CN105169473A - 一种超细孔隙水凝胶支架及其制备方法 - Google Patents
一种超细孔隙水凝胶支架及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105169473A CN105169473A CN201510681379.1A CN201510681379A CN105169473A CN 105169473 A CN105169473 A CN 105169473A CN 201510681379 A CN201510681379 A CN 201510681379A CN 105169473 A CN105169473 A CN 105169473A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sodium alginate
- solution
- dmso
- aqueous solution
- cacl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
一种超细孔隙水凝胶支架及其制备方法,主要材料为海藻酸钠、氯化钙、纯水和二甲基亚砜(DMSO),以低温、真空的方式快速制孔,该过程操作简单,材料易获取且价格低廉,造孔方法与此前众多支架材料制备不同。所得材料具有超细孔隙,符合皮肤组织工程支架材料的要求,强度及韧性均良好。
Description
技术领域
本发明属于人工皮肤技术领域,具体涉及一种超细孔隙水凝胶支架及其制备方法。
背景技术
在水凝胶支架的研究中,支架作为细胞外基质,为细胞提供了粘附、生长、迁移、增殖和分化的环境,在水凝胶支架的构建中起着关键作用,决定了水凝胶支架的诸多性能。本发明运用海藻酸钙凝胶作为支架材料,使用二甲基亚砜(DMSO)通过低温快速真空的方法造孔,制备一种具有超细孔隙的降解水凝胶支架。
现有的组织工程多孔支架生物材料主要有合成高分子和天然高分子,合成高分子主要包括聚丙交酯、聚乙交酯和聚乙烯醇等,合成高分子可大规模生产,且力学性能和加工性能较好,最大不足是缺乏生物相容性和细胞亲和性。天然高分子主要包括胶原、明胶、壳聚糖和海藻酸盐等,天然高分子资源丰富,安全无毒、具有较好的亲水性、生物相容性及可降解吸收性,同时天然高分子自身含有大量羟基、氨基和羧基等亲水集团,具有类似于细胞外基质的结构,是组织工程支架的理想材料。不足之处是天然高分子的机械性能和加工性能有待研究提高。由于方便易得且生物相容性、安全性高的特点,天然高分子材料在组织工程领域倍受青睐。海藻酸钠可与氯化钙交联制成凝胶,在组织工程领域有广泛应用。
人们对于海藻酸钙已有丰富的利用历史。海藻酸钙作为敷料运用,有止血和促进新生皮肤的效用。对治疗溃疡也有良好效果。Wang等人将海藻酸钠用于为肝组织工程的支架材料,可增强肝细胞的聚集性,更好的在支架上繁殖,同时提高肝细胞活性及合成蛋白能力。许岩等通过静电液滴法制备了海藻酸钙凝胶微球,形成了注射软组织填充材料,具有较低的吸收性。孙磊等考察了不同浓度的海藻酸盐凝胶与去抗原异种骨构建组织工程载体的生物学性能,发现海藻酸盐浓度为1%时不易降解且适合于异种骨构建骨组织工程载体。
多孔材料的制备关键问题是如何控制孔的大小、形状和分布,以及在孔道中引入功能集团和功能分子。天然高分子材料常用的制孔方法主要有粒子制孔法、气体制孔法和冷冻干燥法等。Zeng等用二氧化硅作制孔剂,制得壳聚糖多孔膜。Sang等以氯化钠作为制孔剂,制备了明胶多孔支架,有利于纤维原细胞的附着生长。Kim等采用氯化钠盐沥滤法制得三维多孔丝素蛋白支架。Chow等利用气体制孔法制备了具有开放孔结构的壳聚糖多孔凝胶,通过CaCO3与盐酸反应放出CO2形成开放孔结构,使凝胶具有较高的水蒸气透过率、吸水率和机械性能。孔径在100-1000微米可调。Petra等采用气体制孔法得到多孔海藻酸钙水凝胶微球,通过加入NaHCO3和表面活性剂搅拌形成气泡,在CaCl2和乙酸混合液中滴制得到,可用于组织工程和药物载体。
在组织工程多孔支架中,支架的生物相容性、机械性能、孔径特征对细胞的粘附生长都有很大影响,因此,使用具有良好生物相容性的天然高分子材料、具有超细孔径的三维多孔支架对水凝胶支架的构建、组织工程的发展具有重要意义。
发明内容
解决的技术问题:本文提供一种多孔隙水凝胶支架及其制备方法,利用DMSO优异的挥发性使构建贯通的三维多孔支架成为现实,通过控制DMSO的不同比例使材料的孔隙率和孔径得到一定程度的控制,从而使材料表面拓扑结构得到改善,提高细胞的粘附率,增加细胞的生长存活量。制备的水凝胶支架具有一定程度可控的孔隙率、可降解性能、具有良好生物安全性和相容性的特点。相比于其它制备方法本研究所用技术,使膜的孔隙率更高,孔径更加均匀,可控性更强,方法更为简便。
