CN105307608A - 用于将治疗剂和显像剂递送至窦和中耳的组合物和方法 - Google Patents

用于将治疗剂和显像剂递送至窦和中耳的组合物和方法 Download PDF

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Abstract

本发明的特征在于如下组合物和方法，所述组合物和方法用于将治疗剂或显像剂靶向递送至可经过鼻或嘴进入的位点(例如中耳、窦或肺)，否则所述位点可能会难以有效地和有效率地治疗。治疗剂或显像剂沉积在磁性纳米粒子上，通过施加在靶位点之上的磁场(例如通过耳道内或围绕耳的磁体)将所述磁性纳米粒子牵引经过远离鼻或嘴的通道或组织。

Description

用于将治疗剂和显像剂递送至窦和中耳的组合物和方法
相关申请的交叉参考
这一申请要求在2013年3月15日提交的美国临时申请61/800,654的提交日期的权益。
技术领域
本发明涉及如下组合物和方法，其中使用通常为纳米级的磁化粒子来将治疗剂或和/或显像剂递送至难以进入的解剖学靶点如窦和中耳。
背景技术
耳感染在儿童中间非常常见，造成被称为中耳炎的中耳的炎症。在急性情况下，用镇痛剂控制疼痛，且可系统地施用抗生素。对于这一方法存在担忧，是因为镇痛剂不能抵御潜在的感染，并且系统的、非靶向的抗生素不仅可以造成副反应如呕吐，还可以促成抗生素抗性。已经以耳滴剂的形式将抗生素和其他药物递送至中耳。然而，这一方法伴随着副反应(Haynes等，Otolaryngol.Clin.NorthAm.40:669-683，2007；Anderson等，Int.J.Ped.Otorhinolaryngol.7:91-95，1984)。
发明内容
本发明的特征在于如下组合物、方法及用途，所述组合物、方法及用途用于将与治疗剂和/或显像剂联合(例如结合)的磁性纳米粒子递送至身体，特别是递送至难以进入的肺或脑中的解剖学区域。通常来讲，将磁化纳米粒子结合至制剂并经鼻(即鼻内)或口腔引入，在鼻或口腔中并没有将其咽下而是推进到鼻咽中以进一步分送至窦、中耳或肺。一旦纳米粒子在可能由加压的递送系统或一些其他推进力(例如喷鼻剂)辅助的情况下进入鼻或嘴，它们就会在一个磁体或多个磁体的帮助下被引导至想要的靶点位置，所述磁体可以外部施加至患者的头、颈或胸中的任何给定的靶点区域。例如，通过放置在耳中或耳上的磁体(如用来听音乐的耳机或头戴式耳机)可以将纳米粒子(例如经耳咽管)指引至中耳。相似地，通过放置在感染的靶腔之上的皮肤上或靠近感染的靶腔之上的皮肤的磁体可以将纳米粒子指引至窦腔。尽管向嘴里面的进入一般来讲是良好的，但是本组合物和方法可以用于治疗影响口腔或周围组织的状况(例如，嘴、舌、扁桃体、悬雍垂、颌，或头或颈中的淋巴结的癌症)。因为可以将治疗剂和可检测的制剂两者连接至纳米粒子，所以本组合物和方法可还用于图像分析。因此，可将磁化纳米粒子连接至荧光分子、冷光分子或另外的可检测的分子。当纳米粒子包括可检测的分子和特定地结合由例如病变细胞或入侵病原体表达的分子的靶向制剂两者时，本方法可用于可视化和进入患者身体的感染区域。因此，发明涵盖了如下方法：通过向患者施用具有特定地结合由例如病变组织或入侵病原体表达的分子(例如细胞表面抗原)的靶向制剂(例如抗体或其生物活性片段)的纳米粒子而可视化和进入患者身体的由疾病或状况所影响的区域。当随时间可视化时，这种评估可以帮助确定治疗方法是否对于患者的疾病或状况具有积极影响。
