CN105203688A - 一种藁本内酯的快速检测方法 - Google Patents

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陈福欣
龚频
周安宁
马筱娴
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Xian University of Science and Technology
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Xian University of Science and Technology
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Abstract

本发明提供一种藁本内酯的快速检测方法：1)样品的准备；2)PY-GC/MS检测；3)数据分析及定性和定量分析。本发明选择PY-GC/MS技术对当归中藁本内酯含量进行检测，是针对实际生产、生活中当归因产地、季节、炮制等不同而品质不同的问题，提供一种藁本内酯快速、微量的检测方法，进而初步判断当归的质量，本发明具有操作简单，检测限低，实验重现性好，实验数据直观可靠等特点，特别适用于微量样品检测，并可对不同当归样品间的质量差别进行定量的比较，应用性广，为当归的质量标准和中药现代化提供了一条可以参考的思路和方法。

Description

一种藁本内酯的快速检测方法
技术领域
本发明涉及一种基于快速热解-气相色谱-质谱联用技术(PY-GC/MS法)快速检测藁本内酯含量的方法。
背景技术
当归别名秦归、云归、西归、岷归，为伞形科植物当归的干燥根。其味甘、辛、性温，具有补血活血、调经镇痛、润肠通便等功效，主要用于血虚萎黄、眩晕心悸、肠燥便秘、风湿痹痛，是我国传统特产药材之一。现代中药学认为，藁本内酯是当归的重要和主要有效成分，其含量约占当归挥发油的50％左右。藁本内酯具有解痉、止咳平喘、调经止痛等多种生理活性。最近的研究表明藁本内酯能够抑制星形胶质细胞中NF-KB依赖的细胞因子的表达，是治疗和预防慢性疼痛疾病的候选药物之一；此外，藁本内酯对低钾大鼠小脑颗粒神经元凋亡也有一定的保护作用。因此，针对藁本内酯，建立新的当归质量控制方法对当归资源的深度开发是非常必要的。现有对藁本内酯的检测和分析主要采用两步法：第一步是用水蒸气蒸馏、有机溶剂或超临界萃取等方法从当归中分离得到挥发油；第二步是利用气相色谱和气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术，或薄层层析-光谱联用技术(TLC-SP)等检测其有效成分。该两步法的主要缺点是总体分析时间长、样品需要量大。
快速热解-气相色谱/质谱联用技术(PY-GC/MS)是一种高效的检测易挥发性成分的技术，近年来发展迅速。通过精确控制热解的温度和时间，可以使大分子化合物热裂解为小分子化合物，也可以使低沸点的复杂混合物质进行初步的气-液或气-固相分离。而分析检测过程中的热解时间、温度、升温速率、载气流速、分流比、离子化温度等对分析结果的影响是很大的。因此，基于PY-GC/MS技术的特点，目前亟需提出一种针对藁本内酯的快速、微量检测方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种藁本内酯的快速检测方法，并基于此，初步判断当归及其制剂质量的高低。
为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：
1)准确称取当归或复方当归制品0.01～1.00mg得样品，将样品加入热解杯中；
2)采用快速热解-气相色谱-质谱联用仪对加入热解杯中的样品进行测定；
3)经过步骤2)后，根据测定的原始色谱数据及质谱数据，定性样品中藁本内酯的色谱峰，并获得样品中藁本内酯的相对含量。
所述样品为块状或粉末状固体。
所述热解的条件为：热解温度为100～400℃，热解时间为0.1～2min。
所述气相色谱的工作条件为：载气为流速0.1～4.0mL/min的氦气，分流比为0～500：1，升温程序为：初始温度为40～80℃，并保持0～6min，然后以≤10℃/min升至200℃，然后以5～15℃/min升至280℃，然后以5～20℃/min升至300～310℃后保持0～10min。
所述质谱的工作条件为：采用EI源、正离子检测，电子能量为40～120eV，离子源温度为200～250℃，单四级杆温度为130～200℃，扫描方式为全扫描方式，电子倍增器电压为1070～3120V，溶剂延迟为0.1～10min。
所述相对含量采用面积归一化方法进行计算。
所述藁本内酯的色谱峰的定性采用NIST08软件的自动匹配计算。
本发明的有益效果体现在：
1)总分析时间短，提高分析效率。现有方法是将当归通过水蒸气蒸馏、有机溶剂或超临界萃取等方法分离得到挥发油，然后利用气相色谱和气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术，或薄层层析-光谱联用技术(TLC-SP)等检测其有效成分；该方法的一般分析时间为12～24小时。本发明中通过热解方法直接对当归及其制剂进行分析，大大节省了分析时间，常规分析时间为0.5～1小时，提高了分析效率。
2)灵敏度好，所需样品量少。现有方法因需要先分离得到挥发油，因此需要的样品量较大，通常是几克到几十克不等；本发明方法的一般分析所用样品量为0.01～1mg，提高了分析灵敏度。
3)本发明优化了热解、色谱、质谱等检测条件，可以快速定性所需的色谱峰，实现了快速和准确检测。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例
一种基于PY-GC/MS检测藁本内酯的方法，以当归为例，但本发明的保护范围不局限于该实施例，具体步骤如下：
一、样品准备
将取得的当归块(陕西帕尼尔生物科技有限公司，西安)准确称取1.00mg(±0.02mg)放入50μL的热解小杯中；
二、热解：
热裂解炉采用Frontiers的PY2020is，
①热解温度：260℃，
②热解时间：0.20min。
三、分离、检测
色谱：
气相色谱采用安捷伦7890A：
①分析柱是DB-5MS弹性石英毛细管柱(30m*0.25id*0.25um)；
②载气：氦气，流速为1.0mL/min；
③进样方式为分流进样，分流比为100：1；
④进样口温度为280℃，传输线温度为290℃；
⑤程序升温，初始温度为40℃，保持3min，然后以4℃/min升至200℃，然后以15℃/min升至280℃，再以20℃/min升至310℃，保持4min。
质谱(采用安捷伦5975C)：
①EI源，正离子检测，电子能量为70eV；
②离子源温度为230℃，单四级杆温度为150℃；
③扫描方式为全扫描方式；
④电子倍增器电压为2082V，溶剂延迟为3min；
四、数据分析及处理
色谱图的保留时间和积分面积由工作站自动完成，利用NIST08谱库定性色谱峰。各挥发性成分的相对含量通过面积归一化法得到。
本样品当归热解组分中可辨认的峰为82个，成分及其保留时间列于表1。保留时间及峰面积用安捷伦Chemstation计算，相对含量用面积归一化的方法计算。
表1.当归中挥发性成分的组成和含量(tr＝13.567为藁本内酯)
五、精密度、重现性及稳定性实验
1.精密度实验：取同一当归样品5份，按照上述方法连续进样5次，对相对峰面积大于0.5％的82个色谱峰进行分析，其相对保留时间和相对峰面积的RSD(相对标准偏差)分别在0～0.53％和0.01～3％之间，说明该方法精密度良好。
2.重现性实验：取同一批次的样品5份，按照上述方法连续进样5次。结果82个色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD分别在0～1.8％和0.11～3.8％之间，说明该方法重现性良好。
3.稳定性实验：取制备好的样品1份，分别在0、2、4、8、12、24h进样测定，结果82个色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于1.8％，说明该方法在24h内测定是稳定的。
从根本上说当归中的挥发性成分是当归的主要活性成分，统称为当归挥发油。本发明所针对的是当归挥发油中主要和重要的活性成分之一藁本内酯，并将其作为当归品质的主要判断标准，从而快速的鉴定当归质量。不同的当归样品因产地、季节、炮制方式的不同，其含水量、密度等都有细微的不同，而其需要的热解、分离和分析条件均不相同，据此得出本发明中的条件范围。
本发明选择PY-GC/MS技术对藁本内酯含量进行检测，是针对实际生产、生活中当归因产地、季节、炮制等不同而品质不同的问题，提供一种藁本内酯的快速、微量的检测方法，进而初步判断当归的质量。本发明具有操作简单，检测限低，实验重现性好，实验数据直观可靠等特点，特别适用于微量样品检测(可低至10μg)，并可对不同样品间的质量差别进行定量的比较，应用性广，为当归的质量标准和中药现代化提供了一条可以参考的思路和方法。

Claims (7)

1.一种藁本内酯的快速检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)准确称取当归或复方当归制品0.01～1.00mg得样品，将样品加入热解杯中；
2)采用快速热解-气相色谱-质谱联用仪对加入热解杯中的样品进行测定；
3)经过步骤2)后，根据测定的原始色谱数据及质谱数据，定性样品中藁本内酯的色谱峰，并获得样品中藁本内酯的相对含量。
2.根据权利要求1所述一种藁本内酯的快速检测方法，其特征在于：所述样品为块状或粉末状固体。
3.根据权利要求1所述一种藁本内酯的快速检测方法，其特征在于：所述热解的条件为：热解温度为100～400℃，热解时间为0.1～2min。
4.根据权利要求1所述一种藁本内酯的快速检测方法，其特征在于：所述气相色谱的工作条件为：载气为流速0.1～4.0mL/min的氦气，分流比为0～500：1，升温程序为：初始温度为40～80℃，并保持0～6min，然后以≤10℃/min升至200℃，然后以5～15℃/min升至280℃，然后以5～20℃/min升至300～310℃后保持0～10min。
5.根据权利要求1所述一种藁本内酯的快速检测方法，其特征在于：所述质谱的工作条件为：采用EI源、正离子检测，电子能量为40～120eV，离子源温度为200～250℃，单四级杆温度为130～200℃，扫描方式为全扫描方式，电子倍增器电压为1070～3120V，溶剂延迟为0.1～10min。
6.根据权利要求1所述一种藁本内酯的快速检测方法，其特征在于：所述相对含量采用面积归一化方法进行计算。
7.根据权利要求1所述一种藁本内酯的快速检测方法，其特征在于：所述藁本内酯的色谱峰的定性采用NIST08软件的自动匹配计算。
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