CN105466746B - 一种石蜡制片粘片剂配方及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种石蜡制片粘片剂配方及其制备方法，该配方为每100mL含有以下组成成分：糯米粉乳液3～5mL、鸡蛋清1～3mL、明胶0.4～0.6g，余量为蒸馏水。本发明还公开了一种石蜡制片粘片剂配方的制备方法，本发明技术方案目的明确，效果可靠，制备过程通俗易懂，便于操作，可作为动植物材料石蜡制片显微观察时的备选粘片剂，适合推广应用。

Description

一种石蜡制片粘片剂配方及其制备方法

技术领域

本发明属于制片技术领域，涉及一种石蜡制片粘片剂配方及其制备方法。

背景技术

制片技术是生物显微观察技术的一个重要组成部分，而石蜡制片技术又是生物制片技术中应用最为普遍的一种，它适合于绝大部分生物材料的光学显微镜观察，对硬件要求较低，实验成本也很低，是各层次研究人员比较钟爱的一种显微观察手段。粘片剂是石蜡制片技术中的一个重要环节，脱片现象是石蜡制片中极为常见的一种情况，很多时候因为脱片而导致整个制片过程失败，既浪费了大量试剂，也消耗了宝贵的时间；当实验材料比较稀有和珍贵时，因粘片剂不良而导致的制片失败，更会造成无法挽回的损失和遗憾。石蜡制片技术中最为常用的粘片剂主要有火棉胶粘片剂、明胶粘片剂和蛋白粘片剂，但他们存在的最突出的共性问题是脱片率较高，实验失败率也随之增高，尤其是对于技术不娴熟的操作者来说，脱片始终是一个颇令人烦恼的问题。所以，探索适用性更广、效果能够得到更好保障的粘片剂新配方及其制备方法，对丰富和完善生物制片技术具有积极的意义，实际推广应用前景广阔。

目前，各类文献记载的石蜡切片制片过程中用到的粘片剂有三种，即火棉胶粘片剂、明胶粘片剂和蛋白粘片剂，其配方如下：

火棉胶粘片剂：火棉胶1～2g溶解在纯酒精和乙醚各半的混合液中即成。

明胶粘片剂：溶液甲(明胶1g+100mL蒸馏水+石炭酸2g+甘油15mL)，溶液乙(40％甲醛4mL+100mL蒸馏水)，使用时先滴加溶液甲，再滴加溶液乙。

蛋白粘片剂：鸡蛋清25mL+甘油25mL+石炭酸0.5g。

以上三种传统的火棉胶粘片剂、明胶粘片剂和蛋白粘片剂在石蜡制片中都有应用，但存在的问题也较为突出，这些不足集中体现在：(1)三种粘片剂的脱片率均比较高，应用效果难以把握；(2)明胶粘片剂涉及试剂较多，而且使用步骤较为繁琐；(3)三种粘片剂均涉及毒性较强的化学试剂，如石炭酸、乙醚，对长时间操作制片人员存在潜在的人身危害；(4)三种粘片剂通用性比较欠缺，如火棉胶粘片剂更加适合大型材料和切片较厚的材料，对小型或要求切片较薄时使用效果较差；蛋白粘片剂更加适合动物材料等。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺陷，提供一种石蜡制片粘片剂配方及其制备方法，达到以下目的：

(1)提高石蜡制片过程中粘片剂的广谱性；(2)提高粘片剂使用效果，改善石蜡制片过程中传统粘片剂黏固不牢固、易于脱落的问题；(3)提高石蜡制片的成功率。

其具体技术方案为：

一种石蜡制片粘片剂配方，每100mL含有以下组成成分：糯米粉乳液3～5mL、鸡蛋清1～3mL、明胶0.4～0.6g，余量为蒸馏水。

优选地，每100mL含有以下组成成分：糯米粉乳液4mL、鸡蛋清2mL、明胶0.5g，余量为蒸馏水。

一种本发明所述的石蜡制片粘片剂配方的制备方法，包括以下步骤：

步骤1.糯米粉乳液的制备：称取糯米粉3g，于烘箱中130℃干热1h，放入10mL离心管中，加7mL蒸馏水，在涡旋振荡器震荡10min后，2000r/min离心2min，上清液即为糯米粉乳液；

步骤2.粘片剂混合液的制备过程：

①称取明胶0.4～0.6g，放入烧杯，加入蒸馏水70mL，置于36℃烘箱至明胶完全溶解，再冷却至室温，备用；

②吸取1～3mL鸡蛋清加入10mL离心管，在涡旋振荡器震荡10min，静置10min后加入步骤①的冷却至室温的明胶液；再加入步骤1所述的糯米粉乳液3～5mL，室温下混合均匀，用5层纱布过滤，将滤液用蒸馏水定容至100mL，即制得的片剂，粘片剂于4℃保存备用。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明通过不断的探索、优化，摸索出了一种新型粘片剂配方及其制备技术，丰富了石蜡制片技术途径，在石蜡制片、微生物形态观察中具有很强的实用性。

1.在本发明技术方案中，将糯米粉乳液引入粘片剂配方中，是基于糯米粉的主要成分是支链淀粉、蛋白质和少量脂肪，当糯米粉干热糊化后，分子之间的相互作用力增加，可促进淀粉成分和蛋白成分的结合，形成新的更加复杂的网络结构，其结构也更加致密，且胶凝性和稳定性均有较大提高，更加符合粘片剂对成分特征的要求。

2.本发明粘片剂配方中的鸡蛋清含有0.3％的纤维状粘蛋白，这是作为粘片剂成分之一的本质原因。但要充分发挥蛋清的效果，要对蛋清进行充分的震荡处理，以使纤维状蛋白分散均匀。

3.明胶是胶原变性产物，是一种热可逆性混合物，其没有固定的结构，分子量分布在几万到几十万，具有较好的持水性、成膜性特征，这些特征有利于对不同切片材料进行物理黏附和和固定。但使用浓度要准确把握，浓度不宜过高，否则会掩填切片材料，降低观察效果；另外，当浓度过高时，涂抹到载玻片上后会形成较厚的凝固层，反而会造成更加严重的脱片现象。明胶融化时，温度以不超过38℃为宜，因为较高的温度会使明胶分子均一化，不利于对不同切片材料的黏附。

4.糯米粉乳液、鸡蛋清和明胶三者混合过程中，要在室温条件下进行，因为较高温度下，鸡蛋清比较容易形成絮状沉淀，降低粘片效果。

5.糯米粉乳液、鸡蛋清和明胶混合使用，为生物切片材料提供了更加丰富的物理黏附背景，可大大降低石蜡制片时脱片情况的发生，进而提高生物材料显微观察实验的成功率。具体使用时也可根据实验材料的大小、细胞组成特征等情况适当调整成分用量，以达到最佳的使用效果。

总之，本发明技术方案目的明确，效果可靠，制备过程通俗易懂，便于操作，可作为动植物材料石蜡制片显微观察时的备选粘片剂，适合推广应用。

附图说明

图1为使用本发明粘片剂获得的石蜡制片观察效果示例，其中A.棉花根横切面；B.棉花茎横切面；C.棉花叶横切面；D.昆虫复眼纵切面。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。

实施例1

一种石蜡制片粘片剂配方，每100mL含有以下组成成分：糯米粉乳液3mL、鸡蛋清1mL、明胶0.4g，余量为蒸馏水。

一种本发明所述的石蜡制片粘片剂配方的制备方法，包括以下步骤：

步骤1.糯米粉乳液的制备：称取糯米粉3g，于烘箱中130℃干热1h，放入10mL离心管中，加7mL蒸馏水，在涡旋振荡器震荡10min后，2000r/min离心2min，上清液即为糯米粉乳液；

步骤2.粘片剂混合液的制备过程：

①称取明胶0.4g，放入烧杯，加入蒸馏水70mL，置于36℃烘箱至明胶完全溶解，再冷却至室温，备用；

②吸取1mL鸡蛋清加入10mL离心管，在涡旋振荡器震荡10min，静置10min后加入步骤①的冷却至室温的明胶液；再加入步骤1所述的3mL糯米粉乳液，室温下混合均匀，用5层纱布过滤，将滤液用蒸馏水定容至100mL，即制得的片剂，粘片剂于4℃保存备用。

实施例2

一种石蜡制片粘片剂配方，每100mL含有以下组成成分：糯米粉乳液4mL、鸡蛋清2mL、明胶0.5g，余量为蒸馏水。

一种本发明所述的石蜡制片粘片剂配方的制备方法，包括以下步骤：

步骤1.糯米粉乳液的制备：称取糯米粉3g，于烘箱中130℃干热1h，放入10mL离心管中，加7mL蒸馏水，在涡旋振荡器震荡10min后，2000r/min离心2min，上清液即为糯米粉乳液；

步骤2.粘片剂混合液的制备过程：

①称取明胶0.5g，放入烧杯，加入蒸馏水70mL，置于36℃烘箱至明胶完全溶解，再冷却至室温，备用；

②吸取2mL鸡蛋清加入10mL离心管，在涡旋振荡器震荡10min，静置10min后加入步骤①的冷却至室温的明胶液；再加入步骤1所述的4mL糯米粉乳液，室温下混合均匀，用5层纱布过滤，将滤液用蒸馏水定容至100mL，即制得的片剂，粘片剂于4℃保存备用。

实施例3

一种石蜡制片粘片剂配方，每100mL含有以下组成成分：糯米粉乳液5mL、鸡蛋清3mL、明胶0.6g，余量为蒸馏水。

一种本发明所述的石蜡制片粘片剂配方的制备方法，包括以下步骤：

步骤1.糯米粉乳液的制备：称取糯米粉3g，于烘箱中130℃干热1h，放入10mL离心管中，加7mL蒸馏水，在涡旋振荡器震荡10min后，2000r/min离心2min，上清液即为糯米粉乳液；

步骤2.粘片剂混合液的制备过程：

①称取明胶0.6g，放入烧杯，加入蒸馏水70mL，置于36℃烘箱至明胶完全溶解，再冷却至室温，备用；

②吸取3mL鸡蛋清加入10mL离心管，在涡旋振荡器震荡10min，静置10min后加入步骤①的冷却至室温的明胶液；再加入步骤1所述的5mL糯米粉乳液，室温下混合均匀，用5层纱布过滤，将滤液用蒸馏水定容至100mL，即制得的片剂，粘片剂于4℃保存备用。

实施例4

以传统的明胶粘片剂、火棉胶粘片剂和蛋白粘片剂为作为对照，在用植物棉花(Gossypium hirsutum)和昆虫二点委夜蛾(Athetis lepigone)为材料的石蜡制片过程中，使用本发明技术制得的粘片剂进行制片。实验重复3次，每种材料做30片，蜡片厚度统一为8μm；脱片率用百分率表示；显微观察效果设为优、良、中、差四个等级。如表1所示，结果表明：使用本发明技术方案制得的粘片剂获得了良好的实验效果，与对照相比，蜡片在载玻片上的脱片率明显降低。制成的片子在光学显微镜下观察时各部分结构清晰完整，如图1所示。

因此，通过本发明配方获得的粘片剂与传统粘片剂相比，在综合效能上具有明显优势，是一项值得推广应用的制片技术。

表1本发明粘片剂与传统粘片剂使用效果对比

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。

Claims (1)

1.一种石蜡制片粘片剂配方的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1.糯米粉乳液的制备：称取糯米粉3g，于烘箱中130℃干热1h，放入10mL离心管中，加7mL蒸馏水，在涡旋振荡器震荡10min后，2000r/min离心2min，上清液即为糯米粉乳液；

步骤2.粘片剂混合液的制备过程：

①称取明胶0.4～0.6g，放入烧杯，加入蒸馏水70mL，置于36℃烘箱至明胶完全溶解，再冷却至室温，备用；

②吸取1～3mL鸡蛋清加入10mL离心管，在涡旋振荡器震荡10min，静置10min后加入步骤①的冷却至室温的明胶液；再加入步骤1所述的糯米粉乳液3～5mL，室温下混合均匀，用5层纱布过滤，将滤液用蒸馏水定容至100mL，即制得的片剂，粘片剂于4℃保存备用。