CN105473590A - 用于治疗增殖性障碍的1h-吡唑并[3,4-b]吡啶衍生物及其药物组合物 - Google Patents

用于治疗增殖性障碍的1h-吡唑并[3,4-b]吡啶衍生物及其药物组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN105473590A
CN105473590A CN201480046541.6A CN201480046541A CN105473590A CN 105473590 A CN105473590 A CN 105473590A CN 201480046541 A CN201480046541 A CN 201480046541A CN 105473590 A CN105473590 A CN 105473590A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
compounds
disease
cancer
equivalent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201480046541.6A
Other languages
English (en)
Inventor
L·R·M·萨尼莱
J·于克
G·J·戴克斯
B·A·施密特
J·布兰克
A·S·巴特勒
S·N·A·博蒙特
F·M-E·伯纳埃尔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Galapagos NV
Original Assignee
Galapagos NV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Galapagos NV filed Critical Galapagos NV
Publication of CN105473590A publication Critical patent/CN105473590A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明公开式I化合物，其中R1、R2、R3、R4、L及X如本文中定义。本发明涉及化合物、其制备方法、包含该化合物的药物组合物，及其用于预防喝/或治疗炎性病症、2型糖尿病、神经疾病及/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(特别是转移性疾病及/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解及/或软骨稳态破坏、特别是用于预防和/或治疗癌症的用途。本发明亦公开使用该化合物的治疗方法，通过施用本发明的化合物用于预防及/或治疗所述疾病。

Description

用于治疗增殖性障碍的1H-吡唑并[3,4-B]吡啶衍生物及其药物组合物
技术领域
本发明涉及化合物及其用于预防和/或治疗炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏的用途。
在另一特定方面中，本发明化合物是艾普林(Ephrin)(Eph)的抑制剂，其是受体蛋白质-酪氨酸激酶(RTK)的最大已知亚家族的成员。
本发明亦提供本发明化合物的制备方法、包含本发明化合物的药物组合物、通过施用本发明的化合物预防和/或治疗包括以下的疾病的方法：炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏。
发明背景
艾普林受体(Eph)超家族在激酶结构域中共享65-90％序列同源性且在细胞外结构域中共享30-70％序列同源性。已自脊椎动物果蝇属(Drosophila)及秀丽隐杆线虫(C.elegans)鉴别出Eph超家族的至少15个成员，且其是受体酪氨酸激酶(RTK)的最大亚家族，其本身分成两个亚组。第一组是基于配体结合亲和力，而第二组是基于细胞外结构域的结构。
艾普林配体在下文中称作“Ephrin”且结合至下文称作“Eph”的Ephrin受体。
EphA(A1-A9)通常结合经由糖基磷脂酰肌醇锚固连接至质膜的EphrinA成员，而EphB(B1-B6)受体通常结合横跨细胞膜的EphrinB成员。在结构上，Eph受体包含负责配体结合的细胞外球形结构域、富含半胱氨酸的区域、两个纤连蛋白型III重复、横跨细胞膜的区域及酪氨酸激酶结构域(Tandon等人,2011)。
在Eph家族内，发生受体-配体结合，而该家族的每一亚类的间无区分，例如，EphA4以高亲和力结合EphrinB(Murai及Pasquale,2003)。此外，Ephrin是膜结合蛋白，其调介毗邻细胞间的双向信号。毗邻细胞上的Eph与Ephrin之间的相互作用促进该分子成簇，此导致涉及由EphRTK调介的酪氨酸磷酸化的信号的起始，且进而引起各种细胞内信号传导途径的活化。
已知Ephrin-Eph信号传导在CNS中的作用，其控制神经元网络的发育、轴突导向及神经系统修复(Pasquale,2008)。此外，在正常胚胎发育及内稳态维持期间，Eph及Ephrin的细胞-细胞接触依赖性功能备紧密调控。然而，在由于细胞接触损失所致的癌发生期间，正常EphA2-EphrinA1信号传导受破坏，从而导致EphA2过表达及致癌信号转导。此失调的信号传导导致细胞骨架调节、细胞黏附、迁移、转移、增生及血管发生，其皆是癌发生的标志(Tandon等人,2011；Xi等人,2012)。
EphA2在若干种癌症中过表达，该癌症包括乳癌、卵巢癌、前列腺癌、胰脏癌、肺癌、黑色素瘤及结肠直肠癌以及多形胶质母细胞瘤。在大比例的病例中，EphA2过表达与晚期疾病或转移期疾病相关。
在乳癌中，EphA2蛋白质含量在侵袭性乳癌细胞系相对非转换哺乳动物上皮细胞中有所增加，而乳癌细胞中的EphA2过表达与表皮生长因子受体(ER)表达呈负相关。令人感兴趣的是，EphA2的组成型表达赋予人类表皮生长因子受体-2(HER2)过表达细胞中的曲妥珠单抗(trastuzumab)固有抗性，且因此降低曲妥珠单抗的治疗效应。该发现进一步由以下临床观察支持：一方面使高EphA2表达程度与降低的整体存活率及无复发的存活率相关(Brantley-Sieders等人,2011)，另一方面使EphA2mRNA含量增加与HER2阳性乳癌患者的整体存活率相关(Zhuang等人,2010)。因此，EphA2表达的抑制可代表用以逆转曲妥珠单抗(tratuzumab)抗性的有前景的途径。
另外，亦报导EphA2反义寡核苷酸减少了三重阴性乳癌细胞系MDA-MB-231的生长(Carles-Kinch等人,2002)。
除EphA2在乳癌中起关键作用外，已报导若干其他Eph的肿瘤启动子作用和/或其表达与较差预后相关，如EphA4、EphB4及EphB6。
EphB家族成员除对神经元及血管发生成型具有作用外，亦在炎症(Ivanov等人,2005；Kitamura等人,2008；Zamora等人,2006)、骨代谢(Zhao等人,2006)及骨关节炎骨重塑(KwanTat等人,2008)中具有作用。
最后，EphA及EphrinA已经被认为在调控葡萄糖中、更特定而言在胰脏β细胞中发挥作用。据报导EphA负面地调控胰岛素产生，而经由Ephrin配体的逆转信号传导将上调胰岛素产生。增加的葡萄糖含量触发去磷酸化且因此使受体激酶灭活并引起Ephrin逆转信号传导。因此，胰岛素稳态程度取决于配体与受体之间的相互作用及受体的活性态(Konstantinova等人,2007)。
尽管目前存在对于2型糖尿病的多种治疗，但其伴有或多或少的严重副作用(Bolen等人,2007)。因此，仍需要有效治疗糖尿病。
因此，需要鉴别可有效治疗和/或预防这些疾病的其他化合物。
US2010/0113415(Rajapakse等人,2010)公开了1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基化合物，其皆应在3位处具有氨基。
本发明提供化合物、其制备方法及包含本发明化合物以及适宜药物载剂的药物组合物，该化合物及组合物可用于治疗和/或预防这些疾病。本发明亦提供本发明化合物的用途，其用于制备用于预防和/或治疗包括以下的疾病的药物：炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏。
发明内容
本发明涉及化合物及其用途，其用于预防和/或治疗炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏。具体而言，本发明化合物是EphA2的抑制剂。
本发明亦提供这些化合物的制备方法、包含这些化合物的药物组合物及通过施用本发明化合物预防和/或治疗炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏的方法。
因此，在本发明的第一方面中，提供具有式(I)的本发明化合物：
其中
X是N或CH；
L是-NH(C＝O)-或-C(＝O)NH-；
R1是
-CN，
卤代，
C1-4烷基，任选被一个或多个独立选择的R6a基团取代，
C1-4烷氧基，任选被一个或多个独立选择的R6b基团取代，
C3-4环烷基，
苯基，
-SO2C1-4烷基，或
NR7aR7b；
R2是H、环丙基、C1-4烷基(任选被一个或多个卤代取代)或C1-4烷氧基；
R3是-CH3、-CH2CH3或Cl；
R4是
C1-2烷基，任选被一个OH取代，
C1-2烷基，被一个OH及一个包含一个或两个独立地选自N、O及S的杂原子的5至6元杂环烷基取代，
C3-6环烷基，任选被一个OH取代；
每一R6a皆是
OH，
卤代，或
C1-4烷氧基；
每一R6b皆是
OH，
卤代，
C1-4烷氧基，
-NR8aR8b，或
5至6元杂环烷基，其包含一个或两个独立地选自N、O及S的杂原
子，任选被一个C1-4烷基取代；
每一R7a、R7b皆是独立地选自H及C1-4烷基；且
每一R8a或R8b皆是独立地选自H及C1-4烷基。
在特定实施方案中，本发明化合物是EphA或EphB的抑制剂。在特定实施方案中，本发明化合物是EphA2的抑制剂。
令人惊讶的是，与先前技术中阐述的结构上类似的化合物相比，式I的本发明化合物呈现改良的体内暴露。较高暴露可容许降低化合物的剂量水平，且因此使用低剂量水平可有益于降低药物-药物相互作用、副作用和/或毒性。本发明化合物亦显示体内活性，具体而言减少/阻断肿瘤生长，且具体而言可用于预防和/或治疗癌症。
提供本发明化合物，其用于预防和/或治疗炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏。
在又一方面中，本发明提供药物组合物，其包含本发明化合物及药物载剂、赋形剂或稀释剂。在特定方面中，药物组合物可另外包含适于与本发明化合物组合使用的进一步治疗活性成份。在更特定方面中，进一步治疗活性成份是用于预防和/或治疗炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏的药剂。
另外，可用于本文所公开药物组合物及治疗方法中的本发明化合物在制备及使用时皆呈药学上可接受的形式。
在本发明的又一方面中，本发明提供治疗哺乳动物、具体而言人类的方法，其具有选自尤其本文所列举哪些的病症，具体而言炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏，该方法包括施用有效量的如本文所述的本发明药物组合物或化合物。
本发明亦提供药物组合物，其包含本发明化合物及适宜药物载剂、赋形剂或稀释剂，其用于医药中。在特定方面中，药物组合物用于预防和/或治疗炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏。
在其他方面中，本发明提供合成本发明化合物的方法，其中代表性合成方案及途径将稍后揭示于本文中。
通过考虑随后的详细说明，熟习此项技术者将明了其他目的及优势。
应了解，本发明化合物可经代谢以产生生物活性代谢物。
附图
图1：图1显示比较化合物A、紫杉醇(paclitaxel)及本发明化合物(化合物55)的体内肿瘤生长进化。
发明详述
定义
以下术语意欲具有下文所述关于其的含义且可用于理解本发明的说明及既定范畴。
在阐述本发明(其可包括化合物、含有这些化合物的药物组合物及使用这些化合物及组合物的方法)时，除非另外指明，否则以下术语(若存在)具有以下含义。亦应了解，在本文阐述时，上下文定义的部分中的任一者可经多种取代基取代，且各个定义意欲在如下文所述的其范畴内包括经取代的部分。除非另外指明，否则术语“被取代”如下文所述定义。应进一步了解，术语“基团”(“group”及“radical”)在本文中使用时可视为可互换。
冠词“一”(“a”及“an”)可在本文中用于指一或一以上(即至少一)该冠词的文法受词。举例而言，“类似物”意指一种类似物或一种以上类似物。
“烷基”意指具有指定数目碳原子的直链或支链脂族烃。特定烷基具有1至8个碳原子。更具体而言是具有1至6个碳原子的低级烷基。进一步特定基团具有1至4个碳原子。例示性直链基团包括甲基、乙基、正丙基及正丁基。支链意指一或多个低级烷基如甲基、乙基、丙基或丁基附接至直链烷基链，例示性支链基团包括异丙基、异丁基、叔丁基及异戊基。
“烷氧基”是指基团-OR26，其中R26是具有指定数目碳原子的烷基。特定烷氧基是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基及1,2-二甲基丁氧基。特定烷氧基是即具有1至6个碳原子的低级烷氧基。其他特定烷氧基具有1至4个碳原子。
“亚烷基”是指具有指定数目碳原子、具体而言具有1至6个碳原子且更具体而言1至4个碳原子的二价烯烃基团，其可为直链或支链。此术语由如亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2-CH2-)或-CH(CH3)-等基团例示。
“烯基”是指具有指定数目碳原子的单价烯属(不饱和)烃基团。特定烯基具有2至8个碳原子且更具体而言2至6个碳原子，其可为直链或支链且具有至少1个且具体而言1至2个烯烃不饱和位点。特定烯基包括乙烯基(-CH＝CH2)、正丙烯基(-CH2CH＝CH2)、异丙烯基(-C(CH3)＝CH2)等。
“氨基”是指基团-NH2。
“芳基”是指通过自母体芳族环系统的单一碳原子移除一个氢原子衍生的单价芳族烃基团。具体而言，芳基是指具有指定数目环原子的单环或多环状芳族环结构。特定而言，该术语包括包含6至10个环成员的基团。若芳基是单环系统，则其优先含有6个碳原子。具体而言，芳基包括苯基、萘基、茚基及四氢萘基。
“环烷基”是指具有指定数目环原子的单环或多环状非芳族烃基环结构。环烷基可具有3至10个碳原子且具体而言3至7个碳原子。这类环烷基包括(例如)单一环结构，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基及环庚基。
“氰基”是指基团-CN。
“卤代”或“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)及碘(I)。特定卤代是氟或氯。
“杂”在用于阐述化合物或化合物上存在的基团时意指化合物或基团中的一或多个碳原子由氮、氧或硫杂原子置换。杂可适于上述任何烃基，例如具有1至4、具体而言1至3个杂原子、更通常1或2个杂原子、例如单一杂原子的烷基、例如杂烷基；环烷基、例如杂环烷基；芳基，例如杂芳基等。
“杂芳基”意指具有指定环原子数目的单环或多环状芳族环结构，其包括一或多个独立地选自O、N及S的杂原子。具体而言，芳族环结构可具有5至10个环成员。杂芳基可为例如5元或6元单环，或自稠合5元和6元环或两个稠合6元环、进一步举例而言两个稠合5元环形成的二环结构。每一环皆可含有至多4个通常选自氮、硫及氧的杂原子。通常，杂芳基环将含有至多4个杂原子、更通常至多3个杂原子、更通常至多2个、例如单一杂原子。在一个实施方案中，杂芳基环含有至少一个环氮原子。杂芳基环中的氮原子可具有碱性，如同在咪唑或吡啶的情形下，或基本上无碱性，如同在吲哚或吡咯氮的情形下。一般而言，杂芳基、包括环的任何氨基取代基中存在的碱性氮原子的数目将小于5。5元单环杂芳基的实例包括但不限于吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、呋咱、噁唑、噁二唑、噁三唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、吡唑、三唑及四唑基团。6元单环杂芳基的实例包括但不限于吡啶、吡嗪、哒嗪、嘧啶及三嗪。含有稠合至另一5元环的5元环的二环杂芳基的特定实例包括但不限于咪唑并噻唑及咪唑并咪唑。含有稠合至5元环的6元环的二环杂芳基的特定实例包括但不限于苯并呋喃、苯并噻吩、苯并咪唑、苯并噁唑、异苯并噁唑、苯并异噁唑、苯并噻唑、苯并异噻唑、异苯并呋喃、吲哚、异吲哚、异吲哚酮、吲嗪、吲哚啉、异吲哚啉、嘌呤(例如腺嘌呤、鸟嘌呤)、吲唑、吡唑并嘧啶、三唑并嘧啶、苯并间二氧杂环戊烯及吡唑并吡啶基团。含有两个稠合6元环的二环杂芳基的特定实例包括但不限于喹啉、异喹啉、苯并二氢吡喃、二氢苯并噻喃、苯并吡喃、异苯并吡喃、色满、异色满、苯并二噁烷、喹嗪、苯并噁嗪、苯并二嗪、吡啶并吡啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、酞嗪、萘啶及蝶呤基团。特定杂芳基是衍生自噻吩、吡咯、苯并噻吩、苯并呋喃、吲哚、吡啶、喹啉、咪唑、噁唑及吡嗪的那些。
代表性杂芳基的实例包括以下：
其中每一Y选自>C(＝O)、NH、O及S。
稠合杂芳基环系统亦可包括碳环且仅需要包括一个杂芳基环。杂芳基环的实例包括但不限于二氢苯并呋喃、二氢吲哚、二氢苯并噻吩、二氢吡啶并呋喃、二氢吡咯并吡啶、二氢噻吩并吡啶、二氢苯并二噁英、二氢苯并氧硫杂环己二烯(dihydrobenzooxathiine)、二氢苯并噁嗪、二氢苯并噻嗪、二氢二氧杂环己烯并吡啶(dihydrodioxinopyridine)、二氢二氧杂氮杂茚(dihydrodioxaazaindene)。
这类代表性杂芳基的实例包括以下：
其中每一P选自N及CH；Y选自NH、O及S；且W选自CH2、NH、O及S。
本文所用术语“杂环烷基”意指稳定的单环或多环状非芳族环结构，其包括一或多个独立地选自O、N及S的杂原子且环原子的数目经指定。非芳族环结构可具有4至10个环成员且具体而言4至7个环成员。稠合杂环系统可包括碳环且仅需要包括一个杂环。杂环的实例包括但不限于吗啉、哌啶(例如1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基及4-哌啶基)、吡咯烷(例如1-吡咯烷基、2-吡咯烷基及3-吡咯烷基)、吡咯烷酮、吡喃、四氢呋喃、四氢噻吩、二噁烷、四氢吡喃(例如4-四氢吡喃基)、咪唑啉、咪唑烷酮、噁唑啉、噻唑啉、2-吡唑啉、吡唑烷、哌嗪及N-烷基哌嗪如N-甲基哌嗪。其他实例包括硫吗啉及其S-氧化物及S,S-二氧化物(具体而言硫吗啉)。再一些实例包括氮杂环丁烷、哌啶酮、哌嗪酮及N-烷基哌啶如N-甲基哌啶。杂环烷基的特定实例示于以下示例性实例中：
其中每一W选自CH2、NH、O及S；且每一Y选自NH、O、C(＝O)、SO2及S。
本文所用术语“杂环烯基”意指“杂环烷基”，其中环的一个键经还原，因此该环包含双键。杂环烯基的特定实例示于以下示例性实例中：
其中每一W选自CH2、NH、O及S；且每一Y选自NH、O、C(＝O)、SO2及S。
“羟基”是指基团-OH。
“氧代基”是指基团＝O。
“被取代”是指一或多个氢原子各自独立地被一或多个相同或不同取代基置换的基团。
“磺基”或“磺酸”是指如-SO3H等基团。
“巯基”是指基团-SH。
本文所用术语“被一或多个取代”是指1至4个取代基。在一个实施方案中，其是指1至3个取代基。在其他实施方案中，其是指一个或两个取代基。在再一实施方案中，其是指一个取代基。
“硫代烷氧基”是指基团-SR26，其中R26具有指定数目碳原子且具体而言C1-C8烷基。特定硫代烷氧基是硫代甲氧基、硫代乙氧基、正硫代丙氧基、异硫代丙氧基、正硫代丁氧基、叔硫代丁氧基、仲硫代丁氧基、正硫代戊氧基、正硫代己氧基及1,2-二甲基硫代丁氧基。特定硫代烷氧基是低级硫代烷氧基，即具有1至6个碳原子。其他特定烷氧基具有1至4个碳原子。
熟习有机合成技术者应认识到，化学上可行的稳定杂环，无论其是芳族或是非芳族，其中的杂原子的最大数目是由环的大小、不饱和度及杂原子的价决定。一般而言，杂环可具有1至4个杂原子，只要杂芳族环在化学上可行且稳定即可。
“药学上可接受”意指已获得联邦或州政府管理机构或除美国外的国家的相应机构批准或可获得批准，或列示于美国药典(USPharmacopoeia)或其他公认药典中用于动物、且更具体而言用于人类中的那些。
“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，其在药学上可接受且具有母体化合物的期望药理活性。具体而言，该等盐是无毒性的，可为无机或有机酸加成盐及碱加成盐。特定而言，该等盐包括：(1)酸加成盐，其是利用无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成；或利用有机酸如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、羟乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、1,2-乙烷-二磺酸、2-羟基乙烷磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环[2.2.2]-辛-2-烯-1-甲酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、黏康酸等形成；或(2)在母体化合物中存在的酸性质子由以下物质置换时形成的盐：金属离子，例如碱金属离子、碱土离子或铝离子；或与有机碱如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺等的配合物。盐进一步包括(仅举例而言)钠、钾、钙、镁、铵、四烷基铵等；且在化合物含有碱性官能基时，盐包括无毒性有机或无机酸的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、草酸盐等。术语“药学上可接受的阳离子”是指酸性官能基的可接受的阳离子抗衡离子。该等阳离子是由钠、钾、钙、镁、铵、四烷基铵阳离子等例示。
“药学上可接受的媒剂”是指与本发明化合物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体。
“前药”是指具有可裂解基团且通过溶剂分解或在生理条件下变为具有体内医药活性的本发明化合物的化合物，包括本发明化合物的衍生物。该等实例包括但不限于胆碱酯衍生物等、N-烷基吗啉酯等。
“溶剂合物”是指通常通过溶剂分解反应与溶剂缔合的形式的本发明化合物。此物理缔合包括氢键合。常用溶剂包括水、乙醇、乙酸等。本发明化合物可以例如以结晶形式制得且可经溶剂化或水合。适宜溶剂合物包括药学上可接受的溶剂合物如水合物，且进一步包括化学计量的溶剂合物及非化学计量的溶剂合物。在某些情形下，例如在结晶固体的晶格中纳入一或多个溶剂分子时，溶剂合物能够分离。“溶剂合物”涵盖溶液相及可分离溶剂合物。代表性溶剂合物包括水合物、乙醇合物及甲醇合物。
“个体”包括人类。术语“人类”、“患者”及“个体”在本文中可互换使用。
“有效量”意指本发明化合物在施用个体用于治疗疾病时足以实现对疾病的治疗的量。“有效量”可视化合物、疾病及其严重程度及欲治疗个体的年龄、体重等变化。
“防止”(preventing或prevention)是指降低患上或发生疾病或病症的风险，即在疾病发作前使得可能暴露于致病因素或易感染该疾病的个体中不出现该疾病的至少一种临床症状。
术语“预防”与“防止”相关，且是指措施或程序，其目的是防止而非治疗或治愈疾病。预防措施的非限制性实例可包括施用疫苗；向由于例如固定而处于血栓形成风险的住院患者施用低分子量肝素；及在拜访疟疾流行或感染疟疾的风险较高的地理区域前预先施用抗疟疾剂如氯喹。
在一个实施方案中，任何疾病或病症的“治疗”(“treating”或“treatment”)是指改善疾病或病症(即遏制疾病或减轻其至少一种临床症状的表现、程度或严重程度)。在另一实施方案中，“治疗”(“treating”或“treatment”)是指改善至少一个物理参数，其可不能由个体辨别。在再一实施方案中，“治疗”(“treating”或“treatment”)是指在物理上(例如可辨别症状的稳定)、在生理上(例如物理参数的稳定)或二者上调节疾病或病症。在又一实施方案中，“治疗”(“treating”或“treatment”)是关于减缓疾病的进展。
本文所用术语“炎性病症”是指包括以下的病症群：类风湿性关节炎、骨关节炎、幼年型特发性关节炎、银屑病、炎性肠病(例如克罗恩氏病(Crohn’sdisease)、惠普尔(Whipple)、慢性溃疡性结肠炎或结肠炎)、强直性脊柱炎，及短期或长期直接或间接涉及软骨的有关疾病，例如关节的疾病。具体而言，该术语是指类风湿性关节炎、原发性及继发性骨关节炎及炎性肠病。
本文所用术语“神经和/或神经退化性疾病”是指包括以下的病症群：中风(包括缺血性中风)、脊髓损伤(包括瘫痪)、创伤性脑损伤、阿兹海默氏病(Alzheimer’sdiseases)、帕金森氏病(Parkinson’sdisease)、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿氏病(Huntington’sdiseases)及多发性硬化。
本文所使用术语“自体免疫疾病”是指包括以下的疾病群：阻塞性呼吸道疾病，包括例如以下病症：COPD、哮喘(例如内源性哮喘、外源性哮喘、粉尘性哮喘、小儿哮喘)、具体而言慢性或顽固性哮喘(例如迟发性哮喘及呼吸道高反应性)、支气管炎(包括支气管炎哮喘)、系统性红斑狼疮(SLE)、皮肤红斑狼疮、狼疮肾炎、皮肌炎、舍格伦综合征(Sjogren’ssyndrome)、多发性硬化、银屑病、干眼病、I型糖尿病及其相关并发症、特应性湿疹(特应性皮炎)、甲状腺炎(桥本氏(Hashimoto's)及自体免疫甲状腺炎)、接触性皮炎及其他湿疹性皮炎、炎性肠病(例如克罗恩氏病及溃疡性结肠炎)、动脉粥样硬化及肌萎缩侧索硬化。具体而言，该术语是指COPD、哮喘、系统性红斑狼疮、I型糖尿病及炎性肠病。
本文所使用术语“增殖性疾病”是指例如以下病症：癌症(例如子宫平滑肌肉瘤、乳癌或前列腺癌)、骨髓组织增殖性障碍(例如真性红细胞增多症、原发性血小板增多症及骨髓纤维化)、白血病(例如急性髓样白血病、急性及慢性成淋巴细胞性白血病)、转移性疾病、多发性骨髓瘤、银屑病、再狭窄症、硬皮病或纤维化。具体而言，该术语是指癌症、白血病、转移性疾病、多发性骨髓瘤和/或银屑病。
本文所用术语“癌症”是指皮肤或体器官、例如但不限于乳房、前列腺、肺、肾、胰脏、胃或肠中的细胞的恶性或良性生长。癌症往往渗入毗邻组织并扩散(转移)至远程器官，例如至骨、肝、肺或脑。本文所用术语癌症包括转移性肿瘤细胞类型(例如但不限于黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤及肥大细胞瘤)及组织癌类型(例如但不限于结肠直肠癌、小细胞肺癌及非小细胞肺癌、乳癌、胰脏癌、膀胱癌、肾癌、胃癌、胶质母细胞瘤、原发性肝癌、卵巢癌、前列腺癌、尿道癌、甲状腺癌、食道癌及子宫平滑肌肉瘤)。具体而言，术语“癌症”是指急性成淋巴细胞性白血病、急性髓样白血病、肾上腺皮质癌、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、非典型畸胎样/杆状肿瘤(rhabdoidtumor)、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌(骨肉瘤及恶性纤维组织细胞瘤)、脑干胶质瘤、脑瘤、脑及脊髓肿瘤、乳癌、支气管肿瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt'slymphoma)、子宫颈癌、慢性成淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、结肠癌、结肠直肠癌、颅咽管瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、胚胎肿瘤、子宫内膜癌、室管膜母细胞瘤(ependymoblastoma)、室管膜瘤(ependymoma)、食管癌、肿瘤的尤因氏肉瘤(Ewingsarcoma)家族、眼癌、成视网膜细胞瘤、胆囊癌、胃(gastric，stomach)癌、胃肠道类癌肿瘤、胃肠道基质肿瘤(GIST)、胃肠道间质细胞肿瘤、生殖细胞肿瘤(germcelltumor)、神经胶质瘤、多毛细胞白血病、头颈癌、肝细胞(肝)癌、何杰金氏淋巴瘤(Hodgkinlymphoma)、下咽癌(hypopharyngealcancer)、眼内黑色素瘤、胰岛细胞肿瘤(内分泌胰脏)、卡波西氏肉瘤(Kaposisarcoma)、肾癌、兰格罕氏细胞组织细胞增生症(Langerhanscellhistiocytosis)、喉癌、白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性髓样白血病、慢性成淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、多毛细胞白血病、肝癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、伯基特氏淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、淋巴瘤、沃尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrommacroglobulinemia)、成神经管细胞瘤(medulloblastoma)、髓上皮瘤(medulloepithelioma)、黑色素瘤、间皮瘤、口腔癌、慢性骨髓性白血病、髓样白血病、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、神经母细胞瘤、非何杰金氏淋巴瘤、非小细胞肺癌、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、骨的恶性纤维组织细胞瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞肿瘤、卵巢低度潜在恶性肿瘤、胰脏癌、乳头状瘤病、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌(pharyngealcancer)、中间体分化的松果体实质肿瘤(pinealparenchymaltumorsofintermediatedifferentiation)、成松果体细胞瘤(pineoblastoma)及幕上原始神经外胚层肿瘤(supratentorialprimitiveneuroectodermaltumors)、垂体瘤、浆细胞赘瘤/多发性骨髓瘤、胸膜肺胚细胞瘤(pleuropulmonaryblastoma)、原发性中枢神经系统淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞(肾)癌、成视网膜细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、肿瘤的尤因氏肉瘤家族、卡波西氏肉瘤、塞扎里综合征(Sezarysyndrome)、皮肤癌、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃(stomach，gastric)癌、幕上原始神经外胚层肿瘤、T细胞淋巴瘤、睪丸癌、喉癌、胸腺瘤及胸腺癌、甲状腺癌、尿道癌、子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌、沃尔登斯特伦巨球蛋白血症及威尔姆氏肿瘤(Wilmstumor)。
本文所用术语“白血病”是指血液及血液形成器官的肿瘤性疾病。该疾病可引起骨髓及免疫系统功能障碍，使得宿主高度易于感染及流血。具体而言，术语白血病是指急性髓样白血病(AML)及急性成淋巴细胞性白血病(ALL)及慢性淋巴胚细胞白血病(CLL)。
本文所用术语“转移性疾病”是指涉及病原性微生物或癌性细胞通常通过血管或淋巴自初始位点传播至体内别处的一或多个位点的疾病。具体而言，转移性疾病是指胆管癌、结肠癌、胆囊癌、恶性黑色素瘤、黏液瘤、神经内分泌肿瘤、乳房佩吉特病(Paget'sdisease)、直肠癌、上腔静脉综合征、外阴癌。
本文所用术语“异常血管发生相关的疾病”是指因调介血管发生的过程失调引起的疾病。具体而言，异常血管发生相关的疾病是指动脉粥样硬化、高血压、肿瘤生长、炎症、类风湿性关节炎、湿型黄斑变性、脉络膜新生血管形成、视网膜新生血管形成及糖尿病视网膜病变。
本文所使用术语“涉及降解和/或软骨稳态破坏的疾病”包含例如以下病症：骨关节炎、银屑病关节炎、幼年型类风湿性关节炎、痛风性关节炎、败血性或感染性关节炎、反应性关节炎、反射性交感神经营养障碍(reflexsympatheticdystrophy)、痛性营养障碍(algodystrophy)、软骨发育不全(achondroplasia)、蒂策(Tietze)综合征或肋软骨炎(costalchondritis)、纤维肌痛、骨软骨炎、神经源性或神经病性关节炎、关节病、结节病(sarcoidosis)、淀粉样变性、关节积水(hydarthrosis)、周期性疾病(periodicaldisease)、类风湿性脊柱炎、关节炎的地方性形式(如地方性变形性骨关节炎)、姆塞莱尼病(Mselenidisease)及韩地勾都病(Handigodudisease)；由纤维肌痛、系统性红斑狼疮、硬皮病及强直性脊柱炎造成的退化。
“本发明化合物”及等效表达意指涵盖如本文所述通式的化合物，该表达包括药学上可接受的盐及溶剂合物、例如水合物及药学上可接受的盐的溶剂合物。类似地，若上下文如此允许，则在提及中间体(不管是否主张其自身)意指涵盖其盐及溶剂合物。
当在本文中提及范围，例如但不限于C1-8烷基时，所述范围应视为该范围各成员的表示。
本发明化合物的其他衍生物以其酸及酸衍生物形式具有活性，但酸敏感性形式经常在哺乳动物有机体中提供溶解性、组织兼容性或延迟释放的优势(Bundgaard,1985)。前药包括业内从业人员熟知的酸衍生物，例如通过母体酸与适宜醇的反应制备的酯或通过母体酸化合物与取代或未取代的胺或酸酐或混合酐的反应制备的酰胺。衍生自侧接在本发明化合物上的酸性基团的简单脂族或芳族酯、酰胺及酐具体而言是有用的前药。在一些情形下，期望制备双酯型前药，例如(酰基氧基)烷基酯或((烷氧基羰基)氧基)烷基酯。具体而言，这类前药是本发明化合物的C1-8烷基、C2-8烯基、C6-10任选取代的芳基及(C6-10芳基)-(C1-4烷基)酯。
本文所用术语“同位素变体”是指于一或多个构成该化合物的原子处含有非天然比例的同位素的化合物。举例而言，化合物的“同位素变体”可含有一或多个非放射性同位素，例如氘(2H或D)、碳-13(13C)、氮-15(15N)等。应了解，在进行该同位素取代的化合物中，以下原子(若存在)可变，以使例如任何氢可为2H/D，任何碳可为13C，或任何氮可为15N，且该原子的存在及放置可在业内能力内确立。同样，本发明可包括利用放射性同位素制备同位素变体，在该情形下，例如其中所得化合物可用于药物和/或底物组织分布研究。放射性同位素氚即3H及碳-14即14C鉴于其易于纳入及简便检测方式特别可用于此目的。此外，可制备经正电子发射同位素如11C、18F、15O及13N取代的化合物，且可用于正电子发射断层成像(PET)研究用于检查底物受体占据。
本文提供的化合物的所有同位素变体(不管是否放射性)皆意欲涵盖于本发明范畴内。
亦应了解，具有相同分子式但其原子键合的性质或顺序不同或其原子空间排列不同的化合物称为“异构体”。其原子空间排列不同的异构体称为“立体异构体”。
彼此并非镜像的立体异构物称为“非对映异构体”且那些彼此是不可迭合镜像者称为“对映异构体”。在化合物具有不对称中心，例如其键合至4个不同基团时，一对对映异构体是可能的。对映异构物的特征可在于其不对称中心的绝对构型且由Cahn及Prelog的R-及S-测序规则或通过分子旋转偏振光平面的方式阐述，且指定为右旋或左旋(即分别为(+)或(-)-异构物)。手性化合物可以以个别对映异构体形式或以其混合物形式存在。含有相等比例的对映异构体的混合物称作“外消旋混合物”。
“互变异构体”是指特定化合物结构的可互换形式且氢原子及电子的位移可变的化合物。因此，可经由移动π电子及原子(通常为H)使两种结构平衡。举例而言，烯醇及酮是互变异构体，此乃因其易于通过用酸或碱处理而迅速相互转化。互变异构形式的另一实例是苯基硝基甲烷的酸-及硝基-形式，其同样是通过用酸或碱处理形成。
互变异构形式可能与达成目标化合物的最佳化学反应性及生物活性有关。
本发明化合物可具有一或多个不对称中心；因此，这类化合物可以以个别(R)-或(S)-立体异构物形式或以其混合物形式产生。
除非另外指明，否则说明书及权利要求中的特定化合物的说明及命名意欲包括其个别对映异构体及混合物(外消旋或其他形式)。业内熟知用于测定立体化学及分离立体异构体的方法。
应了解，本发明化合物可经代谢以产生生物活性代谢物。
本发明
本发明涉及化合物及其用途，其用于预防和/或治疗炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏。具体而言，本发明化合物是EphA2的抑制剂。
本发明亦提供制备这些化合物的方法、包含这些化合物的药物组合物及通过施用本发明化合物预防和/或治疗炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏的方法。
因此，在本发明的第一方面中，提供具有式(I)的本发明化合物：
其中
X是N或CH；
L是-NH(C＝O)-或-C(＝O)NH-；
R1是
-CN，
卤代，
C1-4烷基，任选被一个或多个独立选择的R6a基团取代，
C1-4烷氧基，任选被一个或多个独立选择的R6b基团取代，
C3-4环烷基，
苯基，
-SO2C1-4烷基，或
-NR7aR7b；
R2是H、环丙基、C1-4烷基(任选被一个或多个卤代取代)或C1-4烷氧基；
R3是-CH3、-CH2CH3或Cl；
R4是
C1-2烷基，任选被一个OH取代，
C1-2烷基，被一个OH及一个包含一个或两个独立地选自N、O及S的杂原子的5至6元杂环烷基取代，或
C3-6环烷基，任选被一个OH取代；
每一R6a是
OH，
卤代，或
C1-4烷氧基；
每一R6b是
OH，
卤代，
C1-4烷氧基，
-NR8aR8b，或
5至6元杂环烷基，其包含一个或两个独立地选自N、O及S的杂原子，任选被一个C1-4烷基取代；
每一R7a、R7b独立地选自H及C1-4烷基；且
每一R8a或R8b独立地选自H及C1-4烷基。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式II：
其中R1、R2、R3、R4及L如上文所定义。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R1是CN、F、或Cl。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R1是C1-4烷基。在特定实施方案中，R1是-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2或-C(CH3)3。在更特定实施方案中，R1是-CH3或-CH2CH3。在更特定实施方案中，R1是-CH3。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R1是被一或多个独立选择的R6a基团取代的C1-4烷基。在另一实施方案中，R1是-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2或-C(CH3)3，其各自被一或多个独立选择的R6a基团取代。在特定实施方案中，R1是被一个、两个或三个独立选择的R6a基团取代的C1-4烷基。在另一特定实施方案中，R1是-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2或-C(CH3)3，其各自被一个、两个或三个独立选择的R6a基团取代。在更特定实施方案中，R1是被一个R6a基团取代的C1-4烷基。在另一更特定实施方案中，R1是-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2或-C(CH3)3，其各自被一个R6a基团取代。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R6a是OH、卤代或C1-4烷氧基。在特定实施方案中，R6a是OH、F或Cl。在另一特定实施方案中，R6a是-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2或-OC(CH3)3。在更特定实施方案中，R6a是OH、F、Cl、-OCH3或-OCH2CH3。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R1是-CF3、-CH2CF3、-CH2OH或-CH2OCH3。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R1是C1-4烷氧基。在特定实施方案中，R1是-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2或-OC(CH3)3。在更特定实施方案中，R1是-OCH3或-OCH2CH3。在更特定实施方案中，R1是-OCH3。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R1是被一或多个独立选择的R6b基团取代的C1-4烷氧基。在另一实施方案中，R1是-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2或-OC(CH3)3，其各自被一或多个独立选择的R6b基团取代。在特定实施方案中，R1是被一个、两个或三个独立选择的R6b基团取代的C1-4烷氧基。在另一特定实施方案中，R1是-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2或-OC(CH3)3，其各自被一个、两个或三个独立选择的R6b基团取代。在更特定实施方案中，R1是被一个R6b基团取代的C1-4烷氧基。在另一更特定实施方案中，R1是-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2或-OC(CH3)3，其各自被一个R6b基团取代。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R6b是OH、卤代或C1-4烷氧基。在特定实施方案中，R6b是OH、F或Cl。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R6b是C1-4烷氧基。在特定实施方案中，R6b是-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2或-OC(CH3)3。在更特定实施方案中，R6b是-OCH3或-OCH2CH3。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R6b是-NR8aR8b，其中R8a及R8b如上文所述。在特定实施方案中，R8a及R8b各自独立地选自H、-CH3及-CH2CH3。在更特定实施方案中，R6b是-N(CH3)2或-N(CH3)CH2CH3。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R6b是包含一个或两个独立地选自N、O及S的杂原子的5至6元杂环烷基，任选被一个C1-4烷基取代。在特定实施方案中，R6b是吡咯烷基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基，其各自任选被C1-4烷基取代。在另一特定实施方案中，R6b是包含一个或两个独立地选自N、O及S的杂原子的5至6元杂环烷基，任选被-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2或-C(CH3)3取代。在更特定实施方案中，R6b是吡咯烷基、吗啉基、哌啶基或哌嗪基，其各自任选被-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2或-C(CH3)3取代。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R1是C3-6环烷基。在特定实施方案中，R1是环丙基、环丁基或环戊基。在更特定实施方案中，R1是环丙基。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R1是-SO2C1-4烷基。在特定实施方案中，R1是-SO2CH3、-SO2CH2CH3或-SO2CH(CH3)2。在更特定实施方案中，R1是-SO2CH3或-SO2CH2CH3。在最特定实施方案中，R1是-SO2CH3。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R1是-NR7aR7b，其中每一R7a及R7b皆如上文所述。在特定实施方案中，R7a及R7b各自独立地选自H、-CH3及-CH2CH3。在更特定实施方案中，R1是-N(CH3)2或-N(CH3)CH2CH3。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R2是H。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R2是环丙基。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R2是C1-4烷基。在特定实施方案中，R2是-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2或-C(CH3)3。在更特定实施方案中，R2是-CH3或-CH2CH3。在更特定实施方案中，R2是-CH3。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R2是被一或多个卤代取代的C1-4烷基。在另一实施方案中，R2是-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2或-C(CH3)3，其各自被一或多个卤代取代。在特定实施方案中，R2是被一或多个氟取代的C1-4烷基。在另一特定实施方案中，R2是-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2或-C(CH3)3，其各自被一或多个氟取代。在更特定实施方案中，R2是-CF3。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I或II，其中R2是C1-4烷氧基。在特定实施方案中，R2是-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2或-OC(CH3)3。在更特定实施方案中，R2是-OCH3或-OCH2CH3。在更特定实施方案中，R2是-OCH3。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式IIIa或IIIb：
其中X、L、R3及R4如前文所定义。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I-IIIb中的任一者，其中L是-NH(C＝O)-。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I-IIIb中的任一者，其中L是-C(＝O)NH-。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I-IIIb中的任一者，其中R3是-CH3。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I-IIIb中的任一者，其中R3是Cl。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式IVa或IVb：
其中X及R4如前文所定义。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I-IVb中的任一者，其中R4是C1-2烷基。在特定实施方案中，R4是-CH3或-CH2CH3。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I-IVb中的任一者，其中R4是被一个OH取代的C1-2烷基。在另一实施方案中，R4是-CH3或-CH2CH3，其各自被一个OH取代。在特定实施方案中，本发明化合物符合式I-IVb中的任一者，其中R4是-CH(OH)CH3。在更特定实施方案中，R4是
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I-IVb中的任一者，其中R4是被一个OH及一个包含一个或两个独立地选自N、O及S的杂原子的5至6元杂环烷基取代的C1-2烷基。在另一实施方案中，R4是-CH3或-CH2CH3，其各自被一个OH及一个包含一个或两个独立地选自N、O及S的杂原子的5至6元杂环烷基取代。在特定实施方案中，R4是被一个OH及一个选自吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基及吗啉基的杂环烷基取代的C1-2烷基。在另一特定实施方案中，R4是-CH3或-CH2CH3，其各自被一个OH及一个选自吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基及吗啉基的杂环烷基取代。在一个实施方案中，本发明化合物符合式I-IVb中的任一者，其中R4是：
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I-IVb中的任一者，其中R4是C3-6环烷基。在特定实施方案中，R4是环丙基、环丁基或环戊基。在更特定实施方案中，R4是环丙基。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I-IVb中的任一者，其中R4是被一个OH取代的C3-6环烷基。在另一实施方案中，R4是环丙基、环丁基或环戊基，其各自被一个OH取代。在一个实施方案中，本发明化合物符合式I-IVb中的任一者，其中R4是
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I-IVb中的任一者，其中X是N。
在一个实施方案中，本发明化合物符合式I-IVb中的任一者，其中X是CH。
在一个实施方案中，本发明化合物是选自：
N-(3-(3-(羟基甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺，
N-(3-(3-(1-羟基-2-吗啉代乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺，
N-(3-(3-(1-羟基-2-吗啉代乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺，
3-(3-(1-羟基-2-吗啉代乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基-N-(3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺，
3-(二甲基氨基)-N-(3-(3-(1-羟基-2-吗啉代乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)苯甲酰胺，
N-(3-(3-(1-羟基-2-吗啉代乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3,5-二甲基苯甲酰胺，
N-(3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺，
N-(3-(3-(1-羟基乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺，
N-(3-(3-(羟基甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺，
3,5-二甲氧基-N-(4-甲基-3-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)苯基)苯甲酰胺，
N-(5-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-3-基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺，
N-(3-(3-(羟基甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3,5-二甲基苯甲酰胺，
3,5-二甲氧基-N-(6-甲基-5-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)吡啶-3-基)苯甲酰胺，
N-(3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3-甲氧基-5-甲基苯甲酰胺，
N-(3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3-甲基-5-(2-吗啉代乙氧基)苯甲酰胺，
N-(3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3-(2-甲氧基乙氧基)-5-甲基苯甲酰胺，
N-(4-氯-3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)苯基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺，
N-(3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3-(2-羟基乙氧基)-5-甲基苯甲酰胺，
3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-N-(3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-5-甲基苯甲酰胺，
N-(3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3-甲基-5-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)苯甲酰胺，
N-(3-(3-(1-羟基乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3-甲基-5-(2-吗啉代乙氧基)苯甲酰胺，
N-(3-(3-(1-羟基环丙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺，
3-(2-氨基乙氧基)-N-(3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-5-甲基苯甲酰胺，
3-(3-氨基丙氧基)-N-(3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-5-甲基苯甲酰胺，
N-(4-乙基-3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)苯基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺，
N-(3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺，
N-(3-(3-(1-羟基乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺，
3-环丙基-N-(5-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-3-基)-5-甲氧基苯甲酰胺，
3-(2-氨基乙氧基)-N-(3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-5-甲氧基苯甲酰胺，
N-(3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3-甲氧基-5-(2-吗啉代乙氧基)苯甲酰胺，
N-(5-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-3-基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺，
3-(2-氨基乙氧基)-N-(5-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-3-基)-5-甲氧基苯甲酰胺，
3-(3-氨基丙氧基)-N-(3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-5-甲氧基苯甲酰胺，
3-(3-氨基丙氧基)-N-(5-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-3-基)-5-甲氧基苯甲酰胺，
(S)-N-(3-(3-(1-羟基乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺，
(R)-N-(3-(3-(1-羟基乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺，
N-(5-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-3-基)-3,5-二甲基苯甲酰胺，
3-环丙基-N-(3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-5-甲氧基苯甲酰胺，
3,5-二甲基-N-(6-甲基-5-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)吡啶-3-基)苯甲酰胺，
N-(6-甲基-5-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)吡啶-3-基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺，
N-(3-(3-(1-羟基乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3,5-二甲基苯甲酰胺，
(S)-N-(3-(3-(1-羟基乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺，
(R)-N-(3-(3-(1-羟基乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺，
(N-(3-(3-(1-羟基-2-吗啉代乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3-甲基苯甲酰胺)，
N-(3-(3-(1-羟基-2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3,5-二甲基苯甲酰胺，
N-(3-(3-环丙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺，
N-(3-(3-(2-羟基乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺，
N-(5-(3-(羟基甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-3-基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺，
N-(5-(3-(1-羟基乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-3-基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺，
N-(5-(3-(羟基甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-3-基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺，
N-(5-(3-环丙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-3-基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺，
N-(5-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-3-基)-3-甲氧基-5-(2-吗啉代乙氧基)苯甲酰胺，
N-(5-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-3-基)-3-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺，
(3-(二甲基氨基)-N-(3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺)，
N-(3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基)-3-(2-吗啉代乙氧基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺，及
3-环丙基-N-(5-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-甲基吡啶-3-基)-5-(2-吗啉代乙氧基)苯甲酰胺。
在一个实施方案中，本发明化合物是N-{3-[3-((S)-1-羟基-乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]-4-甲基-苯基}-3-三氟甲基-苯甲酰胺。
在另一实施方案中，本发明化合物不是N-{3-[3-((S)-1-羟基-乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]-4-甲基-苯基}-3-三氟甲基-苯甲酰胺。
在一个实施方案中，本发明化合物并非同位素变体。
一方面，本文所述实施方案中的任一者的本发明化合物是以游离碱形式存在。
一方面，本文所述实施方案中的任一者的本发明化合物是药学上可接受的盐。
一方面，本文所述实施方案中的任一者的本发明化合物是该化合物的溶剂合物。
一方面，本文所述实施方案中的任一者的本发明化合物是化合物的药学上可接受的盐的溶剂合物。
尽管上文通常已单独列举每一实施方案的指定群组，本发明化合物包括上式以及本文提供的其他式中的若干或每一实施方案是选自针对每一变量分别指定的一或多个特定成员或群组者。因此，本发明意欲包括其范畴内的这类实施方案的所有组合。
尽管上文通常已单独列举每一实施方案的指定群组，本发明化合物可为一或多个变量(例如R基团)是选自上文所列举的任一式的一个或多个实施方案。因此，本发明意欲包括其范畴内揭示的实施方案中的任一者的变量的所有组合。
或者，本发明亦涵盖排除群组或实施方案或其组合的一或多个指定变量。
在某些方面中，本发明提供上式化合物的前药及衍生物。前药是本发明化合物的衍生物，其具有可代谢裂解的基团且在生理条件下通过溶剂分解变为本发明化合物，其具有体内医药活性。这样的实例包括但不限于胆碱酯衍生物等、N-烷基吗啉酯等。
本发明化合物的其他衍生物以其酸及酸衍生物形式具有活性，但酸敏感性形式经常在哺乳动物有机体中提供溶解性、组织兼容性或延迟释放的优势(Bundgaard,1985)。前药包括业内从业人员熟知的酸衍生物，例如通过母体酸与适宜醇的反应制备的酯或通过母体酸化合物与取代或未取代的胺或酸酐或混合酐的反应制备的酰胺。衍生自侧接在本发明化合物上的酸性基团的简单脂族或芳族酯、酰胺及酐是优选前药。在一些情形下，期望制备双酯型前药，例如(酰基氧基)烷基酯或((烷氧基羰基)氧基)烷基酯。尤其有用的是本发明化合物的C1至C8烷基、C2-C8烯基、芳基、C7-C12取代的芳基及C7-C12芳基烷基酯。
条款
1)一种式I化合物，
其中
X是N或CH；
L是-NH(C＝O)-或-C(＝O)NH-；
R1是
-CN，
卤代，
C1-4烷基，任选被一个或多个独立选择的R6a基团取代，
C1-4烷氧基，任选被一个或多个独立选择的R6b基团取代，
C3-4环烷基，
苯基，
-SO2C1-4烷基，或
-NR7aR7b；
R2是H、环丙基、C1-4烷基(任选被一个或多个卤代取代)或C1-4烷氧基；
R3是-CH3、-CH2CH3或Cl；
R4是
C1-2烷基，任选被一个OH取代，
C1-2烷基，被一个OH及一个包含一个或两个独立地选自N、O及S的杂原子的5至6元杂环烷基取代，
C3-6环烷基，任选被一个OH取代；
每一R6a皆是
OH，
卤代，或
C1-4烷氧基；
每一R6b皆是
OH，
卤代，
C1-4烷氧基，
-NR8aR8b，或
5至6元杂环烷基，其包含一个或两个独立地选自N、O及S的杂原子，任选被一个C1-4烷基取代；
每一R7a、R7b皆是独立地选自H及C1-4烷基；且
每一R8a或R8b皆是独立地选自H及C1-4烷基；
或其药学可接受的盐。
2)根据条款1的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物符合式II：
其中R1、R2、R3、R4及L如条款1中所定义。
3)根据条款1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是CN、F或Cl。
4)根据条款1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是C1-4烷基。
5)根据条款4的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是-CH3或-CH2CH3。
6)根据条款1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是被一或多个独立地选择的R6a基团取代的C1-4烷基。
7)根据条款6的化合物或其药学上可接受的盐，其中每一R6a是OH、F、Cl、-OCH3或-OCH2CH3。
8)根据条款1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是-CH3或-CH2CH3，其各自被一或多个独立选择的OH、F、Cl、-OCH3或-OCH2CH3取代。
9)根据条款1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是C1-4烷氧基。
10)根据条款5的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是-OCH3或-OCH2CH3。
11)根据条款1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是被一或多个独立选择的R6b基团取代的C1-4烷氧基。
12)根据条款11的化合物或其药学上可接受的盐，其中每一R6b是OH、F、Cl、-OCH3或-OCH2CH3。
13)根据条款11的化合物或其药学上可接受的盐，其中每一R6b是-NR8aR8b。
14)根据条款13的化合物或其药学上可接受的盐，其中R8a及R8b独立地选自-CH3及-CH2CH3。
15)根据条款11的化合物或其药学上可接受的盐，其中每一R6b是吡咯烷基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基，其各自任选被C1-4烷基取代。
16)根据条款1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是-OCH3或-OCH2CH3，其各自被一或多个独立选择的OH、F、Cl、-OCH3、-OCH2CH3或-NMe2取代。
17)根据条款1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是环丙基、环丁基或环戊基。
18)根据条款1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是-SO2CH3或-SO2CH2CH3。
19)根据条款1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是NR7aR7b。
20)根据条款19的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7a及R7b独立地选自-CH3及-CH2CH3。
21)根据条款1至20中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是-CH3、-CH2CH3、-OCH3或-OCH2CH3。
22)根据条款1至20中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是H。
23)根据条款1或2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物符合式IIIa：
其中X、L、R3及R4如条款1中所定义。
24)根据条款1或2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物符合式IIIb：
其中X、L、R3及R4如条款1中所定义。
25)根据条款1至24中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中L是-NH(C＝O)-。
26)根据条款1至24中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中L是-C(＝O)NH-。
27)根据条款1或2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物符合式IVa：
其中X及R4如上文所述。
28)根据条款1至27中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是C1-2烷基。
29)根据条款1至27中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是-CH3或-CH2CH3。
30)根据条款1至27中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是被一个OH取代的C1-2烷基。
31)根据条款1至27中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是-CH(OH)CH3。
32)根据条款1至27中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是
33)根据条款1至27中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是被一个OH及一个包含一个或两个独立地选自N、O及S的杂原子的5至6元杂环烷基取代的C1-2烷基。
34)根据条款1至27中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中在另一特定实施方案中，R4是-CH3或-CH2CH3，其各自被一个OH及一个选自吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基及吗啉基的杂环取代。
35)根据条款1至27中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中在另一特定实施方案中，R4是：
36)根据条款1至27中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是C3-6环烷基。
37)根据条款1至27中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是环丙基、环丁基或环戊基。
38)根据条款1至27中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是被一个OH取代的C3-6环烷基。
39)根据条款1至27中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是环丙基、环丁基或环戊基，其各自被一个OH取代。
40)根据条款1至27中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是
41)根据条款1至40中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中X是CH。
42)根据条款1至40中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中X是N。
43)药物组合物，其包含药学上可接受的载体及药学有效量的根据条款1至42中任一项的化合物。
44)根据条款43的药物组合物，其包含另一治疗剂。
45)根据条款1至42中任一项的化合物或根据条款43或44的药物组合物，其用于医药中。
46)根据条款1至42中任一项的化合物或根据条款43或44的药物组合物，其用于预防和/或治疗增殖性疾病。
47)用于预防和/或治疗增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)的方法，其包含施用足以实现该治疗或预防的量的根据条款1至42中任一项的化合物或根据条款43或44的药物组合物。
48)根据条款8的方法，其中根据条款1中任一项的化合物或根据条款2或3的药物组合物是与另一治疗剂组合施用。
49)根据条款44的药物组合物或根据条款48的方法，其中该另一治疗剂是用于治疗增殖性疾病的药剂。
50)根据条款46使用的化合物或药物组合物或根据条款48的方法，其中该增殖性疾病是乳癌。
51)根据条款46使用的化合物或药物组合物或根据条款48的方法，其中该增殖性疾病是黑色素瘤。
52)根据条款46使用的化合物或药物组合物或根据条款48的方法，其中该增殖性疾病是前列腺癌。
53)根据条款46使用的化合物或药物组合物或根据条款48的方法，其中该增殖性疾病是肾癌。
54)根据条款46使用的化合物或药物组合物或根据条款48的方法，其中该增殖性疾病是肉瘤。
55)根据条款46使用的化合物或药物组合物或根据条款48的方法，其中该增殖性疾病是子宫癌。
56)根据条款46使用的化合物或药物组合物或根据条款48的方法，其中该增殖性疾病是肺癌。
57)根据条款46使用的化合物或药物组合物或根据条款48的方法，其中该增殖性疾病是结肠癌。
58)根据条款46使用的化合物或药物组合物或根据条款48的方法，其中该增殖性疾病是胃癌。
59)根据条款46使用的化合物或药物组合物或根据条款48的方法，其中该增殖性疾病是肝癌。
60)根据条款46使用的化合物或药物组合物或根据条款48的方法，其中该增殖性疾病是卵巢癌。
61)根据条款46使用的化合物或药物组合物或根据条款48的方法，其中该增殖性疾病是胰脏癌。
药物组合物
本发明化合物在用作药物时通常是以药物组合物形式施用。该组合物可以以药物技术中熟知的方式制备且包含至少一种本发明的式I活性化合物。通常，本发明化合物是以药学有效量施用。实际施用的本发明化合物的量通常将由医师鉴于有关情形、包括欲治疗病症、所选施用途径、实际施用的本发明化合物、个体患者的年龄、体重及反应、患者症状的严重程度等确定。
本发明的药物组合物可通过多种途径、包括经口、经直肠、经皮、皮下、关节内、静脉内、肌内及鼻内施用。取决于预期递送途径，本发明化合物优选调配为可注射或经口组合物或药膏、洗剂或贴片，所有皆用于经皮施用。
经口施用的组合物可采取散装(bulk)液体溶液或悬浮液或散装粉剂形式。然而，更通常地，组合物以单位剂型呈递以有利于精确投药。术语“单位剂型”是指适于作为单元剂量用于人类个体或其他哺乳动物的物理离散单元，每一单元含有经计算以产生期望治疗效应的预定量的活性物质以及适宜药物赋形剂、媒剂或载体。典型单元剂型包括液体组合物的预填充、预量测的安瓿或注射器，或在固体组合物情形下的丸剂、片剂、胶囊等。在该组合物中，本发明的式I化合物通常是次要组份(约0.1重量％至约50重量％或优选约1重量％至约40重量％)，剩余部分是各种媒剂或载体及有助于形成期望剂型的处理助剂。
适于经口施用的液体形式可包括适宜水性或非水性媒剂与缓冲剂、悬浮及分散剂、着色剂、矫味剂等。固体形式可包括例如任何以下成份或具有类似性质的本发明化合物：黏合剂，例如微晶纤维素、黄耆胶或明胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；崩解剂，例如海藻酸、淀粉羟基乙酸钠(Primogel)或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁；滑动剂，例如胶状二氧化硅；甜味剂，例如蔗糖或糖精；或矫味剂，例如薄荷油或橙味矫味剂。
可注射组合物通常是基于可注射无菌盐水或磷酸盐缓冲盐水或业内熟知的其他可注射载体。如前文所述，该组合物中本发明的式I活性化合物通常是次要组份，通常约0.05重量％至10重量％，剩余部分是可注射载体等。
经皮组合物通常调配为通常含有介于约0.01重量％至约20重量％、优选约0.1重量％至约20重量％、优选约0.1重量％至约10重量％且更优选约0.5重量％至约15重量％范围内的量的活性成份的局部软膏或乳膏。在调配为软膏时，活性成份通常将与石蜡或水混溶性软膏基质合并。或者，活性成份可在乳膏中与例如水包油乳膏基质一起调配。该经皮制剂已为业内所熟知且通常包括额外成份以增强活性成份或制剂的稳定性的表皮渗透。所有该已知经皮制剂及成份皆包括在本发明范畴内。
本发明化合物亦可通过经皮装置施用。因此，经皮施用可使用储存或多孔膜型或各种固体基质的贴片施用。
可经口施用、可注射或局部可施用组合物的上述组份仅仅是代表性的。其他物质及处理技术等阐述于Remington’sPharmaceuticalSciences的第8部分，第17版，1985,MackPublishing公司,Easton,Pennsylvania中，其以引用方式并入本文中(Remington,1985)。
本发明化合物亦可以以持续释放形式或自持续释放药物递送系统施用。代表性持续释放物质的说明参见Remington’sPharmaceuticalSciences。
以下制剂实例阐释可根据本发明制备的代表性药物组合物。然而，本发明并不限于以下药物组合物。
制剂1-片剂
本发明的式I化合物可以干粉末形式与干明胶粘合剂以约1:2重量比混合。少量硬脂酸镁可作为润滑剂添加。混合物可在压片机中形成240-270mg片剂(每个片剂80-90mg本发明的式I活性化合物)。
制剂2-胶囊
本发明的式I化合物可以以干粉末形式与淀粉稀释剂以约1:1重量比混合。混合物可填充至250mg胶囊中(每个胶囊125mg本发明的式I活性化合物)。
制剂3-液体
本发明的式I化合物(125mg)可与蔗糖(1.75g)及黄原胶(4mg)一起混合且所得混合物可经掺和，穿过10号网目美国筛，且随后与先前制得的微晶纤维素及羧甲基纤维素钠(11:89,50mg)于水中的溶液混合。苯甲酸钠(10mg)、矫味剂及着色剂可用水稀释并在搅拌下添加。随后可在搅拌下添加足够水。随后可进一步添加足够水以产生5mL的总体积。
制剂4-片剂
本发明的式I化合物可以以干粉末形式与干明胶粘合剂以约1:2重量比混合。少量硬脂酸镁可作为润滑剂添加。混合物可在压片机中形成450-900mg片剂(150-300mg本发明的式I活性化合物)。
制剂5-注射剂
可将本发明的式I化合物溶解或悬浮于缓冲无菌盐水可注射水性介质中至约5mg/mL的浓度。
制剂6-局部制剂
可在约75℃将硬脂醇(250g)及白矿脂(250g)熔化且随后可添加本发明的式I化合物(50g)、对羟基苯甲酸甲酯(0.25g)、对羟基苯甲酸丙酯(0.15g)、月桂基硫酸钠(10g)及丙二醇(120g)溶解于水(约370g)中的混合物且可搅拌所得混合物直至其凝结为止。
治疗方法
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物，用于医药中。在特定实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物，其用于预防和/或治疗炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏。
在另一实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物，其用于制备用于预防和/或治疗炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏的药物。
在特定实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物的用途，其用于预防和/或治疗炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏。
在治疗方面的额外方法中，本发明提供预防和/或治疗患有选自以下的病症的哺乳动物的方法：炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏，该方法包括施用有效量的本文所述本发明化合物或一或多种药物组合物用于治疗或预防该病症。
在一个实施方案中，本发明提供包含本发明化合物及另一治疗剂的药物组合物。在特定实施方案中，另一治疗剂用于治疗炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏治疗剂。
在治疗方面的额外方法中，本发明提供预防和/或治疗患有选自以下病症的哺乳动物的方法：炎性病症、2型糖尿病、神经和/或神经退化性疾病、自体免疫疾病、增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)、异常血管发生相关的疾病、软骨降解和/或软骨稳态破坏，该方法包括施用有效量的本文所述本发明化合物或一或多种药物组合物用于治疗或预防该病症。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物，其用于预防和/或治疗炎性病症。在特定实施方案中，炎性疾病选自类风湿性关节炎、骨关节炎、变应性呼吸道疾病(例如哮喘)、慢性阻塞性肺病(COPD)及炎性肠病(例如克罗恩氏病及溃疡性结肠炎)。更具体而言，炎性疾病选自类风湿性关节炎及慢性阻塞性肺病(COPD)。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物的用途，其用于预防和/或治疗炎性病症。在特定实施方案中，炎性疾病选自类风湿性关节炎、骨关节炎、变应性呼吸道疾病(例如哮喘)、慢性阻塞性肺病(COPD)及炎性肠病(例如克罗恩氏病及溃疡性结肠炎)。更具体而言，炎性疾病选自类风湿性关节炎及慢性阻塞性肺病(COPD)。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物的用途，其用于制备用于预防和/或治疗炎性病症的药物。在特定实施方案中，炎性疾病选自类风湿性关节炎、骨关节炎、变应性呼吸道疾病(例如哮喘)、慢性阻塞性肺病(COPD)及炎性肠病(例如克罗恩氏病及溃疡性结肠炎)。更具体而言，炎性疾病选自类风湿性关节炎及慢性阻塞性肺病(COPD)。
在治疗方面的额外方法中，本发明提供预防和/或治疗患有选自炎性病症的病症的哺乳动物的方法，该方法包括施用有效量的本文所述本发明化合物或一或多种药物组合物用于治疗或预防该病症。在特定实施方案中，炎性疾病选自类风湿性关节炎、骨关节炎、变应性呼吸道疾病(例如哮喘)、慢性阻塞性肺病(COPD)及炎性肠病(例如克罗恩氏病及溃疡性结肠炎)。更具体而言，炎性疾病选自类风湿性关节炎及慢性阻塞性肺病(COPD)。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物，其用于预防和/或治疗2型糖尿病。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物的用途，其用于预防和/或治疗2型糖尿病。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物的用途，其用于制备用于预防和/或治疗2型糖尿病的药物。
在治疗方面的额外方法中，本发明提供预防和/或治疗患有选自2型糖尿病的病症的哺乳动物的方法，该等方法包括施用有效量的本文所述本发明化合物或一或多种药物组合物用于治疗或预防该病症。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物，其用于预防和/或治疗神经和/或神经退化性疾病。在特定实施方案中，神经和/或神经退化性疾病选自中风、脊髓损伤、创伤性脑损伤、阿兹海默氏病、帕金森氏病、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿氏病及多发性硬化。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物的用途，其用于预防和/或治疗神经和/或神经退化性疾病。在特定实施方案中，神经和/或神经退化性疾病选自中风、脊髓损伤、创伤性脑损伤、阿兹海默氏病、帕金森氏病、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿氏病及多发性硬化。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物的用途，其用于制备用于预防和/或治疗神经和/或神经退化性疾病的药物。在特定实施方案中，神经和/或神经退化性疾病选自中风、脊髓损伤、创伤性脑损伤、阿兹海默氏病、帕金森氏病、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿氏病及多发性硬化。
在治疗方面的额外方法中，本发明提供预防和/或治疗患有选自神经和/或神经退化性疾病的病症的哺乳动物的方法，该方法包括施用有效量的本文所述本发明化合物或一或多种药物组合物用于治疗或预防该疾病。在特定实施方案中，神经和/或神经退化性疾病选自中风、脊髓损伤、创伤性脑损伤、阿兹海默氏病、帕金森氏病、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿氏病及多发性硬化。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物，其用于预防和/或治疗自体免疫疾病。在特定实施方案中，自体免疫疾病选自COPD、哮喘、系统性红斑狼疮、I型糖尿病及炎性肠病。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物的用途，其用于预防和/或治疗自体免疫疾病。在特定实施方案中，自体免疫疾病选自COPD、哮喘、系统性红斑狼疮、I型糖尿病及炎性肠病。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物的用途，其用于制备用于预防和/或治疗自体免疫疾病的药物。在特定实施方案中，自体免疫疾病选自COPD、哮喘、系统性红斑狼疮、I型糖尿病及炎性肠病。
在治疗方面的额外方法中，本发明提供预防和/或治疗患有选自自体免疫疾病的病症的哺乳动物的方法，该方法包括施用有效量的本文所述本发明化合物或一或多种药物组合物用于治疗或预防该病症。在特定实施方案中，自体免疫疾病选自COPD、哮喘、系统性红斑狼疮、I型糖尿病及炎性肠病。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物，其用于预防和/或治疗增殖性疾病。在特定实施方案中，增殖性疾病是癌症。在更特定实施方案中，癌症选自黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、肥大细胞瘤、结肠直肠癌、小细胞肺癌及非小细胞肺癌、乳癌、胰脏癌、膀胱癌、肾癌、胃癌、胶质母细胞瘤、原发性肝癌、卵巢癌、前列腺癌、尿道癌、甲状腺癌、食道癌、恶性神经胶质瘤及子宫平滑肌肉瘤。在更特定实施方案中，癌症是乳癌。在另一更特定实施方案中，癌症是黑色素瘤、前列腺癌、肾癌、肉瘤或子宫癌。在再一更特定实施方案中，癌症是肺癌、结肠癌、胃癌、肝癌、乳癌、卵巢癌或胰脏癌。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物的用途，其用于预防和/或治疗增殖性疾病。在特定实施方案中，增殖性疾病是癌症。在更特定实施方案中，癌症选自黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、肥大细胞瘤、结肠直肠癌、小细胞肺癌及非小细胞肺癌、乳癌、胰脏癌、膀胱癌、肾癌、胃癌、胶质母细胞瘤、原发性肝癌、卵巢癌、前列腺癌、尿道癌、甲状腺癌、食道癌、恶性神经胶质瘤及子宫平滑肌肉瘤。在更特定实施方案中，癌症是乳癌。在另一更特定实施方案中，癌症是黑色素瘤、前列腺癌、肾癌、肉瘤或子宫癌。在再一更特定实施方案中，癌症是肺癌、结肠癌、胃癌、肝癌、乳癌、卵巢癌或胰脏癌。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物的用途，其用于制备用于预防和/或治疗增殖性疾病的药物。在特定实施方案中，增殖性疾病是癌症。在更特定实施方案中，癌症选自黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、肥大细胞瘤、结肠直肠癌、小细胞肺癌及非小细胞肺癌、乳癌、胰脏癌、膀胱癌、肾癌、胃癌、胶质母细胞瘤、原发性肝癌、卵巢癌、前列腺癌、尿道癌、甲状腺癌、食道癌、恶性神经胶质瘤及子宫平滑肌肉瘤。在更特定实施方案中，癌症是乳癌。在另一更特定实施方案中，癌症是黑色素瘤、前列腺癌、肾癌、肉瘤或子宫癌。在再一更特定实施方案中，癌症是肺癌、结肠癌、胃癌、肝癌、乳癌、卵巢癌或胰脏癌。
在治疗方面的额外方法中，本发明提供预防和/或治疗患有选自增殖性疾病(具体而言转移性疾病和/或癌症)的病症的哺乳动物的方法，该方法包括施用有效量的本文所述本发明化合物或一或多种药物组合物用于治疗或预防该疾病。在特定实施方案中，增殖性疾病是癌症。在更特定实施方案中，癌症选自黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、肥大细胞瘤、结肠直肠癌、小细胞肺癌及非小细胞肺癌、乳癌、胰脏癌、膀胱癌、肾癌、胃癌、胶质母细胞瘤、原发性肝癌、卵巢癌、前列腺癌及子宫平滑肌肉瘤。在更特定实施方案中，癌症是乳癌。在另一更特定实施方案中，癌症是黑色素瘤、前列腺癌、肾癌、肉瘤或子宫癌。在再一更特定实施方案中，癌症是肺癌、结肠癌、胃癌、肝癌、乳癌、卵巢癌或胰脏癌。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物，其用于预防和/或治疗转移性疾病。在特定实施方案中，转移性疾病是胆管癌、结肠癌、胆囊癌、恶性黑色素瘤、黏液瘤、神经内分泌肿瘤、乳房佩吉特病、直肠癌、上腔静脉症候群、外阴癌。在更特定实施方案中，转移性疾病是乳癌。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物的用途，其用于预防和/或治疗转移性疾病。在特定实施方案中，转移性疾病是胆管癌、结肠癌、胆囊癌、恶性黑色素瘤、黏液瘤、神经内分泌肿瘤、乳房佩吉特病、直肠癌、上腔静脉症候群、外阴癌。在更特定实施方案中，转移性疾病是乳癌。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物的用途，其用于制备用于预防和/或治疗转移性疾病的药物。在特定实施方案中，转移性疾病是胆管癌、结肠癌、胆囊癌、恶性黑色素瘤、黏液瘤、神经内分泌肿瘤、乳房佩吉特病、直肠癌、上腔静脉症候群、外阴癌。在更特定实施方案中，转移性疾病是乳癌。
在治疗方面的额外方法中，本发明提供预防和/或治疗患有选自转移性疾病的病症的哺乳动物的方法，该方法包括施用有效量的本文所述本发明化合物或一或多种药物组合物用于治疗或预防该病症。在特定实施方案中，转移性疾病是胆管癌、结肠癌、胆囊癌、恶性黑色素瘤、黏液瘤、神经内分泌肿瘤、乳房佩吉特病、直肠癌、上腔静脉症候群、外阴癌。在更特定实施方案中，转移性疾病是乳癌。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物，其用于预防和/或治疗异常血管发生相关的疾病。在特定实施方案中，异常血管发生相关的疾病选自动脉粥样硬化、高血压、肿瘤生长、炎症、类风湿性关节炎、湿型黄斑变性、脉络膜新生血管形成、视网膜新生血管形成、糖尿病视网膜病变及多形胶质母细胞瘤。在更特定实施方案中，异常血管发生相关的疾病是肿瘤生长。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物的用途，其用于预防和/或治疗异常血管发生相关的疾病。在特定实施方案中，异常血管发生相关的疾病选自动脉粥样硬化、高血压、肿瘤生长、炎症、类风湿性关节炎、湿型黄斑变性、脉络膜新生血管形成、视网膜新生血管形成、糖尿病视网膜病变及多形胶质母细胞瘤。在更特定实施方案中，异常血管发生相关的疾病是肿瘤生长。
在另一实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物，其用于制备用于预防和/或治疗异常血管发生相关的疾病的药物。在特定实施方案中，异常血管发生相关的疾病选自动脉粥样硬化、高血压、肿瘤生长、炎症、类风湿性关节炎、湿型黄斑变性、脉络膜新生血管形成、视网膜新生血管形成、糖尿病视网膜病变及多形胶质母细胞瘤。在更特定实施方案中，异常血管发生相关的疾病是肿瘤生长。
在治疗方面的额外方法中，本发明提供预防和/或治疗患有选自异常血管发生相关的疾病的病症的哺乳动物的方法，该方法包括施用有效量的本文所述本发明化合物或一或多种药物组合物用于治疗或预防该疾病。在特定实施方案中，异常血管发生相关的疾病选自动脉粥样硬化、高血压、肿瘤生长、发炎、类风湿性关节炎、湿型黄斑变性、脉络膜新生血管形成、视网膜新生血管形成、糖尿病视网膜病变及多形胶质母细胞瘤。在更特定实施方案中，异常血管发生相关的疾病是肿瘤生长。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物，其用于预防和/或治疗涉及变性和/或软骨稳态破坏的疾病。在特定实施方案中，涉及变性和/或软骨稳态破坏的疾病是选自骨关节炎、银屑病关节炎、幼年型类风湿性关节炎、痛风性关节炎、败血性或感染性关节炎、反应性关节炎、反射性交感神经营养障碍、痛性营养障碍、软骨发育不全、佩吉特病、蒂策综合征(Tietzesyndrome)或肋软骨炎、纤维肌痛、骨软骨炎、神经源性或神经病性关节炎、关节病、地方形式的关节病(如地方性变形性骨关节炎)、姆塞莱尼病(Mselenidisease)及韩地勾都病(Handigodudisease)；由纤维肌痛、系统性红斑狼疮、硬皮病及强直性脊柱炎造成的退化。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物的用途，其用于预防和/或治疗涉及变性和/或软骨稳态破坏的疾病。在特定实施方案中，涉及变性和/或软骨稳态破坏的疾病选自骨关节炎、银屑病关节炎、幼年型类风湿性关节炎、痛风性关节炎、败血性或感染性关节炎、反应性关节炎、反射性交感神经营养障碍、痛性营养障碍、软骨发育不全、佩吉特病、蒂策综合征或肋软骨炎、纤维肌痛、骨软骨炎、神经源性或神经病性关节炎、关节病、地方形式的关节病(如地方性变形性骨关节炎)、姆塞莱尼病及韩地勾都病；由纤维肌痛、系统性红斑狼疮、硬皮病及强直性脊柱炎造成的退化。
在一个实施方案中，本发明提供本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物的用途，其用于制备用于预防和/或治疗涉及变性和/或软骨稳态破坏的疾病的药物。在特定实施方案中，涉及变性和/或软骨稳态破坏的疾病选自骨关节炎、银屑病关节炎、幼年型类风湿性关节炎、痛风性关节炎、败血性或感染性关节炎、反应性关节炎、反射性交感神经营养障碍、痛性营养障碍、软骨发育不全、佩吉特病、蒂策综合征或肋软骨炎、纤维肌痛、骨软骨炎、神经源性或神经病性关节炎、关节病、地方形式的关节病(如地方性变形性骨关节炎)、姆塞莱尼病及韩地勾都病；由纤维肌痛、系统性红斑狼疮、硬皮病及强直性脊柱炎造成的退化。
在治疗方面的额外方法中，本发明提供预防和/或治疗患有选自涉及变性和/或软骨稳态破坏的疾病的病症的哺乳动物的方法，该方法包括施用有效量的本文所述本发明化合物或一或多种药物组合物用于治疗或预防该疾病。在特定实施方案中，涉及变性和/或软骨稳态破坏的疾病选自骨关节炎、银屑病关节炎、幼年型类风湿性关节炎、痛风性关节炎、败血性或感染性关节炎、反应性关节炎、反射性交感神经营养障碍、痛性营养障碍、软骨发育不全、佩吉特病、蒂策综合征或肋软骨炎、纤维肌痛、骨软骨炎、神经源性或神经病性关节炎、关节病、地方形式的关节病(如地方性变形性骨关节炎)、姆塞莱尼病及韩地勾都病；由纤维肌痛、系统性红斑狼疮、硬皮病及强直性脊柱炎造成的退化。
注射剂量水平介于约0.1mg/kg/h至至少10mg/kg/h，其皆在约1h至约120h及尤其24h至96h内施用。亦可施用约0.1mg/kg至约10mg/kg或更多的预装载浓注以达成充足稳态值。对于40kg至80kg人类患者，期望最大总剂量不超过约2g/天。
对于长期病症(例如退化性病症)的预防和/或治疗，治疗方案通常持续多月或多年，因此对于患者便利性及耐受性，经口施用优选。对于经口给药，每日一至四(1至4)个规则剂量、尤其每日一至三(1至3)个规则剂量、通常每日一至二(1至2)个规则剂量且最通常每日一(1)个规则剂量是代表性方案。或者对于持久效应药物，对于经口施用，每隔一周一次、每周一次及每天一次是代表性方案。具体而言，剂量方案可为每1至14天、更具体而言1至10天、甚至更具体而言1至7天且最具体而言1至3天。
使用该给药模式，各剂量提供约1mg至约1,000mg本发明化合物，其中特定剂量各自提供约100mg至约500mg且尤其约200mg至约300mg。
通常选择经皮剂量以提供类似于或低于使用注射剂量达成的血液浓度。
在用于防止病症发作时，通常将在医师建议及监督下以上述剂量水平向处于发生病症风险的患者施用本发明化合物。处于发生特定病症风险的患者通常包括具有该病症家族史者或已通过遗传检测或筛选鉴别尤其易于发生该病症者。
本发明化合物可作为单一活性剂施用或其可与其他治疗剂、包括证实具有相同或类似治疗活性且经测定对于该组合施用安全且有效的本发明的其他化合物组合施用。在具体实施方案中，两种(或更多种)药剂的共施用容许显著降低欲使用的每一剂量，藉此减少所观察到的副作用。
在一个实施方案中，本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物作为药物施用。在具体实施方案中，该药物组合物另外包含另一活性成份。
在一个实施方案中，将本发明化合物与另一治疗剂共施用用于治疗和/或预防涉及炎症的疾病，特定药剂包括但不限于免疫调节剂，例如硫唑嘌呤(azathioprine))、皮质类固醇(例如泼尼松龙(prednisolone)或地塞米松(dexamethasone))、环磷酰胺(cyclophosphamide)、环孢素A、他克莫司(tacrolimus)、麦考酚酸吗乙酯(mycophenolate,mofetil)、莫罗单抗-CD3(muromonab-CD3，OKT3，例如)、ATG、阿司匹林(aspirin)、乙酰氨基酚(acetaminophen)、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)及吡罗西康(piroxicam)。
在一个实施方案中，将本发明化合物与另一治疗剂共施用用于治疗和/或预防关节炎(例如类风湿性关节炎)，特定药剂包括但不限于镇痛药、非类固醇抗炎药(NSAIDS)、类固醇、合成DMARDS(例如但不限于胺甲氨蝶呤(methotrexate)、来氟米特(leflunomide)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、金诺芬(auranofin)、金硫丁二钠(sodiumaurothiomalate)、青霉胺(penicillamine)、氯喹、羟基氯喹、硫唑嘌呤、托法替尼(tofacitinib)、巴西替尼(baricitinib)、福他替尼(fostamatinib)及环孢素)及生物DMARDS(例如但不限于英夫利昔单抗(infliximab)、依那西普(etanercept)、阿达木单抗(adalimumab)、利妥昔单抗(rituximab)及阿巴他塞(abatacept))。
在一个实施方案中，将本发明化合物与另一治疗剂共施用用于治疗和/或预防增殖性障碍，特定药剂包括但不限于：甲氨蝶呤、亚叶酸(leukovorin)、阿霉素(adriamycin)、泼尼松(prednisone)、博莱霉素(bleomycin)、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、吉西他滨(gemcitabine)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、长春瑞滨(vinorelbine)、多柔比星(doxorubicin)、他莫昔芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、乙酸甲地孕酮(megestrolacetate)、阿那曲唑(anastrozole)、戈舍瑞林(goserelin)、抗HER2单克隆抗体(例如HerceptinTM)、卡培他滨(capecitabine)、盐酸雷洛昔芬(raloxifenehydrochloride)、EGFR抑制剂(例如TarcevaTM、ErbituxTM)、VEGF抑制剂(例如AvastinTM)、蛋白酶体抑制剂(例如VelcadeTM)、及hsp90抑制剂(例如17-AAG)。另外，可组合施用本发明的式I化合物与其他疗法，包括但不限于放射疗法及手术。在具体实施方案中，增殖性障碍选自癌症、骨髓增殖性疾病及白血病。
在一个实施方案中，将本发明化合物与另一治疗剂共施用用于治疗和/或预防自体免疫疾病，特定药剂包括但不限于：糖皮质激素、细胞生长抑制剂(例如嘌呤类似物)、烷基化药剂(例如氮芥(环磷酰胺)、亚硝基脲、本发明的铂化合物及其他)、抗代谢物(例如甲氨蝶呤、硫唑嘌呤及巯基嘌呤)、细胞毒性抗生素(例如放线菌素D蒽环类(dactinomycinanthracyclines)、丝裂霉素C(mitomycinC)、博莱霉素及光辉霉素(mithramycin))、抗体(例如，抗CD20、抗CD25或抗CD3(OTK3)单克隆抗体，及)、环孢素、他克莫司、雷帕霉素(rapamycin)(西罗莫斯(sirolimus))、干扰素(例如IFN-β)、TNF结合蛋白(例如英夫利昔单抗、依那昔普或阿达木单抗(adalimumab))、麦考酚酯、芬戈莫德(fingolimod)及多球壳菌素(myriocin)。
在一个实施方案，将本发明化合物与另一治疗剂共施用用于治疗和/或预防哮喘和/或鼻炎和/或COPD，特定药剂包括但不限于：β2-肾上腺受体激动剂(例如沙丁胺醇(salbutamol)、左旋沙丁胺醇(levalbuterol)、特布他林(terbutaline)及比托特罗(bitolterol))、肾上腺素(吸入式或片剂)、抗胆碱能剂(例如异丙托溴铵)、糖皮质激素(口服或吸入)、长效β2-激动剂(例如沙莫特罗(salmeterol)、福莫特罗(formoterol)、班布特罗(bambuterol)及持续释放口服沙丁胺醇)、吸入式类固醇及长效枝气管扩张剂的组合(例如氟替卡松(fluticasone)/沙莫特罗、布地奈德(budesonide)/福莫特罗)、白三烯拮抗剂及合成抑制剂(例如孟鲁斯特(montelukast)、扎鲁斯特(zafirlukast)及齐留通(zileuton))、介导子释放抑制剂(例如色苷酸盐及酮替芬(ketotifen))、IgE反应的生物调节剂(例如奥马珠单抗(omalizumab))、抗组胺药(例如西替利嗪(ceterizine)、桂利嗪(cinnarizine)、非索非那定(fexofenadine))及血管收缩药(例如氧甲唑啉(oxymethazoline)、塞洛唑啉(xylomethazoline)、那法唑啉(nafazoline)及曲马唑啉(tramazoline))。
另外，可组合施用本发明化合物与应急治疗用于哮喘和/或COPD，该等疗法包括氧或氦氧混合剂(heliox)施用、雾化沙丁胺醇或特布他林(视情况与抗胆碱药(例如异丙托铵)组合)、全身性类固醇(口服或经静脉，例如泼尼松、泼尼松龙、甲泼尼龙(methylprednisolone)、地塞米松或氢化可的松(hydrocortisone))、静脉内沙丁胺醇、非特异性β-激动剂(注射或吸入，例如肾上腺素、异他林(isoetharine)、异丙肾上腺素(isoproterenol)、间羟异丙肾上腺素(metaproterenol))、抗胆碱能剂(IV或雾化，例如格隆溴铵(glycopyrrolate)、阿托品(atropine)、异丙托铵)、甲基黄嘌呤(茶碱(theophylline)、氨茶碱(aminophylline)、苄胺茶碱(bamiphylline))、具有支气管扩展效应的吸入麻醉剂(例如异氟烷(isoflurane)、氟烷(halothane)、恩氟烷(enflurane))、氯胺酮(ketamine)及静脉内硫酸镁。
在一个实施方案中，将本发明化合物与另一治疗剂共施用用于治疗和/或预防炎性肠病(IBD)，特定药剂包括(但不限于)：改善疾病的合成糖皮质激素(例如泼尼松、布地奈德)、免疫调节剂(例如氨甲蝶呤、来氟米特、柳氮磺吡啶、美色拉秦(mesalazine)、硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤及环孢素)及生物疾病改善免疫调节剂(英夫利昔单抗、阿达木单抗、利妥昔单抗及阿巴他赛)。
在一个实施方案中，将本发明化合物与另一治疗剂共施用用于治疗和/或预防SLE，特定药剂包括(但不限于)：人类单克隆抗体(贝利木单抗(belimumab)(Benlysta))、改善疾病的抗风湿性药物(DMARD)，例如抗疟疾药(例如必赖克瘘(plaquenil)、羟基氯喹)、免疫抑制剂(例如氨甲蝶呤及硫唑嘌呤)、环磷酰胺及霉酚酸、免疫抑制药物及镇痛药(例如非类固醇抗炎药、阿片(例如右丙氧芬(dextropropoxyphene)及共克达莫(co-codamol))、阿片类(opioid)(例如氢可酮(hydrocodone)、羟考酮(oxycodone)、MSContin或美沙酮(methadone))及芬太尼(fentanyl)duragesic经皮贴片)。
在一个实施方案中，将本发明化合物与另一治疗剂共施用用于治疗和/或预防银屑病，特定药剂包括(但不限于)：局部治疗，例如浴液、保湿剂、含有煤焦油的软膏及含药乳膏、蒽三酚(dithranol)(地蒽酚(anthralin))、皮质类固醇(如去羟米松(desoximetasone)(TopicortTM))、氟轻松(fluocinonide)、维他命D3类似物(例如卡泊三醇(calcipotriol))、亚根油(arganoil)及类视色素(retinoid)(阿维a酯(etretinate)、阿曲汀(acitretin)、他扎罗汀(tazarotene))；全身性治疗，例如氨甲蝶呤、环孢素、类视色素、硫鸟嘌呤、羟基脲、柳氮磺吡啶、麦考酚酸吗乙酯、硫唑嘌呤、他克莫司、富马酸酯或生物剂(例如AmeviveTM、EnbrelTM、HumiraTM、RemicadeTM、RaptivaTM)及优特克单抗(ustekinumab)(IL-12及IL-23阻断剂)。另外，可组合施用本发明化合物与其他疗法，该疗法包括但不限于光疗法或光化学疗法(例如补骨脂素(psoralen)及紫外A光疗法(PUVA))。
共施用包括将两种或更多种治疗剂递送至患者的任何方式作为相同治疗方案的一部分，如熟习此项技术者所明了。尽管两种或更多种药剂可在单一制剂中、即以单一药物组合物同时施用，但此并非必需。药剂可在不同制剂中且于不同时间施用。
化学合成程序
概述
本发明化合物可自容易获得的起始材料、使用以下一般方法及程序制得。应了解，若给予典型或优选方法条件(即反应温度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力等)，亦可使用其他方法条件，除非另有说明。优选反应条件可随所用的特定反应物或溶剂而变化，但该条件可由熟习此项技术者由常规优化程序决定。
另外，如熟习此项技术者所明了，可能需要使用常规保护基团以防止某些官能基进行不期望反应。特定官能基的适合保护基团以及保护及去保护的适合条件的选择为业内所熟知(Wuts及Greene,2012)。
提供以下方法详述上文定义的本发明化合物的制备及比较实例。本发明化合物可自已知或市售起始材料及试剂由熟习有机合成技术者制得。
除非另有说明，否则所有试剂皆是商业级且未经进一步处理即按原样使用。市售无水溶剂用于惰性气氛下实施的反应。除非另外指明，否则试剂级溶剂用于所有其他情形。柱层析法在硅胶60(35-70μm)上实施。薄层层析法使用预涂的硅胶F-254板(厚度0.25mm)实施。分析型手性柱层析法在WatersAlliance分离模块2690及PDA2996检测器(254nM)上实施。手性柱是ChiralpakAD-H(250×4.6mm,5μm)，流速1mL/min，等度模式(50％乙醇/50％甲醇)。1HNMR谱是在BrukerDPX400NMR光谱仪(400MHz)或BrukerAdvance300NMR光谱仪(300MHz)上记录。1HNMR谱的化学位移(δ)是相对于四甲基硅烷(δ0.00)或适当残余溶剂峰(即CHCl3(δ7.27))作为内部参考以百万分率(ppm)报告。多重性是以单峰(s)、双重峰(d)、三重峰(t)、四重峰(q)、五重峰(quin)、多重峰(m)及宽峰(br)给出。电喷雾MS谱是在Waters平台LC/MS光谱仪上或利用具有WatersAcquityPDA检测器及SQD质谱仪的WatersAcquityUPLC获得。所用柱：UPLCBEHC181.7μm2.1×5mmVanGuardPre-column与AcquityUPLCBEHC181.7μm2.1×30mm柱或AcquityUPLCBEHC181.7μm2.1×50mm柱。所有方法皆使用MeCN/H2O梯度。MeCN及H2O含有0.1％甲酸或NH3(10mM)。制备型LCMS：所用柱：WatersXBridgePrepC185μmODB30mmID×100mmL(制备型柱)及WatersXBridgePrepC185μm4.6mmID×100mmL(分析型柱)。所有方法皆使用MeOH/H2O或MeCN/H2O梯度。MeOH、MeCN及H2O含有0.1％甲酸或0.1％二乙胺。微波加热是利用BiotageInitiator实施。
表I.实验部分中所用的缩写的列表：
本发明化合物的合成制备
实例1.一般合成方法
1.1.本发明化合物的制备.
1.1.1.合成方法概述1：中间体Gen-5的合成的一般方法
其中Y是I或Br
步骤i：方法A
A1：硼酸酯的形成
步骤ii：是以下方法之一
B1：与酸的酰胺键形成反应
B2：与酰氯的酰胺键形成反应
B3：与转换成酰氯的酸的酰胺键形成反应
步骤iii：是以下方法之一
B1：与酸的酰胺键形成反应
K：通过与EDC/HOBt的肽偶合的酰胺键形成
步骤iv：是以下方法之一
A2：硼酸酯的形成
1.1.2.合成方法概述2：本发明化合物的合成的一般方法
其中
-Ry是H或Me或Et，
-Rx是R4或CH(OCH3)2或2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-甲基或1-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-环丙烷，
-Rz是H或Boc，且
-Rw是R4或CH(OCH3)2
步骤i：方法C
C：甲硅烷基保护
步骤ii：方法D
D：Weinreb酰胺的形成
步骤iii：方法E
E：酮的引入
步骤iv：方法E
E：酮的引入
步骤v：是以下方法之一
F1：与中间体Gen-5的Suzuki偶合
F2：硼酸的一罐式形成及与中间体Gen-4的Suzuki
步骤vi：是以下方法之一或若干者
G1：用肼环化
G2：甲硅烷基去保护
G3：Boc去保护
步骤vii：方法F1
F1：与中间体Gen-3或Gen-27的Suzuki偶合
步骤viii：方法G1
G1：用肼环化
步骤ix：方法B1
B1：与酸的酰胺键形成反应
L：醛还原成醇
1.1.3.合成方法概述3：化合物的一般合成方法
步骤i：方法H
H：与中间体Gen-5的Suzuki偶合
步骤ii：方法I
I1：利用TFA的PMB去保护
I2：利用H2SO4的PMB去保护
步骤iii：
H：Suzuki偶合
步骤iv：
I1：利用TFA的PMB去保护
I2：利用H2SO4的PMB去保护
步骤v：
B1：与酸的酰胺键形成反应
1.1.4.合成方法概述4：酸的一般合成方法
其中Z是Br或R2
步骤i：方法P
P：酯的形成
步骤ii：是以下方法之一
Q：O-烷基化
步骤iii：是以下方法之一
R1：与Gen-9-g的Suzuki偶合
R2：皂化
1.2.本发明化合物的一般合成方法
1.2.1.一般方法A：中间体Gen-3的合成
1.2.1.1.一般方法A1
向先前利用氮鼓泡脱气的中间体Gen-2(1当量)、中间体Gen-9-a(1.05当量)及乙酸钾(3当量)于先前利用氮鼓泡脱气的DMSO中的悬浮液中添加PdCl2(dppf).DCM(0.05当量)。将反应混合物于80℃在氮下加热过夜。将反应物冷却至室温，随后添加水及EtOAc。经由硅藻土塞过滤(缓慢)双相溶液，并用EtOAc洗涤滤饼。分离两个滤液层，再次用EtOAc萃取水层并用水洗涤合并的有机层。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析纯化残余物，从而得到中间体Gen-3。
1.2.1.2.中间体Gen-3-a：4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基胺的示例性合成
向先前利用氮鼓泡脱气1h的中间体Gen-2-b(300g，1.29mol，1当量)、中间体Gen-9-a(343.2g，1.35mol，1.05当量)及乙酸钾(380g，3.9mol，3当量)于先前利用氮鼓泡脱气2h的DMSO(2.65L)中的悬浮液中添加PdCl2(dppf).DCM(52g，0.06mol，0.05当量)。将反应混合物于80℃在氮下搅拌过夜。将反应物冷却至室温，随后添加水(1.5L)及EtOAc(3L)。经由硅藻土塞过滤双相溶液，且用EtOAc(2L)洗涤滤饼。分离两个滤液层，再次用EtOAc(3L)萃取水层并用水(500mL)洗涤合并的有机层。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过二氧化硅层析(环己烷/EtOAc:95/5至70/30洗脱)纯化残余物，从而得到中间体Gen-3-a。
1HNMR(300MHz,CDCl3-d)δppm7.17(1H,d),6.99(1H,d),6.70(1H,dd),3.54(2H,bs),2.25(3H,s),1.36(12H,s)。
1.2.2.一般方法B：中间体Gen-5的合成
1.2.2.1.一般方法B1
于室温在氩下向中间体Gen-1(1至1.2当量)及胺衍生物(1当量)于DCM或DMF中的搅拌溶液中添加TBTU或HATU(1至1.2当量)，然后添加TEA或NMM(2至3当量)，于室温搅拌反应混合物直至完成为止。随后将反应物用水淬灭，分离各层。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。或者，在真空中浓缩反应物，将残余物分配在EtOAc或EtOAc/nBuOH混合物与饱和NH4Cl水溶液或水之间。分离各层，将有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。随后通过硅胶层析纯化残余物，从而得到期望中间体。
1.2.2.2.中间体Gen-5-a：3,5-二甲氧基-N-[4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-苯甲酰胺的示例性合成
于室温在氩下向中间体Gen-1-a(602mg，3mmol，1当量)及中间体Gen-3-a(700mg，3mmol，1当量)于DCM(15mL)中的搅拌溶液中添加TBTU(963mg，3mmol，1当量)，然后添加TEA(0.83mL，6mmol，2当量)，将反应混合物于室温搅拌5h。随后将反应物用水淬灭，分离各层。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析(庚烷/EtOAc:80/20洗脱)纯化残余物，从而得到中间体Gen-5-a。
LCMS:MW(计算值):397；m/zMW(观察值):398(M+H)。
1.2.2.3.一般方法B2
在氮下将胺衍生物(1当量)于DCM中的溶液冷却至3℃，随后逐滴添加TEA(1.1当量)，然后后添加相应苯甲酰氯(0.8当量)。随后再次逐滴添加相应苯甲酰氯(0.05当量)并将反应物搅拌10min。将反应混合物用水淬灭并用DCM稀释。分离各层并将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中蒸发。移除大部分溶剂且添加环己烷，将混合物于室温进一步简单搅拌，通过过滤分离所得固体并用环己烷洗涤并干燥，从而得到期望中间体。
1.2.2.4.中间体Gen-5-b：N-[4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-3-三氟甲基-苯甲酰胺的示例性合成
在氮下将中间体Gen-3-a(293g，1.26mol，1.0当量)于DCM(3L)中的溶液冷却至3℃，随后逐滴添加TEA(193mL，1.38mol，1.1当量)，然后添加Gen-1-e(150mL，1.0mol，0.8当量)。随后逐滴添加Gen-1-e(9.5mL，0.06mol，0.05当量)并将反应物搅拌10min。将反应混合物用水(1.5L)淬灭并用DCM(2L)稀释。分离各层并将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中蒸发。移除大部分溶剂并添加环己烷(3.0L)。将混合物于室温搅拌几分钟，通过过滤分离所得固体并用环己烷洗涤并干燥，从而得到中间体Gen-5-b。
LCMS:MW(计算值):405；m/zMW(观察值):406(M+H)。
1.2.2.5.一般方法B3
于0℃向Gen-1(1,1当量)的搅拌溶液中添加草酰氯(3当量)。于此温度将反应混合物搅拌5min并添加1滴DMF。将反应物于0℃再次搅拌且随后于室温搅拌直至完成为止。在真空中浓缩反应混合物直至干燥。将残余物溶解于DCM中。将溶液冷却至0℃并添加胺衍生物(1当量)及TEA(5当量)。将反应混合物于0℃搅拌30min并于室温搅拌过夜，随后将反应物用水淬灭。添加DCM及NH4Cl。分离两个层。连续用饱和NaHCO3溶液及盐水洗涤有机层。分离两个层并用DCM萃取有机层，随后经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩直至干燥。重结晶所得固体，从而产生中间体Gen-5。
1.2.2.6.中间体Gen-5-e：N-(3,5-二甲基-苯基)-4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯甲酰胺的示例性合成
于0℃向Gen-1-b(1.06g，7.08mol，1,1当量)于DCM(35mL)中的搅拌溶液中添加草酰氯(1.63mL，19.3mol，3当量)。于此温度将反应混合物搅拌5min并添加1滴DMF。将反应物于0℃再次搅拌45min且于室温搅拌45min。在真空中浓缩反应混合物直至干燥。将残余物溶解于DCM(30mL)中。将溶液冷却至0℃并添加胺衍生物(1.5g，6.4mol，1当量)及TEA(3.26g，32.2mol，5当量)。将反应混合物于0℃搅拌30min并于室温搅拌过夜。随后将反应物用水(20mL)淬灭。添加DCM(100mL)及NH4Cl(100mL)。分离两个层。连续用饱和NaHCO3(100mL)溶液及盐水(100mL)洗涤有机层。分离两个层并用DCM(100mL)萃取水层，随后经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩直至干燥。在MeOH(50mL)中重结晶所得固体，从而产生中间体Gen-5-e。
1.2.2.7.一般方法A2
向中间体Gen4(1当量)于二噁烷或DMF中的溶液中添加(BOpin)2(1.1当量)、KOAc(3当量)并将混合物在氮或氩下于室温搅拌10分钟。随后，添加Pd(dppf)Cl2(0.05当量)并将反应混合物于120℃微波辐照140min或于80℃加热过夜。混合物直接用于下一步骤或在真空中浓缩。将残余物用水及EtOAc吸收。将有机层用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析(醚/EtOAc:95/5至75/25洗脱)纯化期望中间体。
1.2.2.8.中间体Gen-5-f：N-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-3,5-二甲氧基-苯甲酰胺的示例性合成
向中间体Gen-4-e(200mg，0.54mmol，1当量)于二噁烷(9.0mL)中的溶液中添加(BOPin)2(150mg，0.59mmol，1.1当量)、KOAc(257mg，1.62mmol，3当量)并将混合物在氮或氩下于室温搅拌10分钟。随后添加Pd(dppf)Cl2(20mg,0.027mmol,0.05当量)并将反应混合物于120℃微波辐照140分钟，从而产生中间体Gen-5-f。混合物直接用于下一步骤。
LCMS:MW(计算值):417；MW(观察值):418(M+H)。
1.2.3.一般方法C：中间体Gen-15的合成
1.2.3.1.一般方法C
在搅拌及氮下向羟基衍生物(1当量)于DCM或DMF中的溶液中添加1H-咪唑(1.1至2.4当量)及中间体Gen-9-b(1.02至1.2当量)。在添加期间冷却反应混合物，随后在氮下于室温搅拌直至完成为止。将反应混合物在IPE或DCM中稀释，将有机层用1MHCl水溶液或10％柠檬酸水溶液洗涤一次，若需要，用1MHCl水溶液与盐水的混合物(1/1)再次洗涤并用盐水洗涤一次，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥，从而产生期望中间体。
1.2.3.2.中间体Gen-15-b：(S)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-丙酸甲基酯的示例性合成
在搅拌及氮下向中间体Gen-14-b(694g，6.67mol，1当量)于DCM(7L)中的溶液中添加1H-咪唑(500g，7.34mol，1.1当量)及中间体Gen-9-b(1055g，7.00mol，1.05当量)。在添加期间冷却反应混合物，随后于室温在氮下搅拌过夜。将反应混合物在IPE(5.5L)中稀释，将有机层用1MHCl水溶液(2.8L)洗涤一次，用1MHCl水溶液与盐水的混合物(1/1)(1.4L/1.4L)洗涤一次并用盐水(2.8L)洗涤一次，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥，从而产生中间体Gen-15-b。
1HNMR(300MHz,CDCl3-d)δppm4.34(1H,q),3.73(3H,s),1.40(3H,d),0.91(9H,s),0.90(6H,d)。
1.3.一般方法D：中间体Gen-7的合成
1.3.1.一般方法D
在搅拌及氮下于-15℃至-10℃的温度经1h向中间体Gen-9-c(1.56当量)于THF中的悬浮液中缓慢添加己烷中的2.5M丁基锂溶液(3.55当量)。于-15℃搅拌50min后，在低于-60℃经30min向酰胺溶液中逐滴添加中间体Gen-15(1当量)于THF中的溶液。随后将反应混合物在氮下于-70℃搅拌2h。通过于-50℃缓慢添加2MHCl水溶液淬灭反应物，向反应物中添加EtOAc并使混合物升温至室温。分离各层并再次用EtOAc萃取水层(pH约8-9)。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥，从而得到中间体Gen-7。1.3.2.中间体Gen-7-d：(S)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-N-甲氧基-N-甲基-丙酰胺的示例性合成
在搅拌及氮下于-15℃至-10℃的温度经1h向中间体Gen-9-c(139g，1.42mol，1.56当量)于THF(720mL)中的悬浮液中缓慢添加己烷中的2.5M丁基锂溶液(1.3L，3.25mol，3.55当量)。于-15℃搅拌50min后，于低于-60℃经30min向酰胺溶液中逐滴添加中间体Gen-15-b(200g，0.92mol，1当量)于THF(600mL)中的溶液。随后将反应混合物在氮下于-70℃搅拌2h。通过于-50℃缓慢添加2MHCl水溶液(600mL)淬灭反应物，向反应物中添加EtOAc(1L)并使混合物升温至室温。分离各层并再次用EtOAc(500mL)萃取水层(pH约8-9)。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥，从而得到中间体Gen-7-d。
1HNMR(300MHz,CDCl3-d)δppm4.78-4.63(1H,m),3.71(3H,s),3.23(3H,bs),1.37(3H,d),0.92(9H,s),0.11(6H,d)。
1.4.一般方法E：中间体Gen-8的合成
1.4.1.一般方法E1
通过在氮下于介于-78℃与-5℃的温度向DIPA(1.07至1.2当量)于THF中的溶液中逐滴添加己烷中的2.5M丁基锂溶液(1.1至1.2当量)来制备LDA的溶液。于相同温度将反应混合物搅拌15min至30min。随后于-78℃至-60℃逐滴添加THF中的中间体Gen-6-a(1至1.2当量)，并将反应物在氮下于-78℃搅拌1h至1.33h。随后通过监测温度逐滴或逐份添加中间体Gen-7(1.1至1.2当量)。将混合物于-78℃与-70℃之间的稳定搅拌1.5h至3h，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。添加EtOAc，随后分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析纯化残余，从而产生中间体Gen-8。
1.4.2.中间体Gen-8-d：(S)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-(6-氯-2-氟-吡啶-3-基)-丙-1-酮的示例性合成
通过在氮下于-5℃向DIPA(100g，0.98mol，1.07当量)于THF(540mL)中的溶液中逐滴添加己烷中的2.5M丁基锂溶液(308mL，0.77mol，1.167当量)来制备LDA的溶液。将反应混合物于-5℃搅拌30min。随后于低于-60℃逐滴添加THF(650mL)中的中间体Gen-6-a(86.8g，0.66mol，1当量)，并将反应物在氮下于-78℃搅拌1.33h。随后逐滴添加中间体Gen-7-d(180g，0.73mol，1.1当量)，同时监测温度。将混合物于-70℃搅拌3h并用饱和NH4Cl水溶液(400mL)淬灭。添加EtOAc(1L)，随后分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶饼(环己烷/EtOAc:100/0至95/5洗脱)纯化残余物，从而产生中间体Gen-8-d。
1HNMR(300MHz,CDCl3-d)δppm8.18(1H,dd),7.34(1H,dd),4.88(1H,dq),1.43(3.H,dd),0.82(9Hs),0.65(6H,d)。
1.4.3.一般方法E2
通过在氮下于-78°向DIPA(1.1当量)于THF中的溶液中逐滴添加己烷中的2.5M丁基锂溶液(1.1当量)来制备LDA的溶液。将反应混合物于-78℃搅拌15min至30min。随后逐滴添加THF中的中间体Gen-6-a(1当量)，并将反应物在氮下于-78℃搅拌1h。随后添加中间体Gen-15(1.1至1.2当量)，将混合物于-78℃搅拌1h至2h，随后将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。添加EtOAc，分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析纯化残余物，从而产生中间体Gen-8。
1.4.4.中间体Gen-8-c：2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-(6-氯-2-氟-吡啶-3-基)-丙-1-酮的示例性合成
通过在氮下于-78℃向DIPA(7.1mL，22mmol，1.1当量)于THF(40mL)中的溶液中逐滴添加己烷中的2.5M丁基锂溶液(8.8mL，22mmol，1.1当量)来制备LDA的溶液。将反应混合物于-78℃搅拌20min。随后逐滴添加THF(20mL)中的中间体Gen-6-a(2.63g，20mmol，1当量)，并将反应物在氮下于-78℃搅拌1h。随后一次性添加中间体Gen-15-a(4.8g，22mmol，1.2当量)。将混合物于-78℃搅拌2h，随后将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。添加EtOAc，并分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析(庚烷/EtOAc:95/5洗脱)纯化残余物，从而产生中间体Gen-8-c。
LCMS:MW(计算值):317(35Cl),319(37Cl)；m/zMW(观察值):318(35ClM+H),320(37ClM+H)。
1.5.一般方法F：中间体Gen-10的合成
1.5.1.一般方法F1
于室温将中间体Gen-8(1当量)、中间体Gen-5(1至1.1当量)及碳酸铯(1.5至2当量)或碳酸钠(4当量)溶解于1,4-二噁烷/水的混合物(4/1)中，利用氮使溶液脱气。随后添加PdCl2(dppf).DCM或Pd(PPh3)4(0.05至0.07当量)。将反应混合物于80℃加热1h至2h，随后冷却至室温。向反应混合物中添加EtOAc及水，分离各层，并将水层用EtOAc萃取一次。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析纯化粗制物，从而得到中间体Gen-10。
1.5.2.中间体Gen-10-d：N-(3-{5-[2-(S)(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-丙酰基]-6-氟-吡啶-2-基}-4-甲基-苯基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺的示例性合成
于室温将中间体Gen-8-d(60g，0.189mol，1当量)、中间体Gen-5-b(76.52g，0.19mol，1当量)及碳酸铯(120g，0.38mol，2当量)溶解于1,4-二噁烷(1.15L)与水(285mL)的混合物中，利用氮使溶液脱气。随后添加PdCl2(dppf).DCM(7.7g，0.009mol，0.05当量)。将反应混合物于80℃加热1h，随后利用冰浴冷却至室温。向反应混合物中添加EtOAc(1.15L)，分离各层，并将水层用EtOAc(300mL)萃取一次。将合并的有机层用盐水(800mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶饼(环己烷/EtOAc:100/0至90/10洗脱)纯化粗制物，从而得到中间体Gen-10-d。
1HNMR(300MHz,CDCl3-d)δppm8.28(1H,dd),8.17(2H,d),8.07(1H,bd),7.80(1H,bd),7.75(1H,d),7.70-7.60(2H,m),7.47(1H,dd),7.29(1H,d),5.00(1H,dq),2.41(3H,s),1.50(3H,dd),0.87(9H,s),0.11(6H,d)。
1.6.一般方法F2
于室温将中间体Gen-4(1当量)、中间体Gen-9-a(1.1当量)及乙酸钾(3当量)溶解于1,4-二噁烷中，利用氮使溶液脱气。随后添加PdCl2(dppf)(0.07当量)，并将反应混合物回流3.25h至3.5h。随后在氮下向反应混合物中添加中间体Gen-8(1当量)、碳酸铯(3当量)、PdCl2(dppf)(0.07当量)及水，并将混合物回流0.66h至1.5h。在冷却至室温后，添加NH4Cl水溶液及EtOAc，分离各层，并将水层用EtOAc萃取四次。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，经硅胶垫过滤并将滤液蒸发至干燥。通过硅胶层析纯化粗制物，从而得到中间体Gen-10。
1.7.中间体Gen-10-b：N-(5-乙酰基-6-氟-2'-甲基-[2,3']联吡啶基-5'-基)-3,5-二甲氧基-苯甲酰胺的示例性合成
于室温将中间体Gen-4-a(15.07g，43mmol，1当量)、中间体Gen-9-a(12g，47mmol，1.1当量)及乙酸钾(12.64g，13mmol，3当量)溶解于1,4-二噁烷(400mL)中，利用氮使溶液脱气。随后添加PdCl2(dppf)(2.2g，3mmol，0.07当量)，并将反应混合物回流3.5h。随后在氮下向反应混合物中添加中间体Gen-8-b(7.45g，43mmol，1当量)、碳酸铯(41.95g，13mmol，3当量)、PdCl2(dppf)(2.20g，3mmol，0.07当量)及水(100mL)，并将混合物回流1.5h。在冷却至室温后，添加NH4Cl水溶液及EtOAc，分离各层，并将水层用EtOAc萃取四次。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，经硅胶垫过滤并将滤液蒸发至干燥。通过硅胶层析(庚烷/EtOAc:70/30至0/100洗脱)纯化粗制物，从而得到中间体Gen-10-b。
LCMS:MW(计算值):409；m/zMW(观察值):410(M+H)。
1.8.一般方法F1：中间体Gen-11的合成
中间体Gen-11自中间体Gen-8及Gen-3或Gen-27、根据先前所述的一般方法F1制得。
1.9.一般方法G
1.9.1.一般方法G1
向(2-氟-3-酮基-吡啶-6-基)衍生物(1当量)于iPrOH或EtOH中的溶液中添加肼单水合物(5至12当量)，将反应混合物于回流温度或于介于120℃与130℃之间的温度、在微波辐照下加热45min至3h。随后将反应混合物用水淬灭，随后在真空中蒸发iPrOH或EtOH。将残余物在EtOAc中稀释并将有机层用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。或者在真空中浓缩反应混合物。通过硅胶层析或结晶获得期望中间体。
1.9.2.中间体Gen-13-b：3-(3-二甲氧基甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基-苯基胺的示例性合成
