CN105639210B

CN105639210B - 一种培育生态标记型牙鲆的饲料及其应用方法

Info

Publication number: CN105639210B
Application number: CN201610192436.4A
Authority: CN
Inventors: 于广宝; 李刚
Original assignee: National Aquatic Product Technology Popularization Terminus
Current assignee: National Aquatic Product Technology Popularization Terminus
Priority date: 2016-03-30
Filing date: 2016-03-30
Publication date: 2018-07-06
Anticipated expiration: 2036-03-30
Also published as: CN105639210A

Abstract

本发明涉及一种培育生态标记型牙鲆的饲料及其应用方法，包括配合饲料、营养强化剂强化后的轮虫和营养强化剂强化后的卤虫；强化后的轮虫中营养强化剂的添加量为：每1亿轮虫用13～30g的营养强化剂强化；强化后的卤虫中营养强化剂的添加量为：每1亿卤虫用50g～100g的营养强化剂强化；营养强化剂的成份包括DHA、EPA、维生素和氨基酸。本发明的饲料营养、无副作用，最重要的是能够使牙鲆无眼侧出现黑色素沉积斑的生态标记印记，且该饲料不仅不增加死亡率，不影响生长，且在试验中还发现，采用本发明的饲料喂养牙鲆，其成活率明显提高。

Description

一种培育生态标记型牙鲆的饲料及其应用方法

技术领域

本发明涉及一种培育生态标记型牙鲆的饲料，具体涉及一种培育生态标记型牙鲆的饲料及其应用方法，该生态标记型的牙鲆主要用于放流统计研究。

背景技术

牙鲆(Paralichthys olivaceus)主要分布于我国渤海、黄海、东海、南海和朝鲜、日本海域。生活环境多为靠近沿岸水深20-50m潮流畅通的海域。其栖息底质多为砂泥、砂石或岩礁地带。牙鲆是名贵的暖温性、底栖海产经济鱼类，也是我国北方沿海重要的海水经济鱼类之一。

由于之前的过度拖网捕捞，导致我国的牙鲆野生资源曾衰退严重，为此，各级政府高度重视，每年动用大量人力、物力在不同海域开展牙鲆增殖放流活动。通过这些年牙鲆增殖放流活动的开展，野生牙鲆资源量有了一定程度的增加。

近些年我国十分重视牙鲆种质资源的恢复，1998年至2003年我国农业部渔业局和日本国水产厅，分别委派全国水产技术推广总站(本申请人)和日本栽培渔业协会在全国水产技术推广总站日照海水良种示范基地开展为期5年的“中日水产增殖技术合作项目”，专门从事牙鲆鱼的苗种培育和种质资源恢复工作。在合作项目的带动下，全国沿海省开始了牙鲆的增殖放流。以山东省为例，2005年之前放流规模较小，不足20万尾，到2007年放流数量已近每年1000万尾。

然而，这些年，我们只片面的追求了牙鲆鱼苗培育数量和放流规模，却轻视了增殖放流的后期评估，即到底增加了多少？放流牙鲆的成活率又如何？多少体长的牙鲆鱼苗最适宜于放流等问题却一直没有让人信服的答案。究其原因，主要是因为没有找到合适的牙鲆放流标记方法。即使进行放流效果评估，也因选择的标记方法的诸多缺陷，很难推广应用，不同标记方法的优缺点详见表1所示。

表1.增殖放流中不同标记技术的优缺点

现行最常用的是“T”型标记法，由上表可知，放流鱼苗个体太小就不能用，还易造成继发感染，也不易于大规模放流使用；切除标记虽能大规模使用，但切的少了只能作为短期标记，切得多了又影响放流鱼苗的运动和捕食；分子标记、荧光染色标记等“高、大、上”方法，不仅费用昂贵，而且不易于后期回捕辨识。

针对以上诸多问题，本发明申请人全国水产技术推广总站，发明人李刚等认真总结多年牙鲆鱼苗培育和增殖放流经验。于2007年，提出了从饲喂牙鲆的饲料开始入手干预，使牙鲆具有生态标记印记，得到了黄渤海区渔政局有关领导的认可，并在随后的几年中一直从事生态标记的研究，开展了牙鲆生态标记放流试验，旨在通过对牙鲆鱼苗变态前后的摄入营养进行人为干预，使放流牙鲆鱼苗在无眼侧出现黑色素沉积斑以此和野生牙鲆无眼纯白形成鲜明对比，达到标记的目的。并且这种标记方法不增加死亡率，不影响生长，保持时间长，不易脱标，技术成本低、易于量化操作且回捕易辨识，具有广阔的推广和应用前景。2012年开始本申请的申请人分别与多家企业及个体老板合作进行了生态标记牙鲆的培育试验，试验成果得到了日照市海洋与渔业局渔业分管局长的高度肯定。

所谓牙鲆生态标记就是在人工养殖过程中通过人为干预使放流牙鲆鱼苗无眼侧出现黑色素沉积斑，以此与野生牙鲆无眼侧纯白进行区别达到标记目的牙鲆增殖放流标记方法。本申请人研究发现，牙鲆孵出后3天，眼色素加深，视觉系统的形态结构形成，呈正趋光性，开始主动摄食。随着视觉器官的进一步发育，视网膜通过视紫红质将视觉传递到中枢神经系统，中枢神经再通过酪氨酸酶先将酪氨酸氧化成二羟苯丙氨酸(DOPA)；二羟苯丙氨酸生成多巴奎宁；多巴奎宁在酪氨酸酶的作用下聚合成黑色素。