技术方案:一种超细孔隙水凝胶支架的制备方法,制备步骤为:a.以纯水为溶剂溶解海藻酸钠,制得0.01g/mL~0.03g/mL的海藻酸钠水溶液;b.以纯DMSO或水和DMSO的混合液作为溶剂制成0.01g/mL~0.03g/mL的氯化钙溶液,所述水和DMSO的体积比为1:1-2:1;c.在底面为平面的容器中加入a所述海藻酸钠水溶液,形成溶液层,再加入b步骤中所制得的氯化钙溶液,使氯化钙溶液与海藻酸钠水溶液的体积比不大于1:1,在真空干燥箱中进行反应,保持干燥箱温度不高于16℃,使环境压力不高于-0.1mPa,抽真空干燥不小于10分钟,即可制得该超细孔隙水凝胶支架,其弹性模量不低于0.18Mpa。
优选的方案为:称取1g海藻酸钠溶于100mL水溶液,加入量程为250mL的烧杯中,用蜡膜封闭烧杯口,并以转速500r/min,温度在28℃条件下完全溶解至透明澄清溶液,制成0.01g/mL的海藻酸钠溶液;称取2gCaCl2溶于100mL水溶液配制0.02g/mL的CaCl2水溶液;将CaCl2水溶液与DMSO以1:1的体积比混合形成CaCl2水溶液和DMSO的混合溶液;在直径为10cm的培养皿中加入3mL海藻酸钠溶液,使海藻酸钠溶液均匀的铺满培养皿的底面,静置10min,用一次性滴管均匀的滴入CaCl2溶液和DMSO的混合溶液3mL,并将培养皿放入低压真空干燥箱,-0.1mPa干燥10min,取出得到完全交联的皮肤细胞支架材料。
上述方法制备得到的超细孔隙水凝胶支架。
有益效果:该过程操作简单,材料易获取且价格低廉,造孔方法与此前众多支架材料制备不同。所得材料具有贯通的三维结构,通过控制DMSO的不同比例,控制材料的孔隙率和孔径,从而使材料表面拓扑结构得到改善,提高细胞的粘附率。该材料符合皮肤组织工程支架材料的要求,强度及韧性均良好。通过SEM图看出支架孔径从微米级到纳米级可控,且分布较均匀,有利于营养物质的渗透及细胞的粘附生长及相互通讯,为水凝胶支架提供了更好的生物相容性。同时,经拉力测试测得,该材料的弹性模量为0.08Mpa,在0.009N断裂。材料的机械性能较好。水蒸气透过率和吸水性较好。DMSO经处理后挥发,该凝胶材料的生物相容性好,对细胞无毒害。经细胞急性毒性试验MTT检测,研究发现在实施例1的最佳配比下,材料对细胞的生长具有更明显的促进作用,而实施例5所制备材料对细胞的生长促进作用不明显,与在平面材料上培养的结果相似。
附图说明
图1为超细孔隙水凝胶支架的SEM图,是实施例中最佳实施例1的电镜图,SEM照片显示材料表面孔隙率大于90%,孔径在0.1微米到1微米之间;从SEM图可以看出支架孔径约为0.1微米~1微米间的超细小孔,且分布较均匀,有利于细胞的粘附生长及相互通讯。
图2为超细孔隙水凝胶支架的SEM图,是实施例中实施例5的图,SEM照片显示材料表面孔隙率大于90%,孔径相比最佳实施例1中的孔径更小为纳米级。
图3材料对细胞生长对比图;图中显示细胞在实施例1的最佳配比下,材料对细胞的生长具有更明显的促进作用,而实施例5所制备材料对细胞的生长促进作用不明显,与对照组培养的结果相似。
具体实施方式
以下实施例仅为说明本发明的技术思想,不能以此限定本发明的保护范围,凡是按照本发明提出的技术思想,在技术方案上所做的任何改动,均落入本发明保护范围之内;本发明未涉及的技术均可通过现有技术加以实现。
实施例1
称取1g海藻酸钠溶于100mL水溶液,加入量程为250mL的烧杯中,用蜡膜封闭烧杯口,并以转速500r/min,温度在28℃条件下完全溶解至透明澄清溶液,制成0.01g/mL的海藻酸钠溶液;称取2gCaCl2溶于100mL水溶液配制0.02g/mL的CaCl2水溶液;将CaCl2水溶液与DMSO以1:1的体积比混合形成CaCl2水溶液和DMSO的混合溶液。在直径为10cm的培养皿中加入3mL海藻酸钠溶液,使海藻酸钠溶液均匀的铺满培养皿的底面,静置10min,用一次性滴管快速均匀的滴入CaCl2溶液和DMSO的混合溶液3mL,并迅速将培养皿放入低压真空干燥箱,-0.1mPa干燥10min,取出得到完全交联的皮肤细胞支架材料。实验成功。反应较为均一,所制得材料较薄,且显微镜下有小孔,经力学测试测得材料弹性模量为0.08MPa,断裂强度为0.009N,具有较好力学特性,经与其他实施例比较为最优配比。
实施例2