向Gen-11-b(758mg，2.5mmol，1当量)于EtOH(30mL)中的溶液中添加肼单水合物(1.25mL，14.9mmol，6当量)，将反应混合物回流加热2h。随后在真空中浓缩反应混合物。通过硅胶层析(庚烷/EtOAc:100/0至35/65洗脱)纯化粗制物，从而得到中间体Gen-13-b。
LCMS:MW(计算值):298；m/zMW(观察值):299(M+H)。
1.9.3.一般方法G2
向经保护的羟基衍生物(1当量)于THF中的溶液中添加THF中的1MTBAF溶液(1.5至2当量)，将反应混合物于50℃加热1.5h至3.5h。随后在真空中浓缩反应混合物。通过硅胶层析、随后通过沉淀纯化残余物，从而得到期望化合物。
1.9.4.化合物29：N-{3-[3-(1-羟基-环丙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]-4-甲基-苯基}-3,5-二甲氧基-苯甲酰胺的示例性合成
向中间体Gen-16-d(5.3g，9.5mmol，1当量)于THF(40mL)中的溶液中添加THF中的1MTBAF溶液(14.2mL，14.2mmol，1.5当量)，将反应混合物于50℃加热1.5h。随后在真空中浓缩反应混合物。通过硅胶层析(DCM/MeOH:97/3至95/5洗脱)纯化残余物，随后将粗制物溶解于最少DCM中，并将溶液添加至戊烷的搅拌溶液中。通过过滤分离所得固体并干燥，从而得到化合物29。
LCMS:MW(计算值):444；m/zMW(观察值):445(M+H)。
1.9.5.一般方法G3
向经保护的胺衍生物(1当量)于DCM中的溶液中添加TFA(0.7mL)，将反应混合物于室温搅拌1.5h至7h。随后，在真空中浓缩反应混合物。将混合物用NaHCO3水溶液淬灭并用EtOAc萃取。合并有机层，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析(DCM/MeOH/Et3N:90:10:2或DCM/MeOH:80/20洗脱)或制备型LCMS纯化期望中间体。
1.9.6.化合物39：3-(2-氨基-乙氧基)-N-[3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基苯基]-5-甲氧基苯甲酰胺的示例性合成
向中间体Gen-47-d(41mg，0.075mmol，1当量)于DCM(3.0mL)中的溶液中添加TFA(0.7mL)，将反应混合物于室温搅拌2.5h。随后，在真空中浓缩反应混合物。将混合物用NaHCO3水溶液淬灭并用EtOAc萃取。合并有机层，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析(DCM/MeOH/Et3N:90:10:2洗脱)纯化粗制物，从而产生化合物39。
1HNMR(300MHz,MeOD-d4):δppm8.33(1H,d),7.82(1H,d),7.72(1H,dd),7.36(1H,d),7.35(1H,d),7.19-7.14(2H,m),6.79-6.75(1H,m),4.19(2H,t),3.88(3H,s),3.80(2H,t),3.07(2H,q),2.37(3H,s),1.45(3H,t)。1.9.7.一般方法B1
化合物50、19、20、21、25、27或中间体Gen-17自中间体Gen-13-a、Gen-13-b、Gen-35-a、Gen-41-b、Gen-1-b、Gen-1-c、Gen-54-c、Gen-54-d、Gen-63-a、Gen-61-a及Gen-57-a、根据先前所述的一般方法B1制得。
1.9.8.一般方法L
在氮下于0℃向羰基衍生物(1当量)于THF中的溶液中逐滴添加甲苯/THF中的1.4MMeMgBr溶液(7当量)。使反应混合物升温至室温并于室温搅拌4.5h。将反应混合物用NH4Cl水溶液淬灭并用EtOAc萃取。合并有机层，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析(DCM/MeOH:100/0至95/5洗脱)纯化期望中间体。
1.9.9.化合物35：N-{3-[3-(1-羟基-乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]-4-甲基-苯基}-3-三氟甲基-苯甲酰胺的示例性合成
在氮下于0℃向中间体Gen-18-a(25mg，0.06mmol，1当量)于THF(6mL)中的溶液中逐滴添加甲苯/THF中的1.4MMeMgBr溶液(295μL，0.41mmol，7当量)。使反应混合物升温至室温并于室温搅拌4.5h。随后将反应物用NH4Cl水溶液淬灭，并用EtOAc稀释，分离两个层，并将水层再次用EtOAc萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析(DCM/MeOH:100/0至96/4洗脱)纯化残余物，从而得到化合物35。
1HNMR(300MHz,MeOD-d4)δppm8.48(1H,d),8.27(1H,bs),8.20(1H,bd),7.89(1H,bd),7.83(1H,d),7.77-7.67(2H,m),7.35(2H,d),5.25(1H,q),2.36(3H,s),1.70(3H,d)。
LCMS:MW(计算值):440；m/zMW(观察值):441(M+H)。
1.9.10.一般方法H：中间体Gen-25的合成
1.9.11.一般方法
向中间体Gen-24(1当量)、中间体Gen-5(1.2当量)及碳酸钠(4当量)于1,4-二噁烷/水(4/1)中的溶液中添加Pd(PPh3)4(0.05当量)或PdCl2dppf(0.05当量)。将反应混合物用氩吹扫，随后于90℃加热过夜。随后将反应混合物用DCM稀释，用盐水洗涤，并将有机层经Na2SO4干燥并浓缩。通过硅胶层析纯化残余物，从而得到中间体Gen-25。
1.9.12.中间体Gen-25-a的示例性合成：
向中间体Gen-24-a(100mg，0.248mmol，1当量)、中间体Gen-5-c(113mg，0.298mmol，1.2当量)及碳酸钠(105mg，0.993mmol，4当量)于1,4-二噁烷/水(4/1)中的溶液中添加Pd(PPh3)4(14.3mg，0.0124mmol，0.05当量)。将反应混合物用氩吹扫，随后于90℃加热过夜。随后将反应混合物用DCM(25mL)稀释，用盐水(10mL)洗涤，将有机层经Na2SO4干燥并浓缩。通过硅胶层析(DCM/MeOH:100/0至96/4洗脱)纯化残余物，从而得到中间体Gen-25-a。
1.10.一般方法I：化合物的合成
1.10.1.一般方法I1
向中间体Gen-25(1当量)于TFA中的溶液中添加TES、甲苯及水。将反应物于110℃在微波下加热2h。将反应混合物浓缩，随后用DCM稀释并添加Na2CO3溶液。分离两个层，并将水层用DCM/MeOH95:5萃取3次。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。通过硅胶层析纯化残余物。
1.10.2.化合物6的示例性合成：
向中间体Gen-25-a(143mg，0.230mmol，1当量)于TFA(1mL，13mmol，56当量)中的溶液中添加TES(50μL，0.313mmol，1.5当量)、甲苯(100μL)及水(50μL)。将反应物于110℃在微波下加热2h。将反应混合物浓缩，随后用DCM(25mL)稀释并添加Na2CO3溶液(10mL)。分离两个层，并将水层用DCM/MeOH95:5萃取3次。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。通过硅胶层析(利用DCM/MeOH100:0至90:10洗脱)纯化残余物，从而得到化合物6。
LCMS:MW(计算值):500；m/zMW(观察值):501(M+H)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm13.36(1H,s),10.18(1H,s),8.39(1H,d),7.91(1H,s),7.77(1H,d),7.33-7.22(5H,m),6.92(1H,d),5.11(1H,d),3.57-3.55(4H,m),2.96(6H,s),2.83-2.79(2H,m),2.60-2.54(4H,m),2.33(3H,s)。
1.10.3.一般方法I2
向于0℃冷却的中间体Gen-25(1当量)中添加浓H2SO4。将反应烧瓶于0℃搅拌1h。随后将反应混合物倒在碎冰水上，用饱和K2CO3水溶液碱化至pH10，且随后用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过硅胶层析纯化残余物。
1.10.4.化合物54：N-{3-[3-(1-羟基-乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]-4-甲基-苯基}-3,5-二甲基-苯甲酰胺的示例性合成
向于0℃冷却的中间体Gen-28-c(350mg，0.672mmol，1当量)中添加浓H2SO4(4mL)。将反应烧瓶于0℃搅拌1h。随后将反应混合物倒在碎冰水上，用饱和K2CO3水溶液碱化至达到pH10，且随后用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过硅胶层析(用EtOAc100％洗脱)纯化残余物，从而得到化合物54。
LCMS:MW(计算值):400；m/zMW(观察值):401(M+H)。
1.10.5.一般方法K
向胺衍生物(1当量)、羧酸(1.2当量)、EDCI.HCl(1.3当量)及HOBt(1.3当量)于DMF中的悬浮液中添加Et3N(2.6当量)。将反应混合物于室温搅拌过夜。48h后，添加水并用EtOAc萃取混合物。合并有机层，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析(DCM/MeOH:95/5或90/10洗脱)或制备型LCMS纯化期望中间体。
1.10.6.化合物42：N-[5-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-甲基-吡啶-3-基]-3-三氟甲基-苯甲酰胺的示例性合成
向中间体Gen-13-a(63.3mg，0.25mmol，1当量)、Gen-1-c(57mg，0.30mmol，1.2当量)、EDCI.HCl(62.3mg，0.325mmol，1.3当量)及HOBt(44mg，0.325mmol，1.3当量)于DMF(2.0mL)中的悬浮液中添加Et3N(90μL，0.65mmol，2.6当量)。将反应混合物于室温搅拌过夜。48h后，添加水并用EtOAc萃取混合物。合并有机层，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析(DCM/MeOH:95/5洗脱)纯化粗制物，从而产生化合物42。
LCMS:MW(计算值):245；MW(观察值):426(M+H)。
1HNMR(300MHz,MeOD-d3):δppm8.92(1H,d),8.40(1H,s),8.38(1H,d),8.33(1H,s),8.27(1H,d),7.94(1H,d),7.80-7.74(1H,m),7.41(1H,d),3.08(2H,q),2.61(3H,s),1.46(3H,t)。
1.10.7.一般方法M
向衍生的缩醛(1当量)于THF中的溶液中添加1MHCl水溶液(15-20当量)。将反应混合物于0℃搅拌1.5h至2h。随后将反应混合物用饱和NaHCO3溶液淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶层析(DCM/MeOH:100/0至90/10洗脱)纯化期望中间体。
1.10.8.中间体Gen-18-a：N-[3-(3-甲酰基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基-苯基]-3-三氟甲基-苯甲酰胺的示例性合成
向中间体Gen-17-a(92mg，0.2mmol，1当量)于THF(10mL)中的溶液中添加1MHCl水溶液(2.9mL，2.93mmol，15当量)。将反应混合物于0℃搅拌2h。随后将反应混合物用饱和NaHCO3溶液淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩，从而得到中间体Gen-18-a。粗制物未经纯化即直接用于下一步骤。
LCMS:MW(计算值):424；m/zMW(观察值):425(M+H)。
1.11.一般方法O
向羰基衍生物(1当量)于EtOH/THF混合物中的溶液中添加NaBH4(1.2当量)。将反应混合物于室温搅拌过夜。随后，将反应混合物用DCM稀释并用水淬灭。分离两个层，并将水层用DCM/MeOH95:5萃取两次。将合并的层经Na2SO4干燥并浓缩至干燥，从而得到中间体醇衍生物。
1.12.中间体Gen-28-a：N-[3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基-苯基]-3,5-二甲氧基-苯甲酰胺的示例性合成
向中间体Gen-27-a(143mg，259mmol，1当量)于EtOH/THF(1.5/0.5mL)混合物中的溶液中添加NaBH4(11.8mg，312mol，1.2当量)。将反应混合物于室温搅拌过夜。随后将反应混合物用DCM(20mL)稀释并用水(5mL)淬灭。分离两个层，并将水层用15mLDCM/MeOH95:5萃取两次。将合并的层经Na2SO4干燥并浓缩至干燥，从而得到中间体Gen-28-a。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.15(1H,d),7.69(2H,s),7.48(1H,d),7.27(4H,m),6.92(2H,s),6.76(2H,d),6.55(1H,s),5.55(2H,s),5.20(1H,m),3.78(6H,s),3.69(3H,s),2.34(3H,s),1.66(3H,s)。
1.12.1.一般方法P
于室温向酸衍生物(1当量)于MeOH中的溶液中添加浓H2SO4。将反应混合物于80℃加热过夜。随后，蒸发一部分MeOH，添加NH4Cl的饱和溶液及EtOAc。分离有机层，用NH4Cl及盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥，从而产生酯衍生物。
1.12.2.中间体Gen-36-a：3-溴-5-羟基-苯甲酸甲基酯的示例性合成
于室温向Gen-1-g(1.74g，8mmol，1当量)于MeOH(50mL)中的溶液中添加浓H2SO4(6滴)。将反应混合物于80℃加热过夜。随后，蒸发一部分MeOH，添加NH4Cl的饱和溶液及EtOAc。分离有机层，用NH4Cl及盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥，从而产生Gen-36-a。
1.13.一般方法Q
向酚衍生物(1当量)于丙酮或甲苯或DMF或ACN中的溶液中添加K2CO3或Cs2CO3(2当量至4当量)、RX(2当量)及KI。将反应混合物于室温或回流温度搅拌4hr至72hr。随后添加EtOAc及饱和NaHCO3溶液。分离有机层，用饱和NH4Cl溶液及盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩，从而产生O-烷基化中间体。
1.13.1.中间体Gen-37-a：3-溴-5-甲氧基-苯甲酸甲基酯的示例性合成
向Gen-36-a(230mg，1mmol，1当量)于丙酮(5mL)中的溶液中添加K2CO3(415mg，3mmol，3当量)、MeI(185μL，3mmol，3当量)。将反应混合物于室温搅拌72hr。随后添加EtOAc及饱和NaHCO3溶液。分离有机层，用饱和NH4Cl溶液及盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩，从而产生Gen-37-a。
1.13.2.一般方法R1
向卤素衍生物(1当量)、硼酸酯衍生物(1.1当量)及Cs2CO3(2.5当量)于脱气二噁烷/H2O中的搅拌溶液中添加Pd(dppf)Cl2(0.07当量)。将反应混合物于130℃在氩下搅拌3h。添加水及EtOAc并分离各层。合并有机层，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析(庚烷/EtOAc:100/0至25/75洗脱)纯化期望中间体。
1.13.3.中间体Gen-38-a：3-环丙基-5-甲氧基-苯甲酸甲基酯的示例性合成
向中间体Gen-37-a(230mg，0.94mmol，1当量)、Gen-9-g(173.5mg，1.03mmol，1.1当量)及Cs2CO3(766mg，2.35mmol，2.5当量)于脱气二噁烷/H2O(8mL/2mL)中的搅拌溶液中添加Pd(dppl)Cl2(48mg，0.066mmol，0.07当量)。将反应混合物于130℃在氩下搅拌3h。添加水及EtOAc并分离各层。合并有机层，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析(庚烷/EtOAc:80/20洗脱)纯化期望中间体。
LCMS:MW(计算值):206；MW(观察值):207(M+H)。
1.13.4.一般方法R2
向甲基酯衍生物(1当量)于THF或THF/MeOH或THF/H2O中的搅拌溶液中添加1NNaOH溶液(1-2当量)或LiOH.H2O(1当量)。将反应混合物于室温搅拌过夜至4天。将溶剂蒸发至干燥，从而产生期望中间体。或将反应混合物蒸发至干燥并将残余物用饱和NaHCO3溶液淬灭并用EtOAc萃取。将水层用饱和NH4Cl溶液及HCl1N酸化，用EtOAc萃取。合并有机层，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥，从而产生期望中间体。(中间体未经纯化即直接用于下一步骤)。
1.13.5.中间体Gen-39-b：3-环丙基-5-(2-吗啉-4-基-乙氧基)苯甲酸的示例性合成
向中间体Gen-38-b(255mg，0.835mmol，1当量)于THF(3.5mL)中的搅拌溶液中添加1NNaOH溶液(0.84mL，0.835mol，1当量)。将反应混合物于室温搅拌过夜。将溶剂蒸发至干燥，从而产生期望中间体Gen-39-b。(中间体未经纯化即直接用于下一步骤)。
LCMS:MW(计算值):290；MW(观察值):291(M+H)。
实例2.中间体的制备
中间体Gen-4-a：N-(5-溴-6-甲基-吡啶-3-基)-3,5-二甲氧基-苯甲酰胺
于室温在氩下向中间体Gen-1-a(1.87g，10mmol，1当量)及中间体Gen-2-a(1.82g，10mmol，1当量)于DMF(30mL)中的搅拌溶液中添加HATU(3.75g，10mmol，1当量)，然后添加NMM(2.77mL，25mmol，2.5当量)。将反应混合物于室温搅拌过夜。随后在真空中浓缩反应物，将残余物分配在EtOAc/nBuOH混合物与水之间。分离各层，将有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。随后通过硅胶层析(庚烷/EtOAc:100/0至0/100洗脱)纯化残余物，从而得到中间体Gen-4-a。
LCMS:MW(计算值):350(79Br),352(81Br)；m/zMW(观察值):351(79BrM+H),353(81BrM+H)。
中间体Gen-7-a：N-甲氧基-N-甲基-丙酰胺
于0℃在搅拌及氮下向中间体Gen-9-c(9.53g，98mmol，1当量)于DCM(100mL)中的悬浮液中缓慢添加TEA(28.7mL，205mol，2.1当量)及中间体Gen-15-g(12.5mL，98mmol，1当量)。随后使反应混合物升温至室温并于室温搅拌5h。通过缓慢添加NH4Cl水溶液淬灭反应物，分离各层并再次用EtOAc萃取水层。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥，从而得到中间体Gen-7-a。粗产物未经纯化即直接用于下一步骤。
1HNMR(300MHz,CDCl3-d)δppm3.69(3H,s),3.19(3H,s),2.46(2H,d),1.15(3H,t)。
中间体Gen-7-c：环丙烷甲酸甲氧基-甲基-酰胺
于0℃在N2气氛下向中间体Gen-9-c(933mg，9.56mmol，1当量)于DCM(10mL)中的溶液中添加TEA(2.8mL，20mmol，2.1当量)及Gen15-h(870μL，9.54mmol，1当量)。使反应混合物升温至室温并保持5h。随后，将反应混合物用NH4Cl溶液淬灭并用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥，从而得到Gen-7-c。
中间体Gen-7-f：1-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-环丙烷甲酸甲氧基-甲基-酰胺
在搅拌下向中间体Gen-9-c(2.38g，24.4mmol，1.2当量)、中间体Gen-15-f(4.4g，20.3mmol，1当量)、EDCI.HCl(5.06g，26.4mmol，1.3当量)及HOBt(3.57g，26.4mmol，1.3当量)于DCM(200mL)中的悬浮液中添加TEA(10.2mL,73.1mol,3.6当量)。随后将反应混合物于室温搅拌过夜，将反应物用1MHCl水溶液淬灭，分离各层并再次用DCM萃取水层。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析(庚烷/EtOAc:95/5至90/10洗脱)纯化残余物，从而得到中间体Gen-7-f。
1HNMR(300MHz,CDCl3-d)δppm3.74(3H,s),3.41(3H,s),1.13(2H,q),0.90(2H,q),0.87(9H,s),0.13(6H,s)。
中间体Gen-13-a：5-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-甲基-吡啶-3-基胺
向中间体Gen-12-a(653mg，1.84mmol，1当量)于EtOH(9mL)中的溶液中添加TFA(0.7mL，9.2mmol，10当量)。将反应混合物于室温搅拌4h。随后将反应混合物用饱和NaHCO3溶液淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶层析(DCM/MeOH:95/5至90/10洗脱)纯化粗制物，从而得到中间体Gen-13-a。
LCMS:MW(计算值):253；m/zMW(观察值):254(M+H)。
中间体Gen-21-a：6-氯-3-碘-1-(4-甲氧基-苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶
步骤i：6-氯-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(中间体Gen-20-a)
将中间体Gen-19-a(5g，32.6mmol，1当量)溶解于DMF(30mL)中。添加I2(16.4g，64.6mol，2当量)及KOH(6.8g，121mmol，3.7当量)。将反应混合物于室温搅拌3h。随后将反应物用10％Na2S2O3溶液淬灭。将水层用50mLEt2O萃取四次，用DCM萃取三次并用DCM/MeOH9:1萃取三次。用盐水(50mL)洗涤后，将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，从而得到Gen-20-a。
步骤ii：6-氯-3-碘-1-(4-甲氧基-苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(中间体Gen-21-a)
于0℃将中间体Gen-20-a(8.5g，30.5mmol，1当量)溶解于DMF(25mL)中。逐份添加NaH(1.47g，36.6mmol，1.2当量)。将反应混合物于0℃搅拌30min。经5min逐滴添加PMBCl(5mL，37mmol，1.2当量)于DMF(5mL)中的溶液。使混合物升温至室温并于此温度搅拌4h。随后将反应物用NaHCO3淬灭并用EtOAc(75mL)萃取3次。在盐水(25mL)洗涤后，将合并的有机层经Na2SO4干燥。在过滤并浓缩后，通过硅胶层析(用石油醚/Et2O90:10至50:50洗脱)纯化粗制物，从而得到Gen-21-a。
中间体Gen-22-b：6-氯-1-(4-甲氧基-苄基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶
向gen-21-a(400mg，1mmol，1当量)、Pd(PPh3)4(11.6mg，0.01mmol，0.01当量)及Cs2CO3(652mg，2mmol，2当量)于脱气二噁烷/H2O混合物中的搅拌溶液中添加三甲基硼氧环烷(trimethylboroxine)(0.1mL，0.7mmol，0.7当量)，将反应混合物于110℃在氩下搅拌过夜。随后添加水及EtOAc并将有机相经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶层析(用庚烷/EtOAc80/20洗脱)纯化粗制物，从而得到Gen-22-b。
LCMS:MW(计算值):287；m/zMW(观察值):288(M+H)。
中间体Gen-23-b：6-氯-1-(4-甲氧基-苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-甲醛
将中间体Gen-22-a(4g，13.3mmol，1当量)溶解于DCM(400mL)中。将反应混合物在O3气氛下放置30min。在氮吹扫后添加Me2S(5mL，60mmol，5当量)并将反应混合物于-78℃搅拌15min，的后升温至室温并保持1h。随后将反应混合物在真空下浓缩至干燥，从而得到Gen-23-b。
LCMS:MW(计算值):300；m/zMW(观察值):301(M+H)。
中间体Gen-24-a：1-[6-氯-1-(4-甲氧基-苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]-2-吗啉-4-基-乙醇
步骤i：6-氯-3-碘-1-(4-甲氧基-苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(中间体Gen-22-a)
于室温向Gen-21-a(1g，2.50mmol，1当量)于二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中添加三丁基乙烯基锡(873mg，2.75mmol，1.1当量)。将反应混合物用氩脱气。随后添加PdCl2(PPh3)2(88mg，0.125mmol，0.05当量)。将所得混合物回流加热3h30，随后浓缩。将残余物用EtOAc稀释，用水洗涤两次并用盐水洗涤一次。分离两层并将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶层析(石油醚/EtOAc:95/5至70/30洗脱)纯化粗制物，从而得到中间体Gen-22-a。
LCMS:MW(计算值):299(35Cl)301(37Cl)；m/zMW(观察值):300(35ClM+H)302(37ClM+H)。
步骤ii：2-溴-1-[6-氯-1-(4-甲氧基-苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]-乙醇(中间体Gen-23-a)
将中间体Gen-22-a(7.46g，24.89mmol，1当量)溶解于二噁烷/H2O/DCM混合物(65/17/17)中。添加AcOH(1.42mL，24.89mmol，1当量)并将反应混合物于0℃搅拌15min。于此温度经15min添加NBS(6.64g，37.33mmol，1.5当量)。随后将反应混合物于室温搅拌过夜。将反应物用饱和NaHCO3溶液(300mL)淬灭。分离两层并用DCM(300mL)萃取水层。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩直至干燥。通过硅胶层析(用DCM/EtOAc95:5至75:25洗脱)纯化粗制物，从而产生中间体Gen-23-a。
LCMS:MW(计算值):395(79Br35Cl),397(81Br35Cl,79Br37Cl),399(81Br37Cl)；m/zMW(观察值):396(79Br35ClM+H),398(81Br35Cl,79Br37ClM+H),400(81Br37ClM+H)。
步骤iii：1-[6-氯-1-(4-甲氧基-苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]-2-吗啉-4-基-乙醇(中间体Gen-24-a)
向中间体Gen-23-a的溶液(1.3g，3.28mmol，1当量)中添加吗啉(860μL，9.83mmol，3当量)。将反应混合物回流加热2h30。随后将反应物用DCM(50mL)稀释。将有机层用饱和NH4Cl溶液洗涤。将水层用15mLDCM萃取3次。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。在硅胶(用DCM/MeOH100:0至98:2洗脱)上纯化粗制物，从而产生gen-24-a。
中间体Gen-29-a：(5-溴-6-甲基-吡啶-3-基)-氨基甲酸叔丁基酯
向中间体Gen-2-a(1.87g，10mmol，1当量)于DMF(20mL)中的溶液中添加TEA(2.1mL，15mmol，1.5当量)，随后添加Boc2O(3.27g，15mmol，1.5当量)。将反应混合物于90℃加热过夜，随后添加Boc2O(1.09g，5mmol，0.5当量)并将反应混合物于90℃加热4h。随后添加水并将混合物用EtOAc萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶层析(庚烷/EtOH:75/25洗脱)纯化粗制物，从而得到中间体Gen-29-a。
LCMS:MW(计算值):286(79Br),288(81Br)；m/zMW(观察值):287(79BrM+H),289(81BrM+H)。
中间体Gen-30-a：(5-硼酸-6-甲基-吡啶-3-基)-氨基甲酸叔丁基酯
向先前利用氮鼓泡脱气的中间体Gen-29-a(850mg，2.96mmol，1当量)于1,4二噁烷(15mL)中的溶液中添加中间体Gen-9-a(827mg，3.26mmol，1.1当量)，然后添加乙酸钾(870mg，8.88mmol，3当量)及PdCl2(dppf)(108mg，0.148mmol，0.05当量)。将反应混合物在氮下回流过夜。将反应物冷却至室温，随后添加水及EtOAc。分离两层，再次用EtOAc萃取水层并将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥，从而得到中间体Gen-30-a。粗制物未经纯化即直接用于下一步骤。
LCMS:MW(计算值):252；m/zMW(观察值):253(M+H)。
中间体Gen-33-a：N-[3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基-苯基]-3-(2-羟基-乙氧基)-5-甲基-苯甲酰胺
在氮下向中间体Gen-22-a(5.6g，18.68mmol，1当量)于MeOH(100mL)中的脱气悬浮液中添加PtO2(560mg,0.1当量)，用氢吹扫。将反应混合物于室温及氢(1atm)下搅拌过夜。用硅藻土过滤反应混合物，用EtOAc冲洗并蒸发至干燥，从而产生中间体Gen-33-a。中间体未经纯化即直接用于下一步骤。
LCMS:MW(计算值):301；m/zMW(观察值):302(M+H)。
中间体Gen-75-a：2-[6-氯-1-(4-甲氧基-苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]-乙醇
中间体Gen-75-a是使用典型硼氢化程序合成。(Jensen等人,2011)
中间体Gen-44-a：3-羟基-5-甲氧基-苯甲酸甲基酯
步骤i：3-乙酰氧基-5-羟基-苯甲酸(中间体Gen-41-a)
向Gen-40-a(4.12g，26.7mmol，1当量)悬浮于水(20mL)中的溶液中添加NaOH(3.20g，80.2mmol，3当量)。将反应混合物冷却至0℃并缓慢添加乙酸酐(2.50mL,26.7mmol,1当量)。50min后，添加HCl6N直至pH1为止。随后用EtOAc萃取混合物。将有机层用水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩至干燥，从而产生Gen-41-a，其原样用于下一步骤。
步骤ii：3-乙酰氧基-5-甲氧基-苯甲酸甲基酯(中间体Gen-42-a)
于0℃向Gen-41-a(4.97g，25mmol，1当量)于DMF(25mL)中的溶液中添加K2CO3(10.50g，76mmol，3当量)及MeI(3.95mL，63mmol，2.5当量)。将反应混合物于0℃搅拌1h并使其升温至室温并保持1h。添加水及EtOAc。分离有机层，用0.1NaOH水溶液及盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶层析(用Hept/EtOAc100:0至80:20洗脱)纯化粗制物，从而得到Gen-42-a。
LCMS:MW(计算值):224；m/zMW(观察值):225(M+H)。
步骤iii：3-羟基-5-甲氧基-苯甲酸甲基酯(中间体Gen-44-a)
向Gen-42-a(3.77g，16.8mmol，1当量)于MeOH(60mL)中的溶液中添加MeOH中0.5MNaOMe(40.4mL，20.2mmol，1.2当量)。将反应混合物于室温搅拌40min。随后蒸发MeOH。添加Et2O及水。将水层酸化至pH2并再次用Et2O萃取。合并有机层，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶层析(用Hept/EtOAc80:20洗脱)纯化粗制物，从而得到Gen-44-a。
中间体Gen-50-a：3-甲氧基-5-三氟甲基-苯甲酸
于室温向Gen-40-b(503mg，2.4mmol，1当量)于丙酮(15mL)中的溶液中添加K2CO3(1.01g，7.3mmol，3当量)及MeI(455μL，7.3mmol，3当量)。将反应混合物回流加热2hr，随后于室温加热过夜。添加2NNaOH水溶液(12mL，24mmol，10当量)并将反应混合物搅拌2hr。随后蒸发丙酮。添加EtOAc。酸化水层直至pH1并用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过在四级铵捕获及释放(SCEAX)柱上过滤纯化粗制物，从而得到中间体Gen-50-a。
LCMS:MW(计算值):220；m/zMW(观察值):219(M-H)。
实例3.本发明化合物的制备.
化合物8：N-[3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基-苯基]-3,5-二甲氧基-苯甲酰胺
步骤i：1-[6-氯-1-(4-甲氧基-苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]-乙酮(中间体Gen-26-a)
将中间体Gen-21-a(3.03g，7.58mmol，1当量)悬浮于甲苯(70mL)中。添加中间体Gen-9-d(3.2mL，9.48mmol，1.25当量)。将反应混合物用氩吹扫并添加PdCl2(PPh3)2(0.27g，0.38mmol，0.05当量)。将反应混合物于100℃加热9h。随后将反应物用MeOH(70mL)稀释并添加HCl1M(70mL)。将反应混合物再搅拌4h。添加DCM(90mL)及饱和NaHCO3(90mL)溶液。分离两层并用DCM(150mL)萃取水层。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。在MeOH中重结晶所得固体，从而产生中间体Gen-26-a。
步骤ii：N-{3-[3-乙酰基-1-(4-甲氧基-苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]-4-甲基-苯基}-3,5-二甲氧基-苯甲酰胺(中间体Gen-27-a)
中间体Gen-26-a及中间体Gen-5-a的Suzuki偶合是根据一般方法H实施，从而得到中间体Gen-27-a。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.65(1H,d),7.79(2H,s),7.64(1H,d),7.48(1H,d),7.41(2H,d),7.34(1H,d),7.70(2H,d),6.87(2H,d),6.63(1H,s),5.73(2H,s),3.86(6H,s),3.77(3H,s),2.73(3H,s),2.40(3H,s)。
步骤iii：N-{3-[3-(1-羟基-乙基)-1-(4-甲氧基-苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]-4-甲基-苯基}-3,5-二甲氧基-苯甲酰胺(中间体Gen-28-a)
中间体Gen-27-a是根据一般方法O反应，从而得到Gen-28-a。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.15(1H,d),7.69(2H,s),7.48(1H,d),7.27(4H,m),6.92(2H,s),6.76(2H,d),6.55(1H,s),5.55(2H,s),5.20(1H,m),3.78(6H,s),3.69(3H,s),2.34(3H,s),1.66(3H,s)。
步骤iv：N-[3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基-苯基]-3,5-二甲氧基-苯甲酰胺(化合物8)
在密封管中，中间体Gen-28-a(25mg，45.3mmol，1当量)、TFA(1mL，13mmol，3.5当量)及TES(100μL，0.626mmol，0.01当量)于水(100μL)及甲苯(1.0mL)中于110°6.5h。浓缩反应混合物，随后用DCM(15mL)及Na2CO3溶液(5mL)稀释。分离两层，并将水层用DCM/MeOH95:5萃取3次。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。通过硅胶层析(DCM/MeOH:100/0至96/4洗脱)纯化残余物，从而得到化合物8。
LCMS:MW(计算值):416；m/zMW(观察值):417(M+H)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm13.20(1H,s),10.20(1H,s),8.30(1H,d),7.88(1H,s),7.77(1H,d),7.30(2H,d),7.27(2H,d),6.70(1H,d),3.82(6H,s),2.96(2H,q),2.31(3H,s),1.35(3H,t)。
化合物23：N-[3-(3-乙基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-4-甲基-苯基]-3-(2-羟基-乙氧基)-5-甲基-苯甲酰胺
将中间体Gen-64-b(40mg，0.078mmol，1当量)于MeOH(3.0mL)及HCl6N(1.0mL)中的溶液于室温搅拌2h。在真空中浓缩反应混合物并用NaHCO3水溶液及EtOAc吸收残余物。分离各层，将有机层用NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取，随后合并有机层，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥，从而产生化合物23。
LCMS:MW(计算值):430；MW(观察值):431(M+H)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δppm8.53(1H,s),8.14(1H,d),7.80(1H,dd),7.75(1H,d),7.34(1H,d),7.31(1H,d),7.27(1H,m),6.91(1H,s),4.12(2H,t),3.99(2H,t),2.99(2H,q),2.40(3H,s),2.38(3H,s),1.42(3H,t)。化合物35：N-{3-[3-(1-羟基-乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]-4-甲基-苯基}-3-三氟甲基-苯甲酰胺
在氮下于0℃向中间体Gen-18-a(25mg，0.06mmol，1当量)于THF(6mL)中的溶液中逐滴添加甲苯/THF中的1.4MMeMgBr溶液(295μL，0.41mmol，7当量)。使反应混合物升温至室温并于室温搅拌4.5h。随后将反应物用NH4Cl水溶液淬灭，并用EtOAc稀释，分离两层，并再次用EtOAc萃取水层。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析(DCM/MeOH:100/0至96/4洗脱)纯化残余物，从而得到化合物35。
1HNMR(300MHz,MeOD-d4)δppm8.48(1H,d),8.27(1H,bs),8.20(1H,bd),7.89(1H,bd),7.83(1H,d),7.77-7.67(2H,m),7.35(2H,d),5.25(1H,q),2.36(3H,s),1.70(3H,d)。
LCMS:MW(计算值):440；m/zMW(观察值):441(M+H)。
化合物55：N-{3-[3-((S)-1-羟基-乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]-4-甲基-苯基}-3-三氟甲基-苯甲酰胺
步骤i：(S)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-丙酸甲基酯(中间体Gen-15-b)
在搅拌及氮下向中间体Gen-14-b(694g，6.67mol，1当量)于DCM(7L)中的溶液中添加1H-咪唑(500g，7.34mol，1.1当量)及中间体Gen-9-b(1055g，7.00mol，1.05当量)。在添加期间冷却反应混合物，随后于室温在氮下搅拌过夜。在IPE(5.5L)中稀释反应混合物，将有机层用1MHCl水溶液(2.8L)洗涤一次，用1MHCl水溶液与盐水的混合物(1/1)(1.4L/1.4L)洗涤一次并用盐水(2.8L)洗涤一次，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥，从而产生中间体Gen-15-b。
1HNMR(300MHz,CDCl3-d)δppm4.34(1H,q),3.73(3H,s),1.40(3H,d),0.91(9H,s),0.90(6H,d)。
步骤ii：(S)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-N-甲氧基-N-甲基-丙酰胺(中间体Gen-7-d)
在搅拌及氮下、于介于-15℃与-10℃之间的温度经1h向中间体Gen-9-c(139g，1.42mol，1.56当量)于THF(720mL)中的悬浮液中缓慢添加己烷中的2.5M丁基锂溶液(1.3L，3.25mol，3.55当量)。于-15℃搅拌50min后，于低于-60℃经30min向酰胺溶液中逐滴添加中间体Gen-15-b(200g，0.91mol，1当量)于THF(600mL)中的溶液。随后将反应混合物在氮下于-70℃搅拌2h。通过于-50℃缓慢添加2MHCl水溶液(600mL)淬灭反应物，向反应物中添加EtOAc(1L)并使混合物升温至室温。分离各层并再次用EtOAc(500mL)萃取水层(pH约8-9)。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥，从而得到中间体Gen-7-d。
1HNMR(300MHz,CDCl3-d)δppm4.78-4.63(1H,m),3.71(3H,s),3.23(3H,bs),1.37(3H,d),0.92(9H,s),0.11(6H,d)。
