CN105593241B - 特异性结合her3的抗体 - Google Patents
特异性结合her3的抗体 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105593241B CN105593241B CN201480051510.XA CN201480051510A CN105593241B CN 105593241 B CN105593241 B CN 105593241B CN 201480051510 A CN201480051510 A CN 201480051510A CN 105593241 B CN105593241 B CN 105593241B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seq
- antibody
- amino acid
- acid sequence
- chain variable
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 title claims description 51
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 title claims description 46
- 101001010819 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 claims abstract description 94
- 102000057750 human ERBB3 Human genes 0.000 claims abstract description 93
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 54
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 45
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 45
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 114
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 51
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 26
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 26
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 25
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 25
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 25
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 20
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 claims description 14
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 claims description 13
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 10
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 abstract 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 80
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 53
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 42
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 40
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 36
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 33
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 24
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 23
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 23
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 21
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 21
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 16
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 15
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 14
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 14
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 14
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 12
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 11
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 11
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 10
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 10
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 10
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 10
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 9
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 9
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 9
- 101100067974 Arabidopsis thaliana POP2 gene Proteins 0.000 description 8
- 101100118549 Homo sapiens EGFR gene Proteins 0.000 description 8
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 8
- 102100029981 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Human genes 0.000 description 8
- 101710100963 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Proteins 0.000 description 8
- 101100123851 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) HER1 gene Proteins 0.000 description 8
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 8
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 7
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 6
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 6
- 108091005682 Receptor kinases Proteins 0.000 description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 6
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 6
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 5
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 5
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 5
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 5
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 5
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 4
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 4
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 4
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 4
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 4
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 4
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 3
- -1 carboxy α -amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000013115 immunohistochemical detection Methods 0.000 description 3
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000000058 Anaplasia Diseases 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 2
- 241001510071 Pyrrhocoridae Species 0.000 description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 108020001756 ligand binding domains Proteins 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 2
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000012128 staining reagent Substances 0.000 description 2
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 2
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 2