在一个方面，发明的特征在于与抑制PDE4B的制剂复合的磁性纳米粒子。纳米粒子可经共价键或非共价键与制剂复合，且制剂可以是咯利普兰、罗氟司特或西洛司特(或其治疗有效变体、衍生物或前药)。制剂可还是抑制PDE4B基因表达的核酸。在另一个方面，发明的特征在于包括如在本文中描述的纳米粒子(例如与抑制PDE4B的制剂如咯利普兰、罗氟司特或西洛司特或抗菌剂复合的磁性纳米粒子)的药物组合物。可以对这些组合物进行配制用于鼻内递送。在另一个方面，发明的特征在于将本文中描述的组合物(例如药物组合物)局部地递送至受试者的内耳的方法。方法可包括如下步骤：a)将组合物经鼻内施用至受试者；b)将磁体施加至受试者的耳或头；以及c)以足以将治疗有效量的磁性纳米粒子递送至中耳的时间和强度将磁场指向受试者的中耳。在另一个方面，发明的特征在于治疗罹患中耳炎的患者的方法。方法可包括如下步骤：a)将权利要求6的药物组合物经鼻内施用至受试者；b)将磁体施加至受试者的耳或头；以及c)以足以将治疗有效量的磁性纳米粒子递送至中耳的时间和强度将磁场指向受试者的中耳。
在方法的优势中的是以更少的给定治疗剂实现有效治疗的能力。这可以减少治疗成本以及使患者免受于全身递送的不良副反应如恶心和呕吐。
附图说明
图1是一组显微照片，其显示暴露于磁化纳米粒子(结合至FITC-A、FITC-B、Gly-A或Gly-B)之后的完整的健康HMEEC细胞。肺炎链球菌(S.pneumoniae)用作阳性对照且CON表示阴性对照。
图2是指示在与结合的磁化纳米粒子温育之后A549细胞中的LDH释放百分比的图。
具体实施方式
本发明的特征在于与治疗剂和/或显像剂复合的磁化纳米粒子；当纳米粒子被外部施加的磁场吸引时可以将制剂指引到靶区域(例如治疗状况如中耳炎的中耳)。
纳米粒子：我们倾向于使用术语“纳米粒子”是因为使用的纳米粒子必须实际上非常小；足够小从而穿过身体组织和通道而不会显著损害患者。然而，可以使用足够小而可用于本方法的任何粒子，并且我们使用术语“纳米粒子”指代所有的这种粒子。纳米粒子可以小到约1nm或其可以具有几十或几百纳米以上的直径(例如具有约1μm～500μm的直径)。在一些实施方式中，纳米粒子可具有约2nm～约20nm(例如约6nm～约8nm)或约50nm的粒度。如指出的，粒度可还更大，例如从约100nm至几微米(例如约150μm)。根据特定应用还可以选择其他粒度。粒子可具有任何形状，包括常用的球形、立方形或不规则形状，并且形状可以或可以不基本上均一。当粒子具有常用的球形时，会最有用地参考上面提供的粒度。因为粒子可具有非球形和不同大小，所以当粒度用于指代多个粒子时指粒子的平均大小。当粒子具有不规则的非球形时，其粒度是指其有效直径，这是具有非球形粒子相同体积的球形粒子的直径。在粒子具有常用的几何形状如立方形形状的情况中，粒度可以指所述几何形状的特性尺寸。例如，立方形状可由其边长来表征。
本领域的普通技术人员可以使用光学或电子显像技术(例如TEM)或合适的光散射技术如动态光散射确定粒度和粒度分布。
磁性纳米粒子可包括包含一种或多种金属如铁素体(例如Fe3O4、γ-Fe2O3和CoFe2O4)的磁芯。任选地，纳米粒子可还包括由聚合物、水凝胶、聚乙二醇、葡萄糖醛酸、甘氨酸或基质状材料制成的功能化涂层。功能涂层可用作任何数目的另外组分的基底，所述另外组分包括可检测的标记物(例如荧光标签如异硫氰酸荧光素(FITC)或Rho)、靶向制剂和药物或治疗剂。治疗剂可以是抗炎剂或抗菌剂(例如抗生素、抗真菌药或抗寄生虫药)。在一些实施方式中，治疗剂可以是表达CYLD的核酸构建物或其生物有效变体(例如包括催化区域的变体)、抑制CYLD的负调节因子(例如PDE4B或JNK2)表达的核酸、调节下游CYLD靶的表达的核酸(例如Akt，通过抑制或促进下游靶的表达)。
可通过本领域中已知的任何方法磁化纳米粒子。例如，粒子可由如下制成或合并如下：金属如铁氧化物(例如Fe3O4)或不同铁氧化物的混合物(例如磁铁矿和磁赤铁矿的混合物)。磁性材料可以是铁磁的或超顺磁的。可以用较弱的磁力控制强磁性纳米粒子，就像我们用Fe3O4将期望到的。然而，也可以使用其他较弱的磁性铁氧化物形式(例如FeO、α-Fe2O3、β-Fe2O3、γ-Fe2O3和ε-Fe2O3)。有用的纳米粒子的实例包括但不限于超顺磁的铁氧化物纳米粒子(SPIO)、超小型超顺磁的铁氧化物纳米粒子(具有约10nm～40nm的平均个体粒径的USPIO)、单晶铁氧化物纳米粒子(具有约10nm～30nm的平均粒径的MION)或具有附着的磁性粒子的介孔二氧化硅纳米粒子(MSN；Yanes和Tamanoi，2012，Ther.Deliv.3:389)。可以使用结合至相同或不同的治疗剂或可检测的制剂的纳米粒子的混合物。
制造磁性纳米粒子所需的技术对于本领域普通技术人员是已知的。例如，可以由胶体分散液形成纳米粒子，所述胶体分散液由铁氧化物和氢氧化物通过湿化学法形成(例如Alexiou等，CancerRes60:6641，2000)。也可以从商业资源获得磁性纳米粒子。例如，可以从MiltenyiBiotecTM、StemcellTechnologiesTM、InvitrogenTM、PierceTM、OceanNanotechTM等获得合适的磁性粒子。可以对从商业资源获得的原料进行进一步处理以赋予患者益处或增益的一个或多个特性。
治疗剂和显像剂：在本发明的方法中可将纳米粒子用作治疗剂或显像剂或用作两者的组合物。在一个实施方式中，将磁性纳米粒子与治疗剂复合(例如结合或静电结合)。我们将这些复合物指作治疗纳米粒子。治疗纳米粒子中的治疗剂包括但不限于小分子药物如抗生素和酶抑制剂；生物制剂如肽、蛋白、抗体、和包括前药转换酶的酶；植物提取物(例如长春西汀(称为阿扑长春胺酸乙酯；Cavinton，Intelectol))；核酸，包括反义核酸、miRNA和能够诱导RNAi的核酸。可以将治疗纳米粒子结合至一种治疗剂或多种不同的治疗剂(例如两种或三种不同的治疗剂)。
在另一个实施方式中，将磁性纳米粒子与一种或多种可检测的制剂复合。我们将这些复合物指作显像纳米粒子。可检测的制剂包括但不限于荧光分子(荧色物或量子点)、冷光分子、染料、金属、放射性核素、非放射性同位素或它们的组合物。任选地，显像纳米粒子可包括酶(例如荧光素酶)或酶和底物例如产生荧光或冷光反应产物的荧光素酶和荧光素。显像纳米粒子可任选地还包括分子如抗体、凝集素和受体配体，从而允许纳米粒子一旦被磁定位至一般区域所述粒子就会结合至特定细胞类型或目标组织。显像剂允许通过各种方法检测磁定位的粒子，所述方法包括但不限于荧光系显像或冷光系显像、MRI和体层摄影术。显像纳米粒子可用于诊断或任选地用于指引仪器如乙状结肠镜或内窥镜等。显像纳米粒子可还用于在手术期间鉴定细胞和/或组织类型。
磁性纳米粒子可任选地与治疗剂和可检测的制剂两者复合。我们将这些复合物称为治疗+显像纳米粒子。治疗+显像纳米粒子可以靶向一般区域、用于显像和如果必要则通过改变磁场强度聚集至较小的区域而用于精确地将药物递送至感染的区域或慢慢愈合的区域。
在一些实施方式中，可以将各自与不同的治疗剂和可检测的制剂复合或具有不同特性(例如大小或溶出曲线，在下面描述)的治疗和显像纳米粒子混合在一起。
复合和制造制剂的方法：可以通过本领域已知的任何方法将纳米粒子与治疗剂或显像剂结合(我们广泛用于指代任何具体形式的关联的术语)。例如，纳米粒子和治疗剂或显像剂可经可裂解的肽键连接。在粒子递送至靶组织之后，所述键可通过暴露于相关蛋白酶而裂解。在一些实施方式中，用允许结合至制剂的分子涂布磁性纳米粒子。磁性纳米粒子可包括在制造或加工期间添加的非磁性材料。例如，可以用合适的基质涂布粒子，所述基质包括但不限于聚乙烯基吡咯烷酮、淀粉、右旋糖酐、聚乙烯醇、藻酸钙、羟甲基纤维素、乙基纤维素(基质材料)。为了容易制造配方或结合治疗剂和可检测的制剂可以添加基质制剂。
可以使用各种不同的技术进行磁性纳米粒子与治疗剂或可检测的制剂的结合。可将来自基质材料的化学基团用作用于共价交联治疗剂的“化学柄(chemicalhandle)”。为了允许形成共价键，可以将来自基质制剂的氨基、羟基、羧基和其他合适的基团活化并与来自药物的合适的官能团结合。用于活化这些基团的技术对于本领域的普通技术人员是公知的。具有活化的化学基团的磁性纳米粒子可从商业卖主获得。例如，可从InvitrogenTM、PierceTM或OceannanotechTM获得具有活化的化学基团的磁性纳米粒子。形成的共价连接可以或可以不包括化学间隔段(spacer)。化学键可包括但不限于肽键、酯键、醚键和酰胺键。
任选地，将治疗材料包括在基质材料中。纳米粒子的基质材料可以立即溶解并释放包括的治疗剂或显像剂。在另一个实施方式中，可以以具有磁芯的缓释颗粒的形式配制基质材料，所述缓释颗粒的特征在于慢的溶出曲线。这种治疗剂将允许包括的治疗剂或显像剂在延长的时间段内释放。用于制造治疗剂的速释粒子或缓释粒子的技术对于本领域的普通技术人员是公知的。
结合的其他方法包括将制剂添加至将以高的亲和力结合治疗剂的基质材料。例如，基质材料可以是带正电的且治疗剂(如核酸)可以是带负电的。或者或此外，治疗剂可以是对已知配体具有高亲和力的抗体或蛋白，且基质材料可包括所述配体。
也可以选择基质材料以改进纳米粒子在给定的适于施用的水性或非水性载体中的悬浮。制剂将取决于磁性纳米粒子的递送位点和成分。对于口或鼻施用，治疗或显像粒子可以以喷雾剂或滴剂的形式进行配制。
除纳米粒子外，药物组合物可包括添加剂和/或赋形剂。添加剂和/或赋形剂可以是等张制剂、缓冲剂、表面活性剂、润滑剂、防腐剂、增稠剂的组合物。等张剂可以是但不限于氯化钠、蔗糖、葡萄糖、甘油、山梨醇、1,2-丙二醇。缓冲剂可包括但不限于柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、TRIS缓冲剂、甘油缓冲剂、碳酸盐缓冲剂。防腐剂可包括但不限于依地酸及其碱金属盐、对羟基苯甲酸低级烷基酯、氯己定、苯硼酸汞、或苯甲酸或盐、季铵化合物、山梨酸。润滑剂可包括但不限于硬脂酸镁。增稠剂可包括但不限于纤维素衍生物、明胶、果胶、聚乙烯基吡咯烷酮、胶黄芪、ethoxose、海藻酸、聚乙烯醇和聚丙烯酸。
磁场：通过使用结合至使用磁场的磁性纳米粒子的诊断剂，本发明允许将治疗剂/可检测的制剂递送至难以到达的区域。在施用后，基于由外部施加的磁体的组合所产生的磁场将纳米粒子指引至想要的区域。施加在身体的各种位置上的所得磁场将把磁性纳米粒子吸引至想要的递送位点。例如，通过以喷鼻剂的形式施用并且在耳中或耳周围佩戴磁体可以将治疗剂递送至内耳。类似地，通过施用以喷鼻剂配制的磁性纳米粒子并且在耳、鼻和脸上或周围佩戴磁体可以实现将治疗剂递送至窦。根据递送位点，可以将磁体放置在嘴里面、鼻里面、外耳道里面、脸颊周围、耳周围、颈周围、胸周围。可以将磁体设计为并入如下中：耳塞；耳罩；帽子；颈带；磁性口罩，其位于鼻上面且覆盖眼睛下面的脸的部分，具有用于附着至耳的松紧带；背心；胶带等。磁体可以是永久磁体或具有电源和合适的电子电路从而允许调节其磁场强度的电磁体。
试剂盒：发明的特征还在于用于将治疗剂和/或显像剂递送至内耳或窦的试剂盒。用于递送至内耳的试剂盒包括(1)小瓶和点滴器或喷鼻剂瓶，其含有适当配制的治疗剂或显像剂，(2)磁体和(3)说明书。将治疗剂或显像剂结合至配制成滴鼻剂或喷鼻剂的磁性纳米粒子。可以将用于多次施用的足够的量包装在合适的容器(例如小瓶和点滴器或喷鼻剂瓶)中。可以以耳机、耳罩或帽子的形式提供磁体。说明书提供试剂盒的详细使用信息，包括施用治疗剂和/或显像剂的频繁程度和如何施用治疗剂和/或显像剂；何时、多长时间和如何使用磁体。
用于递送至窦的试剂盒可包括(1)小瓶和点滴器或喷鼻剂瓶，其含有适当配制的治疗剂或显像剂，(2)磁体和(3)说明书。将治疗剂或显像剂结合至配制成滴鼻剂或喷鼻剂的磁性纳米粒子。可以将用于多次施用的足够的量包装在合适的容器(例如小瓶和点滴器或喷鼻剂瓶)中。可以以如下形式提供磁体：耳机；耳罩；磁性口罩；其位于鼻上面且覆盖眼睛下面的脸的部分，具有用于附着至耳的松紧带；或帽子，其覆盖眼睛和耳之间的脸的区域。说明书提供试剂盒的详细使用信息，包括施用治疗剂和/或显像剂的频繁程度和如何施用治疗剂和/或显像剂；何时、多长时间和如何使用磁体。
其他试剂盒可以制定成：磁性纳米粒子，将其活化以允许具有给定化学基团(如羟基或氨基)或亲和性基团的药物的结合；如上所述的磁体和说明书。说明书可包含用于将使用者选择的药物与纳米粒子结合的说明。
容易治疗的状况：中耳炎是耳的病毒或细菌性感染，是最常见的儿童感染中的一种，在美国对其开抗生素处方。引起中耳炎的病毒包括肺炎双球菌(Streptococcuspneumoniae)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、嗜血杆菌(Haemophilusinfluenza)、酿脓链球菌(Streptococcuspyogenes)、奇异变形杆菌(Proteusmirabilis)、克雷伯氏菌(Klebsiella)属和卡他微球菌(Micrococcuscatarrhalis)。在发达国家进行的研究显示，80％的儿童在他们的第三个生日之前将会经历至少一次急性中耳炎，并且40％在7岁的年龄之前将有6次以上复发(引自Monasta等，2012，PLoSONE7:e36226)。本发明允许将治疗剂递送至受此状况折磨的患者的内耳。对于中耳炎的治疗，可以以喷鼻剂/滴鼻剂的形式施用药物并且可以使用以耳机、耳罩或帽子的形式佩戴的磁体将磁性纳米粒子经耳咽管指引至中耳。在完成治疗后，通过使用将磁场集中至鼻的球形磁性面具而诱导磁性粒子流动到鼻。在递送之后可以清洗鼻和窦以去除纳米粒子。
磁性纳米粒子通常还用于治疗与耳、鼻、鼻道、喉或肺的炎症或粘液过度分泌相关的医疗状况。这些状况经常与去泛素化酶圆柱瘤(CYLD)的表达的上调相关联。PDE4B即环状APM-特异环核苷酸磷酸二酯酶是CYLD的负调节因子。PDE4B的特异抑制剂(即不显著抑制相关蛋白PED4D的抑制剂)可能用于治疗这种状况。患者可以是没有癌症的患者。
在一个实施方式中，将PDE4的抑制剂结合至磁珠。示例性PDE4B抑制剂包括咯利普兰、罗氟司特、西洛司特(或其生物活性变体，例如其前药、衍生物或水合物)和在WO2007/142929中描述的另外的抑制剂。这些抑制剂包括取代的苯或取代的六元杂芳环，其包含一个或两个环氮原子，取代包含醚、硫醚或氨基，其中在醚、硫醚或氨基上的烷基是卤代烷基。卤代烷基可以是氟代甲基、二氟甲基或三氟甲基。其他抑制剂可以是抑制PDE4B基因表达的核酸(例如核酸结构)。这种核酸在本领域是已知的并包括反义寡核苷酸、miRNA和介导RNAi的核酸(例如siRNA和shRNA)。
然后，可以将与PDE4B抑制剂复合的磁性粒子经鼻内施用至需要中耳炎治疗的患者。以特别设计的耳机、耳罩、帽子等的形式给予患者磁体。在完成治疗后，通过使用将磁场集中至鼻的球形磁性面具而诱导磁性粒子流动到鼻。然后冲洗鼻和窦以去除残余的粒子。
梅尼尔氏症是影响平衡和听力的内耳障碍。内耳包含称为半规管的充液管或迷路。这些管与神经一起帮助理解身体的位置和维持你的平衡。在梅尼尔氏症中，这一能力受到危害。一些时候开处方将抗生素庆大霉素直接放进中耳内以帮助控制眩晕。本发明将大大简化庆大霉素向内耳的递送。可以以喷鼻剂或滴鼻剂的形式施用庆大霉素并且可以使用以耳机、耳罩或帽子的形式佩戴的磁体将磁性纳米粒子经耳咽管指引至中耳。在之后的时间里，在完成递送后，可以使用鼻周围佩戴的磁体将纳米粒子吸引回到鼻。类似地，使用这一方法可以局部递送能够实现梅尼尔氏症的基因治疗的制剂。在完成治疗后，通过使用将磁场集中至鼻的球形磁性面具而诱导磁性粒子流动到鼻。在递送之后可以清洗鼻和窦以去除残余的纳米粒子。
罹患肺的状况的患者可从本发明受益，所述肺的状况包括但不限于纤维症、肺结核、肺炎、慢性阻塞性肺病和囊胞性纤维症。在这些情况下，合适治疗剂可作为喷鼻剂施用。在施用所述喷剂的时候呼吸可以将纳米粒子推进到气道或细支气管。其后，以覆盖胸的不同部分的背心的形状设计的磁体可指引纳米粒子至目标区域。
在另一个实施方式中，可以使用磁性纳米粒子治疗囊胞性纤维症。治疗剂可以是编码在合适的载体如病毒或脂质体中的CFTR基因的核酸。使用上述技术可以将含CFTR的病毒或脂质体结合至磁性纳米粒子并通过喷鼻剂(与吸入结合)施用。使用磁性背心或颈带可以将粒子递送至目标位点。使用相同的方法，还可以递送用于治疗与囊胞性纤维症相关的感染的抗生素。
可从本发明受益的其他状况包括头或颈的淋巴结中的肿瘤，特别是对甾体或抗炎症治疗敏感的那些肿瘤类型。本发明还可用于基因治疗。
实施例
实施例1：磁性纳米粒子的细胞毒性分析。
为了检验用或没用磁场刺激的磁性纳米粒子的细胞毒性，将HMEEC-1(人中耳上皮-1)或A549(人肺腺癌上皮)细胞温育48小时以达到80-90％的细胞融合度。纳米粒子包含磁芯(CoFe2O4)、功能化涂层，所述功能化涂层进一步包含甘氨酸(有或没有荧光标记物FITC)和聚乙二醇(有或没有荧光标记物7-氨基-甲基香豆素)。为此，通过微团方法制备CoFe2O4纳米粒子。将纳米粒子和聚半乳糖醛酸(600mg)添加至80mL的5MNaOH溶液中、超声5小时。使用磁体将涂布的纳米粒子从溶液中分离、进行清洗且然后放入蒸馏水中。接下来，将细胞暴露于磁化纳米粒子(100μg/mL，5×1014粒子/mL)并分成4组，在将磁体(2600高斯(2.6特斯拉))放置在细胞培养板下的同时，每组接收FITC-A、FITC-B、Gly-A或Gly-B中的一种24小时，从而允许纳米粒子透过细胞。将肺炎链球菌用作阳性对照。
为了评价细胞膜的完整性，测定乳酸脱氢酶(LDH)并检验细胞形态。HMEEC-1(图1)和A549细胞两者显示存在或不存在磁场时在测试的浓度下没有毒性。另外，在使用的两种细胞系中，在暴露于纳米粒子后所测试的全部4组中的LDH释放百分比与肺炎链球菌相比是相似的。如在图2中看出，与肺炎链球菌相比，LDH释放百分比在暴露于纳米粒子的细胞组中显著更低。这些数据表明纳米粒子(以100μg/mL，5×1014粒子/mL的浓度)都没有在使用的两种细胞系中导致显著的毒性。
实施例2：磁性纳米粒子的体外细胞摄取。
我们将HMEEC-1细胞以每孔1.0×105细胞的密度接种在24孔细胞培养板中并维持在补充有10％的FBS、青霉素/链霉素的DEME和BEGMTM(从龙沙(Lonza)获得的支气管上皮细胞生长培养基)(通常便于使用的一次性份额)中。我们将细胞温育48小时直到它们达到约80-90％的细胞融合度。然后，在细胞培养板下放置或不放置磁体(2600高斯(2.6特斯拉))的情况下(将磁体放置在培养孔的一半之下且剩下的不受影响)，我们将细胞暴露于结合至荧光标记物(7-氨基-4-甲基香豆素)或聚乙二醇(对照)的纳米粒子(100μg/mL，5×1014粒子/mL)24小时，从而允许纳米粒子有时间透过细胞。与实施例1中描述的纳米粒子相似，在此使用的纳米粒子包含CoFe2O4的磁芯和包括聚乙二醇的功能化涂层。
我们在荧光显微镜(200×的放大率)下观察培养物以确认HMEEC-1细胞摄取纳米粒子的情况。我们观察到了在暴露于结合至荧光标记物的纳米粒子且暴露于吸引磁体的细胞培养物中的明显的细胞摄取。这些数据表明磁化纳米粒子能够响应外部磁体而透过细胞。

Claims (10)

1.一种磁性纳米粒子，其与抑制PDE4B的制剂复合。
2.权利要求1的磁性纳米粒子，其中所述纳米粒子通过共价键与所述制剂复合。
3.权利要求1的磁性纳米粒子，其中所述纳米粒子通过非共价键与所述制剂复合。
4.权利要求1的磁性纳米粒子，其中所述制剂是咯利普兰、罗氟司特或西洛司特。
5.权利要求1的磁性纳米粒子，其中所述制剂是抑制PDE4B基因表达的核酸。
6.一种药物组合物，其包含与抑制PDE4B的制剂复合的磁性纳米粒子。
7.权利要求6的药物组合物，其中所述制剂是咯利普兰、罗氟司特或西洛司特。
8.权利要求6的药物组合物，其中所述组合物被配制用于鼻内递送。
9.一种将权利要求8的所述组合物局部递送至受试者的内耳的方法，所述方法包括：
a)将所述组合物经鼻内施用至受试者；
b)将磁体施加至所述受试者的耳或头；
c)以足以将治疗有效量的磁性纳米粒子递送至中耳的时间和强度将磁场指向受试者的中耳。
10.一种治疗罹患中耳炎的患者的方法，所述方法包括：
a)将权利要求6的药物组合物经鼻内施用至受试者；
b)将磁体施加至所述受试者的耳或头；
c)以足以将治疗有效量的磁性纳米粒子递送至中耳的时间和强度将磁场指向受试者的中耳。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014074475A1 (en) * 2012-11-07 2014-05-15 Emmetrope Ophthalmics Llc Magnetic eye shields and methods of treatment and diagnosis using the same
MX2022004835A (es) * 2019-10-22 2022-09-09 Otomagnetics Inc Nanopartículas de óxido de hierro recubiertas con lípido para otitis media.

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005070471A2 (en) * 2004-01-20 2005-08-04 Alnis Biosciences, Inc. Articles comprising magnetic material and bioactive agents
WO2008044963A2 (en) * 2006-10-13 2008-04-17 Aleksandr Mettalinovich Tishin Magnetic carrier and medical preparation for controllable delivery and release of active substances, a method of production and method of treatment using thereof
CN101247836A (zh) * 2005-04-12 2008-08-20 麦格霍斯奈米生技股份有限公司 纳米颗粒-活性成分结合物
US20100152278A1 (en) * 2007-05-02 2010-06-17 Merck & Co., Inc RNA Interference Mediated Inhibition of Cyclic Nucleotide Type 4 Phosphodiesterase (PDE4B) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
CN102127182A (zh) * 2010-12-23 2011-07-20 南京医科大学 用于检测pde-5抑制剂的磁性分子印记聚合物的制备方法
WO2012051220A1 (en) * 2010-10-11 2012-04-19 Wichita State University Composite magnetic nanoparticle drug delivery system

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009120082A2 (en) * 2008-03-27 2009-10-01 Academisch Medisch Centrum Bij De Universiteit Van Amsterdam Means and methods for influencing electrical activity of cells

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005070471A2 (en) * 2004-01-20 2005-08-04 Alnis Biosciences, Inc. Articles comprising magnetic material and bioactive agents
CN101247836A (zh) * 2005-04-12 2008-08-20 麦格霍斯奈米生技股份有限公司 纳米颗粒-活性成分结合物
WO2008044963A2 (en) * 2006-10-13 2008-04-17 Aleksandr Mettalinovich Tishin Magnetic carrier and medical preparation for controllable delivery and release of active substances, a method of production and method of treatment using thereof
US20100152278A1 (en) * 2007-05-02 2010-06-17 Merck & Co., Inc RNA Interference Mediated Inhibition of Cyclic Nucleotide Type 4 Phosphodiesterase (PDE4B) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
WO2012051220A1 (en) * 2010-10-11 2012-04-19 Wichita State University Composite magnetic nanoparticle drug delivery system
CN102127182A (zh) * 2010-12-23 2011-07-20 南京医科大学 用于检测pde-5抑制剂的磁性分子印记聚合物的制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AZEEM SARWAR ET AL.: "Magnetic Injection of Nanoparticles Into Rat Inner Ears at a Human Head Working Distance", 《IEEE TRANSACTION ON MAGNETICS》 *
JIYUN LEE ET AL: "Phosphodiesterase 4B Mediates Extracellular Signal-regulated Kinase-dependent Up-regulation of Mucin MUC5AC Protein by Streptococcus pneumoniae by Inhibiting cAMP-Protein Kinase A-dependent MKP-1 Phosphatase Pathway", 《THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY》 *

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