步骤iii：(S)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-(6-氯-2-氟-吡啶-3-基)-丙-1-酮(中间体Gen-8-d)
通过在氮下于-5℃向DIPA(100g，0.98mol，1.07当量)于THF(540mL)中的溶液中逐滴添加己烷中的2.5M丁基锂溶液(308mL，0.77mol，1.167当量)来制备LDA的溶液。将反应混合物于-5℃搅拌30min。随后于低于-60℃逐滴添加THF(650mL)中的中间体Gen-6-a(86.8g，0.66mol，1当量)，并将反应物在氮下于-78℃搅拌1.33h。随后通过监测温度逐滴添加中间体Gen-7-d(180g，0.73mol，1.1当量)。将混合物于-70℃搅拌3h并用饱和NH4Cl水溶液(400mL)淬灭。添加EtOAc(1L)，随后分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶饼(环己烷/EtOAc:100/0至95/5洗脱)纯化残余物，从而产生中间体Gen-8-d。
1HNMR(300MHz,CDCl3-d)δppm8.18(1H,dd),7.34(1H,dd),4.88(1H,dq),1.43(3.H,dd),0.82(9Hs),0.65(6H,d)。
中间体Gen-5-b：N-[4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-3-三氟甲基-苯甲酰胺的合成
步骤iv：4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基胺(中间体Gen-3-a)
向先前利用氮鼓泡脱气1h的中间体Gen-2-b(300g，1.29mol，1当量)、中间体Gen-9-a(343.2g，1.35mol，1.05当量)及乙酸钾(380g，3.9mol，3当量)于先前利用氮鼓泡脱气2h的DMSO(2.65L)中的悬浮液中添加PdCl2(dppf).DCM(52g，0.06mol，0.05当量)。将反应混合物于80℃在氮下搅拌过夜。将反应物冷却至室温，随后添加水(1.5L)及EtOAc(3L)。经由硅藻土塞过滤双相溶液(缓慢)，且用EtOAc(2L)洗涤滤饼。分离两个滤液层，再次用EtOAc(3L)萃取水层并用水(500mL)洗涤合并的有机层。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过二氧化硅层析(环己烷/EtOAc:95/5至70/30洗脱)纯化残余物，从而得到中间体Gen-3-a。
1HNMR(300MHz,CDCl3-d)δppm7.17(1H,d),6.99(1H,d),6.70(1H,dd),3.54(2H,bs),2.25(3H,s),1.36(12H,s)。
步骤v：N-[4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-3-三氟甲基-苯甲酰胺(中间体Gen-5-b)
将中间体Gen-3-a(293g，1.26mol，1.0当量)于DCM(3L)中的溶液在氮下冷却至3℃，随后逐滴添加TEA(193mL，1.38mol，1.1当量)，然后Gen-1-e(150mL，1.0mol，0.8当量)。随后逐滴添加Gen-1-e(9.5mL，0.06mol，0.05当量)并将反应物搅拌10min。反应混合物用水(1.5L)淬灭并用DCM(2L)稀释。分离各层，有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中蒸发。移除大部分溶剂并添加环己烷(3.0L)。混合物于室温搅拌几分钟，所得固体由过滤分离并用环己烷洗涤并干燥，得到中间体Gen-5-b。
1HNMR(300MHz,CDCl3-d)δppm8.13(1H,s),8.05(1H,bd),8.00-7.9(2H,m),7.80(1H,bd),7.71(1H,d),7.61(1H,t),7.20(1H,d),2.54(3H,s),1.36(12H,s)。
步骤vi：(S)-N-(3-{5-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-丙酰基]-6-氟-吡啶-2-基}-4-甲基-苯基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺(中间体Gen-10-d)
于室温将中间体Gen-8-d(60g，0.189mol，1当量)、中间体Gen-5-b(76.52g，0.19mol，1当量)及碳酸铯(120g，0.38mol，2当量)溶解于1,4-二噁烷(1.15L)与水(285mL)的混合物中，利用氮使溶液脱气。随后添加PdCl2(dppf).DCM(7.7g，0.009mol，0.05当量)。反应混合物于80℃加热1h，随后利用冰浴冷却至室温。向反应混合物中添加EtOAc(1.15L)，分离各层，水层用EtOAc(300mL)萃取一次。合并的有机层用盐水(800mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶饼(环己烷/EtOAc:100/0至90/10洗脱)纯化粗制物，得到中间体Gen-10-d。
1HNMR(300MHz,CDCl3-d)δppm8.28(1H,dd),8.17(2H,d),8.07(1H,bd),7.80(1H,bd),7.75(1H,d),7.70-7.60(2H,m),7.47(1H,dd),7.29(1H,d),5.00(1H,dq),2.41(3H,s),1.50(3H,dd),0.87(9H,s),0.11(6H,d)。
步骤vii：(S)-N-(3-{3-[1-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-乙基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基}-4-甲基-苯基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺(中间体Gen-16-b)
在iPrOH(340mL)中稀释中间体Gen-10-d(62.3g，0.11mol，1当量)。将反应混合物分成两等份(2×200mL)。在将反应混合物加热至130℃并保持1h前即刻，向反应物的每一部分中添加肼单水合物(62.3mL，1.28mol，11.56当量)(2×31mL)。混合两种反应混合物并用水(200mL)淬灭，随后在真空中蒸发iPrOH。将残余物在EtOAc(600mL)中稀释并用盐水(200mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥，从而得到中间体Gen-16-b。
LCMS:MW(计算值):554；m/zMW(观察值):555(M+H)。
步骤viii：N-{3-[3-((S)-1-羟基-乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基]-4-甲基-苯基}-3-三氟甲基-苯甲酰胺(化合物55)
向中间体Gen-16-b(61g，0.11mol，1当量)于MeOH(280mL)中的溶液中添加1MHCl水溶液(220mL)。将悬浮液于50℃加热1.5h。通过添加饱和Na2CO3溶液(200mL)(pH约8)淬灭反应物。在真空中移除MeOH并将混合物用EtOAc(200mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析纯化残余物。将粗制物溶解于DCM(100mL)中，在搅拌下将此溶液逐滴添加至庚烷溶液(500mL)中。于室温剧烈搅拌混合物，通过过滤分离所得固体并干燥，从而得到化合物55。
1HNMR(300MHz,MeOD-d4)δppm8.45(1H,d),8.25(1H,bs),8.18(1H,bd),7.90-7.80(2H,m),7.75-7.63(2H,m),7.31(2H,d),5.26(1H,q),2.33(3H,s),1.69(3H,d)。
LCMS:MW(计算值):440；m/zMW(观察值):441(M+H)。
表II.用于合成本发明示例化合物的中间体
表III.本发明的示例性化合物
表IV.本发明的示例性化合物的NMR
化合物A如US2010/0113415中所公开制得。
表V.比较化合物
生物学实施例
实例4.体外分析
4.1.EphA2分析
测试化合物对EphA2(UniProtRef.：P29317)的抑制是通过市售ReactionBiology专利纳升放射性HotSpotSM分析(ReactionBiology，Onegreatvalleyparkway,Suite2,MalvernPA,19355,USA)测定。分析原理在于：在通过酶使用[33P]-γ-ATP及ATP(10μM)将底物磷酸化时，测量纳入聚[Glu:Tyr](4:1)(0.2mg/mL)中的33P。
为测定IC50，自10μM或3μM(最高稀释)开始以1/3稀释测试化合物的连续稀释物。
表VI.本发明示例性化合物的EphA2效能
*>100nM
**>50-100nM
***>25-50nM
****0.01-25nM
表VII.比较化合物的EphA2效能
化合物 IC50
A ****
4.2.EphA4分析
测试化合物对EphA4(UniProtRef.：P54764)的抑制是通过市售ReactionBiology专利纳升放射性HotSpotSM分析(ReactionBiology，Onegreatvalleyparkway,Suite2,MalvernPA,19355,USA)测定。分析的原理在于：在通过酶、使用[33P]-γ-ATP及ATP(10μM)将底物磷酸化时，测量纳入聚[Glu:Tyr](4:1)(0.2mg/mL)中的33P。
为测定IC50，自10μM或3μM(最高稀释)开始以1/3稀释测试化合物的连续稀释物。
表VIII.本发明的示例性化合物的EphA4效能
*>100nM
**>50-100nM
***>25-50nM
****0.01-25nM
化合物 IC50
2 ****
9 **
29 *
47 **
55 ***
4.3.EphA7分析
分析的原理在于：在通过酶EphA7、使用[33P]-γ-ATP及ATP将底物磷酸化时，测量纳入底物聚GT中的33P。通过将试样装载于滤板上(使用收集器，PerkinElmer)及6个后续洗涤步骤移除未纳入的33P。在向滤板(PerkinElmer)添加microscint后在Topcount上测量聚GT中纳入的33P。
将重组EphA7(Carna目录号08-126，2ng/孔)与激酶反应缓冲剂(10mMMOPSpH7.2、5mMDTT、0.01％Triton-X100、5mMMnCl2、0.5mMNa3VO4、5mMβ-甘油磷酸酯)中的0.1mg/mL聚(Glu,Tyr)钠盐(4:1)(MW20000-50000(Sigma目录号P0275))、0.15μM非放射性ATP、0.125μCi/25μl33P-γ-ATP(PerkinElmer，目录号NEG602K)最终浓度、以25μL总体积在聚丙烯96孔板(Greiner，V形底)中一起培育，其中含有或不含含有测试化合物或媒剂的5μL(DMSO，1％最终浓度)。于30℃90min后，通过添加25μL/孔的150mM磷酸停止反应。使用细胞收集器(PerkinElmer)将所有终止激酶反应物转移至预洗涤(75mM磷酸)的96孔滤板(PerkinElmer目录号6005177)。将板用300μL/孔的75mM磷酸溶液洗涤6次并密封板底部。添加40μL/孔的Microscint-20，密封板顶部并使用Topcount(PerkinElmer)实施读数。使用计数/分钟(cpm)测定测试化合物抑制激酶活性的能力，该cpm通过Topcount测量为：
Cpm(化合物)：针对存在测试化合物的试样测定的cpm
Cpm(对照)：针对具有阳性对照抑制剂(10μM星形孢菌素)的试样测定的cpm
Cpm(媒剂)：在媒剂(1％DMSO)存在下测定的cpm
针对化合物制备剂量稀释系列，使得能够在EphA7分析中测试剂量反应效应及计算每一化合物的IC50。每一化合物通常是以20μM、随后1/5连续稀释的浓度测定，共10点，最终浓度1％DMSO。在化合物系列的效能增加时，可制备更多稀释物和/或可降低最高浓度(例如5μM、1μM)。
表IX.本发明的示例性化合物的EphA7效能
*>1000nM
**>500-1000nM
***>250-500nM
****0.01-250nM
表X.比较化合物的EphA7效能
化合物 IC50
A *
4.4.EphB2分析
分析的原理在于：在通过酶EphB2、使用[33P]-γ-ATP及ATP将底物磷酸化时，测量纳入底物聚GT中的33P。通过将试样装载于滤板上(使用收集器，PerkinElmer)及6个后续洗涤步骤移除未纳入的33P。在向滤板(PerkinElmer)添加microscint后在Topcount上测量聚GT中纳入的33P。
将重组EphB2(Carna目录号08-129，0.6ng/孔)与激酶反应缓冲剂(10mMMOPSpH7.2、5mMDTT、0.01％Triton-X100、5mMMnCl2、0.5mMNa3VO4、5mMβ-甘油磷酸酯)中的0.05mg/mL聚(Glu,Tyr)钠盐(4:1)(MW20000-50000(Sigma目录号P0275))、0.5μM非放射性ATP、0.25μCi/25μl33P-γ-ATP(PerkinElmer，目录号NEG602K)最终浓度、以25μL的总体积在聚丙烯96孔板(Greiner，V形底)中一起培育，其中含有或不含含有测试化合物或媒剂的5μL(DMSO，1％最终浓度)。于30℃45min后，通过添加25μL/孔的150mM磷酸停止反应。随后如针对EphA7所述实施实验。使用计数/分钟(cpm)测定测试化合物抑制激酶活性的能力，该cpm通过Topcount测量为：
Cpm(化合物)：针对存在测试化合物的试样测定的cpm
Cpm(对照)：针对具有阳性对照抑制剂(10μM星形孢菌素)的试样测定的cpm
Cpm(媒剂)：在媒剂(1％DMSO)存在下测定的cpm
针对化合物制备剂量稀释系列，使得能够在EphB2分析中测试剂量反应效应及计算每一化合物的IC50。每一化合物通常是以20μM、随后1/5连续稀释的浓度测定，共10点，最终浓度1％DMSO。在化合物系列的效能增加时，可制备更多稀释物和/或可降低最高浓度(例如5μM、1μM)。
表XI.本发明的示例性化合物的EphB2效能
*>100nM
**>50-100nM
***>25-50nM
****0.01-25nM
表XII.比较化合物的EphB2效能
化合物 IC50
A ****
4.5.EphB4分析
测试化合物对EphB4(UniProtRef.：Q541P7)由的抑制是通过市售ReactionBiology专利纳升放射性HotSpotSM分析(ReactionBiology，Onegreatvalleyparkway,Suite2,MalvernPA,19355,USA)测定。分析的原理在于：在通过酶、使用[33P]-γ-ATP及ATP(10μM)将底物磷酸化时，测量纳入聚[Glu:Tyr](4:1)(0.2mg/mL)中的33P。
为测定IC50，自10μM或3μM(最高稀释)开始以1/3稀释测试化合物的连续稀释物。
表XIII.本发明的示例性化合物的EphB4效能
*>100nM
**>50-100nM
***>25-50nM
****0.01-25nM
实例5.细胞分析
5.1.MDA-MB-231细胞中的pEPHA2抑制
5.1.1.概要
MDA-MB-231是具有高EphA2表达水平的人类三倍阴性乳癌细胞系(Zhuang等人，2010)，因此，已研发了测量MDA-MB-231细胞中EphA2自体磷酸化被测试化合物抑制的细胞分析。
将MDA-MB-231细胞与不同浓度的测试化合物(30nM-30μM)于37℃一起培育2h。使用兔p-Ser897EphA2抗体、通过细胞裂解物中的Western印迹检测磷酸化EphA2蛋白质含量，并针对β-肌动蛋白蛋白质含量标准化。IC50值源自定量Western印迹的带强度。
5.1.2.方案
于37℃、5％CO2下、在含有10％热灭活胎牛血清(FBS)的杜贝克氏改良鹰氏培养基(Dulbecco’sModifiedeagle’sMedium)(DMEM)中培养MDA-MB-231细胞。
以1800μLDMEM+10％FBS的总体积接种400,000个细胞/6孔，并于37℃、5％CO2下培育过夜。添加10×浓度的200μL测试化合物并将板于37℃、5％CO2下培育2小时。在移除培养基、然后PBS洗涤后，向细胞中添加80μL裂解缓冲剂。收集细胞裂解物并将25μg蛋白质装载于10％Bis-Tris凝胶上。将蛋白质转移至PVDF膜后，将膜与兔p-Ser897EphA2抗体(CellSignaling，3TraskLaneDanver，MA01923,US，目录号6347)在2％乳溶液中培育1h，然后于4℃过夜培育。在洗涤膜并与二级抗体(猪抗兔HRP(Dako,Produktionsvej42,DK-2600Glostrup,Denmark，目录号P039901，于RT)一起培育1h后，将膜用HRP底物显影并利用Kodak成像仪对带(带峰值)进行定量。在对p-Ser897EphA2量进行定量后，将印迹与山羊肌动蛋白抗体(SantaCruz,10410FinnellStreet,Dallas,Texas75220,U.S.A，目录号：sc-1615)一起培育，以检查印迹上是否存在相等载量的所有试样。
5.1.3.分析
使用GraphPad软件、基于p-Ser897EphA2Western印迹及肌动蛋白Western印迹的带峰值测定化合物的EC50。
用p-Epha2值除以肌动蛋白值以标准化载量。通过用化合物条件的值除以针对媒剂条件获得的值计算抑制值百分比(PIN)。利用S形剂量与可变斜率曲线拟合参数计算EC50，且顶部定位于100％PIN且底部定位于0％PIN。
5.2.MDA-MB-231细胞中的无贴壁依赖性生长分析
5.2.1.概要
EphA2反义寡核苷酸抑制软琼脂中MDA-MB-231细胞的生长(Carles-Kinch等人，2002)，因此评定化合物于软琼脂中的细胞生长抑制且还评定聚丙烯无贴壁依赖性生长(AIG)分析。将MDA-MB-231细胞与不同浓度的测试化合物(10nM-30μM)一起培育并10天后测定细胞存活力。
5.2.2.方案
于37℃、5％CO2下、在含有10％热灭活胎牛血清(FBS)的杜贝克氏改良鹰氏培养基(DMEM)中培养MDA-MB-231细胞。
5.2.2.1.软琼脂分析
将琼脂制备为1.2％(w/vol，于H2O中)溶液并高压灭菌以将其熔融成溶液并进行灭菌。微波加热琼脂直至完全溶解并在水浴中冷却至37℃。通过在DMEM+10％FBS+1XP/S中稀释1.2％琼脂溶液1/2，制备软琼脂培养基。用50μL软琼脂培养基涂覆96孔板(TC，透明，聚苯乙烯)并将板转移至4℃并保持30min，以容许基底琼脂层固化。收集MDA-MB-231细胞并重新悬浮为每等份试样25μL培养基中4000个MDA-MB-231细胞，保持于37℃。混合25μL细胞悬浮液及50μL软琼脂培养基，立刻转移至已经含有固化基底琼脂层的96孔平底微量滴定板的每一孔。将板于4℃放置15分钟以容许细胞琼脂层固化。向每一孔中添加90μL生长培养基及10μL化合物，浓度是最终浓度的22.5倍(每孔中的总体积是225μL)。最后，将板于37℃、5％CO2下培育10天。
向每孔中加入40μLAlamar蓝试剂(在培养基中1:2稀释)并于37℃培育5h。随后将80μL转移至黑色96孔板并于exc530_em590下利用Envision测量荧光。
5.2.2.2.PP分析
在黑色聚丙烯96孔板中分配15μL浓度比最终浓度高10倍的化合物或浓度比最终浓度高10倍的媒剂(每孔总体积是150μL)。向板中添加于135μL(完全生长培养基)中的2000个MDA-MB-231细胞，并将板于37℃、5％CO2下培育10天。向每孔中添加15μLAlamar蓝试剂，并将板于37℃培育5h。于exc530_em590下利用Envision测量荧光。
5.2.3.计算及统计
测试化合物的EC50值是使用Graphpad回归、基于抑制值百分比计算，利用媒剂(0％PIN)及1μM星形孢菌素(100％PIN)计算。
实例6.药物代谢动力学
6.1.小鼠
6.1.1.动物
此研究是利用42只天然雄性CD1小鼠(18-20g，4-5周龄)实施。小鼠得自Janvier,LeGenestStIsle,France。
在室内以约15次换气/小时、22±2℃的温度、30-70％的相对湿度及12小时明/12小时暗循环(在夜晚期间夜灯)的最佳条件维持控制环境。
使用啮齿动物的粒状饮食(UARA04C-10)且随意提供。在p.o.给药前，在化合物施用前至少12小时及在施用后4小时，使动物剥夺食物。所有动物皆自由获得自来水。
6.1.2.方案
经由尾静脉浓注以1mg/kg的剂量水平向小鼠(每次取样n＝3)静脉内施用化合物55，且以5mg/kg的剂量水平以单次经口管饲形式经口施用第二组小鼠。i.v.浓注施用是以5mL/kg的剂量体积给予且经口施用是以10mL/kg的剂量体积给予。实际剂量体积基于10只体重的平均值。
用于调配经口施用的化合物的媒剂是水中的甲基纤维素(0.5％，水中)。
在气体麻醉下通过心内穿刺自所有动物收集约500μL血样并将其放置于含有Li-肝素作为抗凝血剂的管中。于不同时间点(i.v.：给药后0.05、0.25、0.5、1、3、5及8小时；p.o.：给药后0.25、0.5、1、3、5、8及24小时)时收集血样。对每一小鼠取样一次并无痛致死。
将血液保持在冰上。在取样后1小时内，于4℃将血液以5,000rpm离心10min。在离心后立刻将所得血浆试样收集至聚丙烯管中并在生物分析期间于-20℃保持冷冻。
6.2.大鼠
6.2.1.动物
此研究是利用6只天然雄性SpragueDawley大鼠(180-200g，6-8周龄)实施。大鼠是自Janvier,LeGenestStIsle,France获得。
在室内以约15次换气/小时、22±2℃的温度、30-70％的相对湿度及12小时明/暗循环的最佳条件维持控制环境。
使用啮齿动物的粒状饮食(UARA04C-10)且随意提供。在p.o.给药前，在化合物施用前至少12小时及在施用后4小时，使动物剥夺食物。所有动物皆自由获得自来水。
6.2.2.方案
在给药日前2天，在用异氟烷的气体麻醉下移植颈静脉中的导管。
经由尾静脉浓注以1mg/kg的剂量水平向大鼠静脉内施用测试化合物。
以5mg/kg或30mg/kg的剂量水平、以调配于水中的羟基-丙基-β-环糊精(HPβCD)10％w/v中的化合物的单次管饲形式经口施用额外3只大鼠。
i.v.浓注及经口施用是给予5mL/kg的剂量体积。
经由导管自所有动物收集约200μL血样并将其放置于含有Li-肝素作为抗凝血剂的管中。于不同时间点(i.v.：给药后0.05、0.25、0.5、1、3、5、8及24小时；p.o.：给药后0.25、0.5、1、3、5、8及24小时)时收集血样。
将血液保持在冰上。在取样后1小时内，于4℃将血液以5,000rpm离心10min。在离心后立刻将所得血浆试样收集至聚丙烯管中并在生物分析期间于-20℃保持冷冻。
6.3.分析
通过LC-MS/MS分析血浆试样。利用含有内标的过量甲醇沉淀血浆蛋白质并将相应上清液注射至C18柱上。通过增加有机流动相的百分比自HPLC系统洗脱出分析物。API4000质谱仪(ABSciexTM)用于检测及定量。6.4.计算及统计
药物代谢动力学参数是通过非房室分析、使用软件(Pharsight，5.2版)计算。
6.5.结果
在进行此方案时，测量经口施用后的以下暴露值：
表XIV.本发明的示例性化合物的大鼠中的暴露(AUC)
*：化合物4调配于5％甲基纤维素/水中
表XV.比较化合物的暴露
化合物 剂量(mg/kg，po) AUC(ng.h/mL)
A 5 273
表XVI.本发明的示例性化合物的小鼠中的暴露(AUC)
表XVII.比较化合物的小鼠中的暴露(AUC)
化合物 剂量(mg/kg，po) AUC(ng.h/mL)121 -->
A 30 1130
实例7.体内分析
7.1.人类三倍阴性乳癌(MDA-MB-231)的小鼠异种移植模型
7.1.1.动物
向动物(雌性BALB/c小鼠，Harlan，S1930，18-20g)随意提供过滤自来水及标准食物并维持于22±2℃、55±10％湿度、12h明/暗循环。
7.1.2.化合物制备
通过将市售溶液(Freseniuskabi,871WF014/4)1/3稀释于盐水中调配用作阳性对照的紫杉醇。
将po施用的测试化合物调配于0.5％甲基纤维素(VWR，参照AX021233)中。
7.1.3.细胞系
MDA-MB-231细胞系是自ATCC保藏中心(RefHTB-26)获得。随后于37℃在5％CO2培育箱中将细胞在补充有10％(v/v)青霉素/链霉素(Gibco15140-148)及1％(v/v)L-谷氨酰胺200mM(Gibco25030-024)的RPMI1640培养基中培养。
7.1.4.肿瘤移植
在120只小鼠的上背部通过皮下途径注射0.1mL50％Matrigel(BDbiosciences，不含LDEV，256235)+50％D-PBS1X(Gibco14190-086)中的500万个MDA-MB-231细胞/小鼠。在移植之前，通过腹膜内注射0.1mL/10g剂量的麻醉溶液(18mLNaCl、0.9％+0.5mL甲苯噻嗪(xylazine)、+1.5mL氯胺酮)麻醉小鼠。在移植后，定期用卡尺测量肿瘤，并将具有约200mm3的平均肿瘤体积的小鼠随机分成10例个体的组，且以3mg/kg、10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg(p.o.，QD，以10mL/kg施用体积)的剂量向每组施用测试化合物、媒剂(p.o.)、作为对照的紫杉醇(3x/周，20mg/kgi.p.)。
在处理过程期间每周记录两次体重及肿瘤生长。
26天后，停止处理，在每组中，将一半小鼠无痛致死进行组织收集，且将另一半再保持7天，在此时段期间测量体重及肿瘤大小。
在处死的小鼠中，收集血液及肿瘤，分析，并将测试化合物的效应与对照(媒剂及紫杉醇)比较。
7.1.5.结果
7.1.5.1.26天处理后的肿瘤生长抑制
数值是使用以下计算获得：
相对肿瘤体积(RTV)：
肿瘤对对照(T/C)
肿瘤生长抑制(TGI)
TGI＝1-T/C
表XVIII.第26天时的肿瘤生长抑制结果
如上表及图1所示，以30mg/kg施用的化合物55引起肿瘤生长完全阻断(统计学上显著)，而以30mg/kg、100mg/kg或300mg/kg施用的比较化合物A显示其抗肿瘤效应停滞且不能达成相同的对肿瘤生长的抑制效应。
7.1.5.2.第7天时的暴露
在实验期间，在第7天量测血浆暴露，如下表所示。本发明化合物显示于30mg/kg(p.o.)下的暴露是比较化合物A的>24倍。甚至于10倍更高给药(300mg/kg,p.o.)下，比较化合物A的暴露仍是化合物55的1/3.9倍。
表XIX.第7天测定的血浆暴露
7.1.6.结论
报告的数据显示：与现有技术的紧密类似物相比，化合物55惊人地显示出更好的体内活性并于p.o.30mg/kg阻断肿瘤生长。
此外，化合物55显示比比较化合物A达成的暴露更高的暴露，即使化合物A是以10倍较高剂量施用。
7.2.经口葡萄糖耐受性测试(OGTT)
可使用经口葡萄糖耐受性测试以测量化合物对葡萄糖吸收速率的效应且因此可为胰岛素分泌的量度。使动物(Sprague-Dawley大鼠，雄性，250g，n＝12/组)禁食过夜。媒剂、二甲双胍(Metformin)(阳性对照，250mg/kgpo)及化合物处理的大鼠接受葡萄糖载量(2g/kg，po)。利用手动血糖测计仪(OneTouchUltraLifescan)在葡萄糖装载之前即刻(t＝0min)及之后15min、30min、60min、90min、120min及180min用一滴通过穿刺大鼠尾静脉获得的血液测量血液葡萄糖值。
7.3.大鼠MNX模型中的体内功效
7.3.1.药理学方法
在雌性Lewis半月板切除大鼠(MNX)模型中研究体内功效。MNX大鼠模型是骨关节炎的充分验证的疾病模型(Janusz等人,2002；Pritzker等人,2006；Bendele等人,2001)。
7.3.2.手术及给药
骨关节炎是由第0天(D0)时在每一大鼠的右腿中通过横切内侧副韧带、通过半月板切除术诱导，且移除4mm韧带。将半月板的内部部分垂直横切至两翼中，其推至滑膜腔的前部及背部。假动物仅经历麻醉，皮肤及肌肉切开，随后缝合。在第1天，将大鼠根据其体重随机指派给治疗组(n＝20/组)，以具有均匀分布。自D2至D21，每日一次(qd)或每天两次(bid)向大鼠经口(po)施用调配于甲基纤维素(MC)0.5％或HPβCD10％pH3.0中的化合物。
7.3.3.稳态PK测定(ssPK)
在处理至少7天后，于施用后4个时间点(0h、1h、3h及6h)(且假定24h等于投药前试样)取样血液，以测定稳态血浆暴露。
7.3.4.组织学
在处死时，收集每一大鼠的右胫骨并进行处理用于组织分析。在4％甲醛中固定48h后，使胫骨在Osteosoft中脱钙7天，且在面对面包埋于石蜡中之前切成2个半部分。以200μm间隔切割5个连续切片，覆盖约1.5mm的骨的中间部分。将一个载玻片系列用番红O及浅绿色染色用于形态评价及OARSI评分。用DAPI安装另一载玻片系列用于软骨细胞密度量测。
使用基于软骨损伤的分级及分期的OARSI方法对反映胫骨坪中骨关节炎的软骨损伤程度进行评价及评分(Pritzker等人,2006)。以盲化方式由两个不同读者评定OARSI评分。对于每一胫骨而言，一个评分得自5个切片的OARSI评分的中值。
OARSI评分＝等级×期(1至24)
等级＝至软骨区域中的损伤深度，提供关节炎严重性的信息。
期＝软骨表面上的损伤程度，提供关节炎程度的信息。
对于统计分析，利用分层Kruskal-Wallis测试、之后Dunnett多重比较事后检验来比较各组的中值。
显著性水平：*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001对MNX-媒剂。对所有研究组进行统计分析。
表XX.本发明化合物的MNX研究结果
7.4.抗炎测定
熟习此项技术者应了解，已研发了许多分析，且其充分确立，可用于量测抗炎活性(Brand等人,2007；Miescher等人,1989)。
7.5.克隆形成(clonogenic)分析
此分析评价半固体培养基中测试化合物抑制肿瘤细胞的无贴壁依赖性生长及离体菌落形成的能力。为此，以半对数增量、在0.001μM至30μM范围内的浓度、在如下104种不同组织型的肿瘤异种移植衍生的细胞悬浮液中评价测试化合物：肛门癌(1)、膀胱(6)、中枢神经(1)、结肠(13)、亚洲人胃(8)、高加索人胃(4)、头颈(2)、肝(1)、NSC肺(腺14、表皮样2、大细胞4)、乳房(6)、卵巢(1)、胰脏(10)、前列腺(3)、肾(10)、子宫体癌(1)以及黑色素瘤(10)、胸膜间皮瘤(pleuramesothelioma)(3)、软组织肉瘤(3)及骨肉瘤(1)。7.5.1.细胞系的培养
按常规方式使患者衍生的肿瘤细胞系每周传代一次或两次。使所有细胞于37℃在具有5％CO2的加湿气氛中、在补充有10％(v/v)胎牛血清及0.01％(w/v)庆大霉素(gentamicin)的RPMI1640培养基中生长。在Neubauer-血球计中、使用锥虫蓝排除法测定活细胞的百分比。
7.5.2.人肿瘤异种移植物的单一细胞悬浮液的制备
在无菌条件下移出在胸腺-发育不全裸小鼠(NMRInu/nu品系)中以连续传代皮下生长的人实体瘤异种移植物。在无菌条件下移出MDA-MB-231异种移植物，放入预冷却的转移培养基(OncoscienceAG)中，并立刻在冷冻包上运送以运行实验。将所有异种移植物材料以机械方式分解且随后与由胶原酶IV型(41U/mL)、DNaseI(125U/mL)、透明质酸酶(100U/mL)及分散酶II(1.0U/mL)组成的酶合剂在RPMI1640培养基中于37℃一起培育45分钟。使细胞通过100μm及40μm网目大小的筛(CellStrainer,BDFalconTM)并用RPMI1640培养基洗涤两次。在Neubauer-血球计中、使用锥虫蓝排除法测定活细胞的百分比。将细胞的等份试样冷冻，并储存于液氮中。在实验的每一天，将冷冻的肿瘤细胞等份试样解冻并用于制备分析板。
7.5.3.克隆形成分析程序
根据经修改的两层软琼脂分析以96孔板格式实施克隆形成分析。对于每一测试，如上文所述制备肿瘤物质且如下制备分析板：每一测试孔含有3个相等体积的层，即2个半固体培养基层(底层及顶层)及一个培养基上清液层，具有或无测试化合物。底层由0.05mL/孔细胞培养基(IMDM或RPMI1640，具有或无丙酮酸盐，补充有20％(v/v)胎牛血清、0.01％(w/v)庆大霉素及0.75％(w/v)琼脂)组成。向0.05mL补充有0.4％(w/v)琼脂的相同培养基中添加1.5x103至1x104个细胞并平铺至底层上。在DMSO中连续稀释后添加测试化合物并转移在细胞培养基中，留在细胞上用于实验期间(连续暴露，0.05mL药物覆盖物)。每个板包括6个未经处理的对照孔及药物处理的组，于10个浓度下一式两份。将培养物于37℃及7.5％CO2下在加湿气氛中培育8至13天，并使用倒置显微镜密切监测集落生长。在此时段内，离体肿瘤生长导致形成直径>50μm的集落。在最大集落形成时，利用自动分析影像系统(BIOREADER5000-Wα,BiosysGmbH)实施计数。在评价之前48小时，将关键集落用氯化2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基四唑鎓盐的无菌水溶液(1mg/mL，100μL/孔)染色。
7.5.4.数据评价
若满足以下质量控制准则，则认为分析完全可评价：
-对照孔中的集落的平均数>50个，集落直径>50μm
-分析板内计算的Z’-因子≥0.5
-生长对照孔中的变化系数≤30％
-100μM浓度的阳性参照化合物舒尼替尼(sunitinib)应引起信号减少至生长对照的<30％
药物效应是根据通过比较经处理孔中的平均信号与未经处理对照的平均信号获得的集落形成百分比来表示(由测试-对-对照值T/C-值[％]表示)：
使用4参数非线性曲线拟合(OncotestWarehouse软件)、将S形浓度-反应曲线拟合至每一肿瘤模型获得的数据点。IC50值报告为相对及绝对IC50值。相对IC50值是给出的响应(抑制集落形成)位于S形浓度-反应曲线的顶部坪与底部坪之间的一半(曲线的拐点)的测试化合物的浓度。绝对IC50值测定为T/C＝50％的浓度效应曲线的交点处的浓度。
化合物的总体效能是由所有个别IC50值的几何平均IC50值表示。若IC50值不可在检查剂量范围内测定(由于化合物活性过大或无活性)，则使用所研究的最低或最高浓度计算几何平均值。
7.5.5.结果
在进行此分析时且基于相对IC50值，具体而言在黑色素瘤、前列腺癌、肾癌、肉瘤、子宫癌、肺癌、结肠癌、胃癌、肝癌、乳癌及卵巢癌中发现敏感性肿瘤模型。
一般结论
本申请中提供的数据证实，与现有技术中所述的结构类似的化合物相比，式I化合物惊人地呈现改良的暴露。较高暴露可引起化合物的较低剂量，且较低剂量水平进而可降低化合物的药物-药物相互作用、副作用和/或毒性。
另外，与现有技术的密切类似物相比，本发明化合物亦惊人地显示较高体内活性，且特定而言可用于减少和/或阻断肿瘤生长。熟习此项技术者尚不可预测此改良的暴露及活体内活性。
最终备注
那些熟习此项技术者应了解，上述说明本质上是示例性及说明性的，且意欲阐释本发明及其优选实施方案。经由常规实验，熟习此项技术者应认知到，可进行明显修改及改变，此并不背离本发明的精神。随附权利要求范围内的所有此类修改皆意欲包括于其中。因此，本发明意欲不由上述说明、而是由以下权利要求及其等效形式界定。
本说明书中引用的所有出版物、包括但不限于专利及专利申请皆以引用方式并入本文中，如同充分陈述的已特定地及个别地指明将各个出版物以引用方式并入本文中一般。
应理解，诸如各种化合物的差示细胞渗透能力等因素可促成体外生物化学及细胞分析中的化合物活性间的差异。
本申请中给出且阐述的本发明化合物的至少一些化学名称已以自动基础通过使用市售化学名称软件程序生成，且尚未经独立地验证。实施此功能的代表性程序包括由OpenEye软件公司销售的Lexichem命名工具及由MDL公司销售的Autonom软件工具。在指示化学名称及所绘示结构不同的情形下，以所绘示结构为准。
参考文献
Bolen,S.、Feldman,L.、Vassy,J.、Wilson,L.、Yeh,H.-C.、Marinopoulos,S.、Wiley,C.、Selvin,E.、Wilson,R.、Bass,E.B.等人(2007)，Systematicreview:comparativeeffectivenessandsafetyoforalmedicationsfortype2diabetesmellitus.Ann.Intern.Med.147,386-399。
Brand,D.D.、Latham,K.A.及Rosloniec,E.F.(2007)，Collagen-inducedarthritis.Nat.Protoc.2,1269-1275。
Brantley-Sieders,D.M.、Jiang,A.、Sarma,K.、Badu-Nkansah,A.、Walter,D.L.、Shyr,Y.及Chen,J.(2011)，Eph/ephrinprofilinginhumanbreastcancerrevealssignificantassociationsbetweenexpressionlevelandclinicaloutcome.PloSOne6,e24426。
Bundgaard,H.(1985).Designofprodrugs(Elsevier)。
Carles-Kinch,K.、Kilpatrick,K.E.、Stewart,J.C.及Kinch,M.S.(2002)，AntibodyTargetingoftheEphA2TyrosineKinaseInhibitsMalignantCellBehavior.CancerRes.62,2840-2847。
Ivanov,A.I.、Steiner,A.A.、Scheck,A.C.及Romanovsky,A.A.(2005)，ExpressionofEphreceptorsandtheirligands,ephrins,duringlipopolysaccharidefeverinrats.Physiol.Genomics21,152-160。
Jensen,K.L.、Dickmeiss,G.、Donslund,B.S.、Poulsen,P.H.及K.A.(2011)，AsymmetricOrganocatalyticSynthesisofComplexCyclopenta[b]quinolineDerivatives.Org.Lett.13,3678-3681。
Kitamura,T.、Kabuyama,Y.、Kamataki,A.、Homma,M.K.、Kobayashi,H.、Aota,S.、Kikuchi,S.及Homma,Y.(2008)，EnhancementoflymphocytemigrationandcytokineproductionbyephrinB1systeminrheumatoidarthritis.Am.J.Physiol.-CellPhysiol.294,C189-C196。
Konstantinova,I.、Nikolova,G.、Ohara-Imaizumi,M.、Meda,P.、T.、Zarbalis,K.、Wurst,W.、Nagamatsu,S.及Lammert,E.(2007)，EphA-Ephrin-A-MediatedβCellCommunicationRegulatesInsulinSecretionfromPancreaticIslets.Cell129,359-370。
KwanTat,S.、Pelletier,J.-P.、Amiable,N.、Boileau,C.、Lajeunesse,D.、Duval,N.及Martel-Pelletier,J.(2008)，ActivationofthereceptorEphB4byitsspecificligandephrinB2inhumanosteoarthriticsubchondralboneosteoblasts.ArthritisRheum.58,3820-3830。
Miescher,G.C.、Schreyer,M.及MacDonald,H.R.(1989)，ProductionandcharacterizationofaratmonoclonalantibodyagainstthemurineCD3molecularcomplex.Immunol.Lett.23,113-118。
Murai,K.K.及Pasquale,E.B.(2003)，Eph’ectivesignaling:forward,reverseandcrosstalk.J.CellSci.116,2823-2832。
Pasquale,E.B.(2008)，Eph-EphrinBidirectionalSignalinginPhysiologyandDisease.Cell133,38-52。
Pritzker,K.P.H.、Gay,S.、Jimenez,S.A.、Ostergaard,K.、Pelletier,J.-P.、Revell,P.A.、Salter,D.及vandenBerg,W.B.(2006)，Osteoarthritiscartilagehistopathology:gradingandstaging.OsteoarthritisCartilage14,13-29。
Rajapakse,H.a、Moore,K.P.、Nantermet,P.G.、Sanders,J.M.、Parmentier-Batteur,S.及Mark,R.J.(2010)，Epha4RtkInhibitorsforTreatmentofNeurologicalandNeurodegenerativeDisordersandCancer。
Remington,J.P.(1985)，PharmaceuticalPreparationsandTheirManufacture.InRemington’sPharmaceuticalSciences,A.R.Gennaro编辑(Easton,PA18042:MackPub.公司)。
Tandon,M.、Vemula,S.V.及Mittal,S.K.(2011)，EmergingstrategiesforEphA2receptortargetingforcancertherapeutics.ExpertOpin.Ther.Targets15,31-51。
Wuts,P.G.M.及Greene,T.W.(2012)，Greene’sProtectiveGroupsinOrganicSynthesis(Wiley-Interscience)。
Xi,H.-Q.、Wu,X.-S.、Wei,B.及Chen,L.(2012)，Ephreceptorsandephrinsastargetsforcancertherapy.J.Cell.Mol.Med.16,2894-2909。
Zamora,D.O.、Babra,B.、Pan,Y.、Planck,S.R.及Rosenbaum,J.T.(2006)，HumanleukocytesexpressephrinB2whichactivatesmicrovascularendothelialcells.Cell.Immunol.242,99-109。
Zhao,C.、Irie,N.、Takada,Y.、Shimoda,K.、Miyamoto,T.、Nishiwaki,T.、Suda,T.及Matsuo,K.(2006)，BidirectionalephrinB2-EphB4signalingcontrolsbonehomeostasis.CellMetab.4,111-121。
Zhuang,G.、Brantley-Sieders,D.M.、Vaught,D.、Yu,J.、Xie,L.、Wells,S.、Jackson,D.、Muroaka-Cook,R.、Arteaga,C.及Chen,J.(2010)，ElevationofreceptortyrosinekinaseEphA2mediatesresistancetotrastuzumabtherapy.CancerRes.70。