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- MGOWNVYDCIBVKC-FNHRVDEZSA-N (2s)-5-[3-[2-[2-[3-[5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]propoxy]ethoxy]ethoxy]propylamino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-oxopentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(=O)O)CCC(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)CCCC[C@H]1[C@H]2NC(=O)N[C@H]2CS1 MGOWNVYDCIBVKC-FNHRVDEZSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000979 2-amino-2-oxoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 206010052747 Adenocarcinoma pancreas Diseases 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 206010004146 Basal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 201000000274 Carcinosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000005243 Chondrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010052360 Colorectal adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 208000006402 Ductal Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010073306 Exposure to radiation Diseases 0.000 description 1
- 208000032320 Germ cell tumor of testis Diseases 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000265 Lobular Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010029098 Neoplasm skin Diseases 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010057444 Oropharyngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000009004 PCR Kit Methods 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 208000004337 Salivary Gland Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 206010006007 bone sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000012219 cassette mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000051957 human ERBB2 Human genes 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 229910052747 lanthanoid Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002602 lanthanoids Chemical class 0.000 description 1
- 208000003849 large cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002991 molded plastic Substances 0.000 description 1
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 1
- 208000010492 mucinous cystadenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002159 nanocrystal Substances 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 208000021284 ovarian germ cell tumor Diseases 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 201000002094 pancreatic adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 201000005528 peripheral nervous system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920000233 poly(alkylene oxides) Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000005825 prostate adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 1
- 238000013139 quantization Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 208000015347 renal cell adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 208000004548 serous cystadenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000002918 testicular germ cell tumor Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046885 vaginal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000013139 vaginal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 108091005957 yellow fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3023—Lung
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3046—Stomach, Intestines
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N2001/302—Stain compositions
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/71—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及分离的结合人HER3的抗体或其抗原结合部分。新抗体具有极大效用,因为它们容许灵敏且特异性地检测人HER3。例如,有可能在组织样品中检测人HER3,甚至在此类组织样品是福尔马林固定石蜡包埋组织(FFPET)样品时。
Description
本发明涉及分离的特异性结合人HER3的抗体,使用这些抗体实施免疫组织化学的方法,及生成它们的方法。
发明背景
人HER3(ErbB-3,ERBB3,c-erbB-3,c-erbB3,受体酪氨酸蛋白质激酶erbB-3,SEQID NO:17)编码受体酪氨酸激酶的表皮生长因子受体(EGFR)家族的一名成员,该家族还包括HER1(也称作EGFR),HER2,和HER4(Kraus,M.H.等,PNAS 86(1989)9193-9197;Plowman,G.D.等,PNAS 87(1990)4905-4909;Kraus,M.H.等,PNAS 90(1993)2900-2904)。与原型表皮生长因子受体一样,跨膜受体HER3由胞外配体结合域(ECD),ECD内的二聚化域,跨膜域,胞内蛋白质酪氨酸激酶域(TKD)和C端磷酸化域组成。此跨膜蛋白具有胞外域内的调蛋白(HRG)结合域而非活性激酶域。因此,它能结合此配体,但是不能经由蛋白质磷酸化将信号传送入细胞中。然而,它确实与确实具有激酶活性的其它HER家族成员形成异二聚体。异二聚化导致受体介导的信号传导途径的激活及其胞内域的转磷酸化。HER家族成员间的二聚体形成扩大HER3的信号传导潜力,并且是一种不仅用于信号多样化,而且用于信号放大的手段。例如,HER2/HER3异二聚体在HER家族成员间经由PI3K和AKT途径诱导最重要的促有丝分裂信号之一(Sliwkowski,M.X.等,J.Biol.Chem.269(1994)14661-14665;Alimandi,M.等,Oncogene.10(1995)1813-1821;Hellyer,N.J.,J.Biol.Chem.276(2001)42153-4261;Singer,E.,J.Biol.Chem.276(2001)44266-44274;Schaefer,K.L.,Neoplasia 8(2006)613-622)。
已经在众多癌症(包括前列腺,膀胱,和乳腺肿瘤)中报告了此基因的扩增和/或其蛋白质的过表达。已经表征了编码不同同等型的可变转录剪接变体。
一种同等型缺乏膜间区,并且分泌到细胞外。此形式作用为调控膜结合形式的活性。还已经报告了别的剪接变体,但是它们尚未彻底表征。
尽管事实是知道人HER3已经超过二十年,但是在组织样品中检测蛋白质HER3甚至在今天仍然是极度困难的。然而,在组织样品中检测HER3对于将给定样品的结构和形态及HER3的定位,组织分布和/或浓度与生物学功能(特别是涉及众多癌症的病理生理背景)关联起来是至关重要的。
虽然能从多家公司作为科研试剂获得数种抗HER3抗体,但是使用那些试剂看来不可能获得令人满意的对组织样品的染色,尤其是已经福尔马林固定和石蜡包埋的组织样品。特别地,需要在用于组织样品的自动化染色系统(诸如Ventana Benchmark XT)中使用时显示针对HER3的高结合特异性和灵敏度的抗体。
本发明的任务是鉴定特异性结合人HER3蛋白质且至少能部分克服本领域已知问题的抗体。
发明概述
本发明涉及一种分离的结合人HER3的抗体或其抗原结合部分,其中该抗体包含重链可变域和轻链可变域,所述重链可变域包含包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR1H区,包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2H区,和包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR3H区,且所述轻链可变域包含包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的CDR1L区,包含SEQID NO:6或SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR2L区,和包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR3L区。
本发明进一步包含一种分离的结合人HER3的抗体或其抗原结合部分,其具有重链可变域和轻链可变域,所述重链可变域包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10的氨基酸序列,且所述轻链可变域包含SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
本发明还包含一种分离的结合人HER3的抗体或其抗原结合部分,其具有重链可变域和轻链可变域,所述重链可变域包含包含自SEQ ID NO:1通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR1H区,包含自SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR2H区,和包含自SEQ ID NO:4通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR3H区,且所述轻链可变域包含包含自SEQ ID NO:5通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR1L区,包含自SEQ ID NO:6或SEQID NO:7通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR2L区,和包含自SEQ IDNO:8通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR3L区。在本发明的一个实施方案中,CDR1L区包含自SEQ ID NO:5通过第5位处的保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列。在一个进一步的实施方案中,SEQ ID NO:5第5位处的保守氨基酸替代为苏氨酸/丝氨酸替代。在本发明的另一个实施方案中,CDR3L区包含自SEQ ID NO:8通过第6位或第9位处的保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列,或者CDR3L区包含自SEQ ID NO:8通过第6位和第9位处的保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列。在一个进一步的实施方案中,SEQ ID NO:8第6位处的保守氨基酸替代为缬氨酸/丙氨酸替代或SEQ ID NO:8第9位处的保守氨基酸替代为丙氨酸/苏氨酸替代。在另一个实施方案中,CDR3L区包含自SEQ ID NO:8通过第6位和第9位处的保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列,其中SEQ ID NO:8第6位处的保守氨基酸替代为缬氨酸/丙氨酸替代且SEQ ID NO:8第9位处的保守氨基酸替代为丙氨酸/苏氨酸替代。
本发明的另一个方面提供一种分离的结合人HER3的抗体或其抗原结合部分,其中该抗体包含重链可变域和轻链可变域,所述重链可变域包含与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10具有至少95%序列同一性的氨基酸序列,且所述轻链可变域包含与SEQ ID NO:11或SEQID NO:12具有至少95%序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中,本发明的抗体是单克隆抗体。
在另一个实施方案中,本发明的抗体是IgG亚类的抗体。
令人惊讶地发现,本发明的任何上述抗体具有相当有益的特性,而且能克服至少一些本领域已知问题。它们能以极大益处用于免疫组织学染色规程以检测人HER3蛋白质。尤其令人惊讶且值得一提的是,依照本发明的抗体产生卓越的染色结果,甚至是对福尔马林固定石蜡包埋组织(FFPET)样品。因此,依照本发明的抗体对于在自动化染色规程中加工的FFPET样品中检测人HER3是特别有用的。
因而,本发明还涉及一种用于实施免疫组织化学的方法,该方法包括下述步骤:将组织样品与依照本发明的抗体一起温育,由此发生所述抗体对所述组织中的人HER3的结合,并对所述组织样品针对结合至该组织样品的抗HER3抗体进行染色。
在一个实施方案中,本发明涉及依照本发明的抗体在人HER3的免疫组织化学检测中的用途,尤其是在甲醛固定石蜡包埋组织(FFPET)样品中。
本发明的另一个实施方案涉及对于方便实施人HER3的免疫组织化学检测有用的试剂盒。在一个实施方案中,提供用于在甲醛固定石蜡包埋组织(FFPET)样品中检测人HER3的试剂盒,所述试剂盒包含依照本发明的抗体或其抗原结合部分,和用于检测所述抗体或其抗原结合部分的试剂。
本发明的另一个方面提供一种编码本文中提供的抗HER3抗体的重和轻链的核酸。
在一个实施方案中,所述核酸编码抗HER3抗体的重和轻链,其中重链可变域包含包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR1H区,包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2H区,和包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR3H区,且轻链可变域包含包含SEQ IDNO:5的氨基酸序列的CDR1L区,包含SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR2L区,和包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR3L区。
在另一个实施方案中,所述核酸编码抗HER3抗体的重和轻链,其中重链可变域包含包含自SEQ ID NO:1通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR1H区,包含自SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR2H区,和包含自SEQ ID NO:4通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR3H区,且轻链可变域包含包含自SEQ ID NO:5通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR1L区,包含自SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR2L区,和包含自SEQ ID NO:8通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR3L区。
在又一个实施方案中,所述核酸编码抗HER3抗体的重和轻链,其中重链可变域包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10的氨基酸序列,且轻链可变域包含SEQ ID NO:11或SEQ IDNO:12的氨基酸序列。
在另一个实施方案中,所述核酸编码抗HER3抗体的重和轻链,其中重链可变域包含与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10具有至少95%序列同一性的氨基酸序列,且轻链可变域包含与SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12具有至少95%序列同一性的氨基酸序列。
本发明进一步包括表达载体,其包含依照本发明的核酸,用于在原核或真核宿主细胞中表达依照本发明的抗体。
本发明进一步包括包含依照本发明的载体的原核或真核宿主细胞。
本发明进一步包括一种用于生成依照本发明的重组抗体的方法,其特征在于在原核或真核宿主细胞中表达依照本发明的核酸,并自所述细胞或细胞培养物上清液回收所述抗体。
发明详述
本发明涉及一种分离的结合人HER3的抗体或其抗原结合部分,其特征在于:重链可变域包含包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR1H区,包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2H区,和包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR3H区,且轻链可变域包含包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的CDR1L区,包含SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR2L区,和包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR3L区。
本发明进一步包含一种分离的结合人HER3的抗体或其抗原结合部分,其特征在于:重链可变域包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10的氨基酸序列,且所述轻链可变域包含SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
本发明还包含一种分离的结合人HER3的抗体或其抗原结合部分,其特征在于:重链可变域包含包含自SEQ ID NO:1通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR1H区,包含自SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR2H区,和包含自SEQ ID NO:4通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR3H区,且轻链可变域包含包含自SEQ ID NO:5通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR1L区,包含自SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR2L区,和包含自SEQ ID NO:8通过一处或多处保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列的CDR3L区。
本发明的另一个方面提供一种分离的结合人HER3的抗体,其特征在于:重链可变域包含与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10具有至少95%序列同一性的氨基酸序列,且轻链可变域包含与SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12具有至少95%序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中,依照本发明的抗体是单克隆的。
在另一个实施方案中,本发明的抗体是IgG亚类的抗体。
除非另有解释,本文中使用的所有技术和科学术语具有与本文中公开的发明所属领域的普通技术人员的普遍理解相同的含义。
冠词“一个”和“一种”在本文中用于指一个/种或超过一个/种(即至少一个/种)该冠词的语法对象。举例而言,“一种抗体”表示一种抗体或超过一种抗体。
如本文中使用的,术语“抗体”旨在指由通过二硫键互相连接的四条多肽链(两条重(H)链和两条轻(L)链)构成的免疫球蛋白分子。每条重链由重链可变区(本文中缩写为HCVR或VH)和重链恒定区构成。重链恒定区由三个域(CH1,CH2和CH3)构成。每条轻链由轻链可变区(本文中缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区构成。轻链恒定区由一个域(CL)构成。VH和VL区可以进一步细分成高变的区域(称作互补决定区(CDR)),间插更加保守的区域(称作框架区(FR))。每个VH和VL由三个CDR和四个FR构成,自氨基端至羧基端以如下次序排列:FR1,CDR1,FR2,CDR2,FR3,CDR3,FR4。
在本文中使用时,术语“抗体的抗原结合部分”指抗体中负责抗原结合的氨基酸残基。抗体的抗原结合部分包含来自CDR的氨基酸残基。术语本发明的抗体的“抗原结合部分”含有6个CDR,它们以不同程度促成结合位点对抗原的亲和力。存在着三个重链可变域CDR(CDR1H,CDR2H和CDR3H)和三个轻链可变域CDR(CDR1L,CDR2L和CDR3L)。术语“CDR1H”意指依照Kabat计算的重链可变区的CDR1区。CDR2H,CDR3H,CDR1L,CDR2L和CDR3L表示来自重(H)或轻(L)链的相应区。通过与氨基酸序列的汇编数据库比较来确定CDR和FR的范围,在所述数据库中已经依照Kabat等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)依照序列间的可变性定义那些区域。
“分离的”抗体指已经鉴定及自其天然环境的一种成分分开和/或回收的抗体。其天然环境的污染性成分指会干扰该抗体的研究,诊断或治疗用途的物质,而且可以包括酶,激素,和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。如本文中使用的,“分离的抗体”还旨在指基本上没有具有不同抗原特异性的其它抗体的抗体(例如,分离的特异性结合人HER3的抗体基本上没有特异性结合除人HER3以外的抗原的抗体)。然而,分离的特异性结合人HER3的抗体可以具有与其它抗原(诸如来自其它物种的HER3分子)的交叉反应性。在一些实施方案中,将抗体纯化至抗体重量超过70%(根据例如Lowry法的测定),而且在一些实施方案中,重量超过80%,90,95%,96%,97%,98%或99%。在一个优选实施方案中,将依照本发明的分离的抗体纯化至超过90%纯度(根据还原性条件下SDS-PAGE及蛋白质检测使用考马斯蓝染色的测定)。
生成抗体(诸如单克隆或多克隆抗体)的方法是本领域完全建立的(例如参见Harlow和Lane,Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,NewYork,1988)。例如,可以将缀合至载体分子的人HER3的肽片段(或编码此类表位或缀合RDP的核酸)注射入非人哺乳动物(诸如小鼠或大鼠)中,继以强化注射,以引起抗体应答。可以对自经免疫动物分离的血清分离其中含有的多克隆抗体,或者可以将来自经免疫动物的脾用于生成杂交瘤和单克隆抗体。在一些例子中,在使用之前纯化抗体。
例如,结合人HER3的多克隆抗体可以使用亲和柱(含有此序列作为免疫吸附材料)通过免疫吸附来获得。在分离的抗体是单克隆抗体的情况中,此类抗体在一些实施方案中纯化至(1)抗体超过90%(根据例如Lowry法的测定),而且在一些实施方案中,重量超过95%,96%,97%,98%或99%,(2)足以通过使用例如转杯式测序仪获得至少15个残基的N端或内部氨基酸序列的程度,或(3)达到同质(根据还原性或非还原性条件下的SDS-PAGE及使用例如考马斯蓝或银染剂)。
在一个例子中,可以依照和Milstein(Nature,256:495,1975)的经典方法或其衍生方法自鼠杂交瘤制备结合人HER3的单克隆抗体。简言之,在几周的时段里给小鼠(诸如Balb/c)反复接种几微克人HER3肽片段或其载体缀合物。然后处死小鼠,并分离脾的抗体生成细胞。借助聚乙二醇将脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,并通过体系在包含氨基蝶呤的选择性培养基(HAT培养基)上的生长来破坏过量的未融合细胞。稀释成功融合的细胞,并将稀释液的等分试样置于微量滴定板的孔中,在那里继续培养物的生长。通过免疫测定法规程(诸如ELISA,最初由Engvall(Enzymol.,70:419,1980)记载,及其衍生方法)在孔的上清液中检测抗体来鉴定抗体生成克隆。可以扩充选定的阳性克隆,并收获它们的单克隆抗体产物供使用。
抗体是否结合人HER3容易通过适宜的免疫测定法来评估。在一种优选方式中,用生物素在N或C端标记人HER3的肽。一种优选标记试剂使用Fmoc-Glu(生物素基-PEG)-OH,它在生物素残基和肽链之间掺入柔性亲水性间隔物。将此生物素化肽结合至用生物素结合试剂包被的固相,例如经由链霉亲合素。如果待分析的抗体含有针对该人HER3肽内的表位的结合位点,那么此类抗体结合该肽且能通过任何适宜手段来检测。
依照本发明的结合人HER3的抗体优选至少具有107l/mol的对此分子的结合亲和力。还优选它具有108l/mol或更好或109l/mol或更好的亲和力。
如本文中使用的,术语“结合人HER3”,“特异性结合人HER3”,或“抗HER3抗体”可互换,而且指特异性结合人HER3抗原的抗体。正如技术人员会领会的,术语“特异性”或“特异性结合”用于指示样品中存在的其它生物分子对(特异性)结合人HER3的抗体没有显著结合。然而,特异性结合人HER3的抗体可以具有与来自其它物种的HER3分子的交叉反应性。优选地,对含有人HER3的样品中除人HER3以外的生物分子的结合水平分别导致对人HER3的亲和力的只有10%或更少,更优选只有5%或更少的结合亲和力。例如,特异性结合人HER3的抗体不会结合人HER2或其它密切同系物,即所具有的对它的结合亲和力比对人HER3的结合亲和力要差至少10倍或优选至少20倍。
人HER3(ErbB-3,ERBB3,c-erbB-3,c-erbB3,受体酪氨酸蛋白质激酶erbB-3,SEQID NO:17)编码受体酪氨酸激酶的表皮生长因子受体(EGFR)家族的一名成员,该家族还包括HER1(也称作EGFR),HER2,和HER4(Kraus,M.H.等,PNAS 86(1989)9193-9197;Plowman,G.D.等,PNAS 87(1990)4905-4909;Kraus,M.H.等,PNAS 90(1993)2900-2904)。人HER3的氨基酸序列以UniProtKB/Swiss-Prot数据库中参照序列号P21860下当前注释的氨基酸序列出现。与原型表皮生长因子受体一样,跨膜受体HER3由胞外配体结合域(ECD),ECD内的二聚化域,跨膜域,胞内蛋白质酪氨酸激酶域(TKD)和C端磷酸化域组成。此膜结合蛋白具有胞外域内的HER3调蛋白(HRG)结合域而非活性激酶域。因此,它能结合此配体,但是不能经由蛋白质磷酸化将信号传送入细胞中。然而,它确实与确实具有激酶活性的其它HER家族成员形成异二聚体。异二聚化导致受体介导的信号传导途径的激活及其胞内域的转磷酸化。HER家族成员间的二聚体形成扩大HER3的信号传导潜力,并且是一种不仅用于信号多样化,而且用于信号放大的手段。例如,HER2/HER3异二聚体在HER家族成员间经由PI3K和AKT途径诱导最重要的促有丝分裂信号之一(Sliwkowski,M.X.等,J.Biol.Chem.269(1994)14661-14665;Alimandi,M.等,Oncogene.10(1995)1813-1821;Hellyer,N.J.,J.Biol.Chem.276(2001)42153-4261;Singer,E.,J.Biol.Chem.276(2001)44266-44274;Schaefer,K.L.,Neoplasia 8(2006)613-622)。
已经在众多癌症(包括前列腺,膀胱,和乳腺肿瘤)中报告了此基因的扩增和/或其蛋白质的过表达。已经表征了编码不同同等型的可变转录剪接变体。
一种同等型缺乏膜间区,并且分泌到细胞外。此形式作用为调控膜结合形式的活性。还已经报告了别的剪接变体,但是它们尚未彻底表征。
依照本发明的抗体结合HER3的胞内区且因此只检测人HER3的膜结合同等型而非分泌同等型。
如上所述,例如,可以使用人HER3的肽通过免疫吸附自经免疫动物的血清分离依照本发明的(即结合人HER3的)抗体。
单克隆抗体可以以恒定质量和几乎不受限制的数量生成。在一个优选实施方案中,依照本发明的抗体是单克隆抗体。
所生成的最好的单克隆抗体中的两种具有相似的CDR且令人惊讶地能用于组织样品中人HER3的可靠检测,尤其是在用于FFPET样品的自动化染色系统中。
一方面,依照本发明的抗HER3抗体包含与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的重链可变域(VH)序列。在某些实施方案中,具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,或99%同一性的VH序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗HER3抗体保留结合HER3的能力。在某些实施方案中,已经在SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10替代,插入和/或删除总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在CDR以外的区域(即,在FR中)。任选地,抗HER3抗体包含SEQID NO:9或SEQ ID NO:10中的VH序列,包括该序列的翻译后修饰。在一个特定实施方案中,VH包含1,2或3个选自下述的CDR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的CDR1H,(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的CDR2H,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的CDR3H。
另一方面,依照本发明的抗HER3抗体包含与SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的轻链可变域(VL)。在某些实施方案中,具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,或99%同一性的VL序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗HER3抗体保留结合HER3的能力。在某些实施方案中,已经在SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12中替代,插入和/或删除总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在CDR以外的区域(即,在FR中)。任选地,抗HER3抗体包含SEQID NO:11或SEQ ID NO:12中的VL序列,包括该序列的翻译后修饰。在一个特定实施方案中,VL包含1,2或3个选自下述的CDR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的CDR1L,(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的CDR2L,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:8的CDR3L。
另一方面,提供了一种抗HER3抗体,其中所述抗体包含如上文提供的任何实施方案中的VH和如上文提供的任何实施方案中的VL。在一个实施方案中,抗体包含分别在SEQID NO:9或SEQ ID NO:10及SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。
如本申请内所使用的,术语“氨基酸”意指天然发生羧基α-氨基酸的组,包括丙氨酸(三字母代码:ala,单字母代码:A),精氨酸(arg,R),天冬酰胺(asn,N),天冬氨酸(asp,D),半胱氨酸(cys,C),谷氨酰胺(gln,Q),谷氨酸(glu,E),甘氨酸(gly,G),组氨酸(his,H),异亮氨酸(ile,I),亮氨酸(leu,L),赖氨酸(lys,K),甲硫氨酸(met,M),苯丙氨酸(phe,F),脯氨酸(pro,P),丝氨酸(ser,S),苏氨酸(thr,T),色氨酸(trp,W),酪氨酸(tyr,Y),和缬氨酸(val,V)。
另外,依照本发明的抗体包括具有“保守序列修饰”(变体抗体)(即不影响或改变依照本发明的抗体的上文所述特征的核苷酸和氨基酸序列修饰)的此类抗体。可以通过本领域中已知的标准技术,诸如定点诱变和PCR介导的诱变来引入修饰,或者可以通过从头合成基因合成来引入突变。如本文中使用的,术语“保守氨基酸替代”,“保守替代”,或“保守序列修饰”可互换,而且指氨基酸替代,其中一个氨基酸残基用具有相似侧链的另一个氨基酸残基替换。本领域中已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如,赖氨酸,精氨酸,组氨酸),酸性侧链(例如,天冬氨酸,谷氨酸),不带电荷的极性侧链(例如,甘氨酸,天冬酰胺,谷氨酰胺,丝氨酸,苏氨酸,酪氨酸,半胱氨酸,色氨酸),非极性侧链(例如,丙氨酸,缬氨酸,亮氨酸,异亮氨酸,脯氨酸,苯丙氨酸,甲硫氨酸),β-分支的侧链(例如,苏氨酸,缬氨酸,异亮氨酸)和芳香族侧链(例如,酪氨酸,苯丙氨酸,色氨酸,组氨酸)的氨基酸。如此,优选地,可以将人抗HER3抗体中预测的非必需氨基酸残基用来自相同侧链家族的另一种氨基酸残基替换。表1显示了例示性保守氨基酸替代。
表1:例示性保守氨基酸替代
因此,“变体”抗HER3抗体在本文中指在氨基酸序列中与“亲本”抗HER3抗体氨基酸序列在亲本抗体的一个或多个可变区中相差多至10,优选约2至约5处添加,删除和/或替代的分子。氨基酸替代可以基于分子建模通过诱变来实施,如Riechmann,L.等,Nature 332(1988)323-327和Queen,C.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86(1989)10029-10033描述的。
本发明的一个实施方案涉及分离的结合HER3的抗体或其抗原结合部分,其中CDR1L区包含自SEQ ID NO:5通过第5位处的保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列。在一个进一步的实施方案中,SEQ ID NO:5第5位处的保守氨基酸替代为苏氨酸/丝氨酸替代。如本文中使用的,术语“苏氨酸/丝氨酸替代”表示抗HER3抗体的一种变体中的氨基酸苏氨酸用丝氨酸替换,或反之,抗HER3抗体的一种变体中的丝氨酸用苏氨酸替换。同样适用于依照本发明的“变体”抗HER3抗体中的其它特定氨基酸替代。例如,在分离的结合HER3的抗体或其抗原结合部分的另一个实施方案中,CDR3L区包含自SEQ ID NO:8通过第6位或第9位处的保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列,或者CDR3L包含自SEQ ID NO:8通过第6位和第9位处的保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列。在一个进一步的实施方案中,SEQ ID NO:8第6位处的保守氨基酸替代为缬氨酸/丙氨酸替代或SEQ ID NO:8第9位处的保守氨基酸替代为丙氨酸/苏氨酸替代。在还有另一个实施方案中,CDR3L区包含自SEQ ID NO:8通过第6位和第9位处的保守氨基酸替代而修饰的氨基酸序列,其中SEQ ID NO:8第6位处的保守氨基酸替代为缬氨酸/丙氨酸替代且SEQ ID NO:8第9位处的保守氨基酸替代为丙氨酸/苏氨酸替代。
依照本发明的抗体已经证明在人HER3的免疫组织化学检测中极其有用。在一个实施方案中,本发明涉及用于实施免疫组织化学(IHC)的方法,该方法包括下述步骤:a)将组织样品与依照本发明的抗体一起温育,由此发生所述抗体对所述组织中的人HER3的结合,并b)对所述组织样品针对步骤a)中结合的抗HER3抗体进行染色。
术语“染剂”或术语“染色试剂”指生物学或化学化合物,及含有此类化合物的组合物,它们在应用于生物学样品中的靶定分子时,使得该分子可检测(例如在显微镜检查下)。染剂包括但不限于可检测核酸探针,抗体,和组合或自身产生可检测最后产物的其它试剂。术语“染剂”与术语“染料”可互换使用。术语“染色”表示使生物学样品与染色试剂,染剂,或染料接触。
对于细胞或组织样品中的抗原的成功免疫染色,不得不达到至少三项标准:a)抗原在它的原始部位处的保留,b)抗原的可及性和c)感兴趣抗原/表位的正确构象/保持。
非常令人惊讶的事实是依照本发明的抗体对已经用福尔马林固定且在石蜡中包埋的组织样品也运作卓越。
在一个实施方案中,本发明涉及一种使用依照本发明的抗体检测人HER3的免疫组织化学方法,其中对其实施免疫染色的组织样品是已经甲醛固定且石蜡包埋(FFPE)的组织样品。
数种固定剂可得且常规用于临床病理学实验室,像戊二醛,甲醛和丙酮,或其它有机溶剂。然而,绝大多数固定规程基于使用交联剂,像甲醛。固定溶液通常是含有磷酸钠的甲醛水溶液,其设计成提供pH 7.2-7.6的缓冲(添加少量强酸或碱后只有最小限度的pH变化)和大致等张的溶液(它的渗透压与哺乳动物胞外液的渗透压相同,常常基于生理盐水)。术语甲醛和福尔马林可互换使用。
如前所述,甲醛中的固定是临床病理学中最广泛使用的。主要原因最可能是通过用甲醛固定,感兴趣抗原被束缚于它在活生物体中占据的部位。借助甲醛固定时引入的亚甲基桥,细胞或组织样品的形态也得到较好保持。然而,这些积极效果付出了代价,即样品的通透性和感兴趣抗原/表位的可及性和/或构象中固定引起的变化,核酸中的损害和酶活性的灭活。
对于长期贮藏,经过固定的细胞或组织样品通常不得不脱水且在适宜包埋介质中包埋。石蜡包埋通常比塑料包埋或者用振动切片机或在低温恒温器中切割未包埋的标本优选。
本公开文本提供用于在已经在固体表面(例如显微镜载片)上封固并处理(例如福尔马林固定和石蜡包埋)的生物学样品(例如分离的细胞或组织)中检测人HER3的方法等等。对FFPE细胞或组织样品实施免疫组织化学的好处之一是此类标本中的HER3实质性维持其相对于其它成分的位置,例如它在细胞或组织样品内的定位。
如本文中使用的,术语“检测”表示测定药剂(例如核酸分子或蛋白质)或相互作用(例如抗体和抗原之间,蛋白质和核酸之间,或两个核酸分子之间的结合)是否存在或缺失,例如通过对样品进行测量。在一些例子中,这可以进一步包括量化。在特定例子中,检测来自标记物的发射信号。检测可以是大量的,从而能同时观察宏观数目的分子。检测还可以包括使用显微术和诸如全内反射等技术鉴定来自单分子的信号以降低背景噪声。
例如,使用对特定蛋白质(例如人HER3)特异性的抗体允许检测样品(诸如FFPE细胞或组织样品)中的蛋白质或蛋白质-蛋白质相互作用。
依照本发明的抗体可以通过直接标记抗体自身来检测,例如用放射性标记物,发荧光标记物,半抗原标记物(诸如生物素),或酶(诸如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)。或者,未标记的抗HER3一抗与经标记的二抗(包括对一抗特异性的抗血清,多克隆抗血清或单克隆抗体)联合使用。免疫组织化学(IHC)方案和试剂盒是本领域公知的且是商品化的。
任选地,可以用可检测模块直接标记特异性结合剂。有用的检测剂包括发荧光化合物(包括荧光素,异硫氰酸荧光素,罗丹明,5-二甲基胺-1-萘磺酰氯,藻红蛋白,镧系元素磷,或花青家族的染料(诸如Cy-3或Cy-5)等等);生物发光化合物(诸如萤光素酶,绿色荧光蛋白(GFP),或黄色荧光蛋白);能生成可检测反应产物的酶(诸如辣根过氧化物酶,β-半乳糖苷酶,萤光素酶,碱性磷酸酶,或葡萄糖氧化酶等等),或放射性标记物(诸如3H,14C,15N,35S,90Y,99Tc,111In,125I,或131I)。
在所公开的方法中有用的生物学样品进行分离,体外分析,而且包括能在固体表面上固定和封固的任何细胞制备物或组织制备物。例示性样品包括但不限于血涂片,细胞离心制备物,细胞学涂片,核心活检,细针穿刺,和/或组织切片(例如低温恒温器组织切片和/或石蜡包埋组织切片)。例示性生物学样品可以自正常细胞或组织,或者自赘生性细胞或组织分离。赘生物指如下生物学疾患,其中一个或多个细胞经历特征性间变(anaplasia),即丧失分化,生长速率升高,周围组织侵入,而且细胞可以能够转移。例示性赘生性细胞或组织可以自实体瘤分离,包括乳腺癌(例如小叶和导管癌),肉瘤,肺癌(例如非小细胞癌,大细胞癌,鳞癌,和腺癌),肺的间皮瘤,结直肠腺癌,胃癌,前列腺腺癌,卵巢癌(诸如浆液性囊腺癌和粘液性囊腺癌),卵巢生殖细胞肿瘤,睾丸癌和生殖细胞肿瘤,胰腺腺癌,胆腺癌,肝细胞癌,膀胱癌(包括例如移行细胞癌,腺癌,和鳞癌),肾细胞腺癌,子宫内膜癌(包括例如腺癌和混合型Mullerian肿瘤(癌肉瘤)),宫颈内膜,外宫颈,和阴道癌(诸如它们每一项的腺癌和鳞癌),皮肤肿瘤(例如鳞状细胞癌,基细胞癌,黑素瘤,和皮肤附件肿瘤),食道癌,鼻咽和口咽癌(包括它们的鳞癌和腺癌),唾液腺癌,脑和中枢神经系统肿瘤(包括例如神经胶质,神经元,和脑膜起源的肿瘤),周围神经肿瘤,软组织肉瘤和骨和软骨肉瘤。
在所公开的方法中有用的固体支持物只需要承载生物学样品,而且任选但有益的是允许方便地检测样品中的成分(例如蛋白质和/或核酸序列)。例示性支持物包括显微镜载片(例如玻璃显微镜载片或塑料显微镜载片),盖片(例如玻璃盖片或塑料盖片),组织培养皿,多孔板,膜(例如硝酸纤维素或聚偏二氟乙烯(PVDF))或BIACORETM芯片。
甲醛固定所致交联通常有可能掩盖或破坏表位,导致假阴性免疫染色。已经发现人HER3上受到依照本发明的抗体识别的表位能容易地修复,例如通过在BenchMark分析仪(Ventana Medical Systems,Inc.,Tucson,USA)上自动化实施的标准规程。在一个实施方案中,本发明涉及使用本发明中公开的抗体检测甲醛固定石蜡包埋组织(FFPET)样品中的HER3。
还涵盖对于方便如本文中公开的那样实施人HER3的免疫组织化学检测有用的试剂盒。在一个实施方案中,提供用于在甲醛固定石蜡包埋组织样品中检测人HER3的试剂盒,所述试剂盒包含依照本发明的抗体或其抗原结合部分和用于检测所述抗体或其抗原结合部分的试剂。
在特定实例中,在分开的容器或管形瓶中包装依照本发明的抗体或其抗原结合部分和用于检测所述抗体或其抗原结合部分的试剂。
在一些试剂盒实施方案中,可以直接标记抗体或其抗原结合部分,例如用荧光团,生色团,或能够生成可检测产物的酶(诸如碱性磷酸酶,辣根过氧化物酶和本领域普遍知道的其它酶)。
其它试剂盒实施方案会包括第二检测手段;诸如二抗(例如山羊抗家兔抗体,家兔抗小鼠抗体,抗半抗原抗体)或非抗体半抗原结合分子(例如亲合素或链霉亲合素)。在一些此类情况中,第二检测手段会用可检测模块直接标记。在其它情况中,二抗(或更高次序抗体)会缀合至半抗原(诸如生物素,DNP,和/或FITC),该半抗原是通过可检测标记的关联半抗原结合分子(例如链霉亲合素(SA)辣根过氧化物酶,SA碱性磷酸酶,和/或SANanocrystalsTM)可检测的。一些试剂盒实施方案可以在合适容器中包括比色试剂(例如DAB和/或AEC),它要与用酶标记的第一或第二(或更多次序)检测手段(例如抗体)合作使用进行此类比色试剂的显现。
在一些实施方案中,试剂盒包括阳性或阴性对照样品,诸如已知表达或不表达人HER3的细胞系或组织。在特定例子中,对照样品为FFPET样品。例示性样品包括但不限于正常(例如非癌性)细胞或组织。
在一些实施方案中,试剂盒包括记载例如使用特异性结合人HER3的抗体的手段的指导性材料。指导性材料可以是书面的,电子形式的(例如计算机磁盘或高密度磁盘),或者可以是视觉的(例如视频文件)。试剂盒还可以包括另外的成分来方便试剂盒设计的特定应用。如此,例如,试剂盒可以包括缓冲液和常规用于实施本文中公开的免疫组织化学检测的其它试剂。此类试剂盒和适宜内容物是本领域技术人员公知的。
某些试剂盒实施方案可以包括载具手段,诸如盒,袋,包,塑料箱(诸如模制塑料或其它透明包装),包裹物(诸如密封的或可密封的塑料,纸,或金属包裹物),或其它容器。在一些例子中,试剂盒各个构件会封装在单个包装单元(诸如盒或其它容器)中,该包装单元可以具有多个隔室,其中可以放置试剂盒的一种或多种构件。在其它例子中,试剂盒包括能保留例如一份或多份要测试的生物学样品的一个或多个容器,例如管形瓶,管,等等。
其它试剂盒实施方案包括例如注射器,棉签,或乳胶手套,它们可用于操作,收集和/或加工生物学样品。试剂盒还可以任选含有可用于将生物学样品自一处移动至另一处的器械,包括例如滴管,注射器,等等。仍有其它试剂盒实施方案可包括用于丢弃使用过的或不再需要的物品(诸如受试者样品,等)的处置手段。此类处置手段可以包括但不限于能够容纳来自丢弃材料的渗漏的容器,诸如塑料,金属或其它不透袋,盒或容器。
如本文中使用的,术语“核酸”或“核酸分子”旨在包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链,但是优选是双链DNA。在将核酸放置在与另一核酸的功能性关系中时,它是“可操作连接的”。例如,若前序列或分泌前导的DNA以参与多肽分泌的前蛋白表达,则它与多肽的DNA可操作连接;若启动子或增强子影响序列的转录,则它与编码序列可操作连接;或者若核糖体结合位点定位为使得便于翻译,则它与编码序列可操作连接。一般而言,“可操作连接的”表示所连接的DNA序列是共线的,并且在分泌前导的情况中,是连续的且在读码框中。然而,增强子不必是连续的。通过在方便的限制性位点处的连接来实现连接。若不存在此类位点,则依照常规实践使用合成的寡核苷酸衔接头或接头。
本发明的一个实施方案是编码依照本发明的抗体的重和轻链的核酸。
如本文中使用的,表述“细胞”,“细胞系”,和“细胞培养物”可互换使用,而且所有此类名称包括后代。如此,词语“转化体”和“经转化的细胞”包括原代主题细胞和自其衍生的培养物,不管传递的次数。还应当理解,由于有意或无意的突变,所有后代在DNA内容上可能不是精确相同的。包括具有如在初始转化细胞中筛选的相同功能或生物学活性的变体后代。