称取3g海藻酸钠溶于100mL水溶液,加入量程为250mL的烧杯中,用蜡膜封闭烧杯口,并以转速500r/min,温度在28℃条件下完全溶解至透明澄清溶液制成0.03g/mL的海藻酸钠溶液,称取2gCaCl2溶于100mL水溶液配制0.02g/mL的CaCl2水溶液,将CaCl2水溶液与DMSO以1:1的体积比混合形成CaCl2水溶液和DMSO的混合溶液。在直径为10cm的培养皿中加入3mL海藻酸钠溶液,使海藻酸钠溶液均匀的铺满培养皿的底面,静置10min,用一次性滴管快速均匀的滴入CaCl2溶液和DMSO的混合溶液3mL,并迅速将培养皿放入低压真空干燥箱,-0.1mPa干燥10min,取出得到完全交联的皮肤细胞支架材料。实验成功。但由于海藻酸钠浓度较高,反应过于剧烈,交联效果不好,制得材料不理想,不是最佳配比。
实施例3
称取1g海藻酸钠溶于100mL水溶液,加入量程为250mL的烧杯中,用蜡膜封闭烧杯口,并以转速500r/min,温度在28℃条件下完全溶解至透明澄清溶液制成0.01g/mL的海藻酸钠溶液,称取2gCaCl2溶于100mL水溶液配制0.02g/mL的CaCl2水溶液,将CaCl2水溶液与DMSO以2:1的体积比混合形成CaCl2水溶液和DMSO的混合溶液。在直径为10cm的培养皿中加入3mL海藻酸钠溶液,使海藻酸钠溶液均匀的铺满培养皿的底面,静置10min,用一次性滴管快速均匀的滴入CaCl2溶液和DMSO的混合溶液3mL,并迅速将培养皿放入低压真空干燥箱,-0.1mPa干燥10min,取出得到完全交联的皮肤细胞支架材料。实验成功。但由于CaCl2溶液比例较高,反应不均一,交联效果不好,制得材料不理想,不是最佳配比。
实施例4
称取3g海藻酸钠溶于100mL水溶液,加入量程为250mL的烧杯中,用蜡膜封闭烧杯口,并以转速500r/min,温度在28℃条件下完全溶解至透明澄清溶液制成0.03g/mL的海藻酸钠溶液,称取2gCaCl2溶于100mL水溶液配制0.02g/mL的CaCl2水溶液,将CaCl2水溶液与DMSO以2:1的体积比混合形成CaCl2水溶液和DMSO的混合溶液。在直径为10cm的培养皿中加入3mL海藻酸钠溶液,使海藻酸钠溶液均匀的铺满培养皿的底面,静置10min,用一次性滴管快速均匀的滴入CaCl2溶液和DMSO的混合溶液3mL,并迅速将培养皿放入低压真空干燥箱,-0.1mPa干燥10min,取出得到完全交联的皮肤细胞支架材料。实验成功。但由于海藻酸钠和CaCl2溶液比例不恰当,反应不均一,交联效果不好,制得材料不理想,不是最佳配比。
实施例5
称取1g海藻酸钠溶于100mL水溶液,加入量程为250mL的烧杯中,用蜡膜封闭烧杯口,并以转速500r/min,温度在28℃条件下完全溶解至透明澄清溶液制成0.01g/mL的海藻酸钠溶液,称取1gCaCl2溶于100mLDMSO配制0.01g/mL的CaCl2DMSO溶液。在直径为10cm的培养皿中加入3mL海藻酸钠溶液,使海藻酸钠溶液均匀的铺满培养皿的底面,静置10min,用一次性滴管快速均匀的滴入CaCl2DMSO溶液3mL,并迅速将培养皿放入低压真空干燥箱,低压干燥10min,取出得到完全交联的皮肤细胞支架材料。实验成功。所制得材料表面有较大孔,经力学实验测得弹性模量为0.1MPa,断裂强度为0.002N,与实施例1相比,不是最佳配比。
实施例6
称取1g海藻酸钠溶于100mL水溶液,加入量程为250mL的烧杯中,用蜡膜封闭烧杯口,并以转速500r/min,温度在28℃条件下完全溶解至透明澄清溶液制成0.01g/mL的海藻酸钠溶液,称取3gCaCl2溶于100mLDMSO配制0.03g/mL的CaCl2DMSO溶液。在直径为10cm的培养皿中加入3mL海藻酸钠溶液,使海藻酸钠溶液均匀的铺满培养皿的底面,静置10min,用一次性滴管快速均匀的滴入CaCl2DMSO溶液3mL,并迅速将培养皿放入低压真空干燥箱,-0.1mPa干燥10min,取出得到完全交联的皮肤细胞支架材料。实验成功。反应十分剧烈,所制得材料较厚,显微镜下孔较少,经力学实验测得弹性模量为0.18MPa,断裂强度为0.0004N,与实施例1相比,不是最佳配比。
实施例7
将细胞培养于实施例1和实施例5的相应材料上,置于二十四孔板相应的细胞培养液中,细胞在孔内直接培养作为对照组(control)。在第一天,第二天,第三天用MTT试剂盒对载细胞染色,加入200μL/孔的MTT(2mg/mL)液,继续培养6h抛弃孔内的培养液和样品,用PBS溶液洗涤孔内残余样品两到三次,加入500μL/孔的DMSO,震荡l0min,在免疫酶标仪上以490nm波长测定吸光度。根据以下公式计算细胞的相对增殖度(RGR):
RGR=(实验组平均吸光度/阴性对照组平均吸光度)×100%
通过酶标仪检测细胞的OD值从而推断细胞在材料表面的增殖情况。
实施例1样品 | 实施例5样品 | 实施例6样品 | |
弹性模量/Mpa | 0.08 | 0.1 | 0.18 |
断裂强度/N | 0.009 | 0.002 | 0.0004 |
Claims (3)
1.一种超细孔隙水凝胶支架的制备方法,其特征在于制备步骤为:
a.以纯水为溶剂溶解海藻酸钠,制得0.01g/mL~0.03g/mL的海藻酸钠水溶液;
b.以纯DMSO或水和DMSO的混合液作为溶剂制成0.01g/mL~0.03g/mL的氯化钙溶液,所述水和DMSO的体积比为1:1-2:1;
c.在底面为平面的容器中加入a所述海藻酸钠水溶液,形成溶液层,再加入b步骤中所制得的氯化钙溶液,使氯化钙溶液与海藻酸钠水溶液的体积比不大于1:1,在真空干燥箱中进行反应,保持干燥箱温度不高于16℃,使环境压力不高于-0.1mPa,抽真空干燥不小于10分钟,即可制得该超细孔隙水凝胶支架,其弹性模量不低于0.18Mpa。
2.根据权利要求1所述超细孔隙水凝胶支架的制备方法,其特征在于称取1g海藻酸钠溶于100mL水溶液,加入量程为250mL的烧杯中,用蜡膜封闭烧杯口,并以转速500r/min,温度在28℃条件下完全溶解至透明澄清溶液,制成0.01g/mL的海藻酸钠溶液;称取2gCaCl2溶于100mL水溶液配制0.02g/mL的CaCl2水溶液;将CaCl2水溶液与DMSO以1:1的体积比混合形成CaCl2水溶液和DMSO的混合溶液;在直径为10cm的培养皿中加入3mL海藻酸钠溶液,使海藻酸钠溶液均匀的铺满培养皿的底面,静置10min,用一次性滴管均匀的滴入CaCl2溶液和DMSO的混合溶液3mL,并将培养皿放入低压真空干燥箱,-0.1mPa干燥10min,取出得到完全交联的皮肤细胞支架材料。
3.权利要求1或2制备得到的超细孔隙水凝胶支架。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510681379.1A CN105169473B (zh) | 2015-10-19 | 2015-10-19 | 一种超细孔隙水凝胶支架及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510681379.1A CN105169473B (zh) | 2015-10-19 | 2015-10-19 | 一种超细孔隙水凝胶支架及其制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105169473A true CN105169473A (zh) | 2015-12-23 |
CN105169473B CN105169473B (zh) | 2018-06-29 |
Family
ID=54892213
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510681379.1A Expired - Fee Related CN105169473B (zh) | 2015-10-19 | 2015-10-19 | 一种超细孔隙水凝胶支架及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN105169473B (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111286045A (zh) * | 2020-03-11 | 2020-06-16 | 广东省医疗器械研究所 | 一种多酚类物质氢键增强水凝胶 |
CN113292745A (zh) * | 2021-06-22 | 2021-08-24 | 华中科技大学同济医学院附属同济医院 | 海藻酸钠水凝胶、其制备方法与具有其的水凝胶生物支架 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1997044070A1 (en) * | 1996-05-22 | 1997-11-27 | Ben-Gurion University Of The Negev | Polysaccharide sponges for cell culture and transplantation |
WO2007144644A2 (en) * | 2006-06-16 | 2007-12-21 | Restoration Of Appearance & Function Trust | Extracellular matrix composition |
CN102532564A (zh) * | 2012-01-16 | 2012-07-04 | 孙珊 | 一种水凝胶及其制备方法 |
CN102886070A (zh) * | 2012-09-14 | 2013-01-23 | 上海大学 | 海藻酸钠-壳聚糖皮肤组织工程支架材料及其制备方法 |
CN104784740A (zh) * | 2015-04-15 | 2015-07-22 | 中国科学院化学研究所 | 一种保湿抗菌双层复合医用敷料及其制备方法 |
-
2015
- 2015-10-19 CN CN201510681379.1A patent/CN105169473B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1997044070A1 (en) * | 1996-05-22 | 1997-11-27 | Ben-Gurion University Of The Negev | Polysaccharide sponges for cell culture and transplantation |
WO2007144644A2 (en) * | 2006-06-16 | 2007-12-21 | Restoration Of Appearance & Function Trust | Extracellular matrix composition |
CN102532564A (zh) * | 2012-01-16 | 2012-07-04 | 孙珊 | 一种水凝胶及其制备方法 |
CN102886070A (zh) * | 2012-09-14 | 2013-01-23 | 上海大学 | 海藻酸钠-壳聚糖皮肤组织工程支架材料及其制备方法 |
CN104784740A (zh) * | 2015-04-15 | 2015-07-22 | 中国科学院化学研究所 | 一种保湿抗菌双层复合医用敷料及其制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
王军: "组织工程化皮肤支架与创面敷料的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
王秀娟等: "海藻酸钠凝胶特性的研究", 《食品工业科技》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111286045A (zh) * | 2020-03-11 | 2020-06-16 | 广东省医疗器械研究所 | 一种多酚类物质氢键增强水凝胶 |
CN113292745A (zh) * | 2021-06-22 | 2021-08-24 | 华中科技大学同济医学院附属同济医院 | 海藻酸钠水凝胶、其制备方法与具有其的水凝胶生物支架 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105169473B (zh) | 2018-06-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Rodríguez-Rodríguez et al. | Composite hydrogels based on gelatin, chitosan and polyvinyl alcohol to biomedical applications: A review | |
Zhu et al. | Recent progress of polysaccharide‐based hydrogel interfaces for wound healing and tissue engineering | |
Hu et al. | Dual‐crosslinked amorphous polysaccharide hydrogels based on chitosan/alginate for wound healing applications | |
Tong et al. | Recent progress in developing injectable matrices for enhancing cell delivery and tissue regeneration | |
CN102688525B (zh) | 一种生物大分子水凝胶及其制备方法 | |
CN102942660B (zh) | 一种天然生物交联的纳米复合三维凝胶支架及制备方法 | |
Silvestre et al. | Do bacterial cellulose membranes have potential in drug-delivery systems? | |
CN104356319A (zh) | 一种以改性明胶为交联剂的多孔性生物材料及其制备方法 | |
Varshney et al. | Freeze–thaw-induced physically cross-linked superabsorbent polyvinyl alcohol/soy protein isolate hydrogels for skin wound dressing: In vitro and in vivo characterization | |
JP5633880B2 (ja) | コラーゲン成形体及びその製造方法 | |
CN103041445A (zh) | 一种用于组织工程的分子印迹多孔凝胶膜的制备方法 | |
CN109897387A (zh) | 一种改性明胶在水包空气乳液中的应用、多孔凝胶及其制备 | |
CN101824160A (zh) | 一种壳聚糖/聚乙烯醇/聚乳酸共混多孔膜的制备方法 | |
Chen et al. | Designing biomimetic scaffolds for skin tissue engineering | |
Tao et al. | Development and characterization of GRGDSPC-modified poly (lactide-co-glycolide acid) porous microspheres incorporated with protein-loaded chitosan microspheres for bone tissue engineering | |
Lv et al. | Progress in preparation and properties of chitosan-based hydrogels | |
CN103739856B (zh) | 一种能自胶凝的水凝胶冻干粉的制备方法 | |
CN108409988A (zh) | 一种海绵状大孔聚乙烯醇水凝胶的制备方法 | |
CN108822335B (zh) | 一种复合膜及其制备方法和应用 | |
CN103044703A (zh) | 多孔水凝胶和无孔水凝胶制备工艺 | |
CN108210985A (zh) | 一种基于人源胶原蛋白的高强度医用水凝胶及其制备方法 | |
Bonani et al. | Alginate hydrogels: a tool for 3D cell encapsulation, tissue engineering, and biofabrication | |
CN105169473A (zh) | 一种超细孔隙水凝胶支架及其制备方法 | |
Sazhnev et al. | Preparation of chitosan cryostructurates with controlled porous morphology and their use as 3D-scaffolds for the cultivation of animal cells | |
Liu et al. | Effect of freezing process on the microstructure of gelatin methacryloyl hydrogels |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200617 Address after: No.10 Huishan Road, economic development zone, Gaochun District, Nanjing City, Jiangsu Province Patentee after: Nanjing wuyuedao Medical Technology Development Co.,Ltd. Address before: 210096 Jiangsu city Nanjing Province four pailou No. 2 Patentee before: SOUTHEAST University |
|
TR01 | Transfer of patent right | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20180629 Termination date: 20211019 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |