CN105452857A - 评价慢性肝病的疾病严重性指标和诊断三种不同亚型的原发性硬化性胆管炎的方法 - Google Patents

评价慢性肝病的疾病严重性指标和诊断三种不同亚型的原发性硬化性胆管炎的方法 Download PDF

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Abstract

本文提供使用非侵入性肝功能测试结果评价患者中的慢性肝病的疾病严重性指标(DSI)。DSI源白基于肝血流的非侵入性肝功能测试结果。在方法中使用DSI用于预测临床结果，预测对于抗病毒治疗的响应和评价慢性肝病的进展。本文提供了诊断三个不同类别的患有原发性硬化性胆管炎(PSC)的患者的非侵入性方法。该方法可用于诊断PSC患者为慢速进展者、中速进展者和快速进展者。

Description

评价慢性肝病的疾病严重性指标和诊断三种不同亚型的原发性硬化性胆管炎的方法
本申请于2013年11月12日作为PCT国际专利申请提交，并且要求2012年11月12日提交的美国临时申请号61/725,292的优先权，后者通过引用并入本文。
关于联邦赞助的研究或开发的声明
本发明由国立卫生研究所在合同号N01-DK-9-2327下通过政府支持进行的。政府在本发明中具有某些权利。
背景技术
技术领域
在评价患者中的慢性肝病中有用的疾病严重性指标(DiseaseSeverityIndex，DSI)源自基于肝血流的一个或多个肝功能测试结果。DSI用于许多慢性肝病中的患者评价的方法中。还提供非侵入性方法来诊断三个不同类别的患有原发性硬化性胆管炎(PrimarySclerosingCholangitis，PSC)的患者。所述方法可以用于将PSC患者诊断为慢速进展者、中速进展者和快速进展者。
相关技术描述
直到现在，在肝活组织检查的纤维化分期被认为是作为用于患有慢性肝病的患者中的临床结果的替代的金标准。几个研究已经证明，纤维化的严重性而不是脂肪变性，预测临床结果的未来风险。遗憾地，纤维化的分期活组织检查的精确性受到取样误差和组织病理学解释变化两者的损害。此外，活组织检查是侵入性的，昂贵的，而不被患者接受，并伴随有显著的风险，包括威胁生命的并发症或甚至死亡的风险。肝活组织检查的备选方案是需要的。
慢性肝病。估算表明，3000万以上的美国人可能会受到慢性肝病影响。慢性肝病(Chronicliverdiseases，CLDs)包括慢性丙型肝炎(chronichepatitisC，CHC)、慢性乙型肝炎、酒精性肝病、酒精性脂肪肝炎(AlcoholicSteatoHepatitis，ASH)以及非酒精性脂肪肝病(Non-AlcoholicFattyLiverDisease，NAFLD)，其可以从相对良性的称为脂肪变性的简单脂肪肝发展到更严重的非酒精性脂肪肝炎(Non-AlcoholicSteatoHepatitis，NASH)、自身免疫性肝病、隐源性肝硬化(cryptogeniccirrhosis)、血色素沉着(hemochromatosis)、威尔逊病(Wilson’sdisease)、α-1-抗胰蛋白酶缺乏(alpha-1-antitrypsindeficiency)、原发性硬化性胆管炎(PSC)和其它胆汁淤积性肝病(cholestaticliverdiseases)。
全部肝病具有由炎症、纤维化积累和门静脉循环改变促使疾病进展的共同病理生理特征。涉及门静脉血流的非侵入性评价的测试对于具有或怀疑具有任何慢性肝病的患者是合乎需要的。
原发性硬化性胆管炎。原发性硬化性胆管炎(PSC)是进展性肝病，其导致肝损伤并最终导致肝衰竭。PSC表现不可阻挡的进展，但进展速率在患者之间不同。慢性炎症导致胆管的硬化和结疤。肝移植是PSC的唯一已知的疗法，但移植通常预留给患有严重肝损害的患者。患者护理包括减少PSC并发症的体征和症状。PSC病理生理学的特点是门静脉纤维化，与肝病的其它病因相比，其更早在疾病上导致门静脉高血压(portalhypertension，PHTN)。
PSC疾病严重性评价缺乏金标准，因为肝活组织检查具有显著抽样误差且不再推荐。肝静脉压力梯度(HepaticVenousPressureGradient，HVPG)是侵入性的，昂贵的和不实用的，并且实际建立临床模型来评价晚期疾病。在PSC患者中进行先前公开的肝功能测试SHUNT、门静脉HFR和STAT，如Everson等于2012年5月30日提交的US13/484083，将其通过引用并入本文。虽然这些测试可能描绘疾病严重性，但仍有对于用于诊断PSC进展速率的精确非侵入性方法的未满足的需要。
两个已知的肝功能试验，门静脉HFR(Portalhepaticfiltrationrate，门静脉肝滤过率，FLOW)测试和SHUNT测试，已被用于精确测量门静脉血流并且使用大量患有慢性丙型肝炎的患者预先验证。用于患有慢性丙型肝炎的患者中肝功能的门静脉HFR和SHUNT测试公开在本发明人的在先申请中。
门静脉HFR(FLOW)测试，精确测量来自最低限度为5个血样的门静脉血流，所述血样是在氘化胆酸盐的口服剂量以后90分钟的时期取得的。门静脉HFR(FLOW)测试公开在Everson，US2010/0055734，用于诊断和介入肝病症的方法(MethodsforDiagnosisandInterventionofHepaticDisorders)，2009年9月11日提交，将其通过引用并入本文。
SHUNT(分流)测试，包括同时施用静脉内剂量的13C-胆酸盐和口服剂量的氘化胆酸盐。SHUNT测试可以用于测量门静脉血流，和全身肝血流并且因此确定门静脉-全身分流的量。SHUNT测试公开在Everson等，US2008/0279766，用于诊断和介入肝病症的方法(MethodsforDiagnosisandInterventionofHepaticDisorders)中，2006年1月26日提交，将其通过引用并入本文。用于估计门静脉血流的测试也可用于其它慢性肝病。
称为STAT测试的第三种测试是用于估计门静脉血流和肝功能的筛查方法。STAT测试公开在Everson等，US13/484,083中，2012年5月30日提交，将其通过引用并入本文。STAT测试意欲筛查目的并且与FLOW和SHUNT测试联合使用以监测肝血流和肝功能。例如，用STAT筛查测试结果在截止值水平以上的患者经受更综合的门静脉HFR和SHUNT测试以监测患者中的肝血流和肝功能。
门静脉HFR(FLOW)、SHUNT和STAT测试目前用于限定患有慢性丙型肝炎和其它慢性肝病的患者中的疾病严重性。已经建立起多个截止点用于追踪特定疾病的疾病进展和评价对于治疗的反应。然而，还没有开发出用于任何慢性肝病的具有实用性的严重性通用指标。
门静脉HFR和SHUNT测试是用于大量临床应用的评价肝功能的有价值的工具，所述临床应用例如，选择应当接受抗病毒治疗的患有慢性乙型肝炎的患者；选择应当接受抗病毒治疗的慢性丙型肝炎患者；评价患有肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)的患者正在评估肝切除术的肝功能失代偿的风险；识别等候名单上的具有低MELD(ModelforEnd-stageLiverDiseasescore，终末期肝病评分的模型)的患者在等候器官捐献者时处于死亡高风险的亚组；作为临床试验中的终点；在儿科群体中替代肝活组织检查；同种移植功能的跟踪；测量活体捐赠者的功能恢复；和测量胆汁淤积性肝病(PSC，原发性硬化性胆管炎)的功能损伤。虽然已经对于特定病症开发了用于FLOW和SHUNT测试的多个截止点，但是可应用于肝疾病中的数种临床病况的疾病严重性指标(DSI)的开发显然是需要的。
发明概述
在一些实施方案中，提供疾病严重性指标(DSI)用于监测患者中慢性肝病的方法。DSI从基于肝血流量的肝功能测试结果得出。DSI在许多慢性肝病中用于监控治疗和评价疾病严重性的方法中使用。
在一些实施方案中，提供了用于确定患者中疾病严重性指标(DSI)值的方法，所述方法包括(a)获得具有或处在慢性肝病风险中的患者的一种或多种肝功能测试值，其中所述一个或多个肝功能测试值从选自由SHUNT、门静脉肝滤过率(门静脉HFR)和全身肝滤过率(全身HFR)组成的组中的一种或多种肝功能测试获得；和(b)采用疾病严重性指标方程(DSI方程)以获得患者中的DSI值，其中DSI方程包括一个或多个项和常数以得到DSI值，其中DSI方程的至少一个项独立地表示患者中的肝功能测试值，或者数学变换的来自步骤的患者中的肝功能测试值；和将DSI方程的至少一个项乘以对于肝功能测试特异的系数。
在一些实施方案中，用于确定患者中疾病严重性指标(DSI)值的方法还包括，将患者中的DSI值与一个或多个DSI截止值、一个或多个正常健康对照或者随时间的患者内一个或多个DSI值比较。在一些实施方案中，所述将患者中的DSI值与一个或多个DSI截止值比较表示至少一个临床结果。在一些实施方案中，临床结果选自由Child-Turcotte-Pugh(CTP)增加、静脉曲张、脑病、腹水和肝相关死亡组成的组。
在一些实施方案中，比较随时间的患者内的DSI值用于监测治疗患者中的慢性肝病的治疗有效性，其中随时间的患者中DSI值降低表示治疗的有效性。
在一些实施方案中，比较随时间的患者中DSI值用于监测治疗患者中慢性肝病的需要，其中患者中DSI值随时间增加表示患者中治疗的需要。
在一些实施方案中，患者中的DSI值用于监测患者中慢性肝病治疗的需要，或有效性，其中所述治疗选自由抗病毒治疗、抗纤维化治疗、抗生素、免疫抑制治疗、抗癌治疗、熊脱氧胆酸、胰岛素增敏剂、介入治疗、肝移植、改变生活方式、和饮食限制、低血糖指标饮食、抗氧化剂、维生素补充剂、经颈静脉肝内门体分流术(transjugularintrahepaticportosystemicshunt，TIPS)、导管定向溶栓、球囊扩张和支架放置、球囊扩张和引流、体重减轻、锻炼和避免酒精的组。
在一些实施方案中，比较随时间的患者内的DSI值用于监测患者中的慢性肝病的状况或疾病进展，其中随时间的患者内的DSI值的变化用于通知患者疾病状况和未来的临床结果的风险，其中，随时间的患者内的DSI值增加表示较差的预后，并且随时间的患者内的DSI值的降低表示较好的预后。
在一些实施方案中，DSI方程中的至少一项独立地表示数学变换的来自步骤的患者中的肝功能测试值，其中数学变换的患者中的肝功能测试值选自患者中的肝功能测试值的对数、反对数、自然对数、自然反对数或倒数。
在一些实施方案中，DSI方程的每一项独立地表示患者中的肝功能测试值，或患者中的肝功能测试值的数学变换，并且将DSI方程的至少一项乘以肝功能测试的特异性的系数。
在一些实施方案中，疾病严重性指标方程是：
DSI＝5.34(SHUNT)-6.65(Loge门静脉HFR)-8.57(Loge全身HFR)+44.66
其中SHUNT是患者中的SHUNT测试值(％)，门静脉HFR是作为mL/min/kg的患者中的门静脉HFR测试值，其中kg是患者的体重，和全身HFR是患者中的全身HFR值，为mL/min/kg，其中kg是患者的体重，其中患者中的SHUNT、门静脉HFR和全身HFR测试值是在同一天获得的。
在一些实施方案中，疾病严重性指标方程是：
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50
其中SHUNT是患者中的SHUNT测试值(％)，门静脉HFR是作为mL/min/kg的患者中的门静脉HFR测试值，其中kg是患者的体重，和全身HFR是患者中的全身HFR值，为mL/min/kg，其中kg是患者的体重，其中患者中的SHUNT、门静脉HFR和全身HFR测试值是在同一天获得的。
在一些实施方案中，患者中DSI值用于评估患者中的慢性肝病，其选自慢性丙型肝炎、非酒精性脂肪肝病或原发性硬化性胆管炎。
在一些实施方案中，用于评估患者中的慢性肝病的疾病严重性指标方程是：
DSI＝9.84(SHUNT)-12.36LOGe(门静脉HFR)+50.5
其中SHUNT是患者中的SHUNT测试值(％)并且门静脉HFR是作为mL/min/kg的患者中的门静脉HFR测试值，其中kg是患者的体重，其中患者中的SHUNT和门静脉HFR测试值是在同一天获得的。在一些实施方案中，慢性肝病是慢性丙型肝炎。
在一些实施方案中，患者中的SHUNT测试值用于DSI方程中，并且SHUNT测试值由下列方法确定，所述方法包括：口服施用第一可区别的胆酸盐剂量(剂量口服)给患者并且同时静脉内共施用第二可区别的胆酸盐剂量(剂量静脉内)给患者，之后接收从患有PSC的患者收集的多个血液或血清样品，其中已经在跨越施用以后的一段时间的间隔收集样品；将每一个样品中的第一和第二可区别胆酸盐的浓度定量；从每个样品中的第一可区别的胆酸盐的浓度生成个体化的口服清除率曲线，这通过包括使用拟合到模式口服可区别的胆酸盐清除率曲线的计算机算法曲线进行，并计算个体化的口服清除率曲线下的面积(AUC口服)；从每个样品中的第二可区别胆酸盐的浓度生成个体化的静脉内清除率曲线，这通过使用拟合到模式静脉内第二可区别的胆酸盐清除率曲线的计算机算法曲线进行，并且计算个体化的静脉内清除率曲线下的面积(AUC静脉内)；和使用下式计算患者中的shunt值：
AUC口服/AUC静脉内×剂量静脉内/剂量口服×100％。
在一些实施方案中，SHUNT测试采用的第一可区别的胆酸盐是第一稳定同位素标记的胆酸并且第二可区别的胆酸盐是第二稳定同位素标记的胆酸。在一些实施方案中，第一和第二稳定同位素标记的胆酸选自2，2，4，4-d4胆酸盐和24-13C-胆酸盐。在一些实施方案中，已经跨越施用以后的2至7个时间点的间隔从患者收集了所述样品。在一些实施方案中，已经在施用以后的5、20、45、60和90分钟从患者收集了样品。在一些实施方案中，已经在跨越从施用时间到选自施用以后约45分钟至约180分钟的时间的一段时间的间隔收集了样品。在一些实施方案中，已经在跨越施用以后约90分钟以下的一段时间的间隔收集了样品。
在一些实施方案中，患者中的门静脉HFR值在DSI方程中使用，并且门静脉HFR值由下列方法确定，所述方法包括的步骤为：口服施用可区别的胆酸盐剂量(剂量口服)给患者，之后接收从患有慢性肝病或处于慢性肝病风险中的患者收集的多个血液或血清样品，其中已经在跨越施用以后的一段时间的间隔从患者收集了样品；测量每个样品中的可区别的胆酸盐的浓度；从每个样品中的可区别的胆酸盐的浓度生成个体化口服清除率曲线，这通过包括使用拟合到模式可区别的胆酸盐清除率曲线的计算机算法曲线进行；计算个体化口服清除率曲线下的面积(AUC)(mg/mL/min)并将所述剂量(以mg计)除以口服施用的稳定同位素标记的胆酸的AUC以获得患者中的口服胆酸盐清除率；和将所述口服胆酸盐清除率除以以kg计的患者重量以获得患者中的门静脉HFR值(mL/min/kg)。
在一些实施方案中，患者中的全身HFR值在DSI方程中使用并且患者中的全身HFR值由下列方法确定，其包括的步骤为：静脉内施用可区别的胆酸盐剂量(剂量静脉内)给患者，之后接收从患有慢性肝病或处于慢性肝病风险中的患者收集的多个血液或血清样品，其中已经在跨越施用以后的一段时间的间隔从患者收集了样品；测量每个样品中的可区别的胆酸盐的浓度；从每个样品中的可区别的胆酸盐的浓度生成个体化静脉内清除率曲线，这通过包括使用拟合到模式可区别的胆酸盐清除率曲线的计算机算法曲线进行；计算个体化静脉内清除率曲线下的面积(AUC)(mg/mL/min)并将所述剂量(以mg计)除以静脉内施用的稳定同位素标记的胆酸的AUC以获得患者中的静脉内胆酸盐清除率；和将所述静脉内胆酸盐清除率除以以kg计的患者重量以获得患者中的全身HFR值(mL/min/kg)。
在一些实施方案中，提供用于计算遭受慢性肝病的患者的疾病严重性指标(DSI)值的方法，所述方法包括：从遭受慢性肝病的患者获得血清样品，其中所述患者事先接收口服施用的第一稳定同位素胆酸盐和同时静脉内施用的第二稳定同位素胆酸盐，并且其中已经在施用所述胆酸盐以后不足180分钟的间隔从所述患者收集了血液样品；测定所述血清样品以计算门静脉肝滤过率(门静脉HFR)，为mL/min/kg，其中kg是所述患者的体重，全身肝滤过率(全身HFR)，为mL/min/kg，其中kg是所述患者的体重，和SHUNT，为％；并且通过使用选自下列的方程计算患者的DSI值：
DSI＝9.84(SHUNT)-12.36Loge(门静脉HFR)+50.5；
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50；或
DSI＝5.34(SHUNT)-6.65(Loge门静脉HFR)-8.57(Loge全身HFR)+44.66。
在一些实施方案中，DSI方程是：
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50，并且所述DSI值用于识别慢性肝病患者中门静脉高血压或代偿失调的风险增加，其中DSI≥18表示门静脉高血压(PHTN)的风险增加；和DSI≥36表示代偿失调的风险增加。在一些实施方案中，门静脉高血压(PHTN)定义为脾肿大或静脉曲张，并且代偿失调定义为腹水或静脉曲张性出血。在一些实施方案中，慢性肝病是原发性硬化性胆管炎。
在一些实施方案中，用于计算患有慢性肝病的患者的疾病严重性指标(DSI)值的DSI方程是：
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50，
并且DSI值用于预测所述慢性肝病患者中的临床结果，其中DSI≥25表示所述患者中临床结果的风险增加。在一些实施方案中，慢性肝病是慢性丙型肝炎。在一些实施方案中，临床结果选自CTP进展、静脉曲张性出血、腹水、肝性脑病或肝相关的死亡。
在一些实施方案中，患者在肝移植(LT)的等待名单上，并且DSI方程是：
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50，
其中DSI值用于优先处理LT等待名单上的患者，其中所述LT等待名单上的患者的优先权随着患者中随时间的DSI值增加，或随着患者的DSI值大于40而增加。
在一些实施方案中，DSI方程是：
DSI＝5.34(SHUNT)-6.65(Loge门静脉HFR)-8.57(Loge全身HFR)+44.66
并且DSI值用于预测慢性肝病患者中的未来临床结果，其中DSI＞19表示所述患者中临床结果的风险增加。
在一些实施方案中，提供的DSI方程包括两项或更多项以及常数以获得DSI值，其中DSI方程的至少一项独立地表示患者中的肝功能测试值，或数学变换的来自步骤的患者中肝功能测试值；其中DSI方程的至少一项乘以特定于肝功能测试的系数，并且DSI方程包括表示来自选自由血清白蛋白，丙氨酸转氨酶，天冬氨酸转氨酶，碱性磷酸酶，总胆红素，直接胆红素，γ-谷氨酰转肽酶，5’核苷酸酶，PT-INR(凝血酶原时间-国际标准化比值)，咖啡因消除，氨基比林清除率，半乳糖消除能力，从利多卡因形成MEGX、美沙西汀-C13和甲硫氨酸-C13组成的组的临床生物化学实验室试验的值的一个或多个附加项；和/或表示选自静脉曲张、腹水或肝性脑病的临床特征的一个或多个附加项。
在一些实施方案中，提供用于诊断患者中原发性硬化性胆管炎(PSC)进展速率的方法，所述方法包括：测定患有PSC的患者中的SHUNT测试值或门静脉HFR测试值；采用算法中的SHUNT测试值或门静脉HFR测试值以提供算法结果，其中所述算法包括在测定步骤的时刻以年表示患者年龄的项；和将所述算法结果与已知的截止值比较以诊断患者中PSC的进展速率。在一些实施方案中，提供用于诊断患者中原发性硬化性胆管炎(PSC)进展速率的方法，其中如果所述患者中的SHUNT测试值(以％计)除以所述患者的年龄大于1.7；则所述患者中的原发性硬化性胆管炎(PSC)的进展速率快，并且将患有PSC的患者诊断为快速进展者。
在一些实施方案中，提供用于诊断患者中原发性硬化性胆管炎(PSC)进展速率的方法，其中如果所述患者中的SHUNT测试值(以％计)除以所述患者的年龄小于1.7；并且门静脉HFR(以mL/min/kg计)+[0.35×年龄]＞29；则所述患者中的原发性硬化性胆管炎(PSC)的进展速率低，并且将患有PSC的患者诊断为慢速进展者。
在一些实施方案中，提供用于诊断患者中原发性硬化性胆管炎(PSC)进展速率的方法，其中如果所述患者中的SHUNT测试值(以％计)除以所述患者年龄小于1.7；并且门静脉HFR(以mL/min/kg计)+[0.35×年龄]＜29；则所述患者中的原发性硬化性胆管炎(PSC)的进展速率是中速的，并且将患有PSC的患者诊断为中速进展者。
附图简述
图1显示门静脉HFR和SHUNT测试的简图。健康对照(上图)一般显示低SHUNT、高门静脉HFR和高全身HFR；而患有肝病诸如PSC的受试者(下图)显示较高的SHUNT、较低的门静脉HFR和较低的全身HFR。
图2显示门静脉HFR对SHUNT测试值可以将健康对照与没有静脉曲张的PSC患者、患有静脉曲张的PSC患者和患有代偿失调的PSC患者区分。
图3显示PSC患者中的门静脉HFR对年龄。PHC患者可以分开成不同的组，基于他们的门静脉HFR测试值和测试时的年龄进行。
图4显示PSC患者可以分开成不同的组，基于他们的SHUNT测试值对测试时的年龄进行。
图5显示来自健康对照和分类为慢速、中速和快速进展者的患有PSC的患者的促炎性的细胞因子IFN-γ、TNF-α、GM-CSF、IL-1β、IL-6和IL-8。每一类型的患者显示细胞因子的独特模式，表明独特的病理生理学机理。
图6显示SHUNT对年龄确定PSC患者分类为快速进展者。在0开始的线区分SHUNT/年龄为1.7；显示SHUNT/年龄＞1.7的线以上的患者归类为快速进展者。具有SHUNT/1.7＜1.7的患者归入到其它PSC类别中。
图7显示没有归类为快速进展者的PSC患者的门静脉HFR对年龄。在0开始的线区分等于29的门静脉HFR+[0.35+年龄]。将具有门静脉HFR+[0.35+年龄]大于29的患者归类为慢速进展者。将具有门静脉HFR+[0.35+年龄]小于29的患者归类为中速进展者。
图8显示PSC患者的STAT测试值对年龄。大多数患者可以使用简单的截止点归类，显示为慢速、中速和快速进展者的图上深色线。年龄在30和40岁之间的患者具有重叠的STAT结果并且不能用此方法归类。
图9显示对于一组CHC患者的在60分钟的STAT测试结果的对数对门静脉HFR(FLOW)测试结果的对数的相关性。得出方程，其可以将在60分钟的浓度(uM)变换成估计的门静脉流(mL/min/kg)。方程是y＝0.9702x+0.0206，其中x是LOG门静脉HFR(FLOW)并且y是LOGSTAT。
图10显示DSI与Ishak纤维化分数(肝活组织检查法，左图)线性相关但是不受脂肪变性(活组织检查脂肪分数，右图)影响，如实施例9中所提供。
图11显示DSI在识别具有未来临床结果的患者方面的表现，如相比于Ishak纤维化分数(肝活组织检查)、血小板计数(CBC)和MELD(ModelforEnd-stageLiverDiseasescore，用于末期肝病分数的模型)的表现。在优化的截止点，DSI惊奇地胜过其它标准测试方法，其包括肝活组织检查和用于预测未来临床结果的MELD。具体地，当相比于肝活组织检查、血小板计数和MELD时，DSI显示最高的灵敏度、特异性、PPV和NPV。
图12显示对于SHUNT、门静脉HFR和DSI用于预测结果的ROC曲线。最优截止点确定为每条曲线上最接近左上角的点。
图13显示对于患有轻微疾病、中等疾病和严重疾病的非肝硬化的慢性丙型肝炎患者(IshakF2，3，4；n＝19，63，45)的胆酸盐测试结果和基于胆酸盐测试SHUNT(％)、全身HFR(mL/min/kg)、门静脉HFR(mL/min/kg)和DSI测试结果的图。将门静脉HFR绘制在X轴上并将全身HFR绘制在Y轴上，SHUNT，全身对门静脉HFR的比率由对角线表示，将DSI显示在阴影区域中。惊奇地，具有高DSI的非肝硬化的患者具有更高的结果风险，如实施例10中所讨论。
图14显示对于患有轻微疾病、中等疾病和严重疾病的肝硬化的慢性丙型肝炎患者(IshakF5，6；n＝48，49)的胆酸盐测试结果和基于胆酸盐测试SHUNT(％)、全身HFR(mL/min/kg)、门静脉HFR(mL/min/kg)和DSI测试结果的图。将门静脉HFR绘制在X轴上并将全身HFR绘制在Y轴上，SHUNT，全身对门静脉HFR的比率由对角线表示，将DSI显示在阴影区域中。惊奇地，具有低DSI的肝硬化的患者具有更低的结果风险，如实施例10中所讨论。
图15显示原发性硬化性胆管炎患者和健康对照的胆酸盐测试结果的图。将门静脉HFR绘制在X轴上并将全身HFR绘制在Y轴上，SHUNT，全身对门静脉HFR的比率由对角线表示，DSI显示在阴影区域中。PSC疾病、静脉曲张和代偿失调的预测DSI截止点显示在区域之间的界面处。
图16显示PSC患者的DSI值与MELD的比较。A区显示全部PSC患者的DSI与MELD的比较。也显示健康对照的DSI用于参考。B区显示约为20的DSI将患有静脉曲张的PSC患者与没有静脉曲张的PSC患者清楚地分开。C区显示约为35的DSI将患有代偿失调的PSC患者与没有代偿失调的那些清楚的分开。
图17显示跟踪1年以后评价的PSC患者中DSI和疾病严重性的改变。将DSI改变针对患者年龄作图。具有表示慢速PSC进展的DSI值的患者显示在左图中，其中截止点18，表示PHTN。具有表示中速和快速PSC进展的DSI值的患者显示在右图中，其中截止点＝36，表示代偿失调。
图18显示肝移植的等待名单上的PSC患者中DSI对MELD分数的图。在评价PSC患者中的并发症风险和肝移植优先级方面，DSI优先于MELD。尽管有低MELD分数，具有DSI＞20的PSC患者发生门静脉高血压相关的并发症，并且具有DSI＞40的PSC患者需要肝移植。
图19，图A显示获得SVR的患者的图，相比于肝功能的四分值。SVR的可能性与DSI最相关。
图19，图B从左至右显示，在用PEG/RBV(聚乙二醇干扰素/利巴韦林)再治疗慢性HCV患者以后，SVR以后的SHUNT、门静脉HFR和DSI的肝功能改善。当基线以后两年测试时，在SVR以后更严重的基线损伤导致更大的功能改善。
发明详述
本文所公开的方法和测试基于慢性肝病的新观点，即，它是门静脉血流的破坏，不是纤维化本身，是有害的和应当作为肝功能分析的靶标。
此前公开的肝功能测试，门静脉HFR(门静脉肝滤过率，FLOW)测试和SHUNT测试，用来精确测量门静脉血流并以前使用大群患有慢性丙型肝炎的患者进行验证。用于患有慢性丙型肝炎的患者中的门静脉HFR和SHUNT测试由本发明人公开在在先申请中。
在一些实施方案中，已经令人惊奇地发现，当门静脉HFR结果或者SHUNT结果除以年龄时，功能评价能够限定PSC中疾病的类别。将PSC患者基于其门静脉HFR和SHUNT值和测试时的年龄分成不同的组。与对照组相比，慢速PSC患者只有缓和的功能下降。中速和快速的PSC患者表现出更多的并发症并且在更早的年龄。慢速、中速和快速进展者可以通过使用门静脉HFR除以年龄(图3)或SHUNT除以年龄(图4)来区分。尽发明人所知，功能评价限定PSC中的疾病类别，这是第一次。
慢性肝病(CLDs)的特征均在于，相似的病理生理学，伴有炎症、细胞死亡和纤维化，导致肝微脉管系统的进展性破坏，因此测量门静脉血流的测试将适用于所有CLDs的评估。
用于评价慢性肝病的几乎全部其它提议的测试已经集中在纤维化，或者关于血清生物标记或者组织弹性的改变(Mukherjee和Sorrell，.2006，肝纤维化的非侵入性测试(Noninvasivetestsforliverfibrosis).肝疾病研讨会(SeminLiverDis.)26：337-347；ManningandAfdhal，2008.纤维化的诊断和定量(Diagnosisandquantitationoffibrosis).肠胃病学(Gastroenterology).134：1670-1681；Poynardetal.，2008，没有金标准的世界中的和谐：用于改善纤维化标记物准确性的新的非侵入性方法(Concordanceinaworldwithoutagoldstandard：Anewnon-invasivemethodologyforimprovingaccuracyoffibrosismarkers).PLoSOne.3：e3857)。
随着疾病进展，纤维化和微脉管系统破坏两者都增加，但它们并不完美相关。这解释了为什么具有极度纤维化、肝硬化的患者可以保持稳定，只要他们的门静脉流量保持在临界阈值以上。这也解释了为什么仅有中度纤维化但是具有严重受损流量的那些患者可能具有严重的并发症。这种新的见解可以改变肝病评估的整个焦点。通过靶向门静脉流量，医生可以容易地检测出早期肝脏疾病，准确地评估病人的状况，并预测临床结果。对于肝病更有效的治疗可从关于新疗法的研究中得出，并且新药注重改善和/或维持门静脉流量。
慢性丙型肝炎。丙型肝炎是一种传染性疾病，影响肝脏并由丙型肝炎病毒(HCV)引起。HCV感染可以未被发现多年并通常是无症状的。然而，慢性感染可导致肝脏结疤、肝硬化和肝衰竭、肝癌或危及生命的食道和胃的静脉曲张。患有肝硬化或肝癌的患者可能需要肝移植，尽管该病毒可以在移植后再次发生。标准疗法包括聚乙二醇干扰素联合利巴韦林，并且涉及与bocepravir或telepravir的进一步结合的临床试验正在进行中。在全球范围内，大约1.80亿人感染HCV。Rosen，慢性丙型肝炎感染(ChronicHepatitisCInfection)，新英格兰医学杂志(NEnglJMed)2011；364：2429-38。
有许多诊断测试可用于检测HCV感染，包括HCV抗体酶免疫测定(ELISA)、重组免疫印迹测定和HCVRNA聚合酶链反应(PCR)。然而，慢性感染通常无症状，并且最经常在升高的肝酶水平的调查以后或例行筛查期间发现。不幸地是，诊断测试不能区分急性和慢性情况。此外，肝酶与疾病严重性不太相关。肝活组织检查用来确定存在的肝损伤程度，但存在来自操作的风险。最近已开发出更好的肝功能非侵入性测试。
两个已知的肝功能测试，门静脉HFR(门静脉肝滤过率，FLOW)测试和SHUNT测试，已被用于精确测量门静脉血流并以前使用大群的患有慢性丙型肝炎的患者进行验证。用于患有慢性丙型肝炎的患者中的门静脉HFR和SHUNT测试由本发明人公开于在先申请中。
非酒精性脂肪肝病。非酒精性脂肪肝病(NAFLD)(Browning等，2004年，脂肪肝在美国城市人口中的流行：族裔影响(PrevalenceofhepaticsteatosisinanurbanpopulationintheUnitedStates：Impactofethnicity)。肝脏病学(Hepatology).40：1387-1395)可能影响高达三分之一美国人口，并且这个庞大的流行病主要是隐藏的，因为人通常无症状并且具有正常的“肝功能测试”-临床生化实验室血液化验如血清白蛋白、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、总胆红素、直接胆红素和γ谷氨酰转肽酶。NAFLD的流行继续增加，伴随着主要风险因素，它们是肥胖症、代谢综合征和胰岛素抗性。NAFLD可以从相对良性的称为脂肪变性的简单脂肪肝进展到更严重的NASH，非酒精性脂肪肝炎。肝炎是肝脏炎症并且也可以由过量饮酒，如在酒精性脂肪肝炎(ASH)，或病毒感染，即，慢性丙型肝炎(CHC)导致。所有这些慢性肝病(CLDs)的特征在于相似的病理生理学，具有炎症、细胞死亡和纤维化，导致肝微脉管系统的进展性破坏。约5％的NAFLD患者将进展为肝硬化(亚当斯等，2005，非酒精性脂肪肝疾病的自然史：人口为基础的群体研究(Thenaturalhistoryofnonalcoholicfattyliverdisease：Apopulation-basedcohortstudy).肠胃病学(Gastroenterology).129：113-121)并且NAFLD将超过CHC作为肝移植的主导指征。
监测患有慢性肝病的患者的困难。目前，将非酒精性脂肪肝炎(NASH)与脂肪变性区分并且监测NASH进展的唯一途径是通过穿刺活组织检查，其评估炎症活动的等级和纤维化的分期。活组织检查被认为是金标准，尽管遭受许多来源的不准确性和侵入性操作的风险。患者必须服用镇静剂并且一部分将经历出血和其它并发症(Janes和Lindor，1993，国际医学年会(AnnInternMed).118：96-98；Seeff等，2010，临床胃肠病学与肝病学(ClinGastroenterolHepatol).8：877-883)。穿刺活组织检查是非常大器官的非常小样本并且难以从足够取样的足够位置获得足够大的片(Vuppalanchi等，2009，临床胃肠病学与肝病学(ClinGastroenterolHepatol).7：481-486；Bedossa等，2003，肝病学(Hepatology).38：1449-1457；Regev等，2002，美国胃肠病学杂志(AmJGastroenterol).97：2614-2618)。活组织检查解释是主观的并且依赖于观察者的专业技能(Rousselet等，2005，肝病学(Hepatology).41：257-264)和组织样品的尺寸和数目(Rousselet等，2005；Vuppalanchi等，2009)。在描述CHC中纤维化的进展时，可以使用6分期Ishak体系(Ishak等，1995，肝病学杂志(JHepatol).22：696-699)，但是更典型的是更简单的4分期体系(Knodell等，1981，肝病学(Hepatology).1：431-435；Batts和Ludwig，1995，美国外科病理学杂志(AmJSurgPathol).19：1409-1417；Scheuer，1991，肝病学杂志(JHepatol).13：372-374)诸如Metavir(Group，TFMCS，1994，肝病学(Hepatology).20：15-20)，其非常可比于用于NASH的4分期体系(Brunt等，1999，美国胃肠病学杂志(AmJGastroenterol).94：2467-2474；Kleiner等，2005.肝病学(Hepatology)41：1313-1321)。然而，NASH中损伤的不均匀性降低准确性(Ratziu等，2005，胃肠病学(Gastroenterology).128：1898-1906)。活组织检查对于三分之一的人群是不实际的，特别是因为该方法具有20％或更高的估计误差率。其它标准肝脏血液测试并不十分有用。肝酶如ALT或AST可在活性闪现期间出现峰值，但它们往往在正常范围内，由于进展的速率慢。肝脏的白蛋白或凝血因子的生产只有在CLD的最晚阶段下降。将NASH与脂肪变性区分并准确地监测NASH进展的非侵入的手段是理想的。
其它非侵入性测试方法的不足。非侵入性肝评估的需要已导致用其它的新方法的商业化，包括生物标记板(biomarkerpanels)、代谢呼吸测试和瞬时弹性成像(transientelastography)。这些其它非侵入性测试方法的每一个都存在缺点。
生物标记物板(Mukherjee和Sorrell，2006，用于肝纤维化的非侵入性测试(Noninvasivetestsforliverfibrosis).肝病研讨会(SeminLiverDis).26：337-347；Shah等，2009，患有非酒精性脂肪肝病的患者中纤维化的非侵入性标记物的比较(Comparisonofnoninvasivemarkersoffibrosisinpatientswithnonalcoholicfattyliverdisease).临床胃肠病学与肝病学(ClinGastroenterolHepatol).7：1104-1112)诸如不足够灵敏以监测早期CHC(Boursier等，2009.用于慢性丙型肝炎中的严重纤维化和肝硬化的血液测试的改进的诊断准确性(Improveddiagnosticaccuracyofbloodtestsforseverefibrosisandcirrhosisinchronichepatitisc).欧洲胃肠病学与肝病学杂志(EurJGastroenterolHepatol).21：28-38；Shaheen等，2007，用于预测丙型肝炎相关的纤维化的纤维测试和纤维扫描：诊断测试准确性的全身检验(Fibrotestandfibroscanforthepredictionofhepatitisc-relatedfibrosis：Asystematicreviewofdiagnostictestaccuracy).美国胃肠病学杂志(AmJGastroenterol).102：2589-2600)或NASH(Ratziu等，2006，用于预测患有非酒精性脂肪肝病的患者中的肝纤维化的生化标记物(纤维测试-纤维确定)的诊断价值(Diagnosticvalueofbiochemicalmarkers(fibrotest-fibrosure)forthepredictionofliverfibrosisinpatientswithnon-alcoholicfattyliverdisease).BMC胃肠病学(BMCGastroenterol).6：6；Angulo等，2007，NAFLD纤维化分数：识别患有NAFLD的患者中肝纤维化的非侵入性系统(TheNAFLDfibrosisscore：AnoninvasivesystemthatidentifiesliverfibrosisinpatientswithNAFLD).肝病学(Hepatology).45：846-854；Wong等，2010，在非酒精性脂肪肝病中使用肝僵硬测量诊断纤维化和肝硬化(Diagnosisoffibrosisandcirrhosisusingliverstiffnessmeasurementinnonalcoholicfattyliverdisease).肝病学(Hepatology).51：454-462)或追踪进展，因为循环蛋白质/片段不能关于精细结构、微脉管系统的破坏和流量的损伤准确地报告。
代谢呼吸测试是可变的，因为它们依赖于细胞色素P450(CYP)酶，其根据性别、年龄、遗传学、饮食、药物而不同，并且它们对于早期阶段疾病不敏感，因为所述酶不显著下降，直到更晚阶段。在FDA试验中具有美沙西汀代谢测试，但这种方法在早期研究中未能检测出早期CHC(Braden等，2005.13C-美沙西汀呼吸测试，作为患有慢性丙型肝炎病毒感染的患者中的肝功能测试(13C-methacetinbreathtestasliverfunctiontestinpatientswithchronichepatitiscvirusinfection).消化药理学和治疗学(AlimentPharmacolTher).21：179-185)。
也在FDA试验中，使用瞬时弹性成像以测量肝僵硬以估计纤维化(DelPoggio和Colombo，2009.瞬时弹性成像是筛查肝病的有用工具吗？(Istransientelastographyausefultoolforscreeningliverdisease？)世界胃肠病杂志(WorldJGastroenterol).15：1409-1414)。该方法对于早期CLD不敏感的(DelPoggio和Colombo，2009，同上；Friedrich-Rust等，2008.用于将肝纤维化分期的瞬时弹性成像的表现：meta分析(Performanceoftransientelastographyforthestagingofliverfibrosis：Ameta-analysis).胃肠病学(Gastroenterology).134：960-974)，包括CHC(Shaheen等，2007，同上，和Rossi等，2003.在评价丙型肝炎患者中的肝纤维化中确认纤维测试生化标记物分数(Validationofthefibrotestbiochemicalmarkersscoreinassessingliverfibrosisinhepatitiscpatients).临床化学(ClinChem).49：450-454)或NASH(Wong等，2010，在非酒精性脂肪肝病中使用肝僵硬诊断纤维化和肝硬化(Diagnosisoffibrosisandcirrhosisusingliverstiffnessmeasurementinnonalcoholicfattyliverdisease).肝病学(Hepatology).51：454-462)并且被NAFLD的主要风险因子肥胖症损害。显然需要区分NASH与脂肪变性并准确监测NASH进展的更有效的非侵入性手段。
集中于门静脉流的新关注可以使如何分期并监控慢性肝病彻底改变。活检仍然在初步诊断中有用，以排除自身免疫疾病和遗传性疾病，但将不被用于评估患者的状态或随着时间跟踪他们。门静脉流的损伤将用来指导管理并确定何时筛查静脉曲张和肝细胞癌是适当的。门静脉流将是临床试验的新的更准确的确定终点。
先前公开的门静脉HFR和SHUNT测试的示意图示于图1中。口服胆酸盐清除率(剂量/口服清除率曲线下的面积)为有效门静脉血流的量度。每公斤体重的口服清除率用于确定门静脉HFR。静脉内胆酸盐清除率(剂量/静脉内清除率曲线下的面积)是总肝血流的量度。每公斤体重的静脉内清除率决定全身HFR。静脉内对口服清除率的比率评估门体分流分数(SHUNT)。在一个方面中，本公开内容提供方法，其中口服胆酸盐清除率或门静脉HFR可以在单个时间点从口服胆酸盐血清浓度来估计，例如，在施用后60分钟(STAT)。
门静脉HFR和SHUNT测试的示意图如图1中所示。图1显示健康对照(上图)通常表现出低SHUNT、高门静脉HFR和高全身HFR；而患有肝病(下图)如PSC的受试者，表现出较高的SHUNT、较低的门静脉HFR和较低的全身HFR。
在健康人中，口服施用的氘化胆酸盐经由门静脉循环递送到肝脏。它的清除率是门静脉循环的量度-因此指定门静脉HFR。静脉内施用的13C-胆酸盐经肝动脉和门静脉循环两者递送到肝脏-因此命名为全身HFR。SHUNT是全身HFR对门静脉HFR的比率。这些测试的正常范围示于顶部图中。
患病时-SHUNT增加并且门静脉和全身HFR两者都降低-如在底部图中所示。
例如，正常健康对照通常表现出SHUNT(静脉内胆酸盐清除率/口服胆酸盐清除率)约为20％，门静脉HFR(每公斤体重的口服胆酸盐清除率)约为30mL/min/kg，和全身HFR(静脉内胆酸盐清除率/公斤体重)约为6mL/min/kg)。肝病患者通常表现出更高的SHUNT值，约为30％至90％之间。肝病患者通常表现出约20mL/min/kg至约2mL/min/kg的较低门静脉HFR。肝病患者通常表现出约4mL/min/kg至约1mL/min/kg的较低全身HFR。
在患病肝脏中，随着更多血液避免由肝内和肝外分流到体循环提取，SHUNT增加，HFR或门静脉流降低，并且STAT增加。在正常对照受试者中，有效的门静脉血流(门静脉HFR，FLOW)在健康肝脏中高，由于低血管阻力。门静脉-全身分流(SHUNT)是最小的。在60分钟口服胆酸盐(STAT)低。例如，在健康对照中，FLOW＝37mLmin-1kg-1、SHUNT＝18％并且STAT＝0.2μM。然而，在患有肝病的受试者中，炎症、纤维化和增加的血管阻力降低有效的门静脉血流(FLOW)。门静脉-全身分流(SHUNT)增加。在60min口服胆酸盐(STAT)是高的。例如，在CHCF2患者中，FLOW＝9mLmin-1kg-1、SHUNT＝35％并且STAT＝1.6μM。
门静脉HFR(FLOW)和SHUNT测试用来确定门静脉血流和肝功能，例如，在健康对照和慢性丙型肝炎患者中；这些测试公开在US2010/0055734和US2008/0279766中，将其每一个通过引用并入本文。开发STAT测试作为筛查测试并用来估计门静脉血流和筛查大量人群用于检测患有慢性肝病，包括慢性丙型肝炎、PSC和NAFLD的患者。开发STAT测试以评估门静脉血流和筛查大量人群用于检测患有慢性肝病，包括慢性丙型肝炎、PSC和NAFLD的患者。STAT对于确定从门静脉循环清除胆酸盐的现有技术方法特别是FLOW和SHUNT测试的关系，已经使用大群的患有慢性丙型肝炎的患者验证。STAT测试公开在2012年5月30日提交的US13/484083中，将其通过引用并入本文。
在一些实施方案中，患者中的门静脉HFR值是从受试者中的STAT测试值估计的，其中受试者中STAT测试值是由下列方法获得的，所述方法包括(a)口服施用可区分的胆酸盐化合物(剂量口服)给受试者，之后接收从具有PSC的受试者采集的单一血液或血清样品，其中所述样品已在施用以后约20-180分钟的特定时间点从受试者收集；(b)测量样品中可区分的胆酸盐化合物的浓度。
在一些实施方案中，患者中的全身HFR值由下列方法确定，所述方法包括：(a)静脉内施用可区别的胆酸盐剂量(剂量口服)给患者，之后接收从患有慢性肝病或处于慢性肝病风险中的患者收集的多个血液或血清样品，其中已经在跨越施用以后的一段时间的间隔从患者收集了样品；(b)测量每个样品中的可区别的胆酸盐的浓度；(c)从每个样品中的可区别的胆酸盐的浓度生成个体化静脉内清除率曲线，这通过包括使用拟合到模式可区别的胆酸盐清除率曲线的计算机算法曲线进行；(d)计算个体化静脉内清除率曲线下的面积(AUC)(mg/mL/min)并将所述剂量(以mg计)除以静脉内施用的稳定同位素标记的胆酸的AUC以获得患者中的静脉内胆酸盐清除率；和(e)将所述静脉内胆酸盐清除率除以以kg计的患者重量以获得患者中的门静脉HFR值(mL/min/kg)。
在一些实施方案中，STAT测试中的单一血液或血清样品是在选自在口服施用可区分的胆酸盐化合物以后约20、25、30、35、40、45、50、55、50、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175或180分钟的一个单一时间点或其间的任一时间点收集的。
在一些实施方案中，在选自口服施用可区分的胆酸盐化合物以后约45、约60或约90分钟的一个时间点收集STAT测试中的单个血液或血清样品。
在一些实施方案中，在口服施用可区分的胆酸盐化合物以后约60分钟收集单个血液或血清样品。
在一些实施方案中，在口服施用可区分的胆酸盐化合物以后约45分钟收集单个血液或血清样品。
在一些实施方案中，在口服施用可区分的胆酸盐化合物以后约90分钟收集单个血液或血清样品。
在一些实施方案中，估计的肝血流(HBF)用下面的方程计算：
HBF＝(静脉内施用以后的胆酸盐清除率)/[1-(SHUNT/100))X(1-(血球容积计％/100))]
以前，人类研究证明CHC中FLOW和SHUNT测试的临床应用。多年中已经提出大量新的肝测试，但很少有研究直接比较它们的疗效和实际临床效用。进行非常大的多中心HALT-C试验，其主要目的是确定长期丙型肝炎病毒抑制的功效，但其中也包括辅助研究，以评估一组新的定量肝功能试验。(Everson等，2009.肝功能的定量测试测量持久病毒学反应以后的肝改善：来自HALT-C试验的结果(Quantitativetestsofliverfunctionmeasurehepaticimprovementaftersustainedvirologicalresponse：ResultsfromtheHALT-Ctrial).消化药理学和治疗学(AlimentPharmacolTher).29：589-601)。测试了近300例晚期(IshakF2-6)但补偿的CLD的患者。最近完成的早期CHC研究比较了25个健康对照和23个早期(IshakF1-2)CHC患者中的这些测试以检验这CLD的整个范围。使用咖啡因、安替比林、利多卡因和半乳糖测试评估了肝脏的代谢能力。全部这些活动都在肝硬化患者中减少，但相比健康对照，没有一个在早期CHC患者中不同。(Everson等，2008.在补偿的慢性丙型肝炎中肝功能损伤的谱：来自针对肝硬化试验的丙型肝炎抗病毒长期治疗的结果(Thespectrumofhepaticfunctionalimpairmentincompensatedchronichepatitisc：Resultsfromthehepatitiscanti-virallong-termtreatmentagainstcirrhosistrial).消化病理学和治疗学(AlimentPharmacolTher).27：798-809)。这些结果表明，代谢能力被保持，直到在更晚期CLD中存在显著的功能实质损失。在HALT-C中，每2年顺序测试患者，随后监测结果。FLOW，使用＜9.5ml/min/kg的截止点，在预测临床结果上优于其它测试，用ROC分析具有最高的灵敏度、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)和最佳性能(定量肝功能测试改善慢性丙型肝炎中的临床结果预测：来自HALT-C试验的结果(QuantitativeLiverFunctionTestsImprovethePredictionofClinicalOutcomesinChronicHepatitisC：ResultsfromtheHALT-CTrial)，Everson等，提交到胃肠病学(Gastroenterology))。FLOW具有较高的ROCc统计(0.84)，相对于SHUNT(0.79)。SVR以后的改善对于FLOW(p值＝0.0002)比SHUNT(p值＝0.0003)更为显著(Everson等，2009年，见下文)。在早期CHC研究中，FLOW从对照中的34±14ml/min/kg(平均值±SD)降低到早期CHC(P＜0.002)中的23±10ml/min/kg，但SHUNT的增加(对照中20±6％对比早期CHC患者中31±14％，P＜0.0002)，更统计学显著。无其他测试可以区分早期CHC患者与健康对照。这些结果表明，SHUNT和FLOW在检测早期肝疾病、跟踪患者和预测临床结果中优于其他的功能测试。
疾病严重性指标(DSI)
尽管对于特定条件在以前开发了用于FLOW和SHUNT测试的各种直接截止点，但在一些情况下，使用疾病严重性指标(DSI)更清楚地描述慢性肝病中的患者类别。
“疾病严重性指标”(DSI)采用数学模型，设计用于生物检测结果(肝功能测试)适应于个体患者的疾病严重性的评估。例如，使用来自限定患者群和健康对照的肝功能测试结果开发DSI方程。在一些实施方案中，DSI方程是从特定的患者群体开发的。DSI方程具有从SHUNT、门静脉HFR和/或全身HFR选择的一个或多个项，取决于肝病的类型或严重性。在一些实施方案中，一个或多个DSI截止值用于DSI比较，根据疾病的类型和疾病的严重性进行。在一些实施方案中，在患者中使用DSI只需要简单的表查找。
在一些实施方案中，确定患有慢性肝病的患者中的疾病严重性指标(DSI)的方法包括：(a)获得患有慢性肝病的患者中的一个或多个肝功能测试值，其中所述一个或多个肝功能测试值是从选自由SHUNT、门静脉HFR和全身HFR组成的组中的一个或多个肝功能测试获得的；和(b)采用疾病严重性指标方程(DSI方程)获得DSI，所述DSI方程包括一个或多个项和常数；其中所述DSI方程的至少一项独立地表示患者中的肝功能测试值，或数学变换的患者中的肝功能测试值；和所述DSI方程的至少一项乘以特异于肝功能测试的系数。在一些实施方案中，患者中的数学变换的肝功能测试值选自患者中的肝功能测试值的对数、反对数、自然对数、自然反对数或倒数。在一些实施方案中，DSI方程的每一项表示肝功能测试值或数学变换的肝功能测试值。
DSI方程的常数和一个或多个系数可以随着肝病类型和/或疾病严重性而不同。在一些实施方案中，常数和系数是相互关联的，因此，例如，如果全部除以10则DSI将在0-5，而不是0-50，并且健康者将是1而不是10。在一些实施方案中，常数是介于5和125之间的正数。在一些实施方案中，SHUNT系数是介于0和正25之间的数。在一些实施方案中，门静脉HFR系数是介于0和负25之间的数。在一些实施方案中，全身HFR系数是介于0和负25之间的数。
在一些实施方案中，DSI方程中的至少一项乘以特异于每一类型测试的系数，以得到DSI。在一些实施方案中，将患者中DSI与指示至少一个临床结果的一个或多个DSI截止值比较。
在一些实施方案中，公开内容提供确定患有慢性肝病的患者中疾病严重性指标(DSI)的方法，所述方法包括(a)从具有慢性肝病的患者获得SHUNT测试值和门静脉HFR测试值；和(b)采用包括用于SHUNT测试值的第一项和用于门静脉HFR值的第二项的疾病严重性方程以获得DSI。
在一个具体实施方案中，通过使用胆酸盐测试开发DSI方程，所述胆酸盐测试在登记在HALT-C临床试验中的224个慢性HCV患者(IshakF2-F6)中在基线进行，患者特征在于CTP分数为5或6并且没有临床并发症的在先历史。
具体地，使用FDA指导原则批准的改进的LCMS方法再分析存档血清以确定来自静脉内施用胆酸盐的清除率的全身肝滤过率(HFR)、来自口服施用的胆酸盐的门静脉HFR和来自清除率比率的SHUNT的胆酸盐清除率曲线。跟踪患者的临床结果高达8.3年(4.9±2.2年，平均值±SD)。将临床结果(n＝54)定义为CTP进展、静脉曲张性出血、腹水、肝性脑病或肝相关的死亡。
使用如实施例10表13中所示的单变量Cox单变量Cox比例风险回归分析进行疾病严重性指标(DSI)的导出。使用来自胆酸盐测试的SHUNT、门静脉HFR和全身HFR生成一般化方程：
DSI＝A(SHUNT)+B(loge门静脉HFR)+C(loge全身HFR)+D。
基于HALT-C人群中的第一临床结果的预测生成DSI方程：
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50。
惊奇地，虽然该DSI方程是在HCV患者中生成的，但是它提供其它慢性肝病原发性硬化性胆管炎(PSC)和非酒精性脂肪肝病(NAFLD)中疾病严重性的精确评价，例如，如例如实施例9-13中所提供。
在一些实施方案中，基于胆酸盐测试的DSI用在方法中区分PSC患者与健康对照，区分列表的PSC患者与未列为肝移植的PSC患者，和区分患有静脉曲张的患者与没有静脉曲张的患者，如实施例12中所示。
在一些实施方案中，在评价并发症的风险和PSC中肝移植优先权时，基于双口服和静脉内胆酸盐清除的PSC患者中的DSI值可以优先于MELD分数。
在一些实施方案中，在用于鉴定处于门静脉高血压和/或代偿失调风险中的慢性肝病患者的方法中使用胆酸盐测试和DSI，其中将门静脉高血压(PHTN)限定为脾肿大或静脉曲张，并且将代偿失调限定为腹水或静脉曲张性出血。
在一些实施方案中，慢性肝病选自慢性丙型肝炎(CHC)，慢性乙型肝炎，酒精性肝病，酒精性脂肪肝炎(ASH)，和非酒精性脂肪肝病(NAFLD)，其可以从相对良性的称为脂肪变性的简单脂肪肝发展到更严重的非酒精性脂肪肝炎(NASH)，自身免疫肝病，隐源性肝硬化，血色素沉着，威尔逊病，α-1-抗胰蛋白酶缺乏，原发性硬化性胆管炎(PSC)和其它胆汁淤积性肝病。
在一些实施方案中，提供用于确定患者中疾病严重性指标(DSI)值的方法，所述方法包括从遭受慢性肝病的患者获得血清样品，其中所述患者事先接收口服施用的第一稳定同位素胆酸盐和同时静脉内施用的第二稳定同位素胆酸盐，并且其中已经在施用所述胆酸盐以后不足180分钟的间隔从所述患者收集了血液样品；测定所述血清样品以计算门静脉肝滤过率(门静脉HFR)，为mL/min/kg，其中kg是所述患者的体重，全身肝滤过率(全身HFR)，为mL/min/kg，其中kg是所述患者的体重，和SHUNT，为％；并使用下列方程计算患者的DSI值：
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50。
在一些实施方案中，在用于鉴定慢性肝病患者中门静脉高血压或代偿失调的风险增加的方法中使用DSI值，其中DSI大于18指示门静脉高血压(PHTN)风险增加，并且DSI大于36指示代偿失调的风险增加，其中门静脉高血压(PHTN)限定为脾肿大或静脉曲张，并且代偿失调限定为腹水或静脉曲张性出血。
在一些实施方案中，在用于预测慢性肝病患者中的临床结果的方法中使用DSI值，其中DSI＞25指示患者中临床结果的风险增加。在一些实施方案中，慢性肝病是慢性丙型肝炎并且临床结果选自CTP进展、静脉曲张性出血、腹水、肝性脑病或肝相关的死亡。
在一些实施方案中，在预测抗病毒治疗以后的遭受慢性乙型肝炎或慢性丙型肝炎的患者中持续的病毒响应的方法中使用DSI值，其中在抗病毒治疗以后患者中DSI值随时间降低指示持续的病毒响应。
在一些实施方案中，具有慢性肝病的患者中的DSI值用于优先处理肝移植(LT)等待名单上的患者，包括，当根据下列方程获得DSI值时，在患者中DSI值随时间增加以后或在患者的DSI值大于40以后提高LT等待名单上患者的优先权：
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50
其中SHUNT是患者中的SHUNT测试值(％)，门静脉HFR是作为mL/min/kg的患者中的门静脉HFR测试值，其中kg是患者的体重，和全身HFR是患者中的全身HFR，为mL/min/kg，其中kg是患者的体重，其中患者中的SHUNT和门静脉HFR测试值是在同一天获得的。
在一些实施方案中，当根据下列方程获得患者中DSI值时，患有慢性肝病的患者中的DSI值在预测未来临床结果或鉴定具有中等/大的静脉曲张的患者的方法中使用：
DSI＝5.34SHUNT-6.65Loge门静脉HFR-8.57Loge全身HFR+44.66
其中DSI＞19表示中等到大的静脉曲张的高风险；DSI10-19表示中等/大静脉曲张的低风险；和0-10的DSI指示健康的肝功能；和DSI＞19表示临床结果的高风险；DSI10-19指示临床结果的低风险；和0-10的DSI指示健康的肝功能。
在一些实施方案中，慢性肝病选自慢性丙型肝炎、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)或原发性硬化性胆管炎(PSC)。
在一些实施方案中，提供用于鉴定慢性肝病患者中门静脉高血压或代偿失调的风险增加的方法，所述方法包括从遭受慢性肝病的患者获得血清样品，其中所述患者事先接收口服施用的第一稳定同位素胆酸盐和同时静脉内施用的第二稳定同位素胆酸盐，并且其中已经在施用所述胆酸盐以后不足180分钟的间隔从所述患者收集了血液样品；测定所述血清样品以计算门静脉肝滤过率(门静脉HFR)，为mL/min/kg，其中kg是所述患者的体重，全身肝滤过率(全身HFR)，为mL/min/kg，其中kg是所述患者的体重，和SHUNT，为％；通过使用下列方程计算患者的DSI值：
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50，
其中DSI大于18表示门静脉高血压(PHTN)的风险增加，并且DSI大于36表示代偿失调的风险增加。
在一些实施方案中，提供用于计算患者的疾病严重性指标(DSI)值的方法，所述方法包括从遭受慢性肝病或处于慢性肝病风险的患者获得血清样品，其中所述患者事先接收口服施用的第一稳定同位素胆酸盐和同时静脉内施用的第二稳定同位素胆酸盐，并且其中已经在施用所述胆酸盐以后不足180分钟的间隔从所述患者收集了血液样品；测定血清样品以计算门静脉肝滤过率(门静脉HFR)，为mL/min/kg，其中kg是所述患者的体重，全身肝滤过率(全身HFR)，为mL/min/kg，其中kg是所述患者的体重，和SHUNT，为％；通过使用下列方程计算患者的DSI值：
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50。
在一些实施方案中，患者中的SHUNT、全身HFR和门静脉HFR测试值是在同一天获得的。
在一些实施方案中，胆酸盐测试DSI用于调节等待名单上的慢性肝病患者的肝移植优先权。
在一些实施方案中，胆酸盐测试DSI用于调节等待名单上的慢性肝病患者的肝移植优先权，其中慢性肝病是慢性丙型肝炎、NAFLD或原发性硬化性胆管炎(PSC)。
在其它具体实施方案中，使用来自HCV患者的门静脉HFR和SHUNT测试值生成DSI方程：
DSI＝9.84(SHUNT)-12.36LOGe(门静脉HFR)+50.5
其中SHUNT是患者中的SHUNT测试值并且门静脉HFR是患者中的门静脉HFR测试值。在一些实施方案中，患者中的SHUNT和门静脉HFR测试值是在同一天获得的。
在一些实施方案中，DSI方程具有代表不同临床生物化学血液化验的一个或多个附加项，诸如血清白蛋白，丙氨酸转氨酶，天冬氨酸转氨酶，碱性磷酸酶，总胆红素，直接胆红素，γ-谷氨酰转肽酶，5’核苷酸酶，PT-INR(凝血酶原时间-国际标准化比值)，腹水或肝性脑病。在其它实施方案中，DSI方程具有代表肝代谢测试结果的一个或多个附加项，其中所述测试选自咖啡因消除，氨基比林清除率，半乳糖消除能力，从利多卡因形成MEGX。
在一些实施方案中，DSI可以用于限定患有慢性肝病的患者中的疾病严重性、追踪疾病进展和对治疗的响应；其中所述慢性肝病选自慢性丙型肝炎，原发性硬化性胆管炎(PSC)，非酒精性脂肪肝病(NAFLD)，慢性乙型肝炎，酒精性肝病，自身免疫肝病，隐源性肝硬化，血色素沉着，威尔逊病，α-1-抗胰蛋白酶缺乏和胆汁淤积性肝病。
在一些实施方案中，在用于预测未来临床结果的方法中使用DSI。在一些实施方案中，临床结果选自Child-Turcotte-Pugh(CTP)增加、静脉曲张、脑病、腹水和肝相关的死亡。在最佳截止值，DSI令人惊奇地胜过用于预测未来临床结果的其它标准测试方法，如实施例9中所示。具体地，实施例9提供了证据，当相比于肝活组织检查法、血小板计数和MELD时，DSI显示最高的灵敏度、特异性、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)。
在一些实施方案中，DSI可以用于评价许多具体临床应用的肝功能，例如，用于预测对患有CHC的患者中的抗病毒治疗的响应，选择应当接受抗病毒治疗的患有慢性乙型肝炎的患者；评价正在评估肝切除的患有肝细胞癌(HCC)的患者中的肝代偿失调的风险；用低MELD(末期肝病分数模型)鉴定在等待器官捐献者时处于死亡风险中的等待名单上的患者亚组；作为临床试验的终点；在儿科人群中取代肝活组织检查；追踪同种移植功能；测量活着的捐献者中的功能恢复；和测量胆汁淤积的肝病(PSC，原发性硬化性胆管炎)中的功能损伤。
在具体实施方案中，DSI用于预测对治疗的响应，例如在用PEG/RBV治疗以后将获得SVR的患有CHC的患者的％。在该具体实施方案中，DSI方程是：
DSI＝9.84(SHUNT)-12.36LOGe(门静脉HFR)+50.5
其中SHUNT是患者中的SHUNT测试值并且门静脉HFR是患者中的门静脉HFR测试值。将DSI方程应用到给予截止值为30的患者的组，在该截止值以上没有人能够获得SVR。在DSI为25-30的患者中，获得SVR的有15％。在DSI为20-25的患者中，获得SVR的有16％。在DSI为小于20的患者中，获得SVR的有19％。见表11。
可区别的化合物。在一些实施方案中，可以使用任何安全口服施用的可区别的化合物评价门静脉流，化合物具有下列特征：在口服施用以后100％吸收，高肝提取(在通过健康受试者肝脏的首过＞70％)，并且专门通过肝脏从血液或血浆除去。用于测量门静脉流的可区别化合物可以是内源化合物或异生物。
在一些实施方案中，可区别的化合物可以是任何标记的内源胆汁酸或胆汁酸结合物；例如，可区别的化合物可以从下列标记的可区别的胆酸盐化合物的任一种中选择：胆酸，胆酸的任何甘氨酸结合物，胆酸的任何牛磺酸结合物；鹅脱氧胆酸，鹅脱氧胆酸的任何甘氨酸结合物，鹅脱氧胆酸的任何牛磺酸结合物；脱氧胆酸，脱氧胆酸的任何甘氨酸结合物，脱氧胆酸的任何牛磺酸结合物；或石胆酸，或其任何甘氨酸结合物或牛磺酸结合物。在各方面中，可区别的胆酸盐化合物是任何胆汁酸或胆汁酸结合物可以是在生理上可接受的盐的形式，例如，胆酸的钠盐。在一个方面中，术语胆酸指胆酸的钠盐。在一些优选的实施方案中，胆酸(胆酸盐)是可区别的化合物。如本文所使用的，术语胆酸盐化合物，胆酸盐和胆酸可互换使用。
可经口给药并且也具有高的首过肝消除的异生物可以包括，但不限于，丙醇、硝酸甘油或硝酸甘油的衍生物，或半乳糖和相关化合物。
在一些实施方案中，可区别的化合物是丙醇。丙醇是非选择性β阻滞物并且已经显示为有效用于防止静脉曲张性出血和再出血并且广泛用作用于治疗患有肝硬化的患者中的门静脉高血压的药物疗法。(Suk等，2007，丙醇对患有肝硬化和门静脉高血压的患者中门静脉压力和全身血液动力学的影响：前瞻性研究(Effectofpropranololonportalpressureandsystemichemodynamicsinpatientswithlivercirrhosisandportalhypertension：aprospectivestudy).肠道和肝脏(GutandLiver)1(2)：159-164)。丙醇几乎完全被肝脏清除。已经证明，总(+)-丙醇血浆清除构成具有正常肝功能的患者中肝血流的良好估计。(Weiss等，1978(+)-丙醇清除，人肝血流的估计(Propranololclearance，anestimationofhepaticbloodflowinman)，英国临床药理学(Br.J.Clin.Pharmacol.)5：457-460)。
在其它实施方案中，可区别的化合物是异山梨醇5-单硝酸酯。该化合物可以口服施用并且用HPLC-EIMS在血浆中检测。(Sun等，人血清中的异山梨醇5-单硝酸酯的高效液相色谱-电喷雾离子化质谱测定(Highperformanceliquidchromatography-electrosprayionizationmassspectrometricdeterminationofisosorbide5-mononitrateinhumanplasma)，色谱杂志B生物医学科学分析技术(J.Chromatogr.BAnalyt.Technol.Biomed.Sci.)20072月1日；846(1-2)：323-8)。
在一些实施方案中，可区别的化合物是半乳糖。半乳糖消除能力(GEC)已被用作残余肝功能的指标。GEC测试中的半乳糖通常是以0.5mg/kg的剂量静脉内施用的，并且在20和60分钟之间每5分钟取静脉样品。在患有慢性肝病和肝硬化的个体中半乳糖的清除率降低。事实是，该碳水化合物具有高提取率，然而，使得半乳糖代谢依赖肝血流量和肝功能质量。(TygstrupN，用单一注射确定半乳糖的肝清除能力(Lm)(Determinationofthehepaticeliminationcapacity(Lm)ofgalactosebyasingleinjection)，斯堪的纳维亚实验室和临床研究杂志(ScandJLabClininvest)，18增刊92，1966，118-126)。碳水化合物半乳糖几乎完全在肝脏中代谢，并且血液浓度消除速率足够高以产生近饱和酶转化，GEC用作肝脏代谢能力的定量测量。一项研究已显示，在具有新诊断的肝硬化和降低的GEC的患者中，GEC是死亡率的强预测因子。(Jepsen等，2009，781例具有新诊断肝硬化的丹麦患者中的半乳糖消除能力和死亡率：群研究(Thegalactoseeliminationcapacityandmortalityin781Danishpatientswithnewly-diagnosedlivercirrhosis：acohortstudy).BMC肠胃病学(BMCGastroenterol).2009，9：50)。
在某些实施方案中，将一个或多个可区分的同位素结合到选择的可区别的化合物中以便用于评价肝功能。可区别的同位素可以是结合到测试化合物中的放射性或稳定同位素。可以使用稳定的(13C，2H，15N，18O)或放射性同位素(14C，3H，Tc-99m)。稳定同位素的优点是缺乏暴露于放射性，天然丰度，和用于测试化合物鉴定的分析的特异性(用质谱的质量测定)。稳定同位素标记的化合物可商购。例如，13C-和2H-标记的胆酸化合物可以购自西格玛-奥德里奇(Sigma-Aldrich)、CDN同位素(CDNIsotopes)和剑桥同位素实验室公司(CambridgeIsotopeLaboratories，Inc.)。
在一些实施方案中，用于口服施用的可区别化合物可以是任何可区别的胆酸盐化合物，其在分析上可区别于内源性胆酸。在一个方面中，可区别的胆酸盐化合物选自本领域中已知的任何同位素标记的胆酸化合物。这些测定的任一个中使用的可区别的胆酸盐化合物可以标记有稳定的(13C，2H，18O)或放射性(14C，3H)同位素。可以购买可区别的胆酸盐化合物(例如CDN同位素公司(CDNIsotopesInc.)，加拿大，魁北克)。在优选的方面中，可区别的胆酸盐选自胆酸的任何已知的安全、非放射性稳定同位素。在一个具体方面中，可区别的胆酸盐化合物是2，2，4，4-2H胆酸。在另一个具体方面中，可区别的胆酸盐化合物是24-13C胆酸。
在其它实施方案中，可区别的化合物可以是未标记的内源性化合物，如未标记的胆酸盐。在使用未标记的内源性化合物的方面中，口服试验剂量足够大，例如2.5-7.5mg/kg胆酸盐，对于所得到的血清浓度在内源性化合物的基线血清浓度以上是可区别的。
用于检测和测量来自受试者的血液样品中的可区别的化合物的平台依赖于施用的可区别化合物的类型。对于稳定同位素，在血液样品中区别的化合物的浓度可以通过，例如，气相色谱/质谱法(GC/MS)或液相色谱法/质谱法(LC/MS)测量。对于放射性标记的试验化合物，例如，可以使用闪烁光谱。对于未标记的化合物的分析，例如，可以采用自动测量仪、发光或ELISA。进一步设想，具有对测试化合物的存在和量直接或间接敏感的彩色显影剂的条带测试可用于在家庭测试或护理点测试中使用。
门静脉血流。已发现门静脉血流是肝脏评价的关键。肝脏通过门静脉接收其血液的～75％，其带来用于加工的营养并解毒有害化合物。该低血压系统对微脉管系统的最早破坏敏感从而CLD的早期阶段可以通过在任何其它生理影响以前降低门静脉血流和增加分流而检测。高压肝全身血流较少得减少并且只在后面的疾病过程中。不像活组织检查，其仅取样肝脏的1/50,000，门静脉流是整个器官的量度。随着疾病发展，存在微脉管系统结构的破坏增加和门静脉血流的损伤增加，其导致晚期的CLD的主要表现形式。损伤的流量引起腹水、门静脉高血压和食管静脉曲张。损伤的流量导致毒素增加的分流，其引起肝性脑病。
胆酸盐是门静脉血流和肝全身流的独特探针。许多肝功能测试已试图使用口服或静脉内化合物的清除率，但只有胆酸盐成功地评估早期和晚期CLD。其它口服化合物被吸收在沿胃肠道的不同地点，不靶向门静脉循环。其它化合物由非特异性转运蛋白吸收。口服胆酸盐经由高亲和性回肠Na+-依赖的胆汁盐转运蛋白(ilealNa+-dependentbilesalttransporter，ISBT)被末端回肠上皮细胞特异性吸收，并且通过MRP3转运蛋白流出直接进入到门静脉血流中(Trauner和Boyer，2003，胆汁盐转运蛋白：分子表征、功能和调节(Bilesalttransporters：Molecularcharacterization，function，andregulation).生理学评述(PhysiolRev.)83：633-671)。然后，包括Na+/牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)和有机阴离子转运蛋白(OATPs)的不同组的高亲和性转运蛋白用高度有效的首过摄取将它吸收到肝细胞中(Trauner和Boyer，2003，下文)，从而没有摄取的任何胆酸盐是门静脉流量的直接量度。一旦在细胞内，它被迅速地结合到甘氨酸和牛磺酸，使得未结合的形式不再重新出现在肝内循环中，这会混淆药物动力学。其它未结合的胆汁盐，如脱氧胆酸盐和鹅脱氧胆酸盐的行为将类似，但它们是更强大的增溶剂并且不会同样安全施用。患者安全是通过使用稳定同位素标记的内源性化合物确保的，避免异生物或辐射暴露的风险。所涉及的全部蛋白质和系统是高度保守的和必要的，使得胆酸盐的药代动力学在个体之间是一致的并且不受性别、年龄或遗传组成，或受饮食或合并用药的影响。
通过利用内源性胆汁酸、胆酸盐，其可以被标记，例如用安全的非放射性稳定同位素的独特生理学，门静脉血流可非侵入性地和准确地定量。高度保守的肠转运蛋白(ISBT，MRP3)专门将口服的胆酸盐靶向到门静脉循环。高度保守的肝转运蛋白(NTCP，OATPs)清除来自门静脉和全身循环的胆酸盐。因此，门静脉循环的非侵入性定量评估可通过将可区别的胆酸盐化合物施用到患者并评估血液样品中可区别的胆酸盐化合物的水平来进行，该样品在不同的多个时间点获得，以确定口服清除率曲线。FLOW(门静脉HFR)测试从最少5个血液样品精确测量门静脉血流，所述血液样品是在氘化胆酸盐的口服给药后90分钟的时期上获取。
几乎300名CHC患者的主要研究，通过胆酸盐测试测量的门静脉流在预测临床结果上优于目前的黄金标准，即通过活组织检查测量的纤维化(Everson等，2011)。在早期CHC研究中，门静脉流的损伤和通过胆酸盐测试测量的分流增加是最早的可检测病理生理学。这些结果已产生了CLD的新认识，即，正是肝微脉管系统的破裂，而不是纤维化本身是有害的。此微脉管破裂损害门静脉血流，其可以通过利用内源性胆汁酸、胆酸盐的独特生理学非侵入性地和准确地定量。
门体分流。如图1中所示，口服胆酸盐由特定肠转运蛋白直接摄取到门静脉中并且在其首次通过肝脏中通过肝转运蛋白除去。静脉内胆酸盐分布全身并且由肝动脉和门静脉提取。在典型的实施方案中，口服和静脉内胆酸盐两者的浓度在施用90分钟内的5个不同时间测量并计算清除率。静脉内清除率比口服清除率是门体SHUNT分数。每公斤体重的口服清除率代表门静脉肝滤过率(门静脉HFR，FLOW)，或门静脉血液输送量。STAT是口服胆酸盐在60分钟时的浓度，并显示出准确地估算门静脉HFR。
SHUNT测试非侵入性的和精确的测量口服施用可区别的胆酸盐化合物以后的门静脉血流，并且还测量第二可区别的胆酸盐化合物的静脉内共施用以后的全身肝血流。因此SHUNT测试可以用来确定门体分流的量。在一些实施方案中，13C-胆酸盐的静脉内剂量是与口服剂量的氘化胆酸盐同时施用的，并且最少为5个血液样品是在施用以后90分钟的时期上取得的。
双胆酸盐清除SHUNT方法产生3个测试结果。门体分流分数(SHUNT(％))；门静脉肝滤过率(门静脉HFR，在以上讨论和实例中也将其限定为FLOW，(mL/min/kg))，基于血液中口服施用的可区别的胆酸盐化合物；和全身肝滤过率(全身HFR，(mL/min/kg))，基于血液中静脉内施用的可区别的胆酸盐化合物。将胆酸盐-2，2，4，4-d4(40mg)口服给予并且通过特异的肠转运蛋白吸收到门静脉中。将胆酸盐-24-13C(20mg)静脉内给予并从全身循环主要通过肝动脉吸收。特异的肝转运蛋白从门静脉和全身循环清除胆酸盐。例如，高度保守的肝转运蛋白(NTCP，OATPs)从门静脉和全身循环清除胆酸盐。
门静脉肝滤过率的估计。STAT测试是简化的，非侵入性的方便的测试，意欲用于筛选目的，可以合理地从在单一时间点所取的单个血样估算门静脉血流，所述时间点例如，在可区别的胆酸盐化合物例如氘化胆酸盐的口服给药以后60分钟。
门静脉HFR(FLOW)、SHUNT和STAT测试的比较。SHUNT、FLOW和STAT测试的典型实施方案的比较显示在下面表1中。
表1.肝功能测试
在之前的研究中正常肝功能的值建立在健康对照中：平均SHUNT是20％，平均HFR(FLOW)是30，并且平均STAT是0.4。
在患病的肝脏中，因为更多的血液没有被肝内和肝外分流提取到全身循环，因此SHUNT增加(～30-90％)，HFR(FLOW)或门静脉流降低(～20至2mL/min/kg)并且STAT增加(0.6至5uM)。
定义和首字母缩略词
如本文所用，“一”或“一个”可以指一个或一个以上的项目。
词语“约”在指任何数值参数时，指的是数字值的平均值+/-10％。例如，短语“约60分钟”，是指60分钟+/-6分钟。
本文所用的“清除”可以指将物质从一个地方去除到另一个地方。
如本文所用的术语“患者”，“受试者”或“受试者们”包括但不限于人，该术语也可涵盖其它哺乳动物，或驯养或外来动物，例如狗，猫，雪貂，兔子，猪，马，牛，鸟，或爬行动物。
首字母缩略词“HALT-C”指的是针对肝硬化的丙型肝炎抗病毒长期治疗试验(HepatitisCAntiviralLong-termTreatmentagainstCirrhosistrial)。HALT-C试验是在患有晚期丙型肝炎的患者中的长期低剂量聚乙二醇干扰素治疗的大的、前瞻性、随机的、对照试验，所述患者还没有对之前的基于干扰素的治疗具有持续病毒学响应。美国国立卫生研究院资助的针对肝硬化的丙型肝炎抗病毒长期治疗(HALT-C)试验研究长期使用抗病毒治疗(维持治疗)是否会减慢肝脏疾病的进展。在显示纤维化显著的非肝硬化患者中，有效的维持治疗预计减缓或停止组织发展为肝硬化，如通过系列肝活组织检查评价。然而，用活组织检查追踪疾病进展带来并发症风险，可能是死亡。此外，肝活组织检查的采样误差和病理解释的变化限制组织学评估和终点的精确度。组织学终点是不太可靠的，因为晚期纤维化已经存在，并且不能检测到与治疗或疾病进展有关的纤维化的改变。因此，对于肝硬化患者中维持治疗有效的反应标准终点是避免临床代偿失调(腹水，静脉曲张性出血和脑病)和肝功能的稳定化，如通过Childs-Turcotte-Pugh(CTP)分数临床测量。然而，临床终点和CTP分数已知是疾病进展的不敏感参数。采用可区别的胆酸盐的双同位素技术用于开发SHUNT测试并与HALT-C试验结合使用。
术语“SHUNT测试”指的是在先公开的QLFT(定量肝功能测试)，其用作肝血流和肝功能的综合评价。SHUNT测试用于确定有或没有慢性肝病的受试者中口服和静脉内施用的胆酸的血浆清除率。在SHUNT测试中，分析至少5个血液样品，其已经在口服或静脉内施用可区别的胆酸盐以后的至少约90分钟的时期上的时间间隔从患者取出。对于稳定同位素标记的胆酸盐的样品分析是例如样品衍生化以后用GC-MS或没有样品衍生化用LC-MS进行的。口服对静脉内施用胆酸的AUC(对于施用的剂量修正)的比率，限定胆酸盐分流。胆酸盐分流可以使用下式计算：AUC口服/AUC静脉内xDose静脉内/Dose口服x100％，其中AUC口服是口服施用的胆酸的血清浓度曲线下的面积，并且AUC静脉内是静脉内施用的胆酸的曲线下的面积。SHUNT测试公开在2006年1月26日提交的Everson等，US2008/0279766，诊断和介入肝病症的方法(MethodsforDiagnosisandInterventionofHepaticDisorders)中，将其通过参考并入本文。这些研究表明，具有肝细胞损伤或门体静脉分流的患者中胆酸盐清除率减少。“SHUNT测试值”指的是数(以％表示)。
SHUNT测试允许测量将胆汁酸从门静脉循环首过肝清除率。流量依赖的，胆汁酸被肝脏的首过清除率的范围在未结合二羟基胆汁酸的60％至对于甘氨酸结合的胆酸盐的95％。在此使用的游离胆酸盐具有报道的首过清除率为大约80％，其接近符合先前观察的约为83％的健康对照中的首过清除率。由肝脏摄取后，将胆酸有效地结合到甘氨酸或牛磺酸并分泌到胆汁中。物理化学胆酸容易从其它多种胆汁酸和一种胆汁酸或胆酸结合物使用色谱方法分离。
首字母缩写“IV”或“iv”是指静脉内。
术语“持续的病毒响应”(sustainedvirologicresponse，SVR)用来描述当完成治疗6个月后丙型肝炎病毒在血液中无法检测时患者中的期望响应。使用干扰素和利巴韦林的常规治疗不必然地消除或清除丙型肝炎病毒。持续病毒响应与非常低的复发的发生率有关。SVR用于评估新药物并且将它们与证明的疗法比较。
首字母缩写“PO”是指每次口服。
首字母缩写“PHM”是指灌注的肝脏质量(perfusedhepaticmass)。
首字母缩写“SF”是指分流分数，例如，如以胆酸盐SF形式。
首字母缩写“ROC”指的是接受者操作特征(receiveroperatingcharacteristic)。ROC曲线是绘制图，其说明二元分类者体系的表现，因为它的辨别阈值是变化的。它是在不同的阈值设置通过绘制来自阳性的真阳性的分数(TPR＝真阳性率)对来自阴性的假阳性的分数(FPR＝假阳性率)产生的。灵敏度是在患有疾病的人中，阳性测试结果的可能性，或在阈值以上的值的可能性。将灵敏度限定为真阳性率(TPR)：TPR＝TP/P＝TP/(TP+FN)。假阳性率(FPR)是FPR＝FP/N＝FP/(FP+FN)。准确性(ACC)定义为ACC＝(TP+TN)/(P+N)。特异性是在没有疾病的人中，阴性测试结果的可能性，或阈值以下的值。特异性(SPC)，或真阴性率(TN)定义为SPC＝TN/N＝TN/(FP+TN)＝1-FPR。阳性预测值(PPV)定义为：PPV＝TP/(TP+FP)。阴性预测值(NPV)定义为NPV＝TN/(TN+FN)。C-统计是ROC曲线下的面积，或“AUROC”(接受者操作特征曲线下的面积)并且范围在0.5(无区别)至理论最大值为1(完美区别)。
术语“口服胆酸盐清除率”(Cl口服)是指从受试者身体清除口服给药的胆酸盐化合物，如通过来自受试者的血液或血清样品所测量。口服胆酸盐清除率用作门静脉血流的量度。口服施用的胆酸跨过小肠上皮衬细胞吸收，结合到门静脉血液中的白蛋白，并经门静脉转运到肝脏。大约80％的胆酸在其通过肝脏的首过从门静脉血液中提取。胆酸逸出肝提取经由排入腔静脉回到心脏的肝静脉退出肝，并递送至全身循环。外周静脉浓度对时间的胆酸口服后的曲线下的面积(AUC)量化胆酸逸出肝提取的分数和限定“口服胆酸盐清除率”。
术语“门静脉肝滤过率”，“门静脉HFR”，“FLOW测试”指的是口服胆酸盐清除率(门静脉肝滤过率；门静脉HFR)，用作门静脉血流或门静脉循环的量度，取自口服施用可区别的化合物例如可区别的胆酸盐以后经过例如约90分钟的时期从受试者抽取的至少5个血液样品中的可区别的化合物的浓度分析。门静脉HFR值的单位通常表示为mL/min/kg，其中kg指受试者的kg体重。
术语“STAT测试”指的是通过从一个患者血样的分析估计门静脉血流，所述血样是在口服施用可区别的胆酸盐以后的限定的时间期间抽取的。在一个方面中，STAT测试是指单一血样的分析，所述血样是在口服施用可区别的胆酸盐以后的特定时间点抽取的。在一个具体方面中，STAT测试是简化方便的测试，意欲用于筛选目的，其可以合理地估计来自口服施用氘化胆酸盐以后60分钟后取的单一血样的门静脉血流(估计的流量)。STAT测试值通常表示为浓度，例如，微摩尔(μM)浓度。
术语“静脉内胆酸盐清除”(Cl静脉内)是指静脉内施用的胆酸盐化合物的清除。静脉内施用的胆酸，结合到白蛋白，全身分布并且经由门静脉和肝动脉血流两者递送至肝脏。外周静脉浓度对胆酸的静脉内施用后的时间的AUC相当于100％全身递送胆酸。口服对静脉内施用的胆酸的AUC(对于施用剂量校正)比率，限定胆酸盐分流。
术语“定量肝功能测试”(QLFT)，指的是测量肝脏的代谢或提取试验化合物的能力的测定，可以在疾病较早期阶段识别肝功能受损的患者，并且可能定义肝硬化、脾肿大和静脉曲张的风险。这些测定法之一是胆酸盐分流测定，其中胆酸盐的清除是通过在外源胆酸盐已经被身体吸收以后分析体液样品评价的。
术语“Ishak纤维化分数”用于指评分体系，其测量由慢性坏死性炎症引起的肝脏的纤维化(结疤)的程度。0分代表无纤维化，6是确定的纤维化。1和2的分数表示轻微程度的门静脉纤维化；3和4表明中度(桥接)纤维化。5分表示结节形成和不完全性肝硬化，6是明确的肝硬化。
术语“Childs-Turcotte-Pugh(CTP)分数”或“Child-Pugh分数”指的是用于评价慢性肝病预后的分类系统，如提供在Pugh等，用于出血性食道静脉曲张的食道横切(Transectionoftheoesophagusforbleedingoesophagealvarices.)英国外科杂志(BrJSurg)1973；60：646-649，将其通过参考并入本文。CTP分数包括肝病的5个临床量度；每个量度分数为1-3，3是最严重的紊乱。将5个分数相加以确定CTP分数。5个临床量度包括总胆红素、血清白蛋白、凝血酶原时间-国际标准化比值(PTINR)、腹水和肝性脑病。CTP分数是一种评分体系，用于将晚期肝病的严重性分层。采用加和的分数，将慢性肝病分类成Child-Pugh类别A至C。Child-Pugh类别A指的是CTP分数为5-6。Child-Pugh类别B指的是CTP分数为7-9。Child-Pugh类别C指的是CTP分数为10-15。网站计算患有肝硬化的患者中的术后死亡风险。http://mayoclinic.org/meld/mayomodel9.html
术语“晚期肝病模型(MELD)”指的是用于评价慢性肝病严重性的评分体系。开发MELD以预测患者中手术的三个月内的死亡，所述患者已经经历了用于肝移植的患者的经颈静脉肝内门体分流术(TIPS)程序。MELD还用于确定肝移植接受者的预后和优先级排序。MELD使用患者的血清胆红素、血清肌氨甘酸和凝血酶原时间-国际标准化比值(INR)的值以预测存活率。评分体系是由器官分享联合网络(UNOS)和Eurotransplant使用的，用于优先处理肝移植的分配，代替较老的Child-Pugh分数。见UNOS(2009-01-28)“MELD/PELD计算器文件”，将其通过引用并入本文。例如，在解释住院患者中的MELD分数时，3月死亡率是：MELD分数为40或以上，71.3％死亡率。
术语“标准样品”指的是当分析含有未知浓度分析物的样品时，用于比较目的的具有已知浓度分析物的样品。
术语“慢性丙型肝炎”(CHC)是指由病毒感染引起并导致肝脏炎症，肝损害和肝硬化的慢性肝病。丙型肝炎是由攻击肝脏并导致炎症感染的血源性病毒引起的感染。很多感染丙型肝炎病毒(HCV)的人不表现出症状，直到有时几年后在常规医疗检查期间出现肝损害。
术语“酒精性脂肪肝炎”(ASH)是指由过量饮酒引起的肝脏炎症的慢性病症。进行性炎性肝损伤与长期重度摄入乙醇相关并且可以发展为肝硬化。
术语“非酒精性脂肪肝炎”(NASH)是指肝脏炎症的严重慢性疾病，从不太严重的称为脂肪变性的单纯性脂肪肝病症进展而来。单纯性脂肪肝(酒精性脂肪肝)是过量酒精消费的早期和可逆的后果。然而，在某些情况下，脂肪堆积可与肝脏中的炎症和结疤相关联。这种更严重的疾病形式被称为非酒精性脂肪肝炎(NASH)。NASH伴随有比NAFLD高得多的肝纤维化和肝硬化的风险。NAFLD可发展到具有纤维化肝硬化和肝细胞癌的NASH。
术语“非酒精性脂肪肝病”(NAFLD)指的是常见的慢性肝病，其特征部分地在于，具有肥胖症、代谢综合征和胰岛素抗性的伴随风险因子的脂肪肝病症。NAFLD和NASH两者通常与肥胖症、糖尿病和血清ALT和γ-GT的无症状升高有关。超声监测可以表明肝脏的脂肪浸润的存在；NAFLD和NASH之间的差异通常需要肝活组织检查。
术语“原发性硬化性胆管炎”(PSC)是指由肝脏的胆管渐进发炎和结疤引起的慢性肝病。胆管结疤可以阻断胆汁流动，导致胆汁淤积。炎症可导致肝硬化，肝功能衰竭和肝癌。慢性胆道梗阻导致门静脉管纤维化，并最终导致胆汁性肝硬化和肝功能衰竭。确定的治疗是肝移植。移植的适应证包括复发性细菌胆管炎、医疗难治的黄疸和内镜治疗、代偿失调肝硬化和门静脉高血压(PHTN)的并发症。PSC通过慢性炎症、纤维化/肝硬化、改变的门静脉循环、门静脉高血压和门体分流到静脉曲张-腹水和脑病而进展。改变的门静脉流是临床并发症的适应证。
在整个说明书中提供其它定义。
计算机/处理器。在STAT试验中使用的检测、预后和/或诊断方法可以采用处理器/计算机系统的使用。例如，包括处理器的通用用途计算机系统，连接到程序存储器存储计算机程序代码来实现所述方法，连接到工作存储器，和连接到接口如常规的计算机屏幕、键盘、鼠标和打印机，以及其它接口诸如网络接口、软件接口，包括数据库接口，能够本文所述的一个实施方案中使用。
计算机系统从数据输入装置例如键盘、输入数据文件、或网络接口、或其它系统，如系统解释，例如，LC-MS或GC-MS数据，并提供输出到输出装置，如打印机、显示器、网络接口或数据存储装置。输入设备，例如网络接口，接收输入，其包括从本文描述的处理血液或血清样品测量的可区别的胆酸盐化合物的检测和那些化合物的定量化。输出装置提供输出，诸如显示器，包括一个或多个数字和/或图表，描述化合物的检测和/或定量。
将计算机系统连接到数据存储，其存储由本文描述的方法产生的数据。对于每个测量和/或每个受试者存储该数据；任选地，将多组的这些数据类型的每一个都对应于每个受试者存储。可以使用一个或多个计算机/处理器，例如，作为单独的机器，例如，通过网络连接到计算机系统，或者可以包括在计算机系统上运行的独立的或集成的程序。无论采用哪种方法，这些系统接收数据并随后提供有关检测/诊断数据。
在实施方案中，选择用于受试者的治疗的方法，所述受试者在血液或血清样品中具有异常水平的可区别的胆酸盐，所述样品在口服施用以后的单一时间点抽取，所述方法包括计算输出分数，其利用计算装置，通过将可区别的胆酸盐化合物水平输入到函数中进行，所述函数提供用于具有肝病或病症的受试者的胆酸盐水平和结果之间的预测关系；和利用计算装置显示输出分数。
在实施方案中，在将可区别化合物口服施用到受试者以后获得STAT测试值，在施用以后的特定时间点抽取单一血液或血清样品。在一些实施方案中，将STAT测试值，表示为样品中可区别胆酸盐化合物的浓度，其通过使用方程转换为受试者中估计的门静脉血流速率，或估计的门静脉HFR(FLOW)(表示为mL/min/kg)进行。在实施方案中，方程是y＝0.9702x+0.0206，其中x是对数HepquantFLOW并且y是对数HepquantSTAT。
在实施方案中，该方法还包括利用计算设备确定输出分数是否大于，或等于，或小于截止值；并显示如果输出的分数大于或等于，或小于截止值，受试者是否可能经历临床结果。
在实施方案中，计算装置，包括处理单元；和连接到处理单元的系统存储器，系统存储器包括指令，当由处理单元执行时使处理单元进行：从来自受试者的单一血样将可区别的胆酸盐化合物的水平计算成函数，所述函数提供具有肝病或机能障碍的受试者的可区别的胆酸盐水平之间的预测关系；并显示输出分数。在实施方案中，该系统存储器包括指令，当由处理单元执行时使处理单元确定输出分数是否大于或等于或小于截止值；并显示如果输出的分数大于或等于截止值，受试者是否可能经历临床结果。
实施例
下列实施例用来说明本发明的优选实施方案。本领域技术人员应当理解，在后面实施例中公开的技术表示在本发明的实施中起良好作用的由本发明人发现的技术，并且因此可以认为构成其实施的优选方式。然而，本领域技术人员，考虑到本公开内容，应当理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以在公开的具体实施方案中进行许多变化并且仍然获得相同或类似的结果。包括以下实施例以证明优选实施方案。
实施例1.STAT测试-从单一血液抽取估计门静脉流
来自HALT-C和早期CHC研究中的门静脉HFR(FLOW)和SHUNT测试的个体化时间点血清胆酸盐的浓度仔细分析并且发现在45、60和90分钟时的差异是高度显著的(p＜0.005)。在60分钟的浓度与门静脉流具有最佳的相关性(r2＝0.8)。得出方程，其可以将60分钟时的浓度(uM)转化成估计的门静脉流(mL/min/kg)，具有5点FLOW方法的85％的准确度。方程是y＝0.9702x+0.0206，其中x是对数门静脉HFR(FLOW)并且y是对数STAT。在STAT测试中，患者饮用口服剂量的可区别胆酸盐化合物，例如，氘化的胆酸盐，并且在1小时以后提供单一血样。STAT测试相对于FLOW(门静脉HFR)测试的准确度显示在图9中。
实施例2.检测肝功能失调中的STAT(估计的门静脉流)功效。
在早期CHC研究中，健康对照具有的门静脉流为34±14ml/min/kg(平均值±SD)。将肝功能失调定义为大于1SD的低于对照平均值的门静脉流，平均值流量＜20ml/min/kg。在早期CHC组中，约1/2的患者表现肝功能失调。早期CHC患者中估计的门静脉流是从图8中所示的方程计算的，使用它们的60分钟血清胆酸盐水平。估计的流量可以检测肝功能失调，其具有灵敏度为90％、特异性为85％、阳性预测值(PPV)为82％和阴性预测值(NPV)为92％。这些初步结果显示，口服胆酸盐剂量以后的单一血样可以用于检测早期CLD中的肝功能失调。
而且，在早期CHC研究中，本发明人分析了STAT如果用作筛查测试的潜在影响。当前，在主要护理设置中，用ALT筛查成年人的肝病。在本发明人的早期CHC研究的分析中，本发明人发现将STAT添加到ALT可以改善患有慢性丙型肝炎的患者的检测。在早期患者中，ALT仅在34％中是异常的，STAT在48％中是异常的，并且65％的患者具有异常的ALT或STAT。由于慢性丙型肝炎，用ALT和STAT的组合筛查将使患有肝病的患者的检测率加倍。当然，当在这样一个阶段中使用时，STAT也还将检测患有除了慢性丙型肝炎外的肝病的患者。
STAT还具有与晚期肝病相关的测试截止值。在患有慢性丙型肝炎的患者和患有慢性胆汁淤积肝病原发性硬化性胆管炎的患者中，具有估计的FLOW的STAT结果＜10mL/(kgmin)，与肝代偿失调或临床并发症的风险相关。在该情况下，STAT将反映到FLOW或SHUNT以提供门静脉循环的精确定量。
实施例3.示例性STAT测试的操作程序
供给品
PO(每口服)测试化合物：
2H4-胆酸盐([2，2，4，4-2H]-胆酸，40mg)(例如CDN同位素)。
碳酸氢钠(例如600mg)。
患者测试供给品：
血清/血浆转移管和标签。
10毫升注射器，用于抽取血样。
7毫升红色顶部和7毫升灰色顶部vacutainer管，用于血清样品收集。
针抛弃桶
饮料诸如苹果汁或葡萄汁，用于稀释口服测试化合物。
示例性测试化合物制备
口服组合物的一个示例性溶液可以含有2，2，4，4-2H-胆酸盐和碳酸氢钠(例如40mg和600mg，分别地)。在一个示例性方法中，在测试前的那天，可以将水添加到含有口服化合物的管上的约10毫升标记以获得口服测试溶液。将加帽管紧闭并振荡混合。旋转内容物以使全部粉末颗粒向下进入到水中。
在试验当天将溶解的口服测试溶液倒入到容器中，如尿杯。用约10毫升水冲洗管进入到尿杯中。在开始测试之前，添加稀释液，如葡萄汁或苹果汁(不是柑橘类果汁)至含有口服测试溶液的尿杯上的约40毫升标记。轻轻旋转以混合；不要摇动或搅拌，否则混合物可能起泡沫从容器出来。冲洗手上额外的果汁。
测试程序
在一个示例性方法中，将使用下列程序。任选收集基线血清样品(见样品收集)，之后施用测试化合物。
测试化合物的施用
开始计时器。记录T＝0.0-使患者饮用胆酸盐和果汁的口服溶液。用少许更多果汁冲洗杯并使患者饮用冲洗液。记录计时器时间。
样品收集
血液
在胆酸盐施用以后60分钟从患者收集静脉内血液样品。记录计时器时间。
加工血液样品并进行样品分析，用HPLC/MS(如下对于FLOW和SHUNT所概述)；或用GC/MS以确定血液样品中的可区别胆酸盐的浓度。在特定日期/时间点对于给定患者的样品测试结果可以与从例如对照组建立的截止值比较，或备选地，每一位患者可以用作随时间的他/她自身的对照。
实施例4.用HPLC-MS分析的SHUNT和门静脉HFR(FLOW)测定的操作程序
门静脉HFR(FLOW；口服胆酸盐清除测试)和SHUNT(胆酸盐分流测试)测定的操作公开在US2010/0055734和US2008/0279766中，将其每一个都通过引用并入本文。
临床流程。氘化-胆酸盐(产品#614149)和13C-胆酸盐(产品#605883)购自Sigma-Isotec(圣路易斯，密苏里州)并溶解在碳酸氢钠缓冲液中。关于这些化合物，本发明人自从2002年已经持有INDs#65121和65123，并且每年报告给FDA。将用于注射的13C-胆酸盐过滤，测试无菌度和热原，并且由研究药剂师以等分部分冷冻。在过夜禁食以后，每一位受试者接受留置的静脉内导管并且抽取基线静脉血液样品。受试者饮用与葡萄汁混合的氘化-胆酸盐剂量，并且同时，静脉内施用与白蛋白混合的13C-胆酸盐。在5、20、45、60和90分钟的时间点，抽取静脉血液样品。在处理成血清以后，将样品转移到临床测试实验室。
实验室分析.将患者血清样品添加未标记的胆酸盐作为内标物并且然后用SPE和醚萃取分离胆酸盐。通过同位素稀释方法，C8上的LCMS和选择的离子监控(SIM)用于定量测试化合物。全部分析运行包括适当的标准曲线和QC样品。口服清除(FLOW测试结果)和静脉内清除是在5个时间点从血清浓度计算的。静脉内对口服清除的比率是SHUNT测试结果。从仅60分钟时间点估计口服清除并用作STAT测试结果。
下面提供详细程序。
样品的收集和处理。
试剂和供给品。
下列试剂和供给品用于胆酸盐分流和胆酸盐清除测试程序中。如果患者仅正在经历口服胆酸盐清除测试，则省略用于注射的静脉内溶液和25％人白蛋白。
静脉内溶液-20mg24-13C-胆酸，在5毫升1mEq/ml碳酸氢钠中
PO测试化合物2，2，4，4-2H(40mg)和碳酸氢钠(600mg)
用于注射的25％人白蛋白(5ml)，待添加到24-13C-胆酸盐溶液。
静脉内供给品，包括250mlsNS，留置导管，3-通旋塞阀
10毫升注射器，用于施用静脉内测试化合物
7毫升红顶管，用于样品收集
3mlcrovials，用于血清储存
针抛弃桶
用于口服测试化合物的苹果或葡萄(非柑橘)果汁
计时器
离心机
转移移液管
患者准备。
确定的是，患者对于胶乳没有过敏反应。进一步确定的是，患者从在测试日之前的夜晚的半夜没有食用或饮用什么(NPO)，除了水。测量并记录患者的高度和重量。使患者的静脉内与三通旋塞阀配合，并将保持开放的生理盐水(NSTKO)在测试开始前放置。
胆酸盐化合物储备溶液。
测试化合物制备。
口服溶液用于口服胆酸盐清除测试和/或胆酸盐分流测定的任一种或两者。包括2，2，4，4-2H-胆酸(40mg)和碳酸氢钠(600mg)的口服溶液溶解在约10毫升水中24小时，之后通过剧烈混合测试。将溶液储存在冰箱中或在室温。就在施用前，将葡萄或苹果(非柑橘)果汁添加到混合物。将果汁溶液充分混合并倾倒入患者饮用的杯中。将杯用额外的果汁冲洗，将其施用给患者。
静脉内溶液用于静脉内胆酸盐清除测试和/或胆酸盐分流测定的任一种或两者。20mg胆酸-24-13C在5毫升1mEq/ml碳酸氢钠中的制剂是由药房工作人员制备的。测试剂量是20mg胆酸-24-13C在10毫升稀释剂中。如果将管瓶冷冻，则允许完全解冻。就在开始测试之前，将胆酸-24-13C溶液与白蛋白混合如下(该方法避免在混合过程期间损失测试化合物)。将全部24-13C-胆酸溶液(约5毫升)吸取在10毫升注射器中。将5毫升白蛋白吸取在另外10毫升注射器中。从24-13C-胆酸盐注射器分离针头并连接3-通旋塞阀。从白蛋白注射器分离针头并将白蛋白通过旋塞阀注射到24-13C胆酸盐注射器中。将一些空气抽入到胆酸/白蛋白注射器并通过将注射器颠倒数次以轻轻混合溶液。排出空气。
测试化合物施用。
在给予测试化合物以前收集基线样品。这些样本收集的时间应当记录在样品收集记录纸上。测试化合物的施用如下进行。开始计时器。记录24小时时钟时间为T＝0。记录时间。在T＝1-3分钟施用口服化合物。使患者饮用口服溶液和果汁。用更多果汁冲洗杯子并使患者饮用冲洗液。记录计时器时间。在T＝4-5分钟-施用3-通旋塞阀施用5毫升25％人白蛋白中20毫克13C胆酸的静脉内推送。记录定时器时间。通过3-通旋塞阀将线返回到NS。
样本收集。
经由3-通旋塞阀收集全部样品，每个样品前抛弃0.5ml以防止稀释或样品的交叉污染。在下列时间收集5ml红色顶。(T＝计时器时间)。
a.T＝10分钟，收集5分钟，记录计时器时间；
b.T＝25分钟，收集20分钟，记录计时器时间；
c.T＝50分钟，收集45分钟，记录计时器时间；
d.T＝65分钟，收集60分钟，记录计时器时间；
e.T＝95分钟，收集90分钟，记录计时器时间。
样品操作
容许将红顶管在室温凝块至少30分钟。将全部血液管在3000rpm旋转10分钟。将血清移除到正确标记的管瓶并冷冻在-20℃直到运送样品。胆酸盐化合物储存溶液的制备
胆酸盐清除和分流的精确测定取决于精确的校准曲线。储存溶液中的胆酸化合物的浓度必须是精确和可再现的。将胆酸粉末的非常精确的(误差＜0.5％)部分称重并将玻璃称重漏斗和1MNaHCO3的清洗液用于确保粉末定量转移到烧瓶。容量瓶用于确保精确的体积以便第一储存溶液的终浓度是精确的。校准空气取代移液管用于分配精确体积的第一储存溶液，使其在容量瓶中达到完全体积以制备第二储存溶液，其也是非常精确的。第二储存溶液用于制备标准曲线样品、准确度和精确度样品、回收样品、质量对照样品、选择性样品和稳定性样品，如在合适的SOP中所描述。
需要下列试剂。
1MNaHCO3
0.1MNaHCO3
0.1MNaHCO3/2％BSA
甲醇，LCMS级
水，CLRW级(临床实验室试剂水)
胆酸，纯度98％
鹅脱氧胆酸，纯度98％
[24-13C]-胆酸，99原子％13C
[2，2，4，4-2H]-胆酸，98原子％2H。
使用下列表2，以250uM的浓度制备全部第一储存溶液。
表2.胆酸盐化合物第一储存溶液。
第一储存溶液单独制备在0.1MNaHCO3中和甲醇中，如下。在玻璃称重漏斗中称出适量的胆酸化合物(+/-0.05mg)。将粉末转移到100ml容量瓶。使用甲醇或0.1MNaHCO3从漏斗清洗任何残留的粉末到烧瓶中。用甲醇使终体积达到100ml并充分混合。用1个月的期限标记烧瓶。储存在-20℃。
将未标记的胆酸制备为在MeOH或0.1MNaHCO3中的50uM内标物，如下。移取2.0ml的适当250uMCA第一标准物到10ml容量瓶中。用0.1MNaHCO3或甲醇使总体积达到10ml并充分混合。用1年的期限标记烧瓶。储存在4℃。
在甲醇中制造的[24-13C]-胆酸第二储存溶液显示在表3中。将每一个第二储存溶液进入到适当的15ml玻璃螺纹顶试管。将管紧密加盖并用数层封口膜密封并储存在-20℃。
表3.甲醇中的[24-13C]-胆酸第二储存溶液。
在甲醇中制成的[2，2，4，4-2H]-胆酸第二储存溶液显示在表4中。将每一个第二储存溶液进入到适当的15ml玻璃螺纹顶试管中。将管紧密加盖并用数层封口膜密封并储存在-20℃。
表4.甲醇中的[2，2，4，4-2H]-胆酸第二储存溶液。
在0.1MNaHCO3和BSA中制成的[24-13C]-胆酸第二储存溶液显示在表5中。将每一个第二储存溶液转移到适当的15ml螺纹顶塑料管中，加盖，用数层封口膜密封并储存在4℃。
表5.0.1MNaHCO3和BSA中[24-13C]-胆酸第二储存溶液。
在0.1MNaHCO3和BSA中制成的[2，2，4，4-2H]-胆酸第二储存溶液显示在表6中。将每一个第二储存溶液转移到适当的15ml螺纹顶塑料管中，加盖，用数层封口膜密封并储存在4℃。
表6.0.1MNaHCO3和BSA中的[2，2，4，4-2H]-胆酸第二储存溶液。
如上述制备的第二储存溶液用于制备人血清中的准确度和精确度样品，用未标记的胆酸盐作为内标。第二储存溶液用于制备回收样品，加入未标记的胆酸盐作为内标。
为了用胆酸盐分流测定精确地测量患者的肝功能，两个不同的稳定同位素胆酸盐化合物必须各自在患者血清中精确地定量。为了做到这一点，两条标准曲线的每一个的准确度、精确度和回收率必须在它们各自的浓度的范围内验证。
测定的准确度和精确度通过在定量的低限(LLOQ)和低、中和高浓度范围运行多个复制样品进行评估。准确度是平均测量值与实际值的接近度。精确度是由CV所指示测量值的再现性。回收率通过比较从血清提取的分析物相对于在低、中和高浓度测量的纯分析物的检测器响应进行评估。
质量控制样品的制备
关于分析方法的可接受水平的准确度和精确度，FDA提供指导。参见，例如，生物分析方法确认(BioanalyticalMethodValidation)，2001年5月，第VI部分。对于常规药物分析的确认方法的应用。一旦对于常规应用确认了分析方法，则其准确度和精确度应当定期监控以确保方法继续满意地执行。为了实现该目的，分开制备许多QC样品并且应当在基于总样品数的时间间隔用处理试样进行分析。将QC样品一式两份在三种浓度运行(一种接近定量的低限(LLOQ)(即，3xLLOQ)，一种在中等范围，并且一种接近于范围的高端点)并且应当以每一个测定运行结合。QC样品的数目(以3的倍数)将依赖于运行中的样品总数。QC样品的结果提供接受或排斥运行的基础。每6个QC样品中的至少4个应当在它们各自标称值的15％内。6个QC样品中的两个可以在它们各自标称值的15％以外，但是两者不在相同的浓度。
QC样品必须覆盖两个标准曲线的高、中和低范围。将QC样品设计成紧密模拟随着测试的时间进程的患者血清中发现的标记化合物的真实浓度。[24-13C]-CA浓度在早期时间点是非常高的，并且在中和低浓度指数下降。[2，2，4，4-2H]-CA浓度在早期时间点是非常低的，在中期时间点升高到最高值并且然后下降到中等浓度。
供给品
下列供给品用于制备QC样品，其用于胆酸盐分流和胆酸盐清除测试程序。如果患者样品正在仅经历口服胆酸盐测试，[24-13C]-CAQC样品可以省略。
人血清AB(GeminiBio-Products#100-512)
未标记的胆酸盐内标储存溶液(IS；0.1MNaHCO3中的50uM胆酸)
0.1MNaHCO3/1％BSA中的[24-13C]-胆酸和[2，2，4，4-2H]-胆酸第二储存溶液：
B2.0uM[24-13C]-CA
D10.0uM[24-13C]-CA
F60.0uM[24-13C]-CA
I3.0uM[2，2，4，4-2H]-CA
K10.0uM[2，2，4，4-2H]-CA
L30.0uM[2，2，4，4-2H]-CA
10ml容量瓶
P1000空气取代移液管和1ml尖管
新的洁净冷冻管
用于胆酸盐清除和测定的质量控制样品的制备程序。
[24-13C]-胆酸和[2，2，4，4-2H]-胆酸QC样品制备如下。对于每一组的QC样品，标记3洁净10ml容量瓶为“QC1”、“QC2”和“QC3”，如表7中所示。较大的容量瓶可以用于制备较大的批次。使用较大烧瓶的1/10的标称体积作为第二储存溶液的量以如下指示添加。
表7.QC样品。
管 [24-13C]-CA [2，2，4，4-2H]-CA
QC1 1.00ml F 1.00ml I
QC2 1.00ml D 1.00ml L
QC3 1.00ml B 1.00ml K
使用P1000，添加1.0ml的适当[24-13C]-CA储存溶液和1.0ml的适当[2，2，4，4-2H]-CA储存溶液到适当的烧瓶，如表6中所指示。用人血清使每个烧瓶达到准确的总量为10.0ml。将每个烧瓶紧密加盖并通过颠倒数次充分混合。标记8冷冻管为“QC1”、8为“QC2”和8为“QC3”。将每个QC混合物的等分部分1.2ml进入到适当的管瓶。在-80℃冷冻储存QC样品。QC样品具有1年的期限。
高压液相色谱-质谱(HPLC-MS)样品制备
为了确保准确的肝功能测试，标记的胆酸盐测试化合物必须从患者的血清样品分离并识别。胆酸盐化合物是两亲性分子，具有疏水性和亲水性区域。胆酸盐也可以是羧酸，其可以以不带电的游离酸形式(胆酸)或带电的羧酸形式(胆酸盐)，取决于pH值。这些特性可以用来从血清分离胆酸盐化合物。相对于GC/MS，采用HPLC/MS，允许在没有样品衍生化的情况下分析胆酸盐。备选地，用本领域已知的任何技术，GC/MS可以用于衍生的样品分析，例如，通过Everson和Martucci的方法，US2008/0279766，将其通过引用并入本文。
试剂、供给品和设备
制备下列试剂并在HPLC-MS样品制备中使用。
水，CLRW级(临床实验室试剂水)
甲醇，LCMS级
乙醚，ACS级
未标记的胆酸内标(IS)第一储存溶液(0.1MNaHCO3中50uMCA)
质量控制样品(如上所述制备)
1.0NNaOH(将20gNaOH溶解在500ml水中)
0.01NNaOH(用水稀释1.0NNaOH1比100)
10％甲醇(将100ml甲醇添加到1L圆筒中并用水使其达到1.0L)
90％甲醇(添加900ml甲醇到1L圆筒并用水使其达到1.0L)
0.2NHCl(在搅拌情况下将1.0mlACS级浓HCl缓慢添加到57.0ml水)
流动相(10mM乙酸铵/60％甲醇)
可抛弃的16x100和13x100试管
P1000空气取代移液管和1ml尖管
P100空气取代移液管和0.2ml尖管
连续注射移液器(RepeaterPipette)
旋涡混合器(VortexMixer)
SPE盒(BondElutLRCC18OH，500mg，Varian，Inc，)
真空多支管
真空离心蒸发浓缩器(Speed-Vac)
台式离心机
通风到烟气罩的真空离心蒸发浓缩器(Speed-Vacventedtofumehood)
浴式声波破碎器(BathSonicator)
用于水、甲醇、10％甲醇和90％甲醇的连续注射移液器
从冰箱移除患者血清样品和一组QC样品(2QC1，2和3的每一个)并容许它们融化至室温。必须穿戴包括实验工作服、手套、护目用具的人员保护设备(PPE)。必须将全部洗脱物和设备消毒。与样品接触的移液器和尖管必须丢弃到危险废物中。
对于每一位患者标记一组试管(16x100)，有患者的首字母和时间点代码(5min是1、20min是2、45min是3、60min是4、90min是5)。使用P1000移液管，从合适的收集管将0.50ml患者血清转移到合适的试管中。
对于每一个QC样品(QCla，QClb，QC2a，QC2b，QC3a，QC3b)标记一组试管(16x100)。使用P1000，将0.50ml每一个QC样品转移到合适的试管中。
将2个试管(13x100)标记为STDl和STD2。
向每一个患者样品和每一个QC样品和每一个STD样品管，使用连续注射移液器添加50ul的未标记的胆酸内标(IS)第一储存溶液。
将STD管放旁边用于随后的步骤21中的酸化和醚萃取。
用连续注射移液器和向每一个患者样品管和QC样品管添加1.0ml的0.01NNaOH并涡旋30秒。
用每一个患者血清的一种和待处理的QC样品标记一组SPE盒。
在罩中用连续注射移液器将5ml甲醇添加到每一个盒。该步骤可以在真空多支管上用高真空或通过重力进行。这用溶剂润湿树脂床。一旦液体顶部达到釉料顶部，则添加下一个溶液。避免使盒流干。
用连续注射移液器将10ml水添加到每一个盒。这平衡树脂床以使它准备用于结合胆酸盐化合物。该步骤可以在真空多支管上在高真空上或通过重力进行。
向每一个SPE盒添加适当的样品。胆酸盐化合物将结合到树脂床。用连续注射移液器向每一个样品试管添加1ml水清洗液，涡旋并将该清洗液添加到适当的盒。容许样品通过重力运行20分钟或更长，然后可以使用低真空≤3英寸汞柱以拉动样品通过。
在样品已经完全进入树脂床以后，用连续注射移液器将2.5ml水添加到每个SPE盒。这洗涤柱树脂床。使用低真空≤3英寸汞柱。
用连续注射移液器向每个SPE盒添加2.5ml10％甲醇。这进一步洗涤柱树脂床。使用低真空≤3英寸汞柱。
标记一组试管(13x100)，每个患者样品和每个QC样品用一支。
将每个试管放置在支架中并且在顶部位置其匹配SPE盒。
用连续注射分配器向每个SPE盒添加2.5ml90％甲醇。这洗脱胆酸盐化合物，将其收集到试管中。
将试管放置在真空离心蒸发浓缩器中并用高热在真空下离心45分钟以减少洗脱液体积并且除去干扰醚萃取的甲醇。
用Eppendorf连续注射移液器向来自真空离心蒸发浓缩器的每个管和STD管添加0.5ml的0.2NHCl并涡旋30秒。该酸化将胆酸盐化合物转变成它们的游离酸形式用于醚萃取。
在烟罩中，向每个管添加3ml的乙醚并剧烈涡旋30秒。这将胆酸盐化合物的游离酸形式萃取到醚相中。
在最小为5000rpm离心5分钟以加速相分离。
标记另一组试管(13x100)，每个样品用一支。
仔细收集上部醚层并转移到新的试管。
将醚萃取物放在排气到烟罩的真空离心蒸发浓缩器中并在无加热情况下真空下离心直到样品干燥。备选地，可以将样品用轻柔的N2流干燥。
向干燥的样品添加100ul流动相，涡旋30秒并超声波处理。
将样品转移到安捷伦(Agilent)1.5ml管瓶并加盖。
HPLC/MS参数和系统准备
试剂、供给品和设备
制备下列试剂并在HPLC-MS样品分析中使用。
水，临床实验室试剂水(CLRW)
甲醇，LCMS级
10mM乙酸铵水
10mM乙酸铵甲醇
流动相：60％10mM乙酸铵甲醇/40％10mM乙酸铵水
容量瓶，适当尺寸
量筒
下列仪器和供给品用于HPLC-MS样品分析中。
校准的分析天平
HPLC/MS仪器：Agilent1100系列液相色谱质谱，装备有G1956A多模式源，自动进样器，HP化学站软件或等效物。
AgilentEclipseXDBC8，2.1X100mm3.5um液相色谱柱
溶剂过滤脱气装置
0.22μm尼龙过滤器
各自准备溶剂和流动相，用0.22μm尼龙过滤器过滤并脱气。在准备以后，将溶剂和流动相各自断气48小时。
制备LCMS系统并调节；将柱稳定在40℃并通过将流动相运行30分钟而调节。将样品上样到自动进样器。柱流速是0.4ml/min的等梯度流动相缓冲液；60％10mM乙酸铵/40％10mM乙酸铵水。用自动进样器注射5微升的每个样品。将MS在多模式电喷雾(MM-ES)离子化中运行，具有大气压化学离子化(APCI)离子化。选择的离子监控在407.30、408.30和411.30m/z进行。用系统软件积分峰。用每个分析运行测定QC样品。QC样品的浓度必须落在15％准确度以内。
来自静脉内和口服样品的选择性离子监控的数据用于生成个体化的患者口服和静脉内清除率曲线。将曲线沿着它们各自的有效时间范围积分并对每一个都生成面积。静脉内和口服胆酸盐清除率曲线的比较容许确定首过肝消除或门静脉分流。用下式计算肝分流分数：
分流分数＝[AUC口服/AUC静脉内]*[剂量静脉内/剂量口服]*100％。
其中AUC表示曲线下的面积并且剂量表示施用的药剂的量(以mg计)。
实施例5.使用胆酸盐测试用功能评价检测的慢速、中速和快速的进展：患有原发性硬化性胆管炎的患者的三种不同类别。
本实施例检验门静脉HFR和SHUNT对患者年龄的关系以估计PSC疾病进展的大致速率。原发性硬化性胆管炎(PSC)显示不可改变的进展，但是进展速率在患者之间不同。胆酸盐测试可以测量门静脉肝滤过率(HFR)和门体SHUNT，其与静脉曲张、腹水、代偿失调和移植需要有关(肠胃病学(Gastroenterology)2012，142：S911；肝移植(LiverTransplantation)2012，18：S233)。令人惊奇地，发现门静脉HFR(FLOW)和SHUNT对于患者年龄的关系可用于估计PSC疾病进展的大致速率。采用胆酸盐测试以区别慢速、中速和快速进展。
方法。PSC患者(n＝42)和32位健康对照，年龄范围从20至67，经历胆酸盐测试并记录医疗史。患者经受两个胆酸盐测试方法。具体地，口服施用第一可区别的胆酸盐和静脉内施用第二可区别的胆酸盐。口服施用的胆酸盐，2，2，4，4-d4胆酸盐(40mg剂量)，通过特异性肠转运蛋白直接吸收到门静脉中。静脉内施用的胆酸盐，24-13C-胆酸盐(20mg)，全身分布并主要通过肝动脉进入肝。特异性肝转运蛋白清除来自门静脉和全身循环的双胆酸盐。在施用以后0、5、20、45、60和90分钟收集外周血液样品。将每一个血液样品中的可区别胆酸盐用LCMS法测定。在该情况下，所述方法已经根据FDA指导原则验证准确度和精确度。用下列方法从每个样品获得的值用于确定门静脉肝流速(门静脉HFR，FLOW)和SHUNT：Everson，US2010/0055734，用于诊断和介入肝病症的方法(MethodsforDiagnosisandInterventionofHepaticDisorders)，2009年9月11日提交；和Everson等，US2008/0279766，用于诊断和介入肝病症的方法(MethodsforDiagnosisandInterventionofHepaticDisorders)，2006年1月26日提交；将其每一个都通过引用并入本文。口服胆酸盐-2，2，4，4-d4靶向门静脉循环，并且其清除率限定门静脉HFR。静脉内胆酸盐-24-13C清除率测量全身HFR。全身对门静脉HFR的比率限定SHUNT。重复测试的重现性是优异的，CVs为10％；重复测试的平均值用于分析。
结果。在PSC患者中，相比于健康对照，随着年龄，门静脉HFR降低并且SHUNT增加。检查这些年龄相关的改变揭示3个类别的PSC患者，由门静脉HFR下降或SHUNT增加所限定-慢速、中速和快速进展者。在每个类别内，功能的年龄相关的下降大致是线性的。慢速进展者(n＝23，61％)证明适中的年龄相关的门静脉HFR下降或SHUNT增加。如果他们发生门静脉高血压(PHTN)，则表现发生在生命的后期-3位具有脾肿大是在超过45岁并且2位具有静脉曲张是在超过62岁。中速进展者(n＝12，32％)通常发生门静脉高血压(12位患者中有9位)并在生命早期经历下降——早至30岁的脾肿大和早至32岁的静脉曲张。超过54岁的中速进展者的大多数具有腹水和/或静脉曲张性出血(5位患者中4位)。快速进展者(n＝3，8％)相对稀少，但是这些患者在早于30岁表现低的门静脉HFR和高的SHUNT。在中速进展者类别中具有最高SHUNT的患者A在58岁接受肝移植，而在快速进展者类别中具有最高SHUNT的患者B在20岁接受肝移植，如图2-4所示。图2显示隔开成3个不同组的PSC患者，基于它们的门静脉HFR测试值和在测试时的年龄。图3显示隔开成3个不同组的PSC患者，基于SHUNT测试值和在测试时的年龄。分类为慢速进展者的PSC患者相比于对照仅具有适中的功能变化。分类为中速和快速进展者的PSC患者表现更多的并发症并且在更早的年龄。
每个类别的患者显示独特的细胞因子模式，表明独特的病理生理机理，如图5中所示。IFN-γ在对照和慢速、中速和快速进展者之间没有改变。相比于健康对照，TNF-α在PSC患者的每一个类别中都增加。相比于对照和慢速进展者，GM-CSF在中速和快速进展者中增加。在快速进展者中，IL-1b呈现出趋向更高，但是在统计上不显著。在健康对照中，IL-6实质上未检测到，而慢速、中速和快速进展者显示逐步上升的IL-6水平的趋势。在健康对照中，IL-8实质上未检测到，而慢速、中速和快速进展者显示逐步上升的IL-8水平的趋势。
结论。用胆酸盐测试的功能评估识别3个不同类别的患有PSC患者：慢速、中速和快速进展者。用胆酸盐测试区分PSC患者的类别可以提高疾病进展的独特病理生理学机理的研究并且帮助开发适合的靶向治疗。
实施例6.使用SHUNT和门静脉HFR分类PSC患者的算法
通过下列算法，将PSC患者归属于PSC的亚类别，基于他们的SHUNT和门静脉HFR以及他们在测试时间时的年龄。
步骤1是基于SHUNT和年龄。如果患者的SHUNT(以百分比)除以他们的年龄(岁)大于1.7则将患者诊断为快速进展者。如果该值小于1.7，则进行到步骤2。图6显示SHUNT对年龄，确定快速进展者。在0岁开始的线区分SHUNT/年龄为1.7，并且在线以上的患者是快速进展者并且在线以下的那些是其他PSC类别。
步骤2基于门静脉HFR和年龄。如果门静脉HFR(以mL/min/kg)+[0.35x年龄(岁)]大于29，则将患者诊断为慢速进展者。如果该值小于29，则将患者诊断为中速进展者。已经在步骤1中诊断为快速进展者的那些患者不用门静脉HFR以该方式进一步评价。图7显示门静脉HFR对年龄确定慢速和中速进展者。在0岁开始的线区分门静脉HFR+[0.35x年龄]，其等于29。在所述线以上的那些患者是慢速进展者并且在该线以下的那些患者是中速进展者。
实施例7.使用STAT归类PSC患者的方法。
STAT测试是如本文中描述的简化筛查测试，其中从在口服施用以后的单一时间点(例如，60分钟)获取自患者的可区别的胆酸盐化合物血液或血清浓度(以μM计)获得所述值。STAT测试值可以用于估计门静脉血流。PSC患者中的STAT测试值可以相比于截止值以归类大多数患者中的PSC进展。大多数PSC患者可以归属PSC的亚类别，基于简单STAT截止值和他们在测试时间的年龄，如图8中所示。图8显示STAT可以归类大多数PSC患者。可以使用该图上的暗线所示的简单截止值将患者归类为慢速、中速和快速进展者。30和40岁之间的患者具有重叠的STAT结果并且不能用该方法归类。如果患者小于30并且具有STAT＞1μM，则将患者诊断为快速进展者。用STAT不精确地归类30多岁的患者。对于较年老患者，截止值显示在表8中。
表8.用于PSC患者的STAT测试截止值。
实施例8.疾病严重性指标的开发。
之前，门静脉HFR测试或SHUNT测试各自单独用于不同的患者群和正常的对照以开发用于特异性慢性肝脏疾病或病症的截止值。如本文中所述，从DSI方程获得疾病严重性指标(DSI)，其中方程的项包括一个或多个肝功能测试结果值，其选自SHUNT、门静脉HFR和/或全身HFR，其中测试结果值用作疾病严重性指标中的项以计算疾病严重性指标(DSI)。
在一个实施方案中，研究了一组CHC患者的预测响应(持续的病毒响应，SVR)中的DSI应用到聚乙二醇化的干扰素/利巴韦林(PEG/RBV)治疗。对于DSI的特定范围内的患者的组实现SVR的CHC患者的％，如表9-11中所示。开发DSI方程，包括SHUNT和门静脉HFR测试值两者。DSI方程显示如下。
DSI＝9.84(SHUNT)-12.36LOGe(门静脉HFR)+50.5
将DSI方程应用到一组健康对照，给出平均分数+/-SD为10+/-3。大多数功能受损的患者，其需要在测试的3周内移植，具有47分。可能存活的患者中最高分预期是约50。使用DSI相比于单独使用SHUNT或门静脉HFR显示在表9-11中，其显示对于SHUNT、门静脉HFR或DSI的特定范围内的患者的组计算的获得SVR的CHC患者的％。
表9.CHC患者中的SHUNT和SVR。
SHUNT ＜25 25-35 35-45 45-60 ＞60 全部
％SVR 17％ 14％ 14％ 3％ 5％ 14％
SVR 11 12 7 1 1 32
N 63 59 50 37 21 230
表10.CHC患者中的门静脉HFR和SVR。
HFR ＞20 15-20 10-15 5-10 ＜5 全部
％SVR 15％ 21％ 17％ 7％ 0％ 14％
SVR 5 11 12 4 0 32
N 34 52 70 59 15 230
表11.CHC患者中DSI和SVR。
DSI 0-20 20-25 25-30 30-40 40-50 全部
％SVR 19％ 16％ 15％ 0％ 0％ 14％
SVR 17 10 5 0 0 32
N 89 62 33 37 9 230
在一些实施方案中，DSI用于预测对于抗病毒治疗的响应，例如获得SVR的患有CHC的患者的％。在一些实施方案中，DSI用于预测对于治疗的响应，例如在用PEG/RBV治疗以后将获得SVR的患有CHC的患者的％。
实施例9.评估肝相关的结果的疾病严重性指标。
非酒精性脂肪肝病(NAFLD)包括良性脂肪肝(脂肪肝)和伴有炎症、坏死和纤维化(NASH)的脂肪变性，其可发展为肝硬化和临床并发症。虽然NASH是积极的坏死炎性过程，但是纤维化的进展和肝硬化的演变速率在患者之间差别很大。
缓慢的进展速率表明，多年的观察和跟进将是需要的以建立NASH的自然史或证明治疗或干预减少临床结果。临床并发症的主要结果的长期研究是极其昂贵的，并且受到患者和调查者减员的影响。使用与临床结果相关的早期标记物或代用品的短期研究是可取的。
直到现在，认为肝活组织检查的纤维化分期是黄金标准作为临床结果的代用品。几个研究已经证明纤维化的严重性而不是脂肪变性，预测临床结果的未来风险。
肝活组织检查的备选方案将是精确的、可再现的、充分耐受的、相对便宜的和非侵入性。另外，这些备选的测试应当与纤维化相关，独立于脂肪变性的程度，并且预测临床结果的风险。开发定量肝功能测试(QLFTs)以解决这些需要。接近全部QLFTs满足一个或多个标准作为肝活组织检查的备选方案。双胆酸盐清除(SHUNT)满足全部这些标准。针对肝硬化的丙型肝炎抗病毒长期治疗(HALT-C)试验的NIH-和工业(罗氏)-资助的QLFT辅助研究评价QLFTs预测临床结果的能力。
用一组QLFTs(咖啡因、安替比林、利多卡因-MEGX、半乳糖、双胆酸盐和SPECT肝-脾扫描)在基线、2年和4年研究患者(N＝285)，并且追踪临床结果(Child-Turcotte-Pugh(CTP)增加、静脉曲张、脑病、腹水、肝相关的死亡)高达8.3年(4.9±2.2年，平均值±SD)。比较每个测试的超出高风险截止值的临床结果的可能性。基线测试的危险比率的范围是从口服胆酸盐的6.5至GEC的2.2，并且用于系列测试的合并相对风险的范围是从口服胆酸盐的14.1至MEGX的2.5。在另外的出版物和报告中，双胆酸盐测试显示不仅预测临床结果，而且与纤维化的分期、肝硬化的风险、静脉曲张的风险和静脉曲张尺寸和SVR以后的肝功能的追踪改善以及从活体肝捐献的恢复相关。
有趣的是，在双胆酸盐预测临床结果的模型中，纤维化的组织学分期不显著；因此可以令人惊奇地避免分期肝活组织检查。给出宽的临床关联，双胆酸盐作为活组织检查的备选方案的潜在应用的进一步的研究是有保证的。
双胆酸盐的最初发展成临床测试需要根据FDA用于生物分析程序和方法的指导原则简化临床测试、修正实验室程序、制定质量控制和批准测试表现特征。
与NIH和HALT-C的数据使用协议达到了再考核并开发修订测试的临床关系。肝功能的三个主要参数是由下列测试限定的：来自静脉内施用的胆酸盐清除率的全身肝滤过率(HFR)、来自口服施用的胆酸盐的门静脉HFR和来自清除率比率的SHUNT。疾病严重性指标由全部三个变量构成。预测患有慢性丙型肝炎的纤维变性阶段的患者中未来临床结果的风险是由这些测试的能力限定的，如实施例10中所示。
使用临床结果作为HCV患者中的终点，疾病严重性指标(DSI)是由测试的参数限定的，如实施例10中所示。在新研究目前登记的受试者中，DSI与HCV患者、PSC患者和NASH患者中的肝疾病严重性相关。DSI是高度可重现的，与纤维化相关，并且预测临床结果。图10显示，DSI与纤维化线性相关(左图)但是不受脂肪变性影响(活组织检查脂肪分数，右图)。将DSI在识别患有未来临床结果的患者中的表现与Ishak纤维化分数、血小板计数和MELD的表现相比(图11和表12)。
表12.识别将具有结果的患者。
测试 参数 C-统计 最优截止值
胆酸盐 DSI 0.83 ＞23
活组织检查 Ishak纤维化 0.75 ＞F4
CBC 血小板 0.75 ＜140
Std Labs MELD 0.70 ＞6
如图11和表12中所示，当相比于活组织检查(Ishak纤维化)、CBC(血小板)或标准实验室(MELD)，在最优截止值，DSI具有最高的灵敏度、特异性、PPV和NPV。QLFTs，特别是双胆酸盐，可以是肝活组织检查的准确的、可重现的、成本有效的、非侵入性的备选方案，作为自然史研究或用于监控NAFLD中治疗有效性的终点。
实施例10.慢性丙型肝炎中肝相关的结果的疾病严重性指标。
在HALT-C试验中登记的224名慢性HCV患者(IshakF2-F6)中在基线进行胆酸盐测试，患者特征在于CTP分数为5或6并且没有临床并发症的在先历史。
具体地，使用FDA指导原则批准的改善LCMS方法，将存档血清再分析以确定来自静脉内施用的胆酸盐清除率的全身肝滤过率(HFR)、来自口服施用的胆酸盐的门静脉HFR和来自清除率比率的SHUNT的胆酸盐清除率曲线。跟踪患者的临床结果高达8.3年(4.9±2.2年，平均值±SD)。将临床结果(n＝54)限定为CTP进展、静脉曲张性出血、腹水、肝性脑病或肝相关的死亡。
使用单变量的Cox单变量Cox单变量比例危险回归分析进行疾病严重性指标(DSI)的导出，如表13中所示。
表13.单变量Cox比例分析危险回归分析。
卡方 卡方
SHUNT 44.7 LogeSHUNT 34.8
门静脉HFR 51.2 Loge门静脉HFR 70.2
全身HFR 21.9 Loge全身HFR 29.8
将用最高卡方的测试结合到疾病严重性指标以改善表现。
DSI＝A(SHUNT)+B(loge门静脉HFR)+C(loge全身HFR)+D。
基于HALT-C群中的第一临床结果的预测，开发DSI方程：
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50
制备用于预测SHUNT、门静脉HFR和DSI结果的ROC曲线并显示在图12中。将最优截止值确定为每条曲线上最接近左上角的点，如图12中所示。
患者的范围从DSI9(正常)到40(严重机能障碍)。ROC曲线显示，DSI可以识别具有中等/大的静脉曲张的患者，c-统计0.82，并且可以预测哪些患者将具有临床结果，c-统计0.83，并且DSI＞25是两者的最优截止值。DSI＞25具有比用活组织检查(IshakF5-F6)的肝硬化的更高平衡准确性，并且相对于活组织检查用于识别中等/大的静脉曲张的PPV增加41％并且用于预测结果的PPV增加47％(表14)。
表14.预后测试表现。
评价每个测试体系的预后测试表现并且最高灵敏度、特异性、PPV、NPV和平衡准确性全部由基于胆酸盐测试的DSI获得，如表14中所示。
图13显示根据本实施例的基于胆酸盐测试的SHUNT(％)、全身HFR(mL/min/kg)、门静脉HFR(mL/min/kg)和DSI的患有轻微疾病、中度疾病和严重疾病测试结果的非硬变患者(IshakF2，3，4；n＝19，63，45)的图。黑色圆表示具有临床结果的患者、浅灰色圆表示没有临床结果的患者，并且深灰色圆表示正常的健康对照。惊奇地，具有高DSI的非硬变患者(IshakF2，3，4)具有更高的结果风险。
图14显示根据本实施例的基于胆酸盐测试的SHUNT(％)、全身HFR(mL/min/kg)、门静脉HFR(mL/min/kg)和DSI的患有轻微疾病、中度疾病和严重疾病测试结果的硬变患者(IshakF5，6；n＝48，49)的图。黑色圆表示具有临床结果的患者、浅灰色圆表示没有临床结果的患者；并且深灰色圆表示正常的健康对照。惊奇地，具有低DSI的硬变患者(IshakF5，6)具有更低的临床结果风险。
显著地，胆酸盐测试可以在预测丙型肝炎患者中的临床结果中胜过活组织检查诊断的硬变。最高的预后表现是通过将胆酸盐测试结果结合到DSI实现的。该实施例显示产生DSI的双胆酸盐肝功能测试可以在识别患有中等/大的静脉曲张并且在预测慢性HCV患者中的临床结果方面胜过组织学纤维化分期。
实施例11.原发性硬化性胆管炎(PSC)的疾病严重性指标评价。
在评价一组患有原发性硬化性胆管炎(PSC)的代偿的或最小代偿失调患者中的疾病严重性时，将胆酸盐测试相比于MELD。
20名健康对照用作比较PSC人群中胆酸盐测试结果的参考。登记已经用胆管造影术诊断的43名PSC患者。大多数是中等年纪，男性并且具有低MELD、CTP或MayoPSC风险分数。胆红素、INR、白蛋白和血小板计数的平均值反映他们疾病的相对代偿阶段。碱性磷酸酶在宽范围适当提高。具体地，43名PSC患者年龄平均为48.4±12.9岁，76％男性，平均MELD分数为9.5±4.3，平均CTP分数为6.0±1.5，平均MayoPSC风险分数为0.85±0.74，平均胆红素1.8±1.8mg/dL，平均INR1.2±0.6，平均白蛋白3.6±0.5，平均血小板计数190±95x10-3uL-1和平均碱性磷酸酶为206±196IU/mL。
使患者经受过夜禁食并在两周内两次研究每一名患者以检验重现性。通过静脉内施用与HSA混合的20mg[24-13C]-胆酸盐和果汁中口服40mg[2，2，4，4-2H]-胆酸盐的同时双施用进行胆酸盐测试。在胆酸盐施用以后0、5、20、45、60和90min取血液样品。用HPLC/MS分析血清样品。从血清胆酸盐计算清除率(IV和PO)、SHUNT、疾病严重性指标(DSI)。从剂量(口服施用的40mg和静脉内施用的20mg)除以每一种同位素的浓度-时间曲线下的面积(mg/min/ml)计算胆酸盐口服清除和静脉内施用以后的胆酸盐清除并且对于体重(kg)标准化，并且胆酸盐分流(shunt)是静脉内和口服施用的同位素的清除比率。从基于HALT-C群中第一临床结果的预测开发的DSI方程计算DSI，如实施例10中所示。
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50。
胆酸盐测试证明优异的重现性，从一个测试日期到另一个测试日期的变化非常低。重现性数据显示在表15中。
表15.胆酸盐测试的重现性
SHUNT 门静脉HFR 全身HFR
相关系数 R2 0.96 0.95 0.90
变化系数 CV 10.1％ 10.7％ 9.7％
类别内的相关系数 ICC 0.93 0.90 0.80
相关系数在0.95和0.97是优异的。HFR和SHUNT的平均CV是10％，并且对于STAT是21％。因为STAT是一次性测量，而不是数个点的平均值，因此本发明人预期更高的CV。重要的是，在测试结果的范围内，CV没有显著变化，表明在疾病严重性的宽范围上的优异重现性。数据显示胆酸盐测试是可重现的。
在全部测试结果的范围上，类别内的相关性测量个体的变化性。ICC的范围在0.9至0.94之间，表明在个体变化性内是非常低的。为了将这放入上下文中，ICC为0.7-0.8表示在测试之间强烈一致。
DSI识别患有静脉曲张或代偿失调的PSC患者。
图15显示DSC患者和健康对照的胆酸盐测试结果的图。将门静脉HFR绘制在X轴上并将全身HFR绘制在Y轴上。SHUNT，全身对门静脉HFR的比率是由对角线表示的。DSI显示在阴影区域中，具有DSI＝14的截止值的右上中的浅灰色区域显示健康对照的DSI，具有DSI＝18的截止值的白色区域显示轻微疾病的DSI，具有DSI＝36的截止值的中等灰色区域显示中等疾病的DSI，并且在左下的深灰色区域显示最严重疾病的DSI。对于PSC疾病、静脉曲张和代偿失调的预测截止值显示在区域之间的交界处。
用于限定处于静脉曲张或代偿失调风险中的患者的胆酸盐截止值的表现显示在表16中。
表16.来自PSC患者的胆酸盐截止值的表现。
在健康对照中，DSI是10±3。在PSC中，DSI可以识别患有PHTN(ROCc-统计0.80)和静脉曲张(ROCc-统计0.93)的患者。DSI≥18对于识别PHTN是最优的(平衡的准确性82％)并且还可以识别患有静脉曲张的全部患者(100％灵敏度，70％特异性，59％PPV，100％NPV)。该截止值标记轻微的和中等的疾病之间的边界。具有DSI≥36的全部患者，区分中等的和严重的疾病，或者具有中等的静脉曲张或者遭受静脉曲张性出血，并且75％具有腹水。没有DSI＜36的患者具有腹水或静脉曲张性出血。
DSI定量PSC疾病严重性。如图16中所示，图面A显示对于全部PSC患者的DSI与MELD的比较。也显示了健康对照的DSI用于参考。DSI将PSC患者与对照分开，将没有临床表现的PSC患者与健康对照和具有静脉曲张的PSC患者分开。DSI识别病最重的患者，其发生代偿失调。相反，在这些组的PSC患者之间在MELD分数上存在显著的重叠。MELD不能任意确定性程度区别所述组。令人惊奇地，在评价具有原发性硬化性胆管炎的患者的疾病严重性时，胆酸盐测试DSI优于MELD。
图16图面B和C显示仅在列表患者中(在肝移植等待列表上的患者)的相比于MELD的DSI。
图16图面B显示大致为20的DSI将患有静脉曲张的PSC患者与没有静脉曲张的PSC患者清楚地分开。
图16图面C显示大致为35的DSI将具有代偿失调的PSC患者与没有代偿失调的患者清楚地分开。
相反，图16图面B和C显示在这些组的PSC患者之间的MELD分数中的重叠，表明MELD不能将患有静脉曲张的患者或患有代偿失调的患者以任何确定性程度区别。
该实施例显示在评价PSC疾病严重性和识别处于静脉曲张或代偿失调风险中的患者时DSI优于MELD-特别是在具有较低MELD分数的患者中。DSI可以用于调整等待列表上的PSC患者的肝移植优先级。
图17显示在1年追踪以后评价的PSC患者中的DSI和疾病严重性的变化。将DSI的变化对着患者的年龄绘图，如图17中所示。系列DSI测量限定疾病严重性的类别。具有慢速PSC进展的患者显示在左图面中，其中截止值＝18表示PHTN。具有中速和快速PSC进展的患者显示在右图面中，其中DSI截止值＝35表示代偿失调。
实施例12.胆酸盐测试和疾病严重性指标识别处于临床并发症风险中的原发性硬化性胆管炎等待名单患者。
相比于基于双胆酸盐清除和分流的疾病严重性指标(DSI)，MELD可能不能评价列表的PSC患者中的临床并发症的风险。在评价肝移植等待列表上的患有原发性硬化性胆管炎(PSC)的患者组中的疾病严重性时，将胆酸盐测试与MELD相比。
如实施例11中所提供，测试患者。如实施例11中所提供，计算DSI。在测试的43名PSC患者中，10名在LT的等待列表上。将PSC患者相比于20名健康对照。用于患者和健康对照的胆酸盐测试值、DSI和MELD的比较显示在表17中。
表17.PSC患者和健康对照中相比于MELD分数的胆酸盐和DSI值。
表17显示SHUNT、门静脉HFR和DSI能够将PSC患者与健康对照区别，将列表的PSC患者与没有列表肝移植(LT)的PSC患者区别，将患有静脉曲张的列表的PSC患者与没有静脉曲张的那些区别。MELD不能区别患有静脉曲张的那些。
图18显示在肝移植等待列表上的PSC患者中的DSI对MELD分数的图。在评价PSC患者中肝移植的并发症风险和优先级时，DSI优于MELD。尽管具有低的MELD分数，具有DSI＞20的PSC患者发生门静脉高血压相关的并发症，并且具有DSI＞40的PSC患者需要肝移植。
实施例13.慢性丙型肝炎患者中持续病毒响应以后功能改善的胆酸盐测试和疾病严重性指标测量。
患有晚期纤维化或肝硬变的慢性HCV患者是难于治疗和治愈的。该研究的目标是确定用胆酸盐测量的肝功能是否可以预测对于PEG干扰素/利巴韦林(PEG/RBV)的持续病毒响应(SVR)并且测量获得SVR的那些患者中的肝功能改善。
登记在HALT-C试验中的230名慢性HCV患者(IshakF2-6)，其特征在于晚期的纤维化和用基于干扰素治疗的在先治疗的失效，在基线测试并且然后用PEG/RBV再治疗。接收持续病毒学响应SVR的患者(n＝32，包括5名肝应变患者)和非响应者(NR)在2年时再测试。
在基线和在2年以后，通过静脉内施用与HSA混合的20mg[24-13C]-胆酸盐和口服果汁中40mg[2，2，4，4-2H]-胆酸盐的同时双施用，使患者经受胆酸盐测试。在胆酸盐施用以后的0、5、20、45、60和90min取血液样品。用HPLC/MS分析血清样品，并且从血清胆酸盐计算清除(IV和PO)、SHUNT、疾病严重性指标(DSI)。从基于HALT-C群中第一临床结果的预测开发的DSI方程计算DSI，如实施例10中所示。
图19图面A显示相比于肝功能的四分值的获得SVR的患者的图。SVR的可能性与DSI最相关。
如表18中所示，非响应者(NR，n＝80)中肝功能下降，并且具有SVR(n＝23)升高。
表18.来自再治疗以后有或没有SVR的HCV患者中基线的肝功能变化。
图19，图面B显示在用PEG/RBV(聚乙二醇干扰素/利巴韦林)再治疗慢性HCV患者以后在SVR以后的肝功能改善。当在基线以后两年测试时，在SVR以后，更严重的基线损伤导致更大的功能改善。
当用PEG/RBV再治疗患者时，非侵入性胆酸盐肝功能测试预测获得SVR的可能性并且将SVR以后的功能显著改善定量。在SVR以后肝功能改善在具有更严重基线损伤的那些患者中更大。
实施例14.疾病严重性指标方程的开发。
该研究的目的是在识别具有中等/大的静脉曲张的那些HCV患者和处于未来的临床结果风险中的那些患者中比较双胆酸盐肝功能测试对纤维化的组织分期。
登记在HALTC试验中的慢性HCV患者(n＝220)进行用于静脉曲张的双胆酸盐测试、肝活组织检查和内窥镜筛查，并且对于临床结果追踪4.9±2.2年。患者具有Ishak纤维化分数为F2-6、CTP分数为5或6，并且没有临床并发症的在先历史。中等或大的食道静脉曲张在22名患者中发现。临床结果，限定为2点CTP进展、静脉曲张性出血、腹水、肝性脑病或肝相关的死亡，发生在52名患者中。
进行双胆酸盐测试。简言之，口服施用的胆酸盐-2，2，4，4-d4(40mg)通过特异的回肠胆汁盐转运蛋白吸收到门静脉中。静脉内施用的胆酸盐-24-13C(20mg)主要通过肝动脉进入肝。特异的肝胆汁盐转运蛋白从门静脉和全身循环清除双胆酸盐。在同时给药后的0、5、20、45、60和90分钟从患者取外周血液样品并且对于准确性和精确性用FDA指导原则批准的LCMS方法测定。计算SHUNT、门静脉HFR和全身HFR。
AUCc-统计和最优截止值是从ROC曲线确定的，并且用平衡的准确度和Youden指标(J)评价测试表现。个体测试的表现显示在表19中。个体测试预测结果。
表19.个体化胆酸盐测试的表现
每个测试和它的对数变换式也是用危险回归评价的，如表20中所示。
表20.单变量Cox比例危险回归分析分析(卡方)。
门静脉HFR 51 Loge门静脉HFR 70
SHUNT 45 LogeSHUNT 35
全身HFR 22 Loge全身HFR 30
将具有最高卡方的测试结合到疾病严重性指标中以改善表现。
将具有最高卡方、Loge门静脉HFR的测试对第二最佳的，SHUNT，在新的特征空间上作图。最优线性分类器是：
Y(SHUNT)＝1.24X(Loge门静脉HFR)-2.36
其限定分量加权和DSI2。
DSI2＝1.24Loge门静脉HFR-SHUNT
表21.DSI2统计。
DSI2相对于个体化测试具有改善的表现。
将DSI2对Loge全身HFR在新的特征空间上作图。最优线性分类器是：
Y(Loge全身HFR)＝-0.623X(DSI2)+3.03
限定第三分量的加权和DSI3。
DSI3＝Loge全身HFR+0.623DSI2
表22.DSI3统计。
DSI3相对于DSI2具有改善的表现。
重新安排DSI3并添加常数以具有最佳的肝功能，预期为DSI＝0，和最差的肝功能为DSI＝50。
DSI＝5.34SHUNT-6.65Loge门静脉HFR-8.57Loge全身HFR+44.66
DSI方程识别具有中等/大的静脉曲张的患者。具体地，使用DSI方程，DSI＞19表示中等到大的静脉曲张的高风险；DSI10-19表示中等到大的静脉曲张的低风险；和DSI为0-10表示健康的肝功能。
DSI方程预测患者中未来的临床结果。具体地，使用DSI方程，DSI＞19表示临床结果的高风险；DSI为10-19表示临床结果的低风险；和DSI为0-10表示健康的肝功能。
DSI与活组织检查的纤维化分期的比较显示在表23和24中。
表23.识别患有中等/大的静脉曲张的患者。
表24.识别未来临床结果。
如表23和24中所示，在用于识别未来临床结果的表现的全部测量中，DSI优于活组织检查的组织学纤维化分期。

Claims (36)

1.一种用于确定患者中的疾病严重性指标(DSI)值的方法，所述方法包括：
(a)获得患有慢性肝病或处于慢性肝病风险中的患者中的一个或多个肝功能测试值，其中所述一个或多个肝功能测试值是从选自由SHUNT、门静脉肝滤过率(门静脉HFR)和全身肝滤过率(全身HFR)组成的组中的一个或多个肝功能测试获得的；和
(b)采用疾病严重性指标方程(DSI方程)获得患者中的DSI值，其中所述DSI方程包括一个或多个项和常数以获得DSI值，其中：
所述DSI方程的至少一项独立地表示来自步骤(a)的患者中的肝功能测试值或数学变换的来自步骤(a)的患者中的肝功能测试值；和
所述DSI方程的至少一项乘以特异于所述肝功能测试的系数。
2.权利要求1的方法，所述方法还包括：
(c)将所述患者中的DSI值与一个或多个DSI截止值、一个或多个正常健康对照、或随时间的所述患者内的一个或多个DSI值比较。
3.权利要求2的方法，其中将患者中的DSI值与一个或多个DSI截止值比较表示至少一个临床结果。
4.权利要求3的方法，其中所述临床结果选自由Child-Turcotte-Pugh(CTP)增加、静脉曲张、脑病、腹水和肝相关的死亡组成的组。
5.权利要求2的方法，其中比较随时间的患者内的DSI值用于监测患者中的慢性肝病的治疗有效性，其中随时间的患者内的DSI值降低表示治疗有效性。
6.权利要求2的方法，其中比较随时间的患者内的DSI值用于监测患者中的慢性肝病的治疗需要，其中随时间的患者内的DSI值增加表示患者中的治疗需要。
7.权利要求5或权利要求6的方法，其中患者中的慢性肝病的治疗选自由下列组成的组：抗病毒治疗、抗纤维化治疗、抗生素、免疫抑制治疗，抗癌治疗、熊脱氧胆酸、胰岛素敏化剂、介入治疗、肝移植、生活方式改变、和饮食限制、低血糖指标饮食、抗氧化剂、维生素补充剂、经颈静脉肝内门体分流术(TIPS)、导管导向溶栓、球囊扩张和支架放置，球囊扩张和引流、体重减轻、锻炼、和避免酒精。
8.权利要求2的方法，其中比较随时间的患者内的DSI值用于监测所述患者中慢性肝病的状态，其中随时间的患者内的DSI值的变化用于通知患者疾病的状态和未来临床结果的风险，其中随时间的患者内的DSI值的增加表示较差的预后，和随时间的患者内的DSI值的降低表示较好的预后。
9.权利要求1的方法，其中数学变换的患者中的肝功能测试值选自患者中的肝功能测试值的对数、反对数、自然对数、自然反对数或倒数。
10.权利要求1的方法，其中DSI方程的每一项独立地表示来自步骤(a)的患者中的肝功能测试值或数学变换的来自步骤(a)的患者中的肝功能测试值。
11.权利要求1的方法，其中所述疾病严重性指标方程是：
DSI＝5.34(SHUNT)-6.65(Loge门静脉HFR)-8.57(Loge全身HFR)+44.66
其中SHUNT是患者中的SHUNT测试值(％)，门静脉HFR是作为mL/min/kg的患者中的门静脉HFR测试值，其中kg是患者的体重，和全身HFR是作为mL/min/kg的患者中的全身HFR值，其中kg是患者的体重，其中患者中的SHUNT、门静脉HFR和全身HFR测试值是在同一天获得的。
12.权利要求1的方法，其中所述疾病严重性指标方程是：
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50
其中SHUNT是患者中的SHUNT测试值(％)，门静脉HFR是作为mL/min/kg的患者中的门静脉HFR测试值，其中kg是患者的体重，和全身HFR是作为mL/min/kg的患者中的全身HFR值，其中kg是患者的体重，其中患者中的SHUNT、门静脉HFR和全身HFR测试值是在同一天获得的。
13.权利要求12的方法，其中所述患者中的慢性肝病是慢性丙型肝炎、非酒精性脂肪肝病或原发性硬化性胆管炎。
14.权利要求1的方法，其中所述慢性肝病是慢性丙型肝炎并且所述疾病严重性指标方程是：
DSI＝9.84(SHUNT)-12.36LOGe(门静脉HFR)+50.5
其中SHUNT是患者中的SHUNT测试值(％)，并且门静脉HFR是作为mL/min/kg的患者中的门静脉HFR测试值，其中kg是患者的体重，其中患者中的SHUNT和门静脉HFR测试值是在同一天获得的。
15.权利要求1的方法，其中患者中的SHUNT测试值由下列方法确定，所述方法包括：
(a)口服施用第一可区别的胆酸盐剂量(剂量口服)给患者并且同时静脉内共施用第二可区别的胆酸盐剂量(剂量静脉内)给患者，之后接收从患有PSC的患者收集的多个血液或血清样品，其中已经在跨越施用以后的一段时间的间隔收集了样品；
(b)将每一个样品中的第一和第二可区别胆酸盐的浓度定量；
(c)包括使用拟合到模式口服可区别的胆酸盐清除率曲线的计算机算法曲线，从每个样品中的第一可区别的胆酸盐的浓度生成个体化的口服清除率曲线，并计算个体化的口服清除率曲线下的面积(AUC口服)；
(d)使用拟合到模式静脉内第二可区别的胆酸盐清除率曲线的计算机算法曲线从每个样品中的第二可区别胆酸盐的浓度生成个体化的静脉内清除率曲线，并且计算个体化的静脉内清除率曲线下的面积(AUC静脉内)；和
(e)使用下式计算患者中的shunt值：
AUC口服/AUC静脉内×剂量静脉内/剂量口服×100％。
16.权利要求15的方法，其中第一可区别的胆酸盐是第一稳定同位素标记的胆酸，并且第二可区别的胆酸盐是第二稳定同位素标记的胆酸。
17.权利要求16的方法，其中所述第一和第二稳定同位素标记的胆酸选自2，2，4，4-d4胆酸盐和24-13C-胆酸盐。
18.权利要求15的方法，其中已经在施用以后的2至7个时间点的间隔从所述患者收集了样品。
19.权利要求15的方法，其中已经在施用以后的5、20、45、60和90分钟从所述患者收集了样品。
20.权利要求15的方法，其中已经在跨越从施用时间到选自施用以后约45分钟至约180分钟的时间的一段时间的间隔收集了样品。
21.权利要求20的方法，其中已经在跨越施用以后约90分钟以下的一段时间的间隔收集了样品。
22.权利要求1的方法，其中所述患者中的门静脉HFR值由下列方法确定，所述方法包括：
(a)口服施用可区别的胆酸盐剂量(剂量口服)给患者，之后接收从患有慢性肝病或处于慢性肝病风险中的患者收集的多个血液或血清样品，其中已经在跨越施用以后的一段时间的间隔从患者收集了样品；
(b)测量每个样品中的可区别的胆酸盐的浓度；
(c)包括使用拟合到模式可区别的胆酸盐清除率曲线的计算机算法曲线，从每个样品中的可区别的胆酸盐的浓度生成个体化口服清除率曲线；
(d)计算个体化口服清除率曲线下的面积(AUC)(mg/mL/min)并将所述剂量(以mg计)除以口服施用的稳定同位素标记的胆酸的AUC以获得患者中的口服胆酸盐清除率；和
(e)将所述口服胆酸盐清除率除以以kg计的患者重量以获得患者中的门静脉HFR值(mL/min/kg)。
23.权利要求1的方法，其中所述患者中的全身HFR值由下列方法确定，所述方法包括：
(a)静脉内施用可区别的胆酸盐剂量(剂量静脉内)给患者，之后接收从患有慢性肝病或处于慢性肝病风险中的患者收集的多个血液或血清样品，其中已经在跨越施用以后的一段时间的间隔从所述患者收集了样品；
(b)测量每个样品中的可区别的胆酸盐的浓度；
(c)包括使用拟合到模式可区别的胆酸盐清除率曲线的计算机算法曲线，从每个样品中的可区别的胆酸盐的浓度生成个体化静脉内清除率曲线；
(d)计算个体化静脉内清除率曲线下的面积(AUC)(mg/mL/min)并将所述剂量(以mg计)除以静脉内施用的稳定同位素标记的胆酸的AUC以获得患者中的静脉内胆酸盐清除率；和
(e)将所述静脉内胆酸盐清除率除以以kg计的患者重量以获得患者中的全身HFR值(mL/min/kg)。
24.用于计算权利要求1的患者的疾病严重性指标(DSI)值的方法，所述方法包括：
从遭受慢性肝病的患者获得血清样品，其中所述患者事先接受口服施用的第一稳定同位素胆酸盐和同时静脉内施用的第二稳定同位素胆酸盐，并且其中已经在施用所述胆酸盐以后低于180分钟的间隔从所述患者收集了血液样品；
测定所述血清样品以计算作为mL/min/kg的门静脉肝滤过率(门静脉HFR)，其中kg是所述患者的体重，作为mL/min/kg的全身肝滤过率(全身HFR)，其中kg是所述患者的体重，和作为％的SHUNT；
通过使用选自下列的方程计算所述患者的DSI值：
DSI＝9.84(SHUNT)-12.36Loge(门静脉HFR)+50.5；
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50；或
DSI＝5.34(SHUNT)-6.65(Loge门静脉HFR)-8.57(Loge全身HFR)+44.66。
25.权利要求24的方法，其中所述DSI方程是：
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50，并且所述DSI值用于识别慢性肝病患者中门静脉高血压或代偿失调的风险增加，其中
DSI≥18表示门静脉高血压(PHTN)的风险增加；和
DSI≥36表示代偿失调的风险增加。
26.权利要求25的方法，其中所述门静脉高血压(PHTN)定义为脾肿大或静脉曲张，并且代偿失调定义为腹水或静脉曲张性出血。
27.权利要求24的方法，其中所述慢性肝病是原发性硬化性胆管炎。
28.权利要求24的方法，其中所述DSI方程是：
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50，并且DSI值用于预测所述慢性肝病患者中的临床结果，其中DSI≥25表示所述患者中临床结果的风险增加。
29.权利要求28的方法，其中所述慢性肝病是慢性丙型肝炎并且所述临床结果选自CTP进展、静脉曲张性出血、腹水、肝性脑病或肝相关的死亡。
30.权利要求24的方法，其中所述患者在肝移植(LT)的等待名单上，并且DSI方程是：
DSI＝5.75(SHUNT)-7.22(Loge门静脉HFR)-8.45(Loge全身HFR)+50，并且DSI值用于优先处理LT等待名单上的患者，其中在患者中的DSI值随时间增加，或在患者中的DSI值大于40，则所述LT等待名单上的所述患者的优先权增加。
31.权利要求24的方法，其中所述DSI方程是：
DSI＝5.34(SHUNT)-6.65(Loge门静脉HFR)-8.57(Loge全身HFR)+44.66
并且DSI值用于预测慢性肝病患者中的未来临床结果，其中DSI＞19表示所述患者中临床结果的风险增加。
32.权利要求1的方法，其中所述DSI方程具有表示来自选自由血清白蛋白，丙氨酸转氨酶，天冬氨酸转氨酶，碱性磷酸酶，总胆红素，直接胆红素，γ-谷氨酰转肽酶，5’核苷酸酶，PT-INR(凝血酶原时间-国际标准化比值)，咖啡因消除，氨基比林清除率，半乳糖消除能力，从利多卡因形成MEGX、美沙西汀-C13和甲硫氨酸-C13组成的组的临床生物化学实验室测定的值的一个或多个附加项；和/或表示选自静脉曲张、腹水或肝性脑病的临床特征的一个或多个附加项。
33.用于诊断患者中原发性硬化性胆管炎(PSC)进展速率的方法，所述方法包括：
(a)确定患有PSC的患者中的SHUNT测试值或门静脉HFR测试值；
(b)采用算法中的SHUNT测试值或门静脉HFR测试值以提供算法结果，其中所述算法包括在所述确定步骤之时以年表示患者年龄的项；和
(c)将算法结果与已知的截止值比较以诊断患者中PSC的进展速率。
34.权利要求33的方法，其中如果所述患者中的SHUNT测试值(以％计)除以所述患者的年龄大于1.7；则
所述患者中的原发性硬化性胆管炎(PSC)的进展速率快，并且将患有PSC的患者诊断为快速进展者。
35.权利要求33的方法，其中如果所述患者中的SHUNT测试值(以％计)除以所述患者的年龄小于1.7；并且
门静脉HFR(以mL/min/kg计)+[0.35×年龄]＞29；则
所述患者中的原发性硬化性胆管炎(PSC)的进展速率低，并且将患有PSC的患者诊断为慢速进展者。
36.权利要求33的方法，其中如果所述患者中的SHUNT测试值(以％计)除以所述患者的年龄小于1.7；并且
门静脉HFR(以mL/min/kg计)+[0.35×年龄]＜29；则
所述患者中的原发性硬化性胆管炎(PSC)的进展速率是中速的，并且将患有PSC的患者诊断为中速进展者。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110265139A (zh) * 2019-02-01 2019-09-20 中国医药大学附设医院 肝纤维化评估模型、肝纤维化评估系统及其评估方法
CN110769741A (zh) * 2017-06-30 2020-02-07 佐治亚州立大学研究基金会 用于检测肝纤维化的非侵入性方法
CN113874023A (zh) * 2019-03-26 2021-12-31 英特塞普特医药品公司 使用奥贝胆酸诊断和治疗肝病的方法

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8778299B2 (en) 2005-01-26 2014-07-15 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Methods for diagnosis and intervention of hepatic disorders
US8613904B2 (en) 2005-01-26 2013-12-24 The Regents Of The University Of Colorado Methods for diagnosis and intervention of hepatic disorders
US8961925B2 (en) 2011-05-31 2015-02-24 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Method for assessment of hepatic function and portal blood flow
JP6378194B2 (ja) 2012-11-12 2018-08-22 ザ リージェンツ オブ ザ ユニヴァーシティ オブ コロラド，ア ボディ コーポレイト 慢性肝疾患の評価のための疾患重症度指数および原発性硬化性胆管炎の３つの異なるサブタイプの診断方法
US10622109B1 (en) * 2013-06-14 2020-04-14 Cerner Innovation, Inc. Method for monitoring mortality risk in children with tetralogy of fallot
US11340235B2 (en) * 2014-02-28 2022-05-24 Ga Generic Assays Gmbh GP2 isoforms and their use in autoantibody capture
US20150327121A1 (en) * 2014-05-08 2015-11-12 Guoqing C. Li Method, apparatus, and computer readable media for acknowledgement in wireless networks
JP2017014206A (ja) 2015-06-30 2017-01-19 ナノアンティバイオティクス，インコーポレイテッド 腹水の治療
RU2718325C2 (ru) * 2018-07-23 2020-04-01 Сергей Борисович Пономарёв Способ прогнозирования развития неалкогольной жировой болезни печени при висцеральном ожирении
KR102664571B1 (ko) * 2018-10-19 2024-05-10 아발론 헤파포크 리미티드 갈락토오스의 신속한 정량 검출 시스템 및 이의 용도
TWI685854B (zh) * 2019-02-01 2020-02-21 中國醫藥大學附設醫院 肝纖維化評估模型、肝纖維化評估系統及肝纖維化評估方法
AU2021254287A1 (en) * 2020-04-09 2022-11-10 HepQuant, LLC Improved methods for evaluating liver function
WO2022016293A1 (en) * 2020-07-23 2022-01-27 Ottawa Heart Institute Research Corporation Health care resources management
WO2022246243A1 (en) * 2021-05-21 2022-11-24 HepQuant, LLC Methods of defining functional change and slowing progression in chronic liver disease

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100055734A1 (en) * 2005-01-26 2010-03-04 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Methods for Diagnosis and Intervention of Hepatic Disorders
CN102334122A (zh) * 2009-02-26 2012-01-25 昂热大学 肝纤维化或肝硬化的改进诊断
WO2012140660A1 (en) * 2011-04-14 2012-10-18 Exalenz Bioscience Ltd. Methods for diagnosis, prognosis, monitoring and treatment of hepatocellular carcinoma

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4207308A (en) 1976-09-02 1980-06-10 The United States Of America As Represented By The Administrator Of Veterans Affairs Process for purifying iodinated bile acid conjugates
TW319763B (zh) 1995-02-01 1997-11-11 Epix Medical Inc
EP1150123B1 (en) * 2000-04-28 2006-07-12 Bayer Aktiengesellschaft Diagnosis of liver fibrosis with serum marker algorithms
EP1311857B1 (en) * 2000-08-21 2006-03-01 Assistance Publique, Hopitaux De Paris Diagnosis method of fibrotic disease using biochemical markers
US7048907B2 (en) 2001-02-05 2006-05-23 Biophysics Assay Laboratory, Inc. Synthesis, compositions and methods for the measurement of the concentration of stable-isotope labeled compounds in life forms and life form excretory products
US6778269B2 (en) 2001-09-04 2004-08-17 Board Of Regents, The University Of Texas System Detecting isotopes and determining isotope ratios using raman spectroscopy
US8613904B2 (en) 2005-01-26 2013-12-24 The Regents Of The University Of Colorado Methods for diagnosis and intervention of hepatic disorders
US20060251576A1 (en) 2005-05-03 2006-11-09 The Regents Of The University Of California Methods for measuring cholesterol metabolism and transport
GB0617581D0 (en) * 2006-09-07 2006-10-18 Ucl Business Plc Biomarkers for assessing liver function
US8961925B2 (en) 2011-05-31 2015-02-24 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Method for assessment of hepatic function and portal blood flow
JP6378194B2 (ja) 2012-11-12 2018-08-22 ザ リージェンツ オブ ザ ユニヴァーシティ オブ コロラド，ア ボディ コーポレイト 慢性肝疾患の評価のための疾患重症度指数および原発性硬化性胆管炎の３つの異なるサブタイプの診断方法
EP3997613A1 (en) 2019-07-10 2022-05-18 Hrl Laboratories, Llc Action classification using deep embedded clustering

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100055734A1 (en) * 2005-01-26 2010-03-04 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Methods for Diagnosis and Intervention of Hepatic Disorders
CN102334122A (zh) * 2009-02-26 2012-01-25 昂热大学 肝纤维化或肝硬化的改进诊断
WO2012140660A1 (en) * 2011-04-14 2012-10-18 Exalenz Bioscience Ltd. Methods for diagnosis, prognosis, monitoring and treatment of hepatocellular carcinoma

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ARIANA WALLACK等: "Non-Invasive Measurement of the Portal Circulation Using Cholates Quantifies Disease Severity in Primary Sclerosing Cholangitis", 《GASTROENTEROLOGY》 *
PATRICK S. KAMATH等: "A Model to Predict Survival in Patients With End-Stage Liver Disease", 《 HEPATOLOGY》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110769741A (zh) * 2017-06-30 2020-02-07 佐治亚州立大学研究基金会 用于检测肝纤维化的非侵入性方法
US11576609B2 (en) 2017-06-30 2023-02-14 Georgia State University Research Foundation, Inc. Noninvasive methods for detecting liver fibrosis
CN110265139A (zh) * 2019-02-01 2019-09-20 中国医药大学附设医院 肝纤维化评估模型、肝纤维化评估系统及其评估方法
CN113874023A (zh) * 2019-03-26 2021-12-31 英特塞普特医药品公司 使用奥贝胆酸诊断和治疗肝病的方法

Also Published As

Publication number Publication date
WO2014075082A1 (en) 2014-05-15
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US20140147875A1 (en) 2014-05-29

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