Claims (16)

1.式I化合物，
其中
X是N或CH；
L是-NH(C＝O)-或-C(＝O)NH-；
R1是
-CN，
卤代，
C1-4烷基，任选被一个或多个独立选择的R6a基团取代，
C1-4烷氧基，任选被一个或多个独立选择的R6b基团取代，
C3-4环烷基，
苯基，
-SO2C1-4烷基，或
-NR7aR7b；
R2是H、环丙基、C1-4烷基(任选被一个或多个卤代取代)或C1-4烷氧基；
R3是-CH3、-CH2CH3或Cl；
R4是
C1-2烷基，任选被一个OH取代，
C1-2烷基，被一个OH和一个包含一个或两个独立地选自N、O及S的杂原子的5至6元杂环烷基取代，
C3-6环烷基，任选被一个OH取代；
各R6a是
OH，
卤代，或
C1-4烷氧基；
各R6b是
OH，
卤代，
C1-4烷氧基，
-NR8aR8b，或
5至6元杂环烷基，其包含一个或两个独立地选自N、O及S的杂原子，任选被一个C1-4烷基取代；
各R7a、R7b独立地选自H和C1-4烷基；和
各R8a或R8b独立地选自H和C1-4烷基，
或其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物是根据式II：
其中R1、R2、R3、R4及L如权利要求1中所定义。
3.根据权利要求1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是-CH3或-CH2CH3，其各自被一个或多个独立选择的OH、F、Cl、-OCH3或-OCH2CH3取代。
4.根据权利要求1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是-OCH3或-OCH2CH3。
5.根据权利要求1至4中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是-CH3、-CH2CH3、-OCH3或-OCH2CH3。
6.根据权利要求1或2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物是根据式IIIa：
其中X、L、R3及R4如权利要求1中所定义。
7.根据权利要求1至6中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中L是-NH(C＝O)-。
8.根据权利要求1至6中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中L是-C(＝O)NH-。
9.根据权利要求1至8中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是被一个OH取代的C1-2烷基。
10.根据权利要求1至9中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中X是CH。
11.根据权利要求1至9中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中X是N。
12.药物组合物，其包含药学上可接受的载体和药学有效量的根据权利要求1至11中任一项的化合物。
13.根据权利要求12的药物组合物，其包含另一治疗剂。
14.根据权利要求13的药物组合物，其中该另一治疗剂是用于治疗增殖性疾病的药剂。
15.根据权利要求1至11中任一项的化合物或根据权利要求12至14中任一项的药物组合物，其用于医药。
16.根据权利要求1至11中任一项的化合物或根据权利要求12至14中任一项的药物组合物，其用于预防和/或治疗增殖性疾病。
CN201480046541.6A 2013-08-23 2014-08-18 用于治疗增殖性障碍的1h-吡唑并[3,4-b]吡啶衍生物及其药物组合物 Pending CN105473590A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB1315072.7 2013-08-23
GBGB1315072.7A GB201315072D0 (en) 2013-08-23 2013-08-23 Novel compounds and pharmaceutical compositions thereoffor the treatment of proliferative disorders
PCT/EP2014/067574 WO2015024905A1 (en) 2013-08-23 2014-08-18 Derivatives of 1 h-pyrazolo[3,4-b]pyridine and pharmaceutical compositions thereof for the treatment of proliferative disorders

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105473590A true CN105473590A (zh) 2016-04-06

Family

ID=49302102

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201480046541.6A Pending CN105473590A (zh) 2013-08-23 2014-08-18 用于治疗增殖性障碍的1h-吡唑并[3,4-b]吡啶衍生物及其药物组合物

Country Status (16)

Country Link
US (1) US9062051B2 (zh)
EP (1) EP3036234A1 (zh)
JP (1) JP2016528269A (zh)
KR (1) KR20160040301A (zh)
CN (1) CN105473590A (zh)
AR (1) AR097339A1 (zh)
AU (1) AU2014310652A1 (zh)
BR (1) BR112016002872A2 (zh)
CA (1) CA2920991A1 (zh)
GB (1) GB201315072D0 (zh)
IL (1) IL243739A0 (zh)
MX (1) MX2016002078A (zh)
PH (1) PH12016500173A1 (zh)
SG (1) SG11201601157XA (zh)
TW (1) TW201536783A (zh)
WO (1) WO2015024905A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111620868A (zh) * 2020-05-28 2020-09-04 爱斯特（成都）生物制药股份有限公司 一种1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-甲醛的制备方法

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2023003087A (es) * 2020-09-16 2023-04-14 Axceso Biopharma Co Ltd Compuesto de pirimido pirimidinona y composicion farmaceutica que comprenden el mismo.

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100113415A1 (en) * 2008-05-29 2010-05-06 Rajapakse Hemaka A Epha4 rtk inhibitors for treatment of neurological and neurodegenerative disorders and cancer
WO2011019780A1 (en) * 2009-08-11 2011-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Azaindazoles as btk kinase modulators and use thereof
WO2013100672A1 (ko) * 2011-12-29 2013-07-04 제이더블유중외제약㈜ 단백질 키나아제 저해활성을 가지는 3,6-이치환된 인다졸 유도체

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100113415A1 (en) * 2008-05-29 2010-05-06 Rajapakse Hemaka A Epha4 rtk inhibitors for treatment of neurological and neurodegenerative disorders and cancer
WO2011019780A1 (en) * 2009-08-11 2011-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Azaindazoles as btk kinase modulators and use thereof
WO2013100672A1 (ko) * 2011-12-29 2013-07-04 제이더블유중외제약㈜ 단백질 키나아제 저해활성을 가지는 3,6-이치환된 인다졸 유도체

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
俞庆森等: "《药物设计》", 31 July 2005, 化学工业出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111620868A (zh) * 2020-05-28 2020-09-04 爱斯特（成都）生物制药股份有限公司 一种1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-甲醛的制备方法
CN111620868B (zh) * 2020-05-28 2021-08-31 爱斯特（成都）生物制药股份有限公司 一种1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-甲醛的制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
AU2014310652A1 (en) 2016-03-03
BR112016002872A2 (pt) 2017-08-01
KR20160040301A (ko) 2016-04-12
MX2016002078A (es) 2016-06-23
AR097339A1 (es) 2016-03-09
CA2920991A1 (en) 2015-02-26
JP2016528269A (ja) 2016-09-15
SG11201601157XA (en) 2016-03-30
TW201536783A (zh) 2015-10-01
US9062051B2 (en) 2015-06-23
PH12016500173A1 (en) 2016-04-25
EP3036234A1 (en) 2016-06-29
GB201315072D0 (en) 2013-10-02
WO2015024905A1 (en) 2015-02-26
US20150080391A1 (en) 2015-03-19
IL243739A0 (en) 2016-04-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103370314B (zh) 作为用于治疗癌症疾病的fgfr激酶抑制剂的取代苯并吡嗪衍生物
US8063225B2 (en) Tricyclic compound derivatives useful in the treatment of neoplastic diseases, inflammatory disorders and immunomodulatory disorders
CN107428758A (zh) 丙烯酸类衍生物、其制备方法及其在医药上的用途
TWI618698B (zh) 新型嘧啶和吡啶類化合物及其用途
CN102887895B (zh) 吡啶并嘧啶类mTOR抑制剂
JP2014193887A (ja) ピリジノニルｐｄｋ１阻害剤
JP2014534212A (ja) Ｆｇｆｒキナーゼ阻害を介した抗癌ベンゾピラジン
KR20100043288A (ko) 키나제 억제제로서의 5-(4-(할로알콕시)페닐)피리미딘-2-아민 화합물 및 조성물
JP7323896B2 (ja) カゼインキナーゼ１ε阻害剤、医薬組成物及びその使用
CN103097381A (zh) 作为激酶抑制剂的1，8-萘啶物质
CN109415361A (zh) 丙烯酸类衍生物及其制备方法和其在医药上的用途
JP2020530833A (ja) ピロロピリミジン及びピロロピリジン誘導体
CN106132934A (zh) 治疗炎性病症的苯并咪唑衍生物及其医药组合物
CN102643272B (zh) 新的噻吩并[3,2-d]嘧啶类化合物
CN104837844A (zh) 作为酪蛋白激酶1 d/e抑制剂的吡唑取代的咪唑并哌嗪
WO2012073184A1 (en) Quinolin-4 (1h) -one derivatives as inhibitors of phosphatidylinositol 3-kinases
CN105473590A (zh) 用于治疗增殖性障碍的1h-吡唑并[3,4-b]吡啶衍生物及其药物组合物
TWI565698B (zh) 喹啉化合物，其製造方法及用途
CN117653636A (zh) 含稠合双环类化合物的抗癌药及该化合物的制药用途
KR101082227B1 (ko) 피라졸로피리미딘 화합물의 메탄술폰산염, 그 결정 및 그제조 방법
US9290503B2 (en) Tricyclic compound derivatives useful in the treatment of neoplastic diseases, inflammatory disorders and immunomodulatory disorders
CN101857594A (zh) 一种四氢吡啶并吲哚类化合物及其制备方法和应用
WO2023026180A1 (en) Amorphous form of (s)-2-(5-((3-ethoxypyridin-2-yl)oxy)pyridin-3-yl)-n-(tetrahydrofuran-3- yl)pyrimidine-5-carboxamide

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20160406

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication