毒性等级为“低毒”。
实施例2
一种本发明的赤子爱胜蚯蚓测定农药悬浮剂毒性的方法，包括以下步骤：
1、试验液配制
称取20％呋虫胺悬浮剂0.2500g，用蒸馏水溶解并定容至50mL容量瓶中，得到浓度为1.00mga.i./mL的储备液。
实验组：取5份1500g的人工土壤(干重)，用移液器向1500g人工土壤(干重)中分别移取0.150、0.300、0.600、1.200、2.400、4.800mL上述储备液得到混合物(标号为1、2、3、4、5)。再分别向混合物1～5中加入450、450、449、449、448、445mL的蒸馏水，充分搅拌使药液、土壤和水混合均匀，得到浓度分别为0.100、0.200、0.400、0.800、1.60、3.20mga.i./kg干土的试验液。将上述每组试验液平均分为三份，作为平行样，分别盛装于1L的标本瓶中。
空白对照组(CK)：称取1500g的人工土壤(干重)，用量筒向1500g人工土壤(干重)中加入450mL的蒸馏水，充分搅拌后平均分为三份，分别盛装于1L的标本瓶中。
2、染毒
挑选体重0.30～0.60g有生殖带的健康赤子爱胜蚯蚓于试验开始前1天在人工土壤中清肠，然后随机加入到标本瓶中，每个标本瓶中加入10条赤子爱胜蚯蚓。
3、试验数据记录
在染毒开始时及染毒开始后14d内每天测定并记录环境的温度、湿度、光照强度等。测得试验期间环境的温度为：19.5℃～20.6℃，湿度为81.3％～82.7％，光照强度为639Lux～663Lux，并在该光照强度下连续光照。
于染毒后7d、14d观察并记录赤子爱胜蚯蚓的中毒症状和死亡数，将观察结果记录于表3中。
表3：20％呋虫胺悬浮剂对蚯蚓急性毒性试验数据记录表
同时，在14d的试验期间，赤子爱胜蚯蚓出现了蠕动能力减弱，尸体腐烂，死亡等生物效应。
4、数据处理
采用统计软件SPSS12.0，以处理浓度的对数值为自变量x，以(校正)死亡率的机率值为因变量y，建立毒力回归方程。计算20％呋虫胺悬浮剂对蚯蚓的半数致死浓度LC50和95％置信限，具体的计算结果参见表4。
表4：20％呋虫胺悬浮剂对蚯蚓急性毒性试验结果表
通过上述方法计算得到20％呋虫胺悬浮剂对蚯蚓急性毒性LC50(14d)为1.64mga.i./kg干土，95％置信限为1.17～2.74mga.i./kg干土。
5、结果评价
根据LC50值判断农药毒级。毒性分级标准为：低毒(LC50＞10.0mga.i./kg干土)，中毒(1.00mga.i./kg干土＜LC50≤10.0mga.i./kg干土)，高毒(0.100mga.i./kg干土＜LC50≤1.00mga.i./kg干土)，剧毒(LC50≤0.100mga.i./kg干土)。
在本实施例的试验条件下，20％呋虫胺悬浮剂悬浮剂对蚯蚓急性毒性的LC50(14d)为1.64mga.i./kg干土，处于1.00～10.0mga.i./kg干土之间，毒性等级为“中毒”。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制。虽然本发明已以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限定本发明。任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明的精神实质和技术方案的情况下，都可利用上述揭示的方法和技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同替换、等效变化及修饰，均仍属于本发明技术方案保护的范围内。

Claims (9)

1.一种赤子爱胜蚯蚓测定农药悬浮剂毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将农药悬浮剂溶解，配制成农药储备液；
S2、将步骤S1中的所述农药储备液加入到土壤和水的混合物中配制成梯度浓度的试验液；
S3、挑选有生殖带的赤子爱胜蚯蚓，随机加入到步骤S2中所述的试验液中，持续培养14d，于第7d、14d记录赤子爱胜蚯蚓的生物效应参数；
S4、根据赤子爱胜蚯蚓的生物效应参数计算农药悬浮剂对赤子爱胜蚯蚓的半数致死浓度LC50值，判断农药悬浮剂的毒性。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中挑选的所述赤子爱胜蚯蚓的体重为0.30g～0.60g。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中所述生物效应参数为赤子爱胜蚯蚓的死亡率和中毒症状。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，赤子爱胜蚯蚓的死亡的标准为：用针轻触赤子爱胜蚯蚓尾部无反应；所述中毒症状为：赤子爱胜蚯蚓出现了蠕动能力减弱。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述持续培养14d的培养条件为：温度20±1℃、湿度80％～85％、400Lux～800Lux光强连续光照。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中所述赤子爱胜蚯蚓在加入所述试验液的前1天，将所述赤子爱胜蚯蚓在人工土壤中清肠。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤S4中，采用统计软件SPSS，以处理浓度的对数值为自变量x，以死亡率的机率值为因变量y，计算农药制剂对赤子爱胜蚯蚓的半数致死浓度LC50和95％置信限。
8.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述农药毒级判断标准为低毒(LC50＞10.0mga.i./kg干土)，中毒(1.00mga.i./kg干土＜LC50≤10.0mga.i./kg干土)，高毒(0.100mga.i./kg干土＜LC50≤1.00mga.i./kg干土)，剧毒(LC50≤0.100mga.i./kg干土)。
9.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述赤子爱胜蚯蚓筛选农药悬浮剂毒性的方法还设有空白对照组，所述空白对照组以土壤和水的混合物作为试验液培养赤子爱胜蚯蚓，所述空白对照组死亡率不超过10％则证明实验结果可信。
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