如本文中使用的,术语“载体”旨在指能够运输与其连接的另一核酸的核酸分子。一类载体是“质粒”,指其中可连接另外的DNA区段的环状双链DNA环。另一类载体是病毒载体,其中可将另外的DNA区段连接入病毒基因组中。某些载体能够在其所导入的宿主细胞中自主复制(例如具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)。其它载体(例如非附加型哺乳动物载体)能在导入宿主细胞中后整合入宿主细胞的基因组中,由此随着宿主基因组一起复制。此外,某些载体能够指导与其可操作连接的基因表达。此类载体在本文中称作“重组表达载体”(或简称作“重组载体”)。通常,在重组DNA技术中有用的表达载体常常是质粒形式。在本说明书中,“质粒”和“载体”可互换使用,因为质粒是载体的最常用形式。然而,本发明旨在包括提供等同功能的此类其它形式的表达载体,诸如病毒载体(例如复制缺陷型逆转录病毒,腺病毒和腺伴随病毒)。
如本文中使用的,术语“重组宿主细胞”(或仅是“宿主细胞”)旨在指其中已经导入重组表达载体的细胞。应当理解,此类术语旨在不仅指特定的主题细胞,还指此类细胞的后代。因为在后代中可能由于突变或环境影响而发生某些改变,所以此类后代可能事实上与亲本细胞不同,但是仍然包括在如本文中使用的术语“宿主细胞”的范围内。
优选地,通过重组手段来生成依照本发明的抗体。此类方法是现有技术中普遍已知的,而且包括原核和真核细胞中的蛋白质表达,随后分离抗体多肽,并且通常纯化至可接受纯度。对于蛋白质表达,通过标准方法将编码轻和重链或其片段的核酸插入表达载体中。在适宜原核或真核宿主细胞(诸如CHO细胞,NSO细胞,SP2/0细胞,HEK293细胞,COS细胞,酵母,或大肠杆菌细胞)中实施表达,并且自细胞(自上清液或在细胞裂解后)回收抗体。抗体的重组生成是现有技术中公知的,而且记载于例如综述文章Makrides,S.C.,ProteinExpr.Purif.17(1999)183-202;Geisse,S.等,Protein Expr.Purif.8(1996)271-282;Kaufman,R.J.,Mol.Biotechnol.16(2000)151-161;Werner,R.G.,Drug Res.48(1998)870-880。抗体可以存在于整个细胞中,在细胞裂解物中,或者为部分纯化的或基本上纯的形式。通过标准技术,包括柱层析和本领域中公知的其它技术(参见Ausubel,F.等编,CurrentProtocols in Molecular Biology,Greene Publishing and Wiley Interscience,NewYork(1987))来实施纯化以消除其它细胞成分或其它污染物,例如其它细胞核酸或蛋白质。NSO细胞中的表达由例如Barnes,L.M.等,Cytotechnology 32(2000)109-123;Barnes,L.M.等,Biotech.Bioeng.73(2001)261-270描述。瞬时表达由例如Durocher,Y.等,Nucl.Acids.Res.30(2002)E9描述。可变域的克隆由Orlandi,R.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86(1989)3833-3837;Carter,P.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA89(1992)4285-4289;Norderhaug,L.等,J.Immunol.Methods 204(1997)77-87描述。一种优选的瞬时表达系统(HEK 293)由Schlaeger,E.-J.和Christensen,K.,于Cytotechnology30(1999)71-83,及由Schlaeger,E.-J.,于J.Immunol.Methods 194(1996)191-199描述。通过常规免疫球蛋白纯化规程,诸如例如蛋白A-Sepharose,羟磷灰石层析,凝胶电泳,透析,或亲和层析自培养液适当地分离单克隆抗体。容易使用常规规程将编码单克隆抗体的DNA和RNA分离并测序。杂交瘤细胞可以充当此类DNA和RNA的来源。一旦分离,可以将DNA插入表达载体中,然后将所述表达载体转染入不另外生成免疫球蛋白蛋白质的宿主细胞(诸如HEK293细胞,CHO细胞,或骨髓瘤细胞)中,以获得重组单克隆抗体在宿主细胞中的合成。自所述细胞系可获得的抗体是本发明的优选实施方案。优选地,经由糖工程化改造制备无岩藻糖基化的抗体,如上文所描述的。
通过将适宜核苷酸变化引入抗体编码DNA中,或者通过肽合成来制备抗HER3抗体的氨基酸序列变体。然而,仅可以在非常有限的范围中实施此类修饰,例如如上文所描述的。例如,修饰不改变上文所述抗体特征诸如IgG同种型和表位结合,但是可以改善重组生成的产量,蛋白质稳定性,或者便于纯化。也可替代任何不涉及维持抗HER3抗体正确构象的半胱氨酸残基,一般替代为丝氨酸,用以改善分子的氧化稳定性及防止异常交联。相反地,可以对抗体添加半胱氨酸键以改善其稳定性(特别是在抗体是抗体片段,诸如Fv片段的情况中)。抗体的另一类氨基酸变体改变抗体的初始糖基化样式。“改变”表示去除抗体中找到的一个或多个碳水化合物模块和/或添加抗体中不存在的一个或多个糖基化位点。
抗体的糖基化通常是N连接的。N连接的指碳水化合物模块附着于天冬酰胺残基的侧链。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除脯氨酸以外的任何氨基酸)是碳水化合物模块酶促附着于天冬酰胺侧链的识别序列。如此,多肽中存在这些三肽序列之任一创建潜在的糖基化位点。可以通过改变氨基酸序列,使得其含有一个或多个上文所述三肽序列(例如N连接的糖基化位点)来方便地实现对抗体添加糖基化位点。
通过本领域中已知的多种方法来制备编码抗HER3抗体的氨基酸序列变体的核酸分子。这些方法包括但不限于自天然来源分离(在天然发生氨基酸序列变体的情况中)或者通过对较早制备的变体或非变体型式的人源化抗HER3抗体进行寡核苷酸介导的(或定点)诱变,PCR诱变,和盒式诱变来制备。
抗体的另一类共价修饰包括以美国专利4,640,835;4,496,689;4,301,144;4,670,417;4,791,192;4,179,337中所列方式将抗体与多种非蛋白质性质的聚合物(例如聚乙二醇,聚丙二醇,或聚氧化烯)之一连接。
将依照本发明的重和轻链可变域与启动子,翻译起始,恒定区,3’非翻译区,多腺苷酸化,和转录终止的序列组合以形成表达载体构建体。可以将重和轻链表达构建体组合入单一载体中,共转染,连续转染,或分开转染入宿主细胞中,然后将所述宿主细胞融合以形成表达这两条链的单一宿主细胞。
提供以下序列表,实施例和图以帮助理解本发明,其实际范围在所附权利要求书中列出。应当理解,可以在不背离本发明的精神的前提下对所列规程做出修改。
序列表描述
附图说明
图1 数种经转染对照细胞系的比较性Western印迹测定法
通过SDS-PAGE将自过表达HER1,HER2,HER3,HER4或经哺乳动物表达载体pRK5转染(作为阴性对照)的经转染HEK293细胞系制备的细胞裂解物分开,并转移至硝酸纤维素膜。封闭后,将膜与HER3单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.2.42或HER3单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.3.8或来自Dako的单克隆现有技术抗HER3抗体DAK-H3-IC一起于RT或37℃温育。使用HRP缀合的抗小鼠Fab作为二抗。
图2 非小细胞肺癌(NSCLC)样品的比较性Western印迹测定法通过SDS-PAGE将自新鲜冷冻的NSCLC样品制备的细胞裂解物分开,并转移至硝酸纤维素膜。封闭后,将膜与HER3单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.2.42或来自Dako的单克隆现有技术抗HER3抗体DAK-H3-IC一起于37℃温育。使用HRP缀合的抗小鼠Fab作为二抗。
图3 使用单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.2.42和MAK<人HER3>M-7.3.8对细胞系对照样品的免疫组织化学
在Ventana自动化载片染色仪Benchmark XT仪器上分析过表达HER1,HER2,HER3或HER4的福尔马林固定石蜡包埋HEK293细胞,使用标准细胞条件化1(CC1)试剂进行样品制备,HER3单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.2.42或HER3单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.3.8作为一抗及ultraView DAB作为检测系统。
图4 FFPET非小细胞肺癌(NSCLC)样品的比较性免疫组织化学测定法
HER3单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.2.42较之来自Dako的现有技术抗HER3抗体DAK-H3-IC对常规福尔马林固定石蜡包埋NSCLC组织的染色特性和染色样式的比较。
A和B:Ventana Benchmark XT系统上HER3单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.2.42的免疫组织化学,使用标准细胞条件化1(CC1)试剂进行样品制备及ultraView DAB作为检测系统。
C:半自动化Dako自动染色仪平台上来自Dako的抗HER3抗体DAK-H3-IC的免疫组织化学,使用UltraVision LP检测系统和DAB。手工进行脱石蜡和抗原修复步骤的规程。来自Dako的DAK-H3-IC抗体不能在Ventana Benchmark XT系统上使用,因为它在此平台上没有显示FFPET样品中的任何结合活性。
图5 来自肺和结肠癌的人肿瘤组织样品的比较性免疫组织化学测定法
HER3单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.3.8(左边;0.125μg/ml)较之来自Santa Cruz的现有技术抗HER3抗体C17(右边;0.125μg/ml)在常规福尔马林固定石蜡包埋组织样品上的染色特性和染色样式的比较。在图5A至D每一幅中,左边和右边的图分别显示MAK<人HER3>M-7.3.8和C17的结合(放大:10倍(顶部)和20倍(底部))
A:人肿瘤组织样品结肠A1278-Tp6
B:人肿瘤组织样品结肠B594-Tp5
C:人肿瘤组织样品结肠CRC 071147.1.1
D:人肿瘤组织样品肺p339-Tc16
实施例
实施例1:针对HER3的单克隆抗体的生成
为了生成单克隆抗体,给8周龄雌性Balb/c小鼠腹膜内免疫接种100μg在cFA中乳化的HER3抗原肽。抗原是先前采用自动化肽合成仪合成的,配备有合适的间隔物并N端偶联KLH(匙孔虫戚血蓝蛋白)。初次免疫接种在6周后继以三次iFA的进一步免疫接种,间隔一个月。取出脾前3天,给小鼠静脉内强化50μg抗原。用PEG融合脾细胞和P3X63Ag8.653骨髓瘤细胞,并在HAz选择培养基中培养。取出后,制备脾的单细胞制备物,并将脾细胞与骨髓瘤细胞融合,例如如和Milstein(1975)描述的。用ELISA对所得杂交瘤筛选针对生物素化筛选肽(其具有与所使用的免疫原对应的序列)的反应性。用生物素化HER3肽包被链霉亲合素包被的384孔MTP,并与未稀释的杂交瘤上清液一起温育。然后用HRP标记的绵羊抗鼠IgG-Fc特异性抗体探查板,并用ABTS显现。通过Biacore分析来测试选定杂交瘤的结合亲和力。使用FACSAria III通过单细胞沉积来克隆对它们相应免疫原序列具有高亲和力的杂交瘤。再次通过ELISA和Biacore分析来测试所得单克隆亚克隆。
实施例2:通过Biacore分析来测试杂交瘤培养物上清液
为了选择合适的抗体,对杂交瘤培养物上清液实施动力学筛选。测量是使用Biacore SPR技术进行的。将CM5系列S传感器芯片安装到A100仪器(GE Healthcare,Biacore)中,并依照制造商的说明书在HBSN缓冲液(10mM HEPES pH 7.4,150mM NaCl)中流体动力学寻址。系统缓冲液是HBS-ET(10mM HEPES pH 7.4,150mM NaCl,0.05%TWEEN 20)。样品缓冲液是补充有1mg/ml CMD(羧甲基右旋糖苷,Sigma#86524)的系统缓冲液。于25℃驱动系统。