正常情况下牙鲆幼鱼变态前，成色素细胞分布在身体两侧，二羟苯丙氨酸(DOPA)阳性细胞均匀分布。一开始变态，有眼侧的黑色素细胞具有许多液胞，内含酪氨酸酶，逐步移向皮肤的表面，迅速扩散；变态后数量增加；而无眼侧的成色素细胞则逐渐溶解，数量减少，因此形成的牙鲆鱼苗有眼侧呈褐色或棕褐色,无眼侧因缺少黑色素细胞而呈白色。然而，通过大量实验发现某些营养元素、营养元素的量以及摄入的时间，能够达到抑制其无眼侧成色素细胞的减少，进而形成褐色或棕褐色的斑块，达到生态标记的目的。

发明内容

本发明的目的是提供一种培育生态标记型牙鲆的饲料及其应用方法，解决了现有技术中提到的不足。本发明的目的是通过以下技术方案来实现：

一种培育生态标记型牙鲆的饲料，包括配合饲料、营养强化剂强化后的轮虫和营养强化剂强化后的卤虫；

所述强化后的轮虫中营养强化剂的添加量为：每1亿轮虫用13～30g的营养强化剂强化营养；

所述强化后的卤虫中营养强化剂的添加量为：每1亿卤虫用50g～100g的营养强化剂强化营养；

所述营养强化剂的成份包括DHA、EPA、维生素和氨基酸；所述维生素包括VA、VD和VE；所述氨基酸的成份包括10种必须氨基酸，其种类为：丙氨酸、天门冬氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸以及丝氨酸；

该营养强化剂中各种成份的含量为：所述DHA的质量百分比为：24～25％；所述EPA的质量百分比为：17～19％，所述维生素中各种成份的含量为：VA：＜100IU/100g、VD：377IU/100g以及VE：＜0.5IU/100g；所述氨基酸中10种必须氨基酸的含量为：丙氨酸720～770mg/100g；天门冬氨酸1200～1300mg/100g；甘氨酸620～660mg/100g；组氨酸220～260mg/100g；异亮氨酸380～420mg/100g；亮氨酸670～720mg/100g；赖氨酸510～550mg/100g；苯丙氨酸400～430mg/100g；脯氨酸380～420mg/100g；丝氨酸440～480mg/100g。

进一步地，所述强化后的轮虫中营养强化剂的添加量为：每1亿轮虫用15～25g的营养强化剂强化营养；所述强化后的卤虫中营养强化剂的添加量为：每1亿卤虫用50g或70g或90g或100g的营养强化剂强化营养。

进一步地，所述营养强化剂中各种成份的含量：所述DHA的质量百分比为：24.6％；所述EPA的质量百分比为：18.05％，所述维生素中各种成份的含量：VA：90IU/100g，VD：377IU/100g，VE：0.4IU/100g；所述氨基酸中10种必须氨基酸的含量为：丙氨酸750mg/100g；天门冬氨酸1260mg/100g；甘氨酸640mg/100g；组氨酸240mg/100g；异亮氨酸400mg/100g；亮氨酸700mg/100g；赖氨酸530mg/100g；苯丙氨酸420mg/100g；脯氨酸400mg/100g；丝氨酸460mg/100g。

进一步地，所述配合饲料的营养成份以及各营养成份的质量份数为：粗蛋白48～60份、粗脂肪15～25份、粗纤维1～4份、粗灰分10～17份、钙1.5～3份、总磷1.2～2份、氨基酸2.2～5份以及水分3～12份。

进一步地，所述配合饲料的营养成份以及各营养成份的质量份数为：粗蛋白50份、粗脂肪16份、粗纤维3份、粗灰分14份、钙1.7份、总磷1.3份、氨基酸2.5份以及水分10份。

进一步地，所述饲料还包括小球藻。

进一步地，所述饲料中各种成份的加量或与牙鲆的关系为：所述营养强化剂强化后的轮虫按0.5～20亿个/100万尾的量添加；所述营养强化剂强化后的卤虫按0.7～30亿个/100万尾的量添加；所述配合饲料按牙鲆体重的3～10％添加；所述小球藻按1～3m³/100万尾的量添加，每1m³的小球藻数量为1亿个左右。

一种所述的培育生态标记型牙鲆的饲料的应用方法，该应用方法包括：

投喂量：所述营养强化剂强化后的轮虫每日的投喂量为：0.5～20亿个/100万尾；所述营养强化剂强化后的卤虫每日的投喂量为：0.7～30亿个/100万尾；所述配合饲料每日的投喂量为仔鱼体重的3～10％；所述小球藻每日的投喂量为：1～3m3/100万尾；

投喂方法：3～28日龄的牙鲆每日投喂小球藻和营养强化剂强化后的轮虫；12～46日龄每日投喂营养强化剂强化后的卤虫；从17日龄开始每日投喂配合饲料。

进一步地，所述配合饲料投喂至牙鲆90～95日龄为止；该配合饲料每日于投喂营养强化剂强化后的轮虫或营养强化剂强化后的卤虫前投喂。

进一步地，所述营养强化剂强化后的轮虫的投喂方法：3～11日龄，每1亿轮虫用15g的营养强化剂强化营养；12-20日龄每1亿轮虫用25g的营养强化剂强化营养；20～28日龄以后又恢复到1亿轮虫15g营养强化剂的用量；所述营养强化剂强化后的卤虫的投喂方法：12-15日龄，每1亿卤虫用50g的营养强化剂强化营养；16～46日龄为每1亿卤虫用100g的营养强化剂强化营养。

本发明提供了一种培育生态标记型牙鲆的饲料及其应用方法，其主要具有的有益效果为：

①本发明饲料以及其应用方法通过对牙鲆鱼苗变态前后的摄入营养进行人为干预，使放流牙鲆鱼苗在无眼侧出现黑色素沉积斑以此和野生牙鲆无眼纯白形成鲜明对比，实现对牙鲆生态标记的目的并能够进行放流统计评估。

②本发明的饲料营养、无副作用，最重要的是能够使牙鲆无眼侧出现黑色素沉积斑的生态标记印记，且该饲料不仅不增加死亡率，不影响生长，且在试验中还发现，采用本发明的饲料喂养牙鲆，其成活率明显提高。

③采用本发明饲料得到的生态标记印记保持时间长，不易脱标，且技术成本低、易于量化操作且回捕易辨识，具有广阔的推广和应用前景。

④可将通过本发明饲料以及其应用方法得到的生态标记型的牙鲆进行野外放流，实现牙鲆种质资源的恢复，并可进行有效的放流后期评估。

附图说明

下面根据附图对本发明作进一步详细说明。

图1是本发明实施例所述的生态标记育苗培育营养强化剂用量图；

图2是本发明实施例所述的第一组生态标记率和白化率的折线比较图；

图3是本发明实施例所述的第二组生态标记率和白化率的折线比较图；

图4是本发明实施例所述的第三组生态标记率和白化率的折线比较图；

图5是本发明实施例所述的三组生态标记率和白化率的折线比较图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本发明实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。因此，以下对在附图中提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

下面以具体实验案例为例来说明具体实施方式，应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

一种培育生态标记型牙鲆的饲料，包括营养强化剂强化后的轮虫和营养强化剂强化后的卤虫；强化后的轮虫中营养强化剂的添加量为：每1亿轮虫用13～30g的营养强化剂强化营养；强化后的卤虫中营养强化剂的添加量为：每1亿卤虫用50g～100g的营养强化剂强化营养；

营养强化剂的成份包括DHA、EPA、维生素和氨基酸；维生素包括VA、VD和VE；氨基酸的成份包括10种必须氨基酸，其种类为：丙氨酸、天门冬氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸以及丝氨酸；

作为进一步优选的实施方式，饲料中各种成份的加量(与牙鲆的关系)为：营养强化剂强化后的轮虫按0.5～20亿个/100万尾的量添加；营养强化剂强化后的卤虫按0.7～30亿个/100万尾的量添加。

作为进一步优选的实施方式，强化后的轮虫中营养强化剂的添加量为：每1亿轮虫用15～25g的营养强化剂强化营养；所述强化后的卤虫中营养强化剂的添加量为：每1亿卤虫用50g或70g或90g或100g的营养强化剂强化营养。

作为进一步优选的实施方式，营养强化剂中各种成份的含量：DHA的质量百分比为：24～25％；EPA的质量百分比为：17～19％，维生素中各种成份的含量：VA：＜100IU/100g、VD：377IU/100g以及VE：＜0.5IU/100g；氨基酸中10种必须氨基酸的含量为：丙氨酸720～770mg/100g；天门冬氨酸1200～1300mg/100g；甘氨酸620～660mg/100g；组氨酸220～260mg/100g；异亮氨酸380～420mg/100g；亮氨酸670～720mg/100g；赖氨酸510～550mg/100g；苯丙氨酸400～430mg/100g；脯氨酸380～420mg/100g；丝氨酸440～480mg/100g，营养强化剂中还可包括一些蛋白质等成份，所有成份加和为100％。

作为进一步优选的实施方式，营养强化剂中各种成份的含量：DHA的质量百分比为：24.6％；EPA的质量百分比为：18.05％；维生素中各种成份的含量：VA：90IU/100g，VD：377IU/100g，VE：0.4IU/100g；氨基酸中10种必须氨基酸的含量为：丙氨酸750mg/100g；天门冬氨酸1260mg/100g；甘氨酸640mg/100g；组氨酸240mg/100g；异亮氨酸400mg/100g；亮氨酸700mg/100g；赖氨酸530mg/100g；苯丙氨酸420mg/100g；脯氨酸400mg/100g；丝氨酸460mg/100g，营养强化剂中还可包括一些蛋白质等成份，所有成份加和为100％。

作为进一步优选的实施方式，上述饲料还包括配合饲料，该配合饲料的营养成份包括粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、粗灰分、钙、总磷、氨基酸以及水分。

作为进一步优选的实施方式，配合饲料的营养成份以及各营养成份的质量份数为：粗蛋白≥48份、粗脂肪≥15份、粗纤维≤4份、粗灰分≤17份、钙≥1.5份、总磷≥1.2份、氨基酸≥2.2份以及水分≤12份。进一步优选地，配合饲料的营养成份以及各营养成份的质量份数为：粗蛋白48～60份、粗脂肪15～25份、粗纤维1～4份、粗灰分10～17份、钙1.5～3份、总磷1.2～2份、氨基酸2.2～5份以及水分3～12份。更优选地，配合饲料的营养成份以及各营养成份的质量份数为：粗蛋白50份、粗脂肪16份、粗纤维3份、粗灰分14份、钙1.7份、总磷1.3份、氨基酸2.5份以及水分10份。

作为进一步优选的实施方式，配合饲料在上述饲料中的加量为：配合饲料按牙鲆体重的3～10％添加，优选地，配合饲料的用量与仔鱼体重呈反比例关系，即3～5日龄按体重的8～10％投喂，5日龄以后逐渐递减，到30日龄以后按体重的3～5％投喂。

作为进一步优选的实施方式，上述饲料还包括小球藻。小球藻按1～3m³/100万尾的量添加，开始时，投喂量可为1m³/100万尾，逐渐增加，到最后达到3m³/100万尾，每1m³的小球藻个数为1亿个左右。

实施例2

一种培育生态标记型牙鲆的饲料的应用方法，该应用方法包括：

投喂量：所述营养强化剂强化后的轮虫每日的投喂量为：0.5～20亿个/100万尾；所述营养强化剂强化后的卤虫每日的投喂量为：0.7～30亿个/100万尾；所述配合饲料每日的投喂量为仔鱼体重的3～10％；所述小球藻每日的投喂量为：1～3m³/100万尾；

投喂方法：牙鲆3～28日龄的牙鲆每日投喂小球藻和营养强化剂强化后的轮虫，投喂至26～30日龄，优选投喂至27日龄或28日龄或29日龄；12日龄开始每日投喂营养强化剂强化后的卤虫，投喂至40～46日龄为止，例如，可投喂至44日或45日或46日；从17日龄开始每日投喂配合饲料。

作为进一步优选的实施方式，配合饲料投喂至牙鲆90～95日龄为止，优选投喂至牙鲆93日龄为止；该配合饲料每日于投喂营养强化剂强化后的轮虫或营养强化剂强化后的卤虫前投喂。

作为进一步优选的实施方式，营养强化剂强化后的轮虫的投喂方法：3～11日龄，每1亿轮虫用15g的营养强化剂强化营养；12-20日龄每1亿轮虫用25g的营养强化剂强化营养；20日龄以后又恢复到1亿轮虫15g营养强化剂的用量，投喂至27日龄或28日龄或29日龄为止。

作为进一步优选的实施方式，营养强化剂强化后的卤虫的投喂方法：12-15日龄，每1亿卤虫用50g的营养强化剂强化营养；15日龄为每1亿卤虫用100g的营养强化剂强化营养，投喂至40～46日龄为止，例如，可投喂至44日或45日或46日。

作为进一步优选的实施方式，营养强化剂强化后的轮虫的投喂量为：3～4日龄每日为0.4～0.6亿个/50m³，由5日龄每日1.2～1.8亿个/50m³逐渐增加至21日龄或22日龄或23日龄的18～19亿个/50m³，此后，再由18～19亿个/50m³递减至投喂结束时的6～7亿个/50m³。

作为进一步优选的实施方式，营养强化剂强化后的轮虫的投喂量为：3～4日龄每日为0.5亿个/50m³，5～6日龄每日1.5亿个/50m³，7～8日龄每日3.0亿个/50m³，9～13日龄每日5.0或5.1亿个/50m³，14～15日龄每日8.1或8.2亿个/50m³，16～17日龄每日11.8或11.9或12.0亿个/50m³，18～19日龄每日15.2或15.3或15.4或15.5亿个/50m³，20～21日龄每日17.0或17.1或17.2或17.3亿个/50m³，22日龄每日18.2亿个/50m³，23日龄每日17.9亿个/50m³，24日龄每日17.7亿个/50m³，25日龄每日17.4亿个/50m³；26～28日龄每日6.6～7.0亿个/50m³。

作为进一步优选的实施方式，营养强化剂强化后的卤虫的投喂量为：由12日龄每日0.7～0.8亿个/50m³逐渐增加至20～31日龄的2.9～3.1亿个/50m³，此后，再由2.9～3.1亿个/50m³递减至投喂结束时的1.3～1.5亿个/50m³。

作为进一步优选的实施方式，营养强化剂强化后的卤虫的投喂量为：12～13日龄每日0.7亿个/50m³，14～15日龄每日1.0亿个/50m³，16～17日龄每日1.5或1.6亿个/50m³，18～19日龄每日2.3亿个/50m³，20～31日龄每日2.9或3.0或3.1亿个/50m³，32～33日龄每日2.8或2.9或3.0亿个/50m³，34～35日龄每日2.1或2.2亿个/50m³，36～39日龄每日1.4或1.5亿个/50m³，40～43日龄每日0.8或0.9亿个/50m³，此后，可按每日0.6或0.7亿个/50m³，直至结束投喂强化后的卤虫，如投喂至44日龄或45日龄或46日龄。

本实施例中的营养强化剂以及配合饲料等的成份以及各种成份的量等如实施例1所示，这里不再重复限定。

实施例3

S1：水泥池消毒处理后作为培养池，加过滤水，该培养池中设有充气装置，调整充气装置上的充气阀使池面有微波，在15℃下，布牙鲆鱼卵，其养殖密度为0.2～2万尾/m³，具体可通过牙鲆的成长其养殖密度递减；

S2：仔鱼3日龄时，仔鱼开口，开始投喂营养强化后的轮虫，投喂至仔鱼26～30日龄为止，优选投喂至27日龄或28日龄或29日龄；

轮虫中营养强化剂的添加量为：3日龄～11日龄，每1亿轮虫用13～18g的营养强化剂强化营养；12日龄-20日龄每1亿轮虫用20～30g的营养强化剂强化营养；20日龄以后为1亿轮虫13～18g营养强化剂的用量；优选地，轮虫中营养强化剂的添加量为：5日龄～11日龄，每1亿轮虫用15g的营养强化剂强化营养；12日龄-20日龄每1亿轮虫用25g的营养强化剂强化营养；20日龄以后又恢复到1亿轮虫15g营养强化剂的用量；

S3：仔鱼12日龄时，开始投喂营养强化后的卤虫，投喂至仔鱼30～50日龄为止，优选投喂至35～50日龄，更优选为40～46日龄，例如，可投喂至44日或45日或46日；

卤虫中营养强化剂的添加量为：12日龄-15日龄，每1亿卤虫用50g的营养强化剂强化营养；15日龄以后为每1亿卤虫用100g的营养强化剂强化营养，直至结束投喂卤虫；

步骤S2和S3中进行营养强化的营养强化剂的成份包括DHA、EPA、维生素和氨基酸；

S4：仔鱼15～19日龄时，优选17日龄时，开始投喂配合饲料，用量为仔鱼体重的3～10％；

由此，可得到用于放流统计的生态标记型牙鲆，该牙鲆无眼侧出现形态、特征稳定的黑色素沉积斑。

作为进一步优选的实施方式，步骤S2中，营养强化后的轮虫的投喂量为：3～4日龄每日为0.4～0.6亿个/50m³，由5日龄每日1.2～1.8亿个/50m³逐渐增加至21日龄或22日龄或23日龄的18～19亿个/50m³，此后，再由18～19亿个/50m³递减至投喂结束时的6～7亿个/50m³。

作为进一步优选的实施方式，步骤S2中，营养强化后的轮虫的投喂量为：3～4日龄每日为0.5亿个/50m³，5～6日龄每日1.5或1.6亿个/50m³，7～8日龄每日2.8～3.1亿个/50m³，9～13日龄每日4.8～5.2亿个/50m³，14～15日龄每日8.0～8.2亿个/50m³，16～17日龄每日11.8～12.0亿个/50m³，18～19日龄每日15.0～15.5亿个/50m³，20～21日龄每日17.0～17.5亿个/50m³，22日龄每日18.0～18.4亿个/50m³，23～25日龄每日17.0～17.9亿个/50m³，26～28日龄每日6.5～7.0亿个/50m³。

作为进一步优选的实施方式，步骤S2中，营养强化后的轮虫的投喂量为：3～4日龄每日为0.5亿个/50m³，5～6日龄每日1.5亿个/50m³，7～8日龄每日3.0亿个/50m³，9～13日龄每日5.0或5.1亿个/50m³，14～15日龄每日8.1或8.2亿个/50m³，16～17日龄每日11.8或11.9或12.0亿个/50m³，18～19日龄每日15.2或15.3或15.4或15.5亿个/50m³，20～21日龄每日17.0或17.1或17.2或17.3亿个/50m³，22日龄每日18.2亿个/50m³，23日龄每日17.9亿个/50m³，24日龄每日17.7亿个/50m³，25日龄每日17.4亿个/50m³；26～28日龄每日6.6～7.0亿个/50m³。

作为进一步优选的实施方式，步骤S3，营养强化后的卤虫的投喂量为：由12日龄每日0.7～0.8亿个/50m³逐渐增加至20～31日龄的2.9～3.1亿个/50m³，此后，再由2.9～3.1亿个/50m³递减至投喂结束时的1.3～1.5亿个/50m³。

作为进一步优选的实施方式，步骤S3，营养强化后的卤虫的投喂量为：12～13日龄每日0.7亿个/50m³，14～15日龄每日1.0亿个/50m³，16～17日龄每日1.5或1.6亿个/50m³，18～19日龄每日2.3亿个/50m³，20～31日龄每日2.9或3.0或3.1亿个/50m³，32～33日龄每日2.8或2.9或3.0亿个/50m³，34～35日龄每日2.1或2.2亿个/50m³，36～39日龄每日1.4或1.5亿个/50m³，40～43日龄每日0.8或0.9亿个/50m³，此后，可按每日0.6或0.7亿个/50m³，直至结束投喂强化后的卤虫，如投喂至44日龄或45日龄或46日龄。

作为进一步优选的实施方式，从仔鱼3日龄开始投喂小球藻，投喂量为：1m³/50m³，投喂至14～16日龄，优选投喂至15日龄，此后，其投喂量增加至：3m³/50m³，投喂至26～30日龄，优选投喂至27日龄或28日龄或29日龄。

作为进一步优选的实施方式，营养强化剂中DHA(二十二碳六烯酸)的质量百分比分别为：24～25％，EPA(二十碳五烯酸)的质量百分比分别为：17～19％，维生素的含量为：IU/100g 450～530，氨基酸的含量为：5000～6000mg/100g，余量可为蛋白质等营养成份。

作为进一步优选的实施方式，营养强化剂中DHA的质量百分比为：24.6％，EPA的质量百分比为：18.05％，维生素的含量为：IU/100g 460～500，氨基酸的含量为：5400～5600mg/100g，余量可为蛋白质等营养成份。

作为进一步优选的实施方式，所述维生素为VA、VD和VE，其含量为：VA:IU/100g＜100，VD:IU/100g 350～390，VE：IU/100g＜0.5，更优选地，VA：90IU/100g，VD：377IU/100g，VE：0.4IU/100g。

作为进一步优选的实施方式，氨基酸的成份包括10种必须氨基酸，其种类以及各种的含量为：丙氨酸720～770mg/100g；天门冬氨酸1200～1300mg/100g；甘氨酸620～660mg/100g；组氨酸220～260mg/100g；异亮氨酸380～420mg/100g；亮氨酸670～720mg/100g；赖氨酸510～550mg/100g；苯丙氨酸400～430mg/100g；脯氨酸380～420mg/100g；丝氨酸440～480mg/100g。更优选地，各种的含量为：丙氨酸750mg/100g；天门冬氨酸1260mg/100g；甘氨酸640mg/100g；组氨酸240mg/100g；异亮氨酸400mg/100g；亮氨酸700mg/100g；赖氨酸530mg/100g；苯丙氨酸420mg/100g；脯氨酸400mg/100g；丝氨酸460mg/100g。

作为进一步优选的实施方式，步骤S4中，配合饲料分2～4次于投喂活饵前投喂，该配合饲料的用量为仔鱼体重的3～10％，优选地，配合饲料的用量与仔鱼体重呈反比例关系，即3～5日龄按体重的8～10％投喂，5日龄以后逐渐递减，到30日龄以后按体重的3～5％投喂，一般，平均按仔鱼体重的5％投喂；

配合饲料投喂至仔鱼80～100日龄为止，优选投喂至仔鱼90～95日龄，此时，仔鱼约为7cm长，体色变化极其明显且稳定下来。

作为进一步优选的实施方式，配合饲料的营养成份包括：粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、粗灰分、钙、总磷、氨基酸以及水分。

作为进一步优选的实施方式，配合饲料中各种成份的质量百分比为：粗蛋白≥48、粗脂肪≥15％、粗纤维≤4％、粗灰分≤17％、钙≥1.5％、总磷≥1.2％、氨基酸≥2.2％以及水分≤12％。

优选地，所述配合饲料的营养成份以及各营养成份的质量百分比为：粗蛋白48～55％、粗脂肪15～22％、粗纤维1～4％、粗灰分10～17％、钙1.5～3％、总磷1.2～2％、氨基酸2.2～5％以及水分3～12％。更优选地，粗蛋白50％、粗脂肪16％、粗纤维3％、粗灰分14％、钙1.7％、总磷1.3％、氨基酸2.5％以及水分10％，余量可为一些蛋白质等成份。

实施例4

一种培育生态标记型牙鲆的饲料的应用方法，该应用方法包括以下步骤，参见表2：

S1：将50m³的水泥池消毒处理后作为培养池，加过滤水，该培养池中设有充气装置，调整充气装置上的充气阀使池面有微波，在15℃下，布牙鲆鱼卵，其密度为1.00～2.00万尾/m³具体可通过牙鲆的成长其养殖密度递减；

S2：仔鱼3日龄时，鱼卵全部孵出仔鱼或仔鱼开口，开始投喂小球藻和营养强化的轮虫；小球藻从第3日一直投喂至第28日为止，其中第3～15天的投喂量为1m³/天，1m³的小球藻个数为1亿个左右，16～28天的的投喂量为3m³/天，每1m³的小球藻个数为1亿个左右，则3m³有3亿个左右；

营养强化后的轮虫，从第3日投喂至仔鱼28日龄为止，每日的投喂量：3～4日龄0.5亿个，然后由5日龄的1.5亿个逐渐增加到第22日龄的18.2亿个，再逐渐递减到28日龄的6.6亿个，具体每日的投喂量及其变化如表2所示；

S3：仔鱼12日龄时，开始投喂营养强化后的卤虫，投喂至仔鱼46日龄为止，每日的投喂量由第12日龄的0.7亿个逐渐增加到第30日龄的3.1亿个，再逐渐递减到46日龄的0.7亿个，具体每日的投喂量及其变化如表2所示；

S4：仔鱼17日龄时，开始投喂配合饲料，分2-4次于投喂活饵前投喂，活饵即为轮虫或卤虫；其具体添加量为：每日的投喂量由第17日龄的200g/50m³逐渐增加到第48日龄的1320g/50m³，具体每日的投喂量及其变化如表2所示。

S5：经48天的苗种培育，牙鲆鱼苗的体色都在不同程度上有了变化，但由于鱼苗较小，肉眼观察不明显。再进行45天(即总共培育90多天)投喂配合饲料的中间培育到牙鲆鱼苗体长7cm左右时，体色变化极其明显且稳定下来,这45天配合饲料的投喂量为仔鱼体重的3～％。

表2仔牙鲆的每日投喂物与投喂量(50m³培养池为基准)。

该实施例中用于进行营养强化的营养强化剂的成份包括DHA、EPA、维生素和氨基酸。DHA的质量百分比为：24.6％，EPA的质量百分比为：18.05％，维生素为VA、VD和VE，其含量为：VA：90IU/100g，VD：377IU/100g，VE：0.4IU/100g。氨基酸的成份包括10中必须氨基酸，其种类以及各种的含量为：丙氨酸750mg/100g；天门冬氨酸1260mg/100g；甘氨酸640mg/100g；组氨酸240mg/100g；异亮氨酸400mg/100g；亮氨酸700mg/100g；赖氨酸530mg/100g；苯丙氨酸420mg/100g；脯氨酸400mg/100g；丝氨酸460mg/100g。

该实施例中的配合饲料的营养成份包括：粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、粗灰分、钙、总磷、氨基酸以及水分，其含量为：粗蛋白50％、粗脂肪16％、粗纤维3％、粗灰分14％、钙1.7％、总磷1.3％、氨基酸2.5％以及水分10％，余量可为一些蛋白质等成份。

轮虫中营养强化剂的添加量为：3日龄～11日龄，每1亿轮虫用15g的营养强化剂强化营养；12日龄-20日龄每1亿轮虫用25g的营养强化剂强化营养；21日龄-30日龄又恢复到1亿轮虫15g营养强化剂的用量，参见图1。

卤虫中营养强化剂的添加量为：12日龄-15日龄，每1亿卤虫用50g的营养强化剂强化营养；16日龄及其以后为每1亿卤虫用100g的营养强化剂强化营养，直至46日，参见图1。

表2中每1m³的小球藻个数为1亿个左右。

由以上方法培育得到的牙鲆的无眼侧出现形态、特征稳定的黑色素沉积斑，其为生态标记型牙鲆，可用于放流统计研究；牙鲆的生态标记率为99.20％。

实施例5

关于培育生态标记型牙鲆的饲料的应用方法以及该方法所具有的技术效果如下所示：

选9个15m³水泥池消毒处理后作为培养池，分成三组，每组各三个池子，每池加过滤水8m³，调整充气装置的充气阀使池面有微波，水温控制在15℃，每个培养池布牙鲆鱼卵100g。第三天鱼卵全部孵出仔鱼，可选择加喂轮虫，第五天仔鱼开口后，进行营养强化。

第一组：3个池子使用经1亿轮虫5g强化剂强化的轮虫和1亿卤虫50g强化剂强化的卤虫；配合饲料为市售的常规的饲喂牙鲆的饲料；强化剂为市售的常规的强化剂。

第二组：使用1亿轮虫10g强化剂强化的轮虫和1亿卤虫80g强化剂强化的卤虫；配合饲料为市售的常规的饲喂牙鲆的饲料。强化剂为市售的常规的强化剂。

第三组：3个池子，12日龄前按1亿轮虫15g营养强化剂进行强化，12日龄-20日龄每1亿轮虫增加10g营养强化剂，达到25g。21日龄-30日龄又恢复到1亿轮虫15g营养强化剂的用量；卤虫营养强化剂用量为12日龄-15日龄每1亿卤虫50g，16日龄后为每1亿卤虫100g，如图1所示。所用到的营养强化剂的成份以及各成份的量同实施例1～4中的成份和量一致，这里不再重复限定。所用到的配合饲料的营养成份以及各成份的量同实施例1～4中的成份和量一致，这里不再重复限定。

对于以上三组，从仔鱼17日龄开始驯化配合饲料，用量为仔鱼体重的3～10％(具体可参见前几个实施例)，分2～4次于投喂活饵前投喂，活饵即为轮虫或卤虫，轮虫投喂到仔鱼30日龄停喂，卤虫投喂到仔鱼48日龄停喂。

经48天的苗种培育，牙鲆鱼苗的体色都在不同程度上有了变化，但由于鱼苗较小，肉眼观察不明显。再进行45天(即总共培育90多天)投喂配合饲料的中间培育到牙鲆鱼苗体长7cm左右时，体色变化极其明显且稳定下来(即得到牙鲆无眼侧具有黑色素沉积斑的生态标记)，这45天配合饲料的投喂量根据牙鲆苗的食量可逐渐增加。

为了统计生态标记率，夜间当牙鲆鱼苗在池中均匀分散时，我们用1平方米面积的网箱在池中不同的3个位置取样，计数有生态标记鱼苗的数量。以此，测算不同营养强化水平下，牙鲆鱼苗的生态标记率，结果如表3所示，每次抽样的生态标记率以及平均生态标记率基本均在99％以上，同时可参见图2～5。

表3生态标记试验牙鲆鱼苗体色统计表

通过上述牙鲆生态标记苗种培育试验，本申请人发现在牙鲆仔鱼孵出后第3天后的变态期采用本发明的饲料并按本发明的应用方法喂养培育，能得到明显的生态标记作用。

实施例6

小型试验：本申请人采用本发明的饲料并按本发明的应用方法喂养培育牙鲆，得到具有生态标记型的牙鲆，然后对1万尾具有生态标记牙鲆采用常规方法进行养殖，一年后，本申请人发现所饲养的牙鲆无眼侧的黑色素沉积斑没有脱色，和野生牙鲆无眼纯白形成依然鲜明对比。

由此可得，采用本发明的饲料并按本发明的应用方法喂养培育得到具有生态标记型的牙鲆，其能够用于放流统计研究。

实施例7

经本申请人的生产实践，牙鲆鱼苗的生态标记率大多在99％以上。但是生态标记鱼苗的无眼侧黑色素沉积斑是否会随着牙鲆鱼苗生长，养殖环境和投喂饲料的不同而消失？又或者正常牙鲆鱼苗无眼侧是否会随着养殖环境和投喂饲料的不同，而在无眼侧出现黑色素沉积斑？一旦在后续的牙鲆生长过程中，出现了诸如上述生态标记斑的逆转现象，将大大影响牙鲆生态标记的可靠性。为了验证牙鲆生态标记是否会产生逆转，本申请人又进行了牙鲆生态标记的验证试验。

一、试验地点

1、全国水产技术推广总站(即本申请人)日照海水基地

本试验全部工厂化养殖条件下的牙鲆生态标记不可逆验证试验，全部在我站日照海水良种示范基地综合车间进行。

2、岩礁池

本试验天然岩礁条件下的牙鲆生态标记不可逆验证试验全部在刘成波老板的山东荣成成山头牙鲆商品鱼养殖场进行。试验所用岩礁池面积15亩，平均水深3米，日常依靠海洋潮汐进行水质交换。

3、海上网箱

海上网箱选在山东胶州湾海域，水流畅通，流速适中；海区表层水温年变化范围为0.96-25.89℃；pH值年变化为7.48-8.34；盐度为27.86-32.29‰；透明度为0.50-4.5m；溶解氧含量为4.93-9.16mg/L。网箱为加强型板框结构，规格36m×3.6m×3.6m，网衣为聚乙烯结节网。

二、试验用鱼

按本发明方法在基地培育的生态标记鱼苗和纯白底鱼苗。

三、试验设计

1、工厂化养殖环境下生态标记验证试验设计

从日照海水基地培育的牙鲆鱼苗种随机挑选17-18cm的生态标记鱼苗300尾(背部打绿色体外标记)，纯白底鱼苗180尾(背部打红色体外标记)。另准备3吨FRP水槽6个，5吨FRP水槽6个。其中每个3吨FRP水槽投放生态标记牙鲆鱼苗20尾、纯白底牙鲆鱼苗10尾；每个5吨FRP水槽投放生态标记牙鲆鱼苗30尾、纯白底牙鲆鱼苗20尾。

表4养殖车间生态标记牙鲆验证性试验设计

2、天然岩礁池环境下生态标记验证试验设计

以推广到天然岩礁池养殖的基地培育的生态标记牙鲆鱼苗为样本，模拟自然沙石质海底养殖环境，投喂附近海区收购的野杂鱼进行验证试验。3、海上网箱环境下生态标记的验证性试验设计

以推广到海上网箱养殖的基地培育的生态标记牙鲆鱼苗为样本，验证真实自然海区养殖环境下，投喂附近海区收购的野杂鱼牙鲆鱼体色的变化。

四、试验成果验收

1、工厂化养殖环境下生态标记验证试验

在工厂化养殖环境下，经近1年的养殖试验，300尾生态标记鱼苗已由原来体长17cm左右，体重50-75g，长到了现在的30cm以上，体重350-400g。纯白底牙鲆由原来体长17cm，体重50-75g，长到现在平均体长27cm，体重300-350g。现存的牙鲆鱼无论是投喂人工配合饲料组还是鲜活饵料组，是光池底养殖还是沙池底，生态标记牙鲆鱼苗的生态标记均没有褪去，且纯白底牙鲆的无眼侧也均未出现黑色素沉积斑。

2、天然岩礁池和海上网箱环境下生态标记验证试验

通过6、7个月的养殖，天然岩礁池和海上网箱环境下的生态标记牙鲆鱼苗长势良好，由原来的体长15cm，体重50g左右已长到现在的750-1500g。通过我们现场查看，发现生态标记牙鲆并没有因为岩礁池是沙底而消褪，也没有因为在纯自然海况的海上网箱养殖而消失。放养时的纯白底牙鲆在我们查看时，也未出现黑斑。

五、结论

通过前后近2年的牙鲆生态标记不可逆验证试验，特别是最近1年。本申请人发现不论是在工厂化养殖，还是岩礁池或海上网箱养殖，生态标记都不会随着后期的养殖环境和饲料的变化而褪去。而纯白底牙鲆也不会因为后期养殖环境和饲料的变化而重新出现色素沉积斑。另外，在工厂化养殖试验过程中，本申请人也发现生态标记牙鲆组的牙鲆养殖成活率明显高于纯白底牙鲆养殖组。经咨询岩礁池养殖和海上网箱养殖的老板，他们也深有同感，并认为生态标记牙鲆不仅养殖成活率高，而且在运输过程中耐受力也较纯白底牙鲆强，无眼侧充血发红的几率较小。

最后应说明的是：以上所述的各实施例仅用于说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或全部技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims

1.一种培育生态标记型牙鲆的饲料的应用方法，包括配合饲料，其特征在于：还包括营养强化剂强化后的轮虫和营养强化剂强化后的卤虫；

投喂方法：3～28日龄的牙鲆每日投喂小球藻和营养强化剂强化后的轮虫；12～46日龄每日投喂营养强化剂强化后的卤虫；从17日龄开始每日投喂配合饲料；

所述营养强化剂强化后的轮虫的投喂方法：3～11日龄，每1亿轮虫用15g的营养强化剂强化营养；12-20日龄每1亿轮虫用25g的营养强化剂强化营养；20～28日龄以后又恢复到1亿轮虫15g营养强化剂的用量；所述营养强化剂强化后的卤虫的投喂方法：12～15日龄，每1亿卤虫用50g的营养强化剂强化营养；16～46日龄为每1亿卤虫用100g的营养强化剂强化营养。

所述营养强化剂的成份包括DHA、EPA、维生素和氨基酸；所述维生素包括VA、VD和VE；所述氨基酸的成份包括10种必须氨基酸，其种类为丙氨酸、天门冬氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸以及丝氨酸；

2.根据权利要求1所述的培育生态标记型牙鲆的饲料的应用方法，其特征在于：所述营养强化剂中各种成份的含量：

所述DHA的质量百分比为：24.6％；

所述EPA的质量百分比为：18.05％，

所述维生素中各种成份的含量：VA：90IU/100g，VD：377IU/100g，VE：0.4IU/100g；

所述氨基酸中10种必须氨基酸的含量为：丙氨酸750mg/100g；天门冬氨酸1260mg/100g；甘氨酸640mg/100g；组氨酸240mg/100g；异亮氨酸400mg/100g；亮氨酸700mg/100g；赖氨酸530mg/100g；苯丙氨酸420mg/100g；脯氨酸400mg/100g；丝氨酸460mg/100g。

3.根据权利要求1所述的培育生态标记型牙鲆的饲料的应用方法，其特征在于：所述配合饲料的营养成份以及各营养成份的质量份数为：粗蛋白48～60份、粗脂肪15～25份、粗纤维1～4份、粗灰分10～17份、钙1.5～3份、总磷1.2～2份、氨基酸2.2～5份以及水分3～12份。

4.根据权利要求3所述的培育生态标记型牙鲆的饲料的应用方法，其特征在于：所述配合饲料的营养成份以及各营养成份的质量份数为：粗蛋白50份、粗脂肪16份、粗纤维3份、粗灰分14份、钙1.7份、总磷1.3份、氨基酸2.5份以及水分10份。

5.根据权利要求4所述的培育生态标记型牙鲆的饲料的应用方法，其特征在于：所述饲料还包括小球藻。

6.根据权利要求5所述的培育生态标记型牙鲆的饲料的应用方法，其特征在于：所述饲料中各种成份的加量为：所述营养强化剂强化后的轮虫按0.5～20亿个/100万尾的量添加；所述营养强化剂强化后的卤虫按0.7～30亿个/100万尾的量添加；所述配合饲料按牙鲆体重的3～10％添加；所述小球藻按1～3m³/100万尾的量添加，每1m³的小球藻数量为1亿个。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的培育生态标记型牙鲆的饲料的应用方法，其特征在于：所述配合饲料投喂至仔鱼90～95日龄为止；该配合饲料每日于投喂营养强化剂强化后的轮虫或营养强化剂强化后的卤虫前投喂。