CN105567786B - 一种巯嘌呤甲基转移酶酶活力检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，所述组合产品含有：S‑腺苷‑L‑甲硫氨酸或生成S‑腺苷‑L‑甲硫氨酸的酶反应系统，所述生成S‑腺苷‑L‑甲硫氨酸的酶反应系统包括三磷酸腺苷，甲硫氨酸和S‑腺苷甲硫氨酸合成酶；甲基受体；S‑腺苷‑L‑同型半胱氨酸水解酶。优选地，所述组合产品为试剂盒形式，其中各包含成分为各自独立存在的试剂状态。采用该组合产品可以在半自动或全自动的分析检测设备上使用，而且检测灵敏度高，特异性高，操作简便，因而可以得到切实的推广使用。

Description

一种巯嘌呤甲基转移酶酶活力检测试剂盒
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，同时又属于临床诊断和检测领域。具体而言本发明提供了一种检测巯嘌呤甲基转移酶(TPMT，thiopurine S-me thyltransferase，EC2.1.1.67)酶活力的组合产品。
背景技术
巯基嘌呤甲基转移酶(TPMT)是一种专门催化芳香族和杂环化合物的巯基甲基化反应的胞内酶，该酶以S-腺苷-L-甲硫氨酸作为甲基供应者，催化芳香族和杂环化合物的硫原子甲基化。
TPMT最初是在鼠的肾脏和肝脏中发现的，后来发现在多数组织中均有分布，如心、血细胞、胎盘、胰腺、小肠等，而且在人的这些组织及红细胞中也发现了TPMT。TPMT结构和生物活性具有多态性。人类红细胞内TPMT活性与肝、肾、白细胞、急性淋巴母细胞性白血病的淋巴细胞的TPMT活性是呈正相关的，因而红细胞成为测定TPMT最容易得到的组织。根据Klemetsdal的报道，不同人种红细胞的TPMT活性存在差异，如挪威北部莎弥人的TPMT活性高于该地区非莎弥的白种人；在美国佛罗里达州，黑人的TPMT活性比白人低33％，但黑人和白人中高活性、中等活性的比例是一致的；新加坡华人的TPMT活性高于美国人。随着分子生物学技术的发展，现已发现TPMT基因存在多态性，该基因突变与酶缺陷存在密切关系。如在TPMT缺陷的病人中发现的第一种突变(称为TPMT 2)是第80位密码子改变，即发生了G238→C颠换，由此导致丙氨酸80→脯氨酸，使TPMT活性上百倍地下降；发现的另一种突变(称为TPMT 3)是在TPMT的ORF出现了两个核苷酸的转换，即G460→A和A719→G，导致相应的氨基酸由丙氨酸154→苏氨酸和酪氨酸240→半胱氨酸，使细胞内TPMT蛋白的含量下降，可比野生型低400倍，从而导致该酶缺陷。
巯基嘌呤类药物在临床上已使用多年，主要用于白血病和肿瘤的化疗、器官移植受者的免疫抑制治疗以及自身免疫性疾病的治疗。常用的药物为6-巯基嘌呤(MP)、6-硫鸟嘌呤(TG)和咪唑硫嘌呤(AT)。MP用于治疗急性淋巴母细胞白血病(ALL)已40多年，至今仍是ALL治疗方案中不可缺少的药物。而AT则已成为免疫抑制治疗的三联药物之一，已广泛用于肾移植病人。近来报道还可用于治疗自身免疫性肝炎且效果良好。
TPMT活性与临床上使用的巯基嘌呤类药物的代谢有重要关系。巯基嘌呤类药物在体内的代谢主要有两条途径，一是在TPMT的催化下使硫基甲基化，二是在黄嘌呤氧化酶的作用下氧化成硫尿酸。由于造血组织中缺乏黄嘌呤氧化酶，该组织中的嘌呤类药物主要靠TPMT催化分解，因而TPMT缺陷的病人，如果使用了常规剂量的MP、AT和TG时，则会引起巯基嘌呤类药物在体内堆积，而且主要影响造血系统，轻者引起中毒和影响治疗效果，重者可致死亡。因此在接受巯基嘌呤类药物治疗之前进行TPMT的酶活力检测或者相关基因检测具有重要意义，通过检测可以及时发现此类患者并积极调整剂量实现安全有效的治疗。
目前TPMT酶活力检测的方法有两种，较常用的是非螯合的放射化学法(简称放射化学法)。放射化学法测定TPMT活性的基本原理是利用该酶的转甲基作用，以14C标记的S-甲基14C-腺苷-甲硫氨酸(14-SAM)为标记甲基的供者，在RBC溶解物中TPMT的催化下使MP接受14C标记的甲基，再以液体闪烁计数测定DPM值，最后计算TPMT活力。另一种是HPLC法检测TPMT活性，原理与放射法相同，最终通过HPLC检测MMP或类似物的含量反馈TPMT的活力。综合上述两种检测方法来看，放射法的前期处理较复杂，对技术要求较高且易造成污染，而HPLC法对设备要求较高，操作相对复杂，检测周期也较长；上述两种方法的特点均不利于推广使用。
发明内容
因此，基于上述已有技术的缺陷，为了解决现有巯嘌呤甲基转移酶(TPMT，thiopurine S-methyltransferase，EC 2.1.1.67)的酶活力检测方法不易推广的问题，本发明的目的是提供一种快速、特异、准确可靠的检测巯嘌呤甲基转移酶(TPMT，thiopurineS-methyltransferase，EC 2.1.1.67)酶活力的组合产品。采用该组合产品可以在半自动或全自动的分析检测设备上使用，而且检测灵敏度高，特异性高，操作简便，因而可以得到切实的推广使用。
针对上述发明目的，本发明是通过下述技术方案实现的：
具体地，本发明提供了一种检测巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)酶活力的组合产品，所述组合产品含有：S-腺苷-L-甲硫氨酸或生成S-腺苷-L-甲硫氨酸的酶反应系统，所述生成S-腺苷-L-甲硫氨酸的酶反应系统包括三磷酸腺苷，甲硫氨酸和S-腺苷甲硫氨酸合成酶；甲基受体；S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶；优选地，所述组合产品为试剂盒形式，其中各包含成分为各自独立存在的试剂状态。
优选地，根据前述检测TPMT酶活力的组合产品，其中，所述甲基受体选自带巯基的芳香族和带巯基的杂环化合物中的一种或两种；优选地，所述甲基受体选自巯基嘌呤、巯基嘌呤类似物和巯基嘌呤衍生物中的一种或多种；更优选地，所述甲基受体选自巯基嘌呤、咪唑硫嘌呤、6-硫鸟嘌呤、6-硫鸟嘌呤核苷酸、硫肌苷单磷酸盐、硫肌苷三磷酸盐、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶、巯基乙醇、溴苯硫酚、邻氨基苯硫醇、氯苯硫酚、氟苯硫酚、硫代苯甲酸和巯基嘌呤核苷酸中的一种或多种。最优选为6-硫鸟嘌呤。
更优选地，根据前述的检测TPMT酶活力的组合产品，其中，所述组合产品还包括缓冲液。所述缓冲液是被物理、化学和酶学上普遍接受的能将体系的pH值缓冲或稳定5.0～9.0的范围中的试剂，它的存在可以有效的稳定巯嘌呤甲基转移酶的催化反应的pH值，并可以稳定巯嘌呤甲基转移酶的物化性质，从而利于巯嘌呤甲基转移酶的酶活力的分析和检测。它包括以下实例但不限于这些实例：
乙酸钠/乙酸：pH 2.6～5.8
柠檬酸/柠檬酸钠：pH 3.0～6.6
磷酸氢盐/柠檬酸(盐)：pH 2.2～8.0
磷酸盐：pH 4.9～8.2
柠檬酸/氢氧化钠/盐酸：pH 2.2～6.5
2-吗啉代乙磺酸缓冲液(MES)：pH 5.5～6.7
3-吗啉丙磺酸缓冲液(MOPS)：pH 6.5～7.9
4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液(HEPES)：pH 6.8～8.2
Tris-盐酸：pH 7.1～8.9
硼酸-硼砂缓冲液：pH 7.4～9.0
最优选为磷酸钾缓冲液。
再优选地，根据前述的检测TPMT酶活力的组合产品中，其中，所述组合产品pH范围为5.0～9.0，优选为6.5～8.0，最优选为7.5。所述缓冲液为10～1000mmol/L，优选为25～100mmol/L，最优选为30mmol/L。所述甲基受体为0.002～10mmol/L，优选为0.05～0.5mmol/L，最优选为0.2mmol/L。所述S-腺苷-L-甲硫氨酸为0.02～2mmol/L，优选为0.05～0.5mmol/L，最优选为0.1mmol/L；及所述S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶为0.01～100KU/L，优选为0.1～50KU/L，最优选为10KU/L。
优选地，根据前述的检测TPMT酶活力的组合产品中，其中，所述组合产品还含有试剂，所述试剂为油酸、胆酸盐、Tween 20、Brij35或牛磺胆酸钠。优选地，所述试剂的体积百分浓度为0.05-1％。最优选为0.5％。
优选地，根据前述的检测TPMT酶活力的组合产品中，其中，所述组合产品为干粉或液体。
优选地，根据前述的检测TPMT酶活力的组合产品中，其中，所述组合产品为双剂试剂或三剂试剂。
具体地，根据前述的检测TPMT酶活力的组合产品中，其中，所述组合产品包括：
实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是双剂还是三剂，如下成分关系较为理想。
因此，优选地，根据前述的检测TPMT酶活力的组合产品，其中，所述组合产品包括：
最优选地，根据前述检测TPMT酶活力的组合产品，其中，所述组合产品pH为7.5，所述组合产品含有所述缓冲液30mmol/L，所述甲基受体0.2mmol/L，所述SAM0.1mmol/L，所述S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶10KU/L。所述缓冲液为磷酸钾缓冲液，所述甲基受体为6-硫鸟嘌呤。
本发明所述的检测TPMT酶活力的组合产品，可以配成如下双剂试剂：
试剂1
缓冲液、SAM
试剂2
缓冲液、甲基受体、S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶
试剂可以是制成干粉，溶解后使用；或是配成液体试剂，可以直接使用。
也可以将上述双剂试剂配成如下三剂试剂：
试剂1
缓冲液、SAM
试剂2
缓冲液、甲基受体
试剂3
缓冲液、S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶
试剂可以是制成干粉，溶解后使用；或是配成液体试剂，可以直接使用。
本发明还提供了前述检测TPMT酶活力的组合产品在制备用于分析样本中巯嘌呤甲基转移酶的酶活力的产品或器械中的应用。优选地，所述样本选自生物组织、体液和细胞中的一种或多种。更优选地，所述生物组织选自心、胎盘、胰腺、小肠、肾和肝脏中的一种或多种，所述细胞为血细胞。再优选地，所述血细胞为红细胞。
本发明还提供了前述检测TPMT酶活力的组合产品在制备用于分析、检测和诊断待测样本中的巯嘌呤甲基转移酶的酶活力异常导致的各种疾病的产品中的应用；所述疾病优选为巯嘌呤甲基转移酶的酶活力异常导致的各种遗传和代谢疾病；或制备用于临床检测或诊断与巯嘌呤甲基转移酶的酶活力相关的疾病的产品中的应用。
本发明还提供了前述检测TPMT酶活力的组合产品在制备用于指导与巯嘌呤甲基转移酶的酶活力相关的药物使用的产品中的应用。
本发明所述检测TPMT酶活力组合产品的检测方法包括：
(1)将含TPMT的样本与S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)和甲基受体接触以形成S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH)和甲基受体的甲基化产物，
(2)通过将所述SAH与SAH水解酶相接触以生成高半胱氨酸(Hcy)和腺苷(Ado)，采用光度计评估所述Ado的产生速率以检测所述样本中所述TPMT的酶活力。
优选地，根据前述的TPMT酶活力检测方法，其中，所述甲基受体选自带巯基的芳香族化合物和带巯基的杂环化合物中的一种或两种。优选地，所述甲基受体选自巯基嘌呤、巯基嘌呤类似物和巯基嘌呤衍生物中的一种或多种。更优选地，所述甲基受体选自巯基嘌呤、咪唑硫嘌呤、6-硫鸟嘌呤、6-硫鸟嘌呤核苷酸、硫肌苷单磷酸盐、硫肌苷三磷酸盐、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶、巯基乙醇、溴苯硫酚、邻氨基苯硫醇、氯苯硫酚、氟苯硫酚、硫代苯甲酸和巯基嘌呤核苷酸中的一种或多种。最优选为6-硫鸟嘌呤。
更优选地，根据前述的TPMT酶活力检测方法，其中，所述方法包括：
(1)所述含TPMT的样本、所述SAM和所述甲基受体混合并反应获得反应液1；
(2)将所述S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶加入步骤(1)中的所述反应液1中并反应，获得反应液2；
(3)将步骤(2)中所述的反应液2离心获得上清液；
(4)采用光度计检测步骤(3)中所述的上清液的光吸收值，间接或直接地评估所述Ado的产生速率以检测所述样本中所述TPMT的酶活力。
再优选地，根据前述的TPMT酶活力检测方法，其中，所述方法包括：在步骤(1)过程和步骤(2)过程中加入缓冲液。优选地，所述缓冲液为乙酸钠/乙酸、柠檬酸/柠檬酸钠、磷酸氢盐/柠檬酸(盐)、磷酸盐、柠檬酸/氢氧化钠/盐酸、MES、MOPS、HEPES、Tris-盐酸、硼酸-硼砂缓冲液中的一种或多种。最优选为磷酸钾缓冲液。
还优选地，根据前述的TPMT酶活力检测方法，其中，所述缓冲液为10～1000mmol/L，优选为25～100mmol/L，最优选为30mmol/L；所述甲基受体为0.002～10mmol/L，优选为0.05～0.5mmol/L，最优选为0.2mmol/L；所述S-腺苷-L-甲硫氨酸0.02～2mmol/L，优选为0.05～0.5mmol/L，最优选为0.1mmol/L；及所述S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶0.01～100KU/L；优选为0.1～50KU/L，最优选为10KU/L。
或还优选地，根据前述的TPMT酶活力检测方法，其中，步骤(1)中所述反应的条件为置于30℃环境中温浴60min。优选地，步骤(2)中所述反应的条件为置于30℃环境中温浴10min。更优选地，步骤(3)中所述离心为10,000g离心10分钟。
或还优选地，根据前述的TPMT酶活力检测方法，其中，所述方法还包括在步骤(1)前将所述含TPMT的样本进行前期处理，所述前期处理为所述含TPMT的样本与试剂混合，所述试剂为油酸、胆酸盐、Tween 20、Brij35或牛磺胆酸钠。优选地，所述试剂在上述混合后，达到的体积百分浓度为0.05-1％。最优选为0.5％。
进一步优选地，根据前述的TPMT酶活力检测方法，其中，所述方法还包括，在所述前期处理后，将所述含TPMT的样本在冰上放置30min。
优选地，根据前述的TPMT酶活力检测方法，其中，所述SAM由三磷酸腺苷，甲硫氨酸和S-腺苷甲硫氨酸合成酶(EC 2.5.1.6)组成的酶反应系统所生成。
优选地，根据前述的TPMT酶活力检测方法，其中，所述含TPMT的样本选自生物组织、体液和细胞中的一种或多种。优选地，所述生物组织选自心、胎盘、胰腺、小肠、肾和肝脏中的一种或多种，细胞为血细胞。最优选地，所述血细胞为红细胞。
具体地，本发明提供一种TPMT酶活力检测方法，其基本实施过程如下：
TPMT能够利用S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)作为甲基供体，将SAM的甲基转移到甲基受体上，生成甲基受体的甲基化产物，同时SAM转化为S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH)，SAH在S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶(SAHase，EC 3.3.1.1)的作用下产生腺苷(Ado)，产生的Ado的速率与SAM的减少速率成正比，评估所述Ado的产生速率可以检测TPMT的酶活力。所述甲基受体为带巯基的芳香族化合物或带巯基的杂环化合物及其衍生物，优选地，所述甲基受体为巯基嘌呤或巯基嘌呤类似物及其衍生物。
可以直接评估所述Ado的产生速率。如Ado在紫外特定波长条件下具有特异性光吸收，评估所述Ado的生成速率可以间接评估SAM的减少速率，进而计算出待测样本中TPMT的酶活力。
本发明所述的TPMT酶活力检测方法的原理可以简化如图1。
本发明所述的检测TPMT酶活力的组合产品可以用于分析和检测各种待测样本中的巯嘌呤甲基转移酶的酶活力，特别是检测人体各种体液、组织或细胞样本中巯嘌呤甲基转移酶的酶活力，如心、血细胞、胎盘、胰腺、小肠、肾或肝脏、红细胞。
本发明所述的检测TPMT酶活力的组合产品可以用于分析、检测和诊断待测样本中的巯嘌呤甲基转移酶的酶活力异常导致的各种疾病，特别是由巯嘌呤甲基转移酶的酶活力异常导致的各种遗传和代谢疾病。从而可以广泛应用到临床检测或诊断与巯嘌呤甲基转移酶的酶活力相关的疾病；而且这种巯嘌呤甲基转移酶酶活力检测方法和试剂还可用于指导与巯嘌呤甲基转移酶的酶活力相关的药物使用。
本发明所述检测TPMT酶活力的组合产品中，所述底物S-腺苷-L-甲硫氨酸可以是已经合成好的化合物；此外，还可以由三磷酸腺苷，甲硫氨酸和S-腺苷甲硫氨酸合成酶(EC2.5.1.6)组成的酶反应系统所生成。
本发明所述检测TPMT酶活力的组合产品中，所述的S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶(EC 3.3.1.1)可以是各种物种来源的，它包括但不限于是天然提取的，或者是重组表达的，或是经过改造或修饰的酶，只要它具有催化S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH)水解产生腺苷的功能，均是本发明所涵盖的范畴。
本发明所述检测TPMT酶活力的组合产品中，所述的S-腺苷甲硫氨酸合成酶(EC2.5.1.6)可以是各种物种来源，它包括但不限于是天然提取的，或者是重组表达的，或是经过改造或修饰的酶，只要它具有催化三磷酸腺苷和甲硫氨酸反应生成S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)的功能，均是本发明所涵盖的范畴。
本发明的检测TPMT酶活力组合产品具有但不限于以下有益效果：
(1)与现有技术放射化学法相比，本发明的检测TPMT酶活力的组合产品前期处理简单，对技术要求不高且不易造成污染。
(2)与现有技术HPLC法相比，本发明的检测TPMT酶活力的组合产品对设备要求较低，操作简单，检测快速。
(3)基于实施例中的酶活力测定可知，本发明的检测TPMT酶活力的组合产品可半自动或全自动的分析检测设备上使用，且检测灵敏度高，特异性高。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1示出了本发明所述检测TPMT酶活力组合产品的检测方法原理。
具体实施方式
下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
以下实施例中，除具体指明的试验材料、条件以及操作方法外，实例中所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的。因此，本领域技术人员清楚，在上下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。
以下6-TG、SAM、S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶均购自SIGMA-ALDRICH，使用检测设备为752型紫外可见分光光度计。
实施例1：人血红细胞裂解液的制备
取健康体检志愿者外周静脉全血1ml，3000rpm离心10min，弃上清取底部红细胞沉淀100ul，加入生理盐水(0.9％NaCl水溶液)3ml充分摇匀，经3000rpm离心10min，弃去上清液，再经生理盐水洗涤2次，3000rpm离心10min，弃上清，收集的沉淀即是红细胞。收集的红细胞可在-40℃条件下保存备用。向一份红细胞沉淀中加入2份体积的20mmol/L Tris-HCl缓冲液，pH7.5，搅拌破碎红细胞，10000g离心10分钟，取上清即是红细胞裂解液。
实施例2：人血红细胞巯嘌呤甲基转移酶活力测定(进行前期处理)
本实施例的巯嘌呤甲基转移酶检测试剂为三剂试剂，包括
试剂1
磷酸钾缓冲液(pH7.5) 30mmol/L
SAM 0.1mmol/L
试剂2
磷酸钾缓冲液(pH7.5) 30mmol/L
6-TG 0.2mmol/L
试剂3
磷酸钾缓冲液(pH7.5) 30mmol/L
S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶 10KU/L
被测巯嘌呤甲基转移酶的样品为健康成年人血红细胞，经破碎处理后，向样本中加入胆酸钠溶液，使终体积百分浓度达到0.5％，轻轻混匀后，冰上放置30min待用。反应体系中总蛋白用量为25ug，反应体系为250ul。共制作5份平行样本。本检测方法采用终点法检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力。
检测方法：
对照：将试剂1与2与经过灭活处理的红细胞裂解液混合后置于30℃环境中温浴60分钟，然后加入试剂3继续反应10分钟，之后终止反应，终止后的混合液经10,000g离心10分钟后取上清加入到分光光度计中，在260nm条件下检测产物的光吸收值，记为A0。
样品：将试剂1与2与红细胞裂解液混合后置于30℃环境中温浴60分钟，然后加入试剂3继续反应10分钟，之后终止反应，终止后的混合液经10,000g离心10分钟后取上清加入到分光光度计中，在260nm条件下检测产物的光吸收值，记为A1。
巯嘌呤甲基转移酶的活力吸光值ΔA＝A1－A0。
酶活力单位为：每小时每克蛋白转化底物的纳摩尔数，用nmol/h/g蛋白表示。
实验结果A0值为0.506±0.016，A1值为0.985±0.019，巯嘌呤甲基转移酶ΔA均为0.48，转化成酶活力均值为186.23nmol/h/g蛋白，由此可见本发明的检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的方法和试剂可以有效检测出样本中的巯嘌呤甲基转移酶酶活力且测定稳定。
实施例3：人血红细胞嘌呤甲基转移酶活力测定(对样本进行前期处理比较)
本实施例的巯嘌呤甲基转移酶检测试剂为三剂试剂，包括
试剂1
磷酸钾缓冲液(pH7.5) 30mmol/L
SAM 0.1mmol/L
试剂2
磷酸钾缓冲液(pH7.5) 30mmol/L
6-TG 0.2mmol/L
试剂3
磷酸钾缓冲液(pH7.5) 30mmol/L
S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶 10KU/L
被测巯嘌呤甲基转移酶的样品为混合健康成年人血红细胞，经破碎处理后，均分成两份，其中一份向样本中加入胆酸钠溶液，使终浓度达到0.5％，轻轻混匀后，冰上放置30min；另一份加入等量的样本悬浮液，轻轻混匀后冰上放置30min，反应体系中总蛋白用量为25ug，反应体系为250ul。本检测方法采用终点法检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力。
检测方法：与实施例2中检测方法相同。
实验结果比较：
前期处理后的巯嘌呤甲基转移酶酶活力为193.64nmol/h/g蛋白，未经前期处理的巯嘌呤甲基转移酶酶活力为113.77nmol/h/g蛋白，由此可见使用本发明中的试剂对样本进行前期处理能够明显提高样本中巯嘌呤甲基转移酶酶活力，进而提高所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的方法的灵敏度。本发明的检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的方法和试剂可以有效检测出样本中的巯嘌呤甲基转移酶酶活力且测定稳定。
尽管在此，已对本发明进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明精神和范围的条件下，所属领域技术人员可进行各个条件的适当变化。可以理解的是，本发明不限于所述实施方案概括和具体实例，其权利归于权利要求的范围，并包括所述每个因素的等同替换。

Claims (25)

1.一种检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于，所述组合产品含有：S-腺苷-L-甲硫氨酸或生成S-腺苷-L-甲硫氨酸的酶反应系统，所述生成S-腺苷-L-甲硫氨酸的酶反应系统包括三磷酸腺苷，甲硫氨酸和S-腺苷甲硫氨酸合成酶；甲基受体；S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶；
所述甲基受体选自巯基嘌呤、巯基嘌呤类似物和巯基嘌呤衍生物中的一种或多种，为0.05～0.5mmol/L；
所述S-腺苷-L-甲硫氨酸为0.02～2mmol/L。
2.根据权利要求1所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于，所述S-腺苷-L-甲硫氨酸为0.05～0.5mmol/L。
3.根据权利要求2所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于，所述S-腺苷-L-甲硫氨酸为0.1mmol/L。
4.根据权利要求1所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于，所述组合产品为试剂盒形式，其中各试剂为各自独立存在的试剂状态。
5.根据权利要求1所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于，所述甲基受体选自巯基嘌呤、咪唑硫嘌呤、6-硫鸟嘌呤、6-硫鸟嘌呤核苷酸、硫肌苷单磷酸盐、硫肌苷三磷酸盐的一种或多种。
6.根据权利要求5所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于，所述甲基受体为6-硫鸟嘌呤。
7.根据权利要求1所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于，所述组合产品还含有缓冲液。
8.根据权利要求7所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于，所述缓冲液选自乙酸钠/乙酸、柠檬酸/柠檬酸钠、磷酸氢盐/柠檬酸、磷酸氢盐/柠檬酸盐、磷酸盐、柠檬酸/氢氧化钠/盐酸、2-吗啉乙磺酸缓冲液、3-吗啉丙磺酸缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、Tris-盐酸、硼酸-硼砂缓冲液中的一种或多种。
9.根据权利要求8所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于，所述缓冲液为磷酸钾缓冲液。
10.根据权利要求7所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于：
所述组合产品pH范围为5.0～9.0；
所述缓冲液为10～1000mmol/L；
所述甲基受体为0.2mmol/L；
及
所述S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶为0.01～100KU/L。
11.根据权利要求10所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于：
所述组合产品pH范围为6.5～8.0；
所述缓冲液为25～100mmol/L；
及
所述S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶为0.1～50KU/L。
12.根据权利要求11所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于：
所述组合产品pH为7.5；
所述缓冲液为30mmol/L；
及
所述S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶为10KU/L。
13.根据权利要求1所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于，所述组合产品还含有试剂，所述试剂为油酸、胆酸盐、Tween20、Brij35或牛磺胆酸钠。
14.根据权利要求13所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于，所述试剂的体积百分浓度为0.05-1％。
15.根据权利要求14所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于，所述试剂的体积百分浓度为0.5％。
16.根据权利要求1所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于，所述组合产品为干粉或液体。
17.根据权利要求1所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品，其特征在于，所述组合产品为双剂试剂或三剂试剂。
18.权利要求1至17中任一项所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品在制备用于分析样本中巯嘌呤甲基转移酶的酶活力的产品或器械中的应用。
19.根据权利要求18所述的应用，其特征在于，所述样本选自生物组织、体液和细胞中的一种或多种。
20.根据权利要求19所述的应用，其特征在于，所述生物组织选自心、胎盘、胰腺、小肠、肾和肝脏中的一种或多种，所述细胞为血细胞。
21.根据权利要求20所述的应用，其特征在于，所述血细胞为红细胞。
22.权利要求1至17中任一项所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品在制备用于检测待测样本中的巯嘌呤甲基转移酶的酶活力异常导致的各种疾病的产品中的应用。
23.根据权利要求22所述的应用，所述疾病为巯嘌呤甲基转移酶的酶活力异常导致的各种遗传和代谢疾病。
24.权利要求1至17中任一项所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品在制备用于临床检测或诊断与巯嘌呤甲基转移酶的酶活力相关的疾病的产品中的应用。
25.权利要求1至17中任一项所述检测巯嘌呤甲基转移酶酶活力的组合产品在制备用于指导与巯嘌呤甲基转移酶的酶活力相关的药物使用的产品中的应用。
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