在每个流动室上的敏感点1,2,4和5上,使用EDC/NHS化学依照制造商的说明书分别在流动室FC1(抗小鼠亚类1F(c)伽马),FC2,FC3和FC4固定化10000RU(相对单位)RAMIgGFC(相应小鼠免疫球蛋白G亚类的家兔抗小鼠F(c)伽马片段/JacksonLaboratories)。使用1M乙醇胺钝化点。
动力学测试抗体针对HER3肽的结合活性。通过以10μl/min注射在样品缓冲液中1:3稀释的粗制杂交瘤上清液1分钟来捕捉抗体。小心地在链霉亲合素上单一嫁接生物素化HER3肽以扩大复合物的分子量及提高系统的质量灵敏度。由于抗原复合物解离kd不依赖于分析物注射浓度,因此这是一种提高系统灵敏度的合法方法。
以30μl/min注射相应肽嫁接物5分钟,并监测解离3分钟。传感器表面的酸再生使用以30μl/min 3次序贯注射10mM甘氨酸pH 1.5。
使用Biaevaluation A100软件V.1.1依照制造商的说明书评估数据。计算晚期结合(RU),晚期稳定性(RU),R最大,kd(1/s)和MR(摩尔比)。依照它们的抗原复合物稳定性和MR对克隆打分。
使用Biaevaluation软件V.4.1依照制造商的说明书评估数据。计算解离速率常数kd(1/s),并计算t1/2解离。t1/2解离=ln(2)/60*kd[min]。相应数据显示于表2。
表2:抗HER3单克隆抗体克隆的动力学参数
单克隆抗体 | 同种型 | k<sub>d</sub>[1/s] | t1/2解离[min] |
MAK<人HER3>M-1.1.1 | IgG1<sub>K</sub> | 4,26E-04 | 27 |
MAK<人HER3>M-1.2.2 | IgG1<sub>K</sub> | 4,18E-04 | 28 |
MAK<人HER3>M-1.1.4 | IgG2a<sub>K</sub> | 2,92E-04 | 40 |
MAK<人HER3>M-6.3.1 | IgG1<sub>K</sub> | 9,28E-04 | 12 |
MAK<人HER3>M-7.3.8 | IgG2a<sub>K</sub> | 2,66E-05 | 435 |
MAK<人HER3>M-7.2.42 | IgG2a<sub>K</sub> | 4,26E-05 | 271 |
单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.3.8和MAK<人HER3>M-7.2.42显示足以在VentanaBenchmark XT平台上应用的复合物稳定性t1/2解离。
尤其,相当低的解离对于使用自动化Ventana Benchmark XT平台的IHC染色是至关重要的。
根据表2显而易见的是,对由杂交瘤(克隆)MAK<人HER3>M-7.3.8和MAK<人HER3>M-7.2.42生成的单克隆抗体观察到很低的解离,其中MAK<人HER3>M-7.3.8显示最慢的解离。
实施例3:Western印迹
使用新生成的HER3单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.2.42,MAK<人HER3>M-7.3.8和来自Dako的单克隆抗体DAK-H3-IC实施比较性Western印迹分析。
a)数种经转染对照细胞系的比较性Western印迹测定法
自数种HEK293对照细胞系制备裂解物。用编码HER1,HER2,HER3或HER4的质粒瞬时转染细胞。使用用哺乳动物表达载体pRK5转染的HEK293细胞作为阴性对照。为了Western印迹,在4-12%NuPage SDS凝胶(Invitrogen)上每道加载10μg蛋白质裂解物。依照标准方案用标准NuPage缓冲液和试剂(Invitrogen)实施Western印迹。封闭后,将膜与MAK<人HER3>M-7.2.42,MAK<人HER3>M-7.3.8或来自Dako的HER3单克隆抗体DAK-H3-IC一起温育。以1ng/ml的浓度使用MAK<人HER3>M-7.2.42和MAK<人HER3>M-7.3.8。一抗温育于RT和37℃实施60分钟。使用HRP缀合的抗小鼠Fab作为二抗。如制造商推荐的那样制备DAK-H3-IC抗体的稀释液,并根据需要调整(检测)二抗的选择。将膜用ECL(Amersham)显现,并使x射线胶片曝光。
图1中给出各个印迹的结果。比较性Western印迹分析指示新开发的MAK<人HER3>M-7.2.42和MAK<人HER3>M-7.3.8特异性检测HER3且显示与HER1,HER2,HER4或其它蛋白没有交叉反应。这些结合特征可见于RT和37℃,而来自Dako的HER3单克隆抗体DAK-H3-IC于37℃显示显著更弱的结合活性。因此,与来自Dako的现有技术单克隆抗HER3抗体DAK-H3-IC相比,新开发的MAK<人HER3>M-7.2.42和MAK<人HER3>M-7.3.8在Western印迹测定法中显示卓越的结合特征,特别是在自动化染色系统中使用的温度条件下。
b)非小细胞肺癌(NSCLC)样品的比较性Western印迹测定法
裂解具有0至高的不同HER3表达水平的新鲜冷冻的NSCLC样品,并于37℃用MAK<人HER3>M-7.2.42或来自Dako的抗体DAK-H3-IC进行分析,与实施例3a)中描述的SDS-PAGE/Western印迹规程类似。
图2中给出各个印迹的结果。比较性Western印迹分析指示来自Dako的现有技术单克隆抗HER3抗体DAK-H3-IC相比,新开发的MAK<人HER3>M-7.2.42显示显著更高的针对HER3的结合灵敏度。
实施例4:测序
为了获得选定杂交瘤克隆的DNA序列,进行5`Race PCR。为了RT-PCR,使用总RNA纯化试剂盒(Qiagen)自5x106个细胞制备总RNA。使用5`prime RACE PCR试剂盒(Roche)进行逆转录和PCR。通过凝胶电泳及随后的凝胶提取来纯化来自重和轻链的所得PCR片段。使用Topo Zero-Blunt克隆试剂盒(Invitrogen)克隆PCR片段,并转化入化学感受态细胞中。对来自每个杂交瘤的数个克隆进行测序以获得选定克隆的共有序列。
实施例5:免疫组织化学
a)使用单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.2.42和MAK<人HER3>M-7.3.8对细胞系对照样品的免疫组织化学
使用FFPE细胞系对照显示新开发的HER3单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.2.42和MAK<人HER3>M-7.3.8的合适性。因此,用4%PBS缓冲的甲醛固定HER1,HER2,HER3或HER4转染或未转染HEK293细胞,并随后在石蜡中包埋。
在Ventana Benchmark XT自动化IHC染色仪上实施所有染色规程,使用Ventana缓冲液和试剂(即标准细胞条件化1(CC1)试剂等等)进行样品制备及ultraView DAB作为检测系统。
根据图3显而易见的是,新开发的HER3单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.2.42和MAK<人HER3>M-7.3.8只对HER3转染细胞显示特异性膜染色。HER1,HER2和HER4转染细胞和对照细胞呈阴性。HER3单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.2.42和MAK<人HER3>M-7.3.8对HER3转染细胞显示优秀的IHC染色,如果在Ventana Benchmark XT分析仪上依照标准方案使用的话(见图3,HER3标题下的细胞染色)。
b)FFPET非小细胞肺癌(NSCLC)样品的比较性免疫组织化学测定法
进一步评估单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.2.42对于福尔马林固定石蜡包埋组织(FFPET)样品的免疫组织化学染色的合适性,与来自Dako的单克隆现有技术抗体DAK-H3-IC比较。在常规福尔马林固定石蜡包埋NSCLC组织样品上实施免疫组织化学测定法。在Ventana Benchmark XT平台上实施MAK<人HER3>M-7.2.42的染色,使用标准试剂和规程(即标准细胞条件化1(CC1)试剂等等)进行样品制备及ultraView DAB作为检测系统。在半自动化Dako自动染色仪平台上实施Dako的DAK-H3-IC抗体对HER3的免疫组织化学测定法,使用UltraVision LP检测系统和DAB。手工进行脱石蜡和抗原修复步骤的规程。来自Dako的DAK-H3-IC抗体不能在Ventana Benchmark XT系统上使用,因为它在这种平台上没有显示FFPET样品中的任何结合活性。
根据图4A(它是图4B中显示的组织样品的放大部分)显而易见的是,新开发的单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.2.42显示肿瘤细胞上的强膜染色。染色强度比用Dako的针对HER3的DAK-H3-IC现有技术抗体获得的染色强度显著更强。因此,单克隆抗体MAK<人HER3>M-7.2.42显示针对FFPET样品中HER3的高结合特异性和灵敏度,并且在自动化系统中用于临床人肿瘤样品的染色时提供HER3表达的可靠检测。
c)来自肺和结肠癌的人肿瘤组织样品的比较性免疫组织化学测定法
为了分析新抗HER3抗体的免疫组织化学的灵敏度,与商品化抗体比较,实施连续切片的染色。制备来自肺和结肠癌的福尔马林固定石蜡包埋人肿瘤组织的3μm连续切片。在Roche/Ventana Benchmark XT仪器上实施所有染色。为了抗原修复,应用缓冲液CC1达60分钟,继以不同一抗(MAK<人HER3>M-7.3.8和Santa Cruz C17)染色。使用Ventana OptiView试剂盒进行一抗检测。以125ng/ml的浓度使用这两种抗体。
如图5A至D所示,抗体MAK<人HER3>M-7.3.8能清楚地检测肿瘤组织内HER3的表达和膜定位,甚至当HER3小量表达时。与新抗体7.3.8相比,商品化抗体C17对同一肿瘤案例的染色检测不到。
Claims (12)
1.一种分离的结合人HER3的抗体或其抗原结合部分,其特征在于:
(1)重链可变域包含
如SEQ ID NO:1的氨基酸序列所列的CDR1H区,
如SEQ ID NO:2的氨基酸序列所列的CDR2H区,和
如SEQ ID NO:4的氨基酸序列所列的CDR3H区,且
轻链可变域包含
如SEQ ID NO:5的氨基酸序列所列的CDR1L区,
如SEQ ID NO:6的氨基酸序列所列的CDR2L区,和
如SEQ ID NO:8的氨基酸序列所列的CDR3L区;或
(2)重链可变域包含
如SEQ ID NO:1的氨基酸序列所列的CDR1H区,
如SEQ ID NO:3的氨基酸序列所列的CDR2H区,和
如SEQ ID NO:4的氨基酸序列所列的CDR3H区,且
轻链可变域包含
如RSSQSIVH所列的CDR1L区,
如SEQ ID NO:7的氨基酸序列所列的CDR2L区,和
如FQGSHAPRT所列的CDR3L区。
2.依照权利要求1的抗体或其抗原结合部分,其特征在于:
(1)重链可变域如SEQ ID NO:9的氨基酸序列所列,且
轻链可变域如SEQ ID NO:11的氨基酸序列所列;或
(2)重链可变域如SEQ ID NO:10的氨基酸序列所列,且
轻链可变域如SEQ ID NO:12的氨基酸序列所列。
3.依照权利要求1的抗体或其抗原结合部分,其特征在于:
(1)重链可变域与SEQ ID NO:9具有至少95%序列同一性,且
轻链可变域与SEQ ID NO:11具有至少95%序列同一性;或
(2)重链可变域与SEQ ID NO:10具有至少95%序列同一性,且
轻链可变域与SEQ ID NO:12具有至少95%序列同一性。
4.依照权利要求1至3中任一项的抗体或其抗原结合部分,其特征在于:所述抗体是单克隆抗体。
5.依照权利要求1至4中任一项的抗体或其抗原结合部分制备供一种用于实施免疫组织化学的方法使用的试剂或试剂盒的用途,该方法包括下述步骤:
a)将组织样品与依照权利要求1至4中任一项的抗体或其抗原结合部分一起温育,由此发生所述抗体对所述组织中的HER3的结合,并
b)对所述组织样品针对步骤(a)中结合的抗HER3抗体进行染色。
6.依照权利要求5的用途,其中所述组织样品为经过甲醛固定和石蜡包埋的(FFPE)组织样品。
7.依照权利要求5或6的用途,其中步骤a)和b)是使用自动化设备实施的。
8.一种用于在甲醛固定石蜡包埋组织(FFPET)样品中检测人HER3的试剂盒,所述试剂盒包含:
依照权利要求1至4中任一项的抗体或其抗原结合部分;和
用于检测所述抗体或其抗原结合部分的试剂。
9.一种编码结合人HER3的抗体的重和轻链的核酸,其特征在于,所述抗体包含依照权利要求1至3中任一项的重链可变域和轻链可变域。
10.一种表达载体,其特征在于:包含依照权利要求9的核酸以在原核或真核宿主细胞中表达依照权利要求1至3中任一项的抗体。
11.一种原核或真核宿主细胞,其包含依照权利要求10的表达载体。
12.一种用于生成依照权利要求1至3中任一项的重组抗体的方法,其特征在于:在原核或真核宿主细胞中表达依照权利要求9的核酸,并自所述细胞或细胞培养物上清液回收所述抗体。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP13004801 | 2013-10-04 | ||
EP13004801.0 | 2013-10-04 | ||
EP13005008.1 | 2013-10-18 | ||
EP13005008 | 2013-10-18 | ||
PCT/EP2014/071204 WO2015049355A1 (en) | 2013-10-04 | 2014-10-02 | Antibodies specifically binding to her3 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105593241A CN105593241A (zh) | 2016-05-18 |
CN105593241B true CN105593241B (zh) | 2020-07-10 |
Family
ID=51655764
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201480051510.XA Active CN105593241B (zh) | 2013-10-04 | 2014-10-02 | 特异性结合her3的抗体 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10179815B2 (zh) |
EP (1) | EP3036259B1 (zh) |
JP (1) | JP6419796B2 (zh) |
CN (1) | CN105593241B (zh) |
CA (1) | CA2924386C (zh) |
DK (1) | DK3036259T3 (zh) |
ES (1) | ES2669201T3 (zh) |
HK (1) | HK1218921A1 (zh) |
WO (1) | WO2015049355A1 (zh) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2016366521A1 (en) | 2015-12-11 | 2018-06-21 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for reducing or preventing growth of tumors resistant to EGFR and/or ErbB3 blockade |
US11549940B2 (en) | 2017-10-02 | 2023-01-10 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Method for detecting analyte |
CN111647074B (zh) * | 2020-06-01 | 2023-12-19 | 皖南医学院 | 一种her3二聚化界面抗原肽、重组抗原肽、编码基因及其应用 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
JPS6023084B2 (ja) | 1979-07-11 | 1985-06-05 | 味の素株式会社 | 代用血液 |
US4640835A (en) | 1981-10-30 | 1987-02-03 | Nippon Chemiphar Company, Ltd. | Plasminogen activator derivatives |
US4496689A (en) | 1983-12-27 | 1985-01-29 | Miles Laboratories, Inc. | Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer |
DE3675588D1 (de) | 1985-06-19 | 1990-12-20 | Ajinomoto Kk | Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist. |
US4791192A (en) | 1986-06-26 | 1988-12-13 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Chemically modified protein with polyethyleneglycol |
EP2138511A1 (en) * | 2008-06-27 | 2009-12-30 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | HER3 as a determinant for the prognosis of melanoma |
BRPI1007321A2 (pt) * | 2009-01-15 | 2018-07-10 | Laboratory Corp America Holdings | métodos para medir e/ou quantificar a presença e/ou quantidade de her-3 ou her-3 em um complexo em uma amostra de um paciente, e para determinar se um indivíduo com um câncer é provável de responder ao tratamento com uma terapia alvejada, e, anticorpo. |
TW201302793A (zh) * | 2010-09-03 | 2013-01-16 | Glaxo Group Ltd | 新穎之抗原結合蛋白 |
-
2014
- 2014-10-02 CA CA2924386A patent/CA2924386C/en active Active
- 2014-10-02 CN CN201480051510.XA patent/CN105593241B/zh active Active
- 2014-10-02 WO PCT/EP2014/071204 patent/WO2015049355A1/en active Application Filing
- 2014-10-02 DK DK14777674.4T patent/DK3036259T3/en active
- 2014-10-02 ES ES14777674.4T patent/ES2669201T3/es active Active
- 2014-10-02 EP EP14777674.4A patent/EP3036259B1/en active Active
- 2014-10-02 JP JP2016519773A patent/JP6419796B2/ja active Active
-
2016
- 2016-03-29 US US15/083,686 patent/US10179815B2/en active Active
- 2016-06-14 HK HK16106813.4A patent/HK1218921A1/zh unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES2669201T3 (es) | 2018-05-24 |
CA2924386A1 (en) | 2015-04-09 |
EP3036259B1 (en) | 2018-02-21 |
US20170096487A1 (en) | 2017-04-06 |
US10179815B2 (en) | 2019-01-15 |
JP2016538827A (ja) | 2016-12-15 |
DK3036259T3 (en) | 2018-05-14 |
CN105593241A (zh) | 2016-05-18 |
CA2924386C (en) | 2021-07-20 |
HK1218921A1 (zh) | 2017-03-17 |
JP6419796B2 (ja) | 2018-11-07 |
WO2015049355A1 (en) | 2015-04-09 |
EP3036259A1 (en) | 2016-06-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2010322415B2 (en) | Monoclonal antibodies and diagnostic uses thereof | |
DK2467401T3 (en) | ANTIBODIES FOR THE DETECTION OF INTEGRIN COMPLEX IN FFPE MATERIAL | |
US9823251B2 (en) | Anti-Uroplakin II antibodies systems and methods | |
US20160370370A1 (en) | Systems and Methods for Anti-PAX8 Antibodies | |
CN105593241B (zh) | 特异性结合her3的抗体 | |
CN103108887A (zh) | 新的抗原结合蛋白 | |
KR20210093961A (ko) | Amh에 대해 특이적인 항체 및 이의 용도 | |
EP3656794A1 (en) | Composition and methods for detecting cancer | |
US7517663B2 (en) | Rabbit monoclonal antibody against Id1 protein | |
EP3548899B1 (en) | Rapid semiquantitative method for determining adamts-13 activity in a patient plasma sample | |
CN102131829A (zh) | 抗人epo受体抗体 | |
US20190194319A1 (en) | Anti-ascl1 antibodies and methods of use | |
WO2013007667A1 (en) | An antibody specifically binding to neuropilin-1 | |
US20230340147A1 (en) | Antibodies specific for alpha-1,6-core-fucosylated psa and fucosylated fragments thereof | |
US20120322083A1 (en) | Antibody binding to abca1 polypeptide | |
CN116234823A (zh) | 用于在免疫组织化学(ihc)方案中诊断癌症的抗体 | |
CN115279795A (zh) | 靶向抗cd19嵌合抗原受体的抗独特型抗体 | |
AU2015224525A1 (en) | Monoclonal antibodies and diagnostic uses thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 1218921 Country of ref document: HK |
|
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |