CN105248280B - 绿州一号一次成苗组培快繁方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种“绿洲一号菌草”组培快繁培养基，为低盐浓度的培养液，加有植物生长调节剂组合成一种培养基配方，使用本发明的组培快繁培养基，优株腋芽茎段为外植体，整个无菌培养过程只需一种培养基，培养过程简单易行。在该培养基中继代培养和生根诱导同步进行，一次成苗。缩短“绿洲一号”菌草组培苗育苗周期，有利于产业化生产。本发明还涉及了“绿洲一号菌草”一次成苗组培快繁方法，增殖培养过程为以茎段芽(带茎段)一次成苗切段后繁殖苗的方式，增殖系数为3‑5，无变异现象，生根过程中无愈伤组织形成，为腋芽基部生根，移栽成活率高。

Description

绿州一号一次成苗组培快繁方法

技术领域

本发明涉及一种植物的组培快繁培养基及组培快繁方法，尤其涉及绿州一号组培快繁培养基及一次成苗组培快繁方法。

背景技术

菌草新技术由福建农林大学研究员、被誉为“世界菌草之父”的林占熺发明。这一技术成功地解决了“菌林矛盾”这道世界性难题，以草代木，变废为宝，为解决人类贫困、保护人类之“肺”——森林做出巨大的贡献。经过近30年的创新研发，该项技术已日趋成熟，从成千上万种野草中精选出近60种可取代木头育菌的野草，并把菌草的研究和运用扩展到培育、制作药用菌，从事水土保持，荒漠化治理，保护生态、减灾防灾和开发生物质新能源等方面，先后进行70多个课题的系统研究，创立起一个全新的学科——菌草学，开发出国际领先的菌草综合技术。

绿州一号作为优良的菌草之一，属于芦竹属。一般的说芦竹属植物是多年生挺水高大宿根草本，形如芦苇。地下茎短缩、粗壮，多分枝，叶片广披针形，圆锥花序顶生，穗状呈扫帚状，9-12月为花果期。为主要水边观景植物。芦竹是一种非常有效的玉米替代物，就生物质而言，芦竹是一种有着巨大增产潜力的一年生植物，其生产力可保持10-15年，而且能适应边际土壤。此外，芦竹还有一个很大优点，即在生产作物的同时不会带走土壤的肥力。秆为制管乐器中的簧片。茎纤维长，长宽比值大，纤维素含量高，是制优质纸浆和人造丝的原料。幼嫩枝叶的粗蛋白质达12％，是牲畜的良好青饲料。根状茎(芦竹)：苦，寒。清热利水。用于热病发狂，虚劳骨蒸，淋证，小便淋痛不利，风火牙痛。

而绿州一号除了这些特点和功用外最大的优点在于：一般的芦竹分布于热带、亚热带，中国华东、华南和西南等地，喜温暖，喜水湿，耐寒性不强，北方需要保护地越冬。而绿州一号可以在北方越冬，耐干旱和瘠薄，根系发达，在西藏正常越冬二年生的绿州一号平均高度135cm，平均分蘖数15，亩产鲜重8500公斤；根系茂密发达，深度超过150cm，沙地被完全固定，效果非常明显。能在较短时间内重建沙地植被，固定流沙，生物生产量高，同时营养价值高，适口性好，可做为牛羊的优良牧草，生态经济效益显著，对我国湿润区的零星沙地治理和高效开发具有重要意义，对其他沙地的治理也有试验前景。所以利用绿州一号造林固沙、湿地改造、观赏林带、生产牧草、种植食用菌、治理污水等有着广泛的用途，尤其对我国北方的生态治理具有深远的意义。

然而，绿州一号的种子结实率低，种节繁殖成活率极低，限制了其大面积的推广应用。通常的方法是在南方，尤其是在我国海南、云南等地通过种苗种植，然后在来年温度适宜的季节通过收割种苗并整根运输至北方地区，在当地现场砍断种苗获得适于栽培的节段。采用这种方法明显的缺点就是运输成本高、运输过程中可能对种苗有不可逆转的破坏，从而造成种苗利用率低。本发明通过组织培养方法能大量繁殖种苗，绿州一号组培育苗未见任何报道，常规的组培育苗方法分继代增殖和生根诱导两个步骤，采用的培养基分继代培养基和生根培养基，育苗周期长，而本发明在同一种培养基中同步进行绿州一号继代增殖和生根诱导，一次成苗，可节省成本及缩短组培苗育苗周期，有利于产业化生产。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种绿州一号组培快繁培养基和一次成苗组培快繁方法，在该培养基中继代增殖和生根诱导同步进行，一次成苗，缩短绿州一号的组培育苗周期，有利于产业化生产。

本发明所采用的技术方案为：

1)外植体消毒：于晴天选取生长健壮、无病虫害的绿州一号植株，剪取茎段作为外植体，剪去叶片，剥去叶鞘，清洗，消毒；

2)外植体初代培养：将已经消毒好的外植体剪切成2cm的长段，每段留一个节位腋芽，节下0.5cm，节上1.5cm，然后斜插或垂直插在装有配制好的培养基的广口瓶中培养，培养基为MS培养基附加高浓度的IBA：1/2MS+5-30mg/LIBA+15g蔗糖+7g琼脂，或MS+5-30mg/LIBA+15g蔗糖+7g琼脂，利用NAOH将PH值调至7.0，不断搅拌的同时，尽快将培养基分装到广口瓶中，以免培养基凝固或变稠而难以分装，分装培养基时应避免培养基粘到瓶口，一旦粘上，应擦除干净，否则容易引起污染；培养室温度为28±2℃，光周期为D/N＝16h/8h，光照度为2000-5000lx；3-4天后观察到腋芽萌动，6-20天叶芽基部萌发出根系，即可形成完整的小植株，此时此植株连在较粗的茎段，即原外植体上；

3)苗的增殖培养：初代培养的小植株在培养基上生长20-40天，发育成10cm左右有2-5个茎节的植株，在超净台上无菌操作将上述植株从初代培养的原外植体上剥离并切断，每段一个节位，根部也要留一个节位接种，斜插或垂直接种在装有上述培养基的玻璃瓶中，进行新一轮的培养，30天左右，新一轮的10cm左右有2-5个茎节的植株长成，切断重复进行苗的增殖和培养，不断继代增殖；

4)移栽：小苗根系良好，叶片舒展，叶色浓绿，苗茎深绿，茎轴伸长有5cm以上均可进行移栽，移栽时倒出培养基，取出小苗，用清水洗净残留在根上的培养基，移栽至经高锰酸钾消毒过的苗床中，苗床基质要求不严，苗床基质采用运城当地的大田黄土、细河沙泥炭土、蛭石、珍珠岩以及它们的复配基质，淋透水，加盖塑料薄膜拱棚及黑网，避免阳光直射，移栽3天后，在薄膜上打孔透气，以薄膜上没有水滴为适宜打孔密度，10天后接膜，每间隔5天交替喷施杀菌剂，施叶面肥和复合肥。

具体实施方式

1.外植体获得：于晴天选取生长健壮、无病虫害的绿州一号植株，剪取茎段作为外植体，剪去叶片，剥去叶鞘，用酒精消毒的剪枝剪剪成2cm左右的切段，每切段带有一个节位(腋芽)，节下0.5cm，节上1.5cm。带节带腋芽的茎段，不剥下腋芽，茎段中的营养可促使腋芽迅速生长。

2.外植体消毒：75％酒精处理30秒，然后在超净工作台上用8万单位的庆大霉素无菌溶液持续震荡摇晃冲洗3次，1.5-2‰的氯化汞消毒5-10分钟并摇动数次，最后用8万单位的庆大霉素无菌溶液震荡摇晃冲洗3次；

3.培养基制备：培养基所有药品加好溶解定容调至PH值7.0后，不断搅拌的同时，尽快将培养基分装到广口瓶中放入高压消毒锅内灭菌，121.5℃下灭菌20分钟，灭菌后培养基PH值处于6.5左右，然后利用NaOH调整PH至7.0；刚灭菌的培养基应置于空气少流动和少灰尘的干净环境冷却，否则在降温进气过程中导致霉菌抱子进入培养瓶，产生霉菌污染，或用高压高温消毒过的厚布包裹冷却；培养基应尽量现配现用，可在空气干净且不流动的环境短时间储藏培养基，但储藏超过1个月的培养基应废弃不用。

4.外植体初代培养：将已经消毒好的外植体切段梢端朝上斜插或垂直插在装有配制好的培养基的玻璃瓶中培养，节位稍低于培养基表面1-2mm或平齐，培养基为MS培养基附加高浓度的IBA：1/2MS+5-30mg/LIBA+15g蔗糖+7g琼脂，或MS+5-30mg/LIBA+15g蔗糖+7g琼脂，利用NAOH将PH值调至7.0，培养室温度为28±2℃，光周期为D/N＝16h/8h，光照度为2000-5000lx；3-4天后观察到腋芽萌动，6-20天叶芽基部萌发出根系，即可形成完整的小植株，此时此植株连在较粗的茎段，即原外植体上；

5.苗的增殖培养：初代培养的小植株在培养基上生长20-40天，发育成10cm左右有2-5个茎节的植株，在超净台上无菌操作将上述植株从初代培养的原外植体上剥离并切断，每段一个节位，根部也要留一个节位接种，斜插或垂直接种在装有上述培养基的玻璃瓶中，进行新一轮的培养，30天左右，新一轮的10cm左右有2-5个茎节的植株长成，切断重复进行苗的增殖和培养，不断继代增殖；

6.移栽：小苗根系良好，叶片舒展，叶色浓绿，苗茎深绿，茎轴伸长有5cm以上均可进行移栽，移栽时倒出培养基，取出小苗，用清水洗净残留在根上的培养基，移栽至经高锰酸钾消毒过的苗床中，苗床基质要求不严，苗床基质采用运城当地的大田黄土、细河沙泥炭土、蛭石、珍珠岩以及它们的复配基质，淋透水，加盖塑料薄膜拱棚及黑网，避免阳光直射，移栽3天后，在薄膜上打孔透气，以薄膜上没有水滴为适宜打孔密度，10天后接膜，每间隔5天交替喷施杀菌剂，施叶面肥和复合肥。

本发明的优点在于，采用本发明的低盐浓度的培养液，加适宜的植物生长调节剂组合成一种培养基配方，使用本发明的组培快繁培养基，绿州一号优株腋芽茎段为外植体，整个无菌培养过程只需一种培养基，培养过程简单易行。增殖培养过程为以芽繁苗的方式，无变异现象生根过程中无愈伤组织形成，为皮部生根，移栽成活率高。

本发明绿州一号一次成苗组培快繁方法，在整个无菌培养过程只需一种培养基，该培养基中继代培养和生根诱导同步进行，一次成苗，缩短绿州一号组培苗育苗周期，有利于产业化生产。

Claims (4)

1.一种绿州一号一次成苗组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：

1)外植体消毒：于晴天选取生长健壮、无病虫害的绿州一号植株，剪取茎段作为外植体，剪去叶片，剥去叶鞘，清洗和消毒，所述的消毒过程为①75％酒精处理30秒，②8万单位的庆大霉素无菌溶液震荡清洗3-4次，③1.5-2‰的氯化汞，消毒时间5-10分钟，④8万单位的庆大霉素无菌溶液震荡清洗3-4次；

2)外植体初代培养：将已经消毒好的外植体剪切成2cm的长段，每段留一个节位腋芽，节下0.5cm，节上1.5cm，然后斜插或垂直插在装有配制好的培养基的玻璃瓶中培养，培养基为MS培养基附加高浓度的IBA：1/2MS+5-30mg/LIBA+15g蔗糖+7g琼脂，或MS+5-30mg/LIBA+15g蔗糖+7g琼脂，p H值调至7.0，培养室温度为28±2℃，光周期为D/N＝16h/8h，光照度为2000-5000lx；3-4天后观察到腋芽萌动，6-20天叶芽基部萌发出根系，即可形成完整的小植株，此时此植株连在较粗的茎段，即原外植体上；

3)苗的增殖培养：初代培养的小植株在培养基上生长20-40天，发育成10cm有2-5个茎节的植株，在超净台上无菌操作将上述植株从初代培养的原外植体上剥离并切断，每段一个节位，根部也要留一个节位接种，斜插或垂直接种在装有上述培养基的玻璃瓶中，进行新一轮的培养，30天后，新一轮的10cm有2-5个茎节的植株长成，切断重复进行苗的增殖和培养，不断继代增殖；增殖培养和初代培养采用相同的培养基，并且继代培养和生根诱导同步进行，一次成苗；

4)移栽：小苗根系良好，叶片舒展，叶色浓绿，苗茎深绿，茎轴伸长有5cm以上均可进行移栽，移栽时倒出培养基，取出小苗，用清水洗净残留在根上的培养基，移栽至经高锰酸钾消毒过的苗床中，淋透水，加盖塑料薄膜拱棚及黑网，避免阳光直射，移栽3天后，在薄膜上打孔透气，以薄膜上没有水滴为适宜打孔密度，10天后接膜，每间隔5天交替喷施杀菌剂，施叶面肥和复合肥。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于玻璃瓶是广口瓶。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于苗床基质要求不严，苗床基质采用运城当地的大田黄土、细河沙泥炭土、蛭石、珍珠岩以及它们的复配基质。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在外植体是带节带腋芽的茎段，不剥下腋芽，茎段中的营养可促使腋芽迅速生长。