CN105532545B - 一种棕点石斑鱼与清水石斑鱼的人工杂交育种方法 - Google Patents

一种棕点石斑鱼与清水石斑鱼的人工杂交育种方法 Download PDF

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    • Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
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Abstract

本发明公开了一种棕点石斑鱼与清水石斑鱼的人工杂交育种方法，包括以下步骤：(1)亲本选择、(2)亲本的培育、(3)亲鱼性腺发育程度的检查和判断、(4)人工受精、(5)受精卵的孵化、(6)受精卵的包装运输。本发明实现了棕点石斑鱼与清水石斑鱼的属间杂交，获得了兼具二种亲本特点的杂交子一代鱼的仔鱼，用于后续的人工养殖，培育出的杂交鱼养殖性能好，肉质鲜美，性价比高，为鱼类各个苗种提供了一个新的品种。

Description

一种棕点石斑鱼与清水石斑鱼的人工杂交育种方法
技术领域
本发明涉及水产养殖技术领域，具体涉及一种棕点石斑鱼与清水石斑鱼的人工杂交育种方法。
背景技术
棕点石斑鱼(学名：Epinephelus fuscoguttatus)，隶属鲈形目、鮨科、石斑鱼属，又称老虎斑、褐点石斑鱼，分布于红海、印度洋非洲东岸至太平洋波利尼西亚、北达琉球群岛、南至澳大利亚、台湾岛以及南海诸岛、澎湖列岛等海域等，栖息深度1-60米，体长可达120厘米，属于暖水性近岸及珊瑚礁鱼类，生活在水质清澈的珊瑚礁、泻湖。肉食性，以鱼类、头足类、甲壳类为食，可做为食用鱼、养殖鱼及观赏鱼。棕点石斑鱼摄食凶猛、生长快，广泛应用于养殖生产。
清水石斑鱼(Epinephelus polyphekadion)，是鮨科石斑鱼属的一种，分布于红海、非洲东海岸的法属波利尼西亚、日本南部、澳大利亚的昆士兰州南部、豪勋爵岛等海域，清水石斑鱼属暖水性中下层鱼类。成鱼全身为褐色。尾鳍后缘圆形。栖息于近海底层。目前，还没有用于人工养殖。清水石斑鱼有生长快、肉质鲜甜爽口、容易烹调的特点。
为获得兼具二种亲本特点的杂交子一代，提供一种棕点石斑鱼与清水石斑鱼人工杂交育种的方法。
发明内容
本发明所要解决的问题是，针对自然物种在经济性状上的不足，设计出一种石斑鱼的种间杂交、得到兼具二亲本优势的批量仔鱼的方法，用于规模化养殖生产。
本发明为解决其问题所采用的技术方案是：
一种棕点石斑鱼与清水石斑鱼的人工杂交育种方法，包括以下步骤：
(1)亲本选择
a.雌性亲本：选择5龄以上、体型正常、无病害、活力强的健康棕点石斑鱼作为雌性亲本；
b.雄性亲本：选择5龄以上、体型正常、无病害、活力强的健康清水石斑鱼作为雄性亲本；
(2)亲本的培育
a.采用池塘控温培育亲本，根据二种亲本性腺发育对水温的要求不同，二种亲本分别在不同池塘进行培育，保证二种亲本的性腺发育在时间上达到同步成熟；
b.棕点石斑鱼亲鱼培育池塘的规格及水温控制：培育亲本的池塘为露天池塘，取自然水温，池塘面积1亩，水深3－3.5m，设进、排水口各1个，培育密度200－300尾/亩，雌雄比例1：1，当春季水温上升至24℃开始进入强化培育；
c.清水石斑鱼亲鱼培育池塘的规格及水温控制：培育亲本的池塘须加盖保温棚，春季水温较同期的露天池塘水温高出2℃左右，池塘面积1亩，水深3－3.5m，设进、排水口各1个，培育密度150－200尾/亩，雌雄比例1：1；春季水温上升至26℃开始进入强化培育；
d.日常培育的饲料种类与投喂量：二种亲本都以小鱿鱼、蓝圆鲹、鲐鱼作为主要饲料，适合的饲料鱼块长6－8cm、宽4－6cm，每天投喂饲料1次，下午投喂，每次投喂量控制在鱼体重的2％－2.5％；
e.强化培育的饲料种类与投喂量：春季水温上升，当露天池塘的水温上升至24℃时，加盖保温棚的池塘水温上升至26℃左右，二种亲同时进入强化培育阶段，二种亲本都以小鱿鱼、蓝圆鲹、鲐鱼作为饲料，每个鱼块饲料中塞入维生素E软胶囊1粒(50mg)投喂，每天投喂1次，日投喂量为亲鱼体重的2－3％，实际投喂量受天气、水温等条件影响而有增减；
(3)亲鱼性腺发育程度的检查和判断
a.对亲本进行强化培育二周后，每周从亲鱼群体中挑选部分个体进行一次成熟度检查；
b.棕点石斑鱼雌性亲本的检查：从棕点石斑鱼群体中选择雌性个体，置于平台上实施检查，外观上腹部隆起，生殖孔微红，即可初步判定为达到性成熟；
c.清水石斑鱼雄性亲本的检查：从清水石斑鱼群体中选择雄性个体，置于平台上实施检查，在鱼腹部，用手从鱼腹部向生殖孔方向推挤，能挤出白色精液的个体即已经达到性成熟；
(4)人工受精
a.采精：取清水石斑鱼成熟的雄性个体，用干毛巾将鱼腹部擦干，酒精棉球对生殖孔消毒，用手在鱼体腹部，从前向生殖孔方向推挤，任乳白色的精液从生殖孔流出，用10ml注射器，将精液吸取，一尾成熟的雄性个体可取得精液3－8ml，注入试管中，备用；
b.挤卵：用湿毛巾将鱼体包裹，暴露生殖孔，操作者戴上乳胶手套，用手指插入鱼的生殖孔，将生殖孔打开，然后用手在鱼腹部从前向生殖孔方向推挤，成熟卵子即可流出，在生殖孔下方用盆接住流出的卵子；
c.人工授精：向盛有卵子的盆内加入干净海水，1千克卵子加入海水10L，一边加水一边轻轻搅动，同时加入经过海水稀释的清水石斑鱼精液，加入量为每千克卵子10ml，精卵混匀之后静置3－5min，之后用干净的海水冲洗受精卵3－4遍；
(5)受精卵的孵化
准备一个容积500L、底部设有排水阀的孵化桶，在孵化桶内放置气石充气，将经过步骤(4)处理过的受精卵放入孵化桶中孵化，受精卵孵化条件为水温25－30℃，盐度28－33，pH7.8～8.5，孵化密度为250－300万粒受精卵/m3，孵化过程中，发现其中有死卵或未受精卵要及时排除，每2小时换水一次，每次换水量为孵化桶容积的一半，以保持孵化桶内海水的清新；
(6)受精卵的包装运输
a.杂种受精卵受精卵经孵化8小时左右，胚胎发育至原肠期，即可将受精卵包装、运输至育苗场，受精卵在孵化24－26小时后，即可孵出仔鱼，用于人工育苗；
b.包装运输方法是用尼龙袋充氧运输法，一只70cm×40cm的尼龙袋，装上过滤海水5－8L，约占尼龙袋容积的1/4，放入受精卵100g，排除袋内空气，充进氧气并扎紧袋口，再用纸箱或泡沫塑料箱包装好，立即装上运输工具。
在本发明中，所述步骤(4)a中，将取出的精液注入试管，密封，4℃暂存，备用，暂存的精液在一周内仍有授精能力。
在本发明中，所述步骤(4)b中，对成熟雌性棕点石斑鱼合适的挤卵时机是农历初一至初六，人工授精操作的当天下午，提前从培育池塘中起捕棕点石斑鱼亲鱼，选择出雌性亲鱼，暂养于水泥池中，于20：00－24：00实施人工授精。
在本发明中，所述步骤(4)c中，清水石斑鱼精液较浓密，须用海水稀释后使用，稀释的方法是：将备用的精液取出1ml，注入烧杯，加入9lm海水，晃动烧杯，将精液与海水快速混均，立即加入到已经加入海水的卵子中，从精子加入海水稀释至将稀释后的精液加入卵子中，全过程在1分钟内完成。
在本发明中，杂种鱼的受精卵在24－25℃度水温条件下，胚胎发育时间约24－26h，如果预计到达目的地之前杂种鱼受精卵可能在运输过程中孵化出仔鱼，则不能使用受精卵运输的方式，应改为运输仔鱼。
在本发明中，所述步骤(6)中，运输受精卵，气温高时，包装箱中可加上适量冰袋降温，适宜的运输温度为24－25℃度；
综上所述，本发明为一种石斑鱼属间杂交育种方法，本发明的有益效果为：
(1)清水石斑鱼目前未用于人工养殖，本发明选择棕点石斑鱼作为雌性亲本、清水石斑鱼作为雄性亲本，进行种间杂交，获得批量的杂交一代仔鱼，用于养殖生产。
(2)棕点石斑鱼与清水石斑鱼同属石斑鱼属，繁殖生物学特性有所差异，本发明将棕点石斑鱼与清水石斑鱼在不同池塘进行培育，以特定的适口饲料投喂，保证二种亲鱼获得足够的营养条件，促使性腺发育成熟，其关键是在强化培育阶段，清水石斑鱼的培育水温高出棕点石斑鱼的培育水温2－3℃，保证二种亲本的性腺发育在时间上达到同步成熟。
(3)本发明在人工授精时采用海水稀释精液，实践中发现，清水石斑鱼精液较粘稠，直接用于人工授精，受精率低，采用本发明的方法，能取得更高的受精率。
(4)本发明中，利用棕点石斑鱼自然产卵与月相有关的规律，确定人工授精的时机在农历初一至初六，于20：00－24：00。
(5)本发明实现了棕点石斑鱼与清水石斑鱼的种间杂交，获得了兼具二种亲本特点的杂交子一代的仔鱼，用于后续的人工养殖，培育出的杂交鱼养殖性能好，肉质鲜美，性价比高。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整的描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
一种棕点石斑鱼与清水石斑鱼的人工杂交育种方法，包括以下步骤：
(1)亲本选择
a.雌性亲本：选择5龄以上、体型正常、无病害、活力强的健康棕点石斑鱼作为雌性亲本；
b.雄性亲本：选择5龄以上、体型正常、无病害、活力强的健康清水石斑鱼作为雄性亲本；
(2)亲本的培育
a.采用池塘控温培育亲本，根据二种亲本性腺发育对水温的要求不同，二种亲本分别在不同池塘进行培育，保证二种亲本的性腺发育在时间上达到同步成熟；
b.棕点石斑鱼亲鱼培育池塘的规格及水温控制：培育亲本的池塘为露天池塘，取自然水温，池塘面积1亩，水深3－3.5m，设进、排水口各1个，培育密度200－300尾/亩，雌雄比例1：1，当春季水温上升至24℃开始进入强化培育；
c.清水石斑鱼亲鱼培育池塘的规格及水温控制：培育亲本的池塘须加盖保温棚，春季水温较同期的露天池塘水温高出2℃左右，池塘面积1亩，水深3－3.5m，设进、排水口各1个，培育密度150－200尾/亩，雌雄比例1：1；春季水温上升至26℃开始进入强化培育；
d.日常培育的饲料种类与投喂量：二种亲本都以小鱿鱼、蓝圆鲹、鲐鱼作为主要饲料，适合的饲料鱼块长6－8cm、宽4－6cm，每天投喂饲料1次，下午投喂，每次投喂量控制在鱼体重的2％－2.5％；
e.强化培育的饲料种类与投喂量：春季水温上升，当露天池塘的水温上升至24℃时，加盖保温棚的池塘水温上升至26℃左右，二种亲同时进入强化培育阶段，二种亲本都以小鱿鱼、蓝圆鲹、鲐鱼作为饲料，每个鱼块饲料中塞入维生素E软胶囊1粒(50mg)投喂，每天投喂1次，日投喂量为亲鱼体重的2－3％，实际投喂量受天气、水温等条件影响而有增减；
(3)亲鱼性腺发育程度的检查和判断
a.对亲本进行强化培育二周后，每周从亲鱼群体中挑选部分个体进行一次成熟度检查；
b.棕点石斑鱼雌性亲本的检查：从棕点石斑鱼群体中选择雌性个体，置于平台上实施检查，外观上腹部隆起，生殖孔微红，即可初步判定为达到性成熟；
c.清水石斑鱼雄性亲本的检查：从清水石斑鱼群体中选择雄性个体，置于平台上实施检查，在鱼腹部，用手从鱼腹部向生殖孔方向推挤，能挤出白色精液的个体即已经达到性成熟；
(5)人工受精
a.采精：取清水石斑鱼成熟的雄性个体，用干毛巾将鱼腹部擦干，酒精棉球对生殖孔消毒，用手在鱼体腹部，从前向生殖孔方向推挤，任乳白色的精液从生殖孔流出，用10ml注射器，将精液吸取，一尾成熟的雄性个体可取得精液3－8ml，注入试管中，备用；
b.挤卵：用湿毛巾将鱼体包裹，暴露生殖孔，操作者戴上乳胶手套，用手指插入鱼的生殖孔，将生殖孔打开，然后用手在鱼腹部从前向生殖孔方向推挤，成熟卵子即可流出，在生殖孔下方用盆接住流出的卵子；
c.人工授精：向盛有卵子的盆内加入干净海水，1千克卵子加入海水10L，一边加水一边轻轻搅动，同时加入经过海水稀释的清水石斑鱼精液，加入量为每千克卵子10ml，精卵混匀之后静置3－5min，之后用干净的海水冲洗受精卵3－4遍；
(6)受精卵的孵化
准备一个容积500L、底部设有排水阀的孵化桶，在孵化桶内放置气石充气，将经过步骤(5)处理过的受精卵放入孵化桶中孵化，受精卵孵化条件为水温25－30℃，盐度28－33，pH7.8～8.5，孵化密度为250－300万粒受精卵/m3，孵化过程中，发现其中有死卵或未受精卵要及时排除，每2小时换水一次，每次换水量为孵化桶容积的一半，以保持孵化桶内海水的清新。
其中，在步骤(2)中的亲本培育过程中，由于棕点石斑鱼与清水石斑鱼生存于不同海域，无法同步发育，即棕点石斑鱼先发育成熟，清水石斑鱼后成熟，这样便产生了时间差，导致无法二种亲本无法杂交。本发明将棕点石斑鱼与清水石斑鱼在不同池塘进行培育，保证二种亲本的性腺发育在时间上达到同步成熟。该方法操作简单，实用性强，采用此方法后，避免了在培育亲本当中不多不必要的麻烦，如目前常用的精子冷冻法，实践操作中较麻烦。
在本发明中，所述步骤(5)a中，将取出的精液注入试管，密封，4℃暂存，备用，暂存的精液在一周内仍有授精能力。
在本发明中，所述步骤(5)b中，对成熟雌性棕点石斑鱼合适的挤卵时机是农历初一至初六，人工授精操作的当天下午，提前从培育池塘中起捕棕点石斑鱼亲鱼，选择出雌性亲鱼，暂养于水泥池中，于20：00－24：00实施人工授精。由于棕点石斑的生命节律在初一至初六，在此时间内挤卵为最佳的挤卵时间。
在本发明中，所述步骤(5)c中，清水石斑鱼精液较浓密，须用海水稀释后使用，稀释的方法是：将备用的精液取出1ml，注入烧杯，加入9lm海水，晃动烧杯，将精液与海水快速混均，立即加入到已经加入海水的卵子中，从精子加入海水稀释至将稀释后的精液加入卵子中，全过程在1分钟内完成。本发明在人工授精时采用海水稀释法，实践中发现，清水石斑鱼精液浓度高，较粘稠，直接授精，孵化出仔鱼效率低，通过海水稀释后，能提高孵化出仔鱼放的效率。同时，稀释精子需在1分钟之内完成，由于精子非常小，被海水稀释后，会打断它在授精时启动能量的开关，因此，这个过程需在合理的时间内完成，时间又不能太长，不仅能有效保存精子的能量，且能提高孵化出仔鱼的效率。
在本发明中，杂种鱼的受精卵在24－25℃度水温条件下，胚胎发育时间约24－26h，如果预计到达目的地之前杂种鱼受精卵可能在运输过程中孵化出仔鱼，则不能使用受精卵运输的方式，应改为运输仔鱼。
在本发明中，所述步骤(7)中，运输受精卵，气温高时，包装箱中可加上适量冰袋降温，适宜的运输温度为24－25℃度；
较佳地，受精卵的在包装运输时，杂种受精卵受精卵经孵化8小时左右，胚胎发育至原肠期，即可将受精卵包装、运输至育苗场，受精卵在孵化24－26小时后，即可孵出仔鱼，用于人工育苗。包装运输方法采用用尼龙袋充氧运输法，一只70cm×40cm的尼龙袋，装上过滤海水5－8L，约占尼龙袋容积的1/4，放入受精卵100g，排除袋内空气，充进氧气并扎紧袋口，再用纸箱或泡沫塑料箱包装好，立即装上运输工具。
运输仔鱼的方法：待仔鱼全部出膜后，停止充气5～10min，仔鱼上浮到水面，死胚胎沉底，用排除死卵或未受精卵的方法将死胚胎和下层多余的水排除，从孵化桶的上层用盆小心将仔鱼取出，用尼龙袋充氧运输法，每千克受精卵孵出的仔鱼，需要包装成30袋。
综上所述，本发明实现了棕点石斑鱼与清水石斑鱼的属间杂交，获得了兼具二种亲本特点的杂交子一代鱼的仔鱼，用于后续的人工养殖，培育出的杂交鱼养殖性能好，肉质鲜美，性价比高。
以上对本发明的较佳实施方式进行了具体说明，但本发明并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明精神的前提下还可作出种种的等同变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。

Claims (1)

1.一种棕点石斑鱼与清水石斑鱼的人工杂交育种方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)亲本选择
a.雌性亲本：选择5龄以上、体型正常、无病害、活力强的健康棕点石斑鱼作为雌性亲本；
b.雄性亲本：选择5龄以上、体型正常、无病害、活力强的健康清水石斑鱼作为雄性亲本；
(2)亲本的培育
a.采用池塘控温培育亲本，保证二种亲本的性腺发育在时间上达到同步成熟；
b.棕点石斑鱼亲鱼培育池塘的规格及水温控制：培育亲本的池塘为露天池塘，取自然水温，池塘面积1亩，水深3－3.5m，设进、排水口各1个，培育密度200－300尾/亩，雌雄比例1：1，当春季水温上升至24℃开始进入强化培育；
c.清水石斑鱼亲鱼培育池塘的规格及水温控制：培育亲本的池塘须加盖保温棚，春季水温较同期的露天池塘水温高出2℃左右，池塘面积1亩，水深3－3.5m，设进、排水口各1个，培育密度150－200尾/亩，雌雄比例1：1；春季水温上升至26℃开始进入强化培育；
d.日常培育的饲料种类与投喂量：二种亲本都以小鱿鱼、蓝圆鲹、鲐鱼作为主要饲料，
适合的饲料鱼块长6－8cm、宽4－6cm，每天投喂饲料1次，下午投喂，每次投喂量控制在鱼体重的2％－2.5％；
e.强化培育的饲料种类与投喂量：春季水温上升，当露天池塘的水温上升至24℃时，加盖保温棚的池塘水温上升至26℃左右，二种亲本同时进入强化培育阶段，二种亲本都以小鱿鱼、蓝圆鲹、鲐鱼作为饲料，每个鱼块饲料中塞入维生素E软胶囊1粒50mg投喂，每天投喂1次，日投喂量为亲鱼体重的2－3％，实际投喂量受天气、水温条件影响而有增减；
(3)亲鱼性腺发育程度的检查和判断
a.对亲本进行强化培育二周后，每周从亲鱼群体中挑选部分个体进行一次成熟度检查；
b.棕点石斑鱼雌性亲本的检查：从棕点石斑鱼群体中选择雌性个体，置于平台上实施检查，外观上腹部隆起，生殖孔微红，即可初步判定为达到性成熟；
c.清水石斑鱼雄性亲本的检查：从清水石斑鱼群体中选择雄性个体，置于平台上实施检查，在鱼腹部，用手从鱼腹部向生殖孔方向推挤，能挤出白色精液的个体即已经达到性成熟；
(4)人工受精
a.采精：取清水石斑鱼成熟的雄性个体，用干毛巾将鱼腹部擦干，酒精棉球对生殖孔消毒，用手在鱼体腹部，从前向生殖孔方向推挤，任乳白色的精液从生殖孔流出，用10mL注射器，将精液吸取，一尾成熟的雄性个体可取得精液3－8mL，注入试管中，备用；
b.挤卵：用湿毛巾将棕点石斑鱼鱼体包裹，暴露生殖孔，操作者戴上乳胶手套，用手指插入鱼的生殖孔，将生殖孔打开，然后用手在鱼腹部从前向生殖孔方向推挤，成熟卵子即可流出，在生殖孔下方用盆接住流出的卵子；
c.人工授精：向盛有卵子的盆内加入干净海水，1千克卵子加入海水10L，一边加水一边轻轻搅动，同时加入经过海水稀释的清水石斑鱼精液，加入量为每千克卵子10mL，精卵混匀之后静置3－5min，之后用干净的海水冲洗受精卵3－4遍；
(5)受精卵的孵化
准备一个容积500L、底部设有排水阀的孵化桶，在孵化桶内放置气石充气，将经过步骤(4)处理过的受精卵放入孵化桶中孵化，受精卵孵化条件为水温25－30℃，盐度28－33，pH7.8～8.5，孵化密度为250－300万粒受精卵/m 3，孵化过程中，发现其中有死卵或未受精卵需及时排除，每2小时换水一次，每次换水量为孵化桶容积的一半，以保持孵化桶内海水的清新；
(6)受精卵的包装运输
a.杂种受精卵经孵化8小时左右，胚胎发育至原肠期，即将受精卵包装、运输至育苗场，受精卵在孵化24－26小时后，即可孵出仔鱼，用于人工育苗；
b.包装运输方法是用尼龙袋充氧运输法，一只70cm×40cm的尼龙袋，装上过滤海水5－8L，约占尼龙袋容积的1/4，放入受精卵100g，排除袋内空气，充进氧气并扎紧袋口，再用纸箱或泡沫塑料箱包装好，立即装上运输工具；
所述步骤(4)a中，将取出的精液注入试管，密封，4℃暂存，备用，暂存的精液在一周内仍有授精能力；
所述步骤(4)b中，对成熟雌性棕点石斑鱼合适的挤卵时机是农历初一至初六，人工授精操作的当天下午，提前从培育池塘中起捕棕点石斑鱼亲鱼，选择出雌性亲鱼，暂养于水泥池中，于20：00－24：00实施人工授精；
所述步骤(4)c中，清水石斑鱼精液较浓密，须用海水稀释后使用，稀释的方法是：将备用的精液取出1mL，注入烧杯，加入9mL海水，晃动烧杯，将精液与海水快速混均，立即加入到已经加入海水的卵子中，从精子加入海水稀释至将稀释后的精液加入卵子中，全过程在1分钟内完成；
杂种受精卵在24－25℃水温条件下，胚胎发育时间约24－26h，如果预计到达目的地之前杂种受精卵可能在运输过程中孵化出仔鱼，则不能使用受精卵运输的方式，改为运输仔鱼；
所述步骤(6)中，运输受精卵，气温高时，包装箱中需加上适量冰袋降温，适宜的运输温度为24－25℃度；
所述运输仔鱼的方法，步骤如下：待仔鱼全部出膜后，停止充气5～10min，仔鱼上浮到水面，死胚胎沉底，用排除死卵或未受精卵的方法将死胚胎和下层多余的水排除，从孵化桶的上层用盆小心将仔鱼取出，用尼龙袋充氧运输法，每千克受精卵孵出的仔鱼，需要包装成30袋。
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Denomination of invention: Artificial hybridization breeding method for epinephelus fuscoguttatus and epinephelus polyphekadion

Effective date of registration: 20200616

Granted publication date: 20190419

Pledgee: Agricultural Development Bank of China Lingshui Li Autonomous County sub branch

Pledgor: HAINAN CHENHAI AQUATIC Co.,Ltd.

Registration number: Y2020980003102