CN105166765B - 一种甘露寡糖合生元肠溶微胶囊的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种肠靶向的合生元产品,其含有低聚甘露糖和乳杆菌,所述甘露低聚糖组合物通过魔芋甘露聚糖酶解获得,通过精制后单糖含量低于5%,2~7糖含量高于90%,益生菌的活菌数不低于2.5×1011 CFU/g。在制备工艺上经过双重保护,保证了合生元的稳定性,提高了合生元的益生效果,具有改善肠道菌群失衡,调节肠道微生态的效果。是一种绿色环保的微生态制剂。
Description
技术领域
本发明总体上涉及一种甘露寡糖合生元肠溶微胶囊的制备方法,属于具有益生作用的保健品。
背景技术
近年来,肠道微生态越来越受到关注,其已被认为是人体的第二器官,与人类的健康与疾病息息相关。随着经济的高速发展,人类的饮食结构发生了较大的变化,加之生活及工作压力大,生活习惯不规律等,容易导致人体的微生态系统紊乱,肠道菌群失衡,进而引发一系列慢性疾病诸如肠易激综合症、便秘、肠道菌群紊乱等。此外,近些年来,Science,Nature等杂志也相继发文,证明肠道菌群失衡能诱发肠道外疾病,如肝脏、心脑血管等相关疾病,甚至也有报道表明其与癌症的发生也息息相关。
在当代微生态理论的指导下,利用绿色环保的微生态制剂来调整微生态失衡,保证肠道菌群平衡的研究受到了国内外的广泛关注。目前,市场上的微生态制剂产品主要包括益生菌,益生元和合生元三种。这些微生态制剂的作用机理主要有两方面,一方面是直接增加肠道有益菌来改善宿主肠道微生态的平衡,从而达到宿主机体保健和疾病防治的目的;另一方面是间接地促进有益菌增殖、增强动物对肠内有害微生物的抑制作用及非特异性免疫功能。然而,当今市场上的这些微生态制剂产品主要都存在着以下的一些问题:
益生元微生态制剂产品多为混合物,成分不明确,导致调控机理不够清晰,作用靶点没有明确定位,功能不够明确等。以木聚糖作为一种益生元为例,其主要是由β-D-1,4木糖苷键连接,还带有多种取代基的多聚五碳糖,因此其结构非常复杂。木聚糖在工业上主要以玉米芯、甘蔗渣、秸秆等为原料,通过酶解、纳滤等先进工艺精制而成。但是,一方面该过程受原料来源的影响很大;另一方面一旦生产工艺发生改变,其结构随之也会发生较大变化,甚至导致活性大大降低。因此,市场上的大部分的益生元产品在生产的过程中都存在着诸如此类的问题。
益生菌类产品在运输、储存过程中活菌容易死亡,导致效果不佳。此外,在市场产品几乎均为口服制剂,而活菌在消化道内的存活率非常低,达到后肠进行发酵时,不能够保证具有较高的活菌数。
目前,市面上的大部分合生元产品都只是采用简单的益生菌与益生元的组合搭配,并且产品均为胃溶型,不能够抵抗胃肠道恶劣的环境,导致到达后肠的益生菌活菌数大量下降,合生元效果大幅下降。
研究表明,甘露低聚糖可以有效促进生物体内有益菌群的增殖,抑制病原菌生菌群、减少有毒代谢产物产生,同时具有防止便秘、保护肝脏、抗肿瘤及增强机体免疫力等多种生理功能。这种低聚甘露糖还具有稳定、低甜度、低热量、不引发龋齿、降血糖、改善血液成分、降低血清总胆固醇和甘油三酯水平、安全无毒等特点。此外,聚合度较低的甘露低聚糖能明显改善使用后肠道产气的不良反应。此外,实验证明,这种低聚甘露糖能够有效的增加正常小鼠和模型小鼠肠道内以乳杆菌为代表的益生菌的增殖,改善肠道微生态,保障机体健康。
因此,针对以上市面上微生态制剂普遍存在的问题,本发明以结构明确、成分清晰、低聚合度的魔芋低聚甘露糖作为益生元,乳酸菌等作为益生菌成分,加入常规的保护剂制备成肠溶微胶囊,一方面使低聚甘露糖充分与益生菌作用,促进其增值;一方面利用这种肠溶技术避免益生菌在肠道中的损失,以达到增加合生元的营养性、功能性等目的。
发明内容
本发明的技术方案如下:
本发明目的在于提供一种含有益生菌和魔芋甘露低聚糖的合生元肠溶微胶囊的制备方法。
上述含合生元的微生态制剂,由以下成分组成:低聚甘露糖、乳杆菌、活菌保护剂。
所述的甘露低聚糖是聚合度在2到10的低聚合度低聚甘露糖。
所述的益生菌是具有益生作用的乳酸菌。
所述的合生元微生态制剂其制备步骤如下:
1.酶解:将魔芋精粉以1%-5%的浓度溶解,加入β甘露聚糖酶(100-1000U/g魔芋精粉),30-70℃酶解2-12 h。
2.分离:通过离心分离上述酶解液1,除去沉淀,获得酶解液2。
3.膜分离:采用截留量在3000-10000的滤膜对上述酶解液2进行膜分离,得到分子量低于10000的糖液。
4.浓缩:真空浓缩上述糖液3至原体积的1/5-1/10。
5.乙醇沉淀:向上述浓缩液4中加入无水乙醇,至终浓度为60%-90%。
6.分离:通过离心分离上述5的乙醇沉淀,获得上清液6。
7.浓缩:真空浓缩上述6的上清至原体积的1/5-1/10,得到浓缩液7,此时得到的低聚甘露糖的聚合度在2-10左右。
8.加入菌泥:向上述7的浓缩液中加入经过纯培养24h后得到的乳杆菌菌泥及相应的保护剂,此时菌泥中的活菌数不低于2.5×1011 CFU/g。
9.具体配方如下:上述7的低聚甘露糖浓缩液10%-20%;经过纯培养的乳杆菌菌泥2%-5%,其活菌数不低于2.5×1011 CFU/g;灭菌的脱脂奶粉5%-10%;阿拉伯胶0.5%-5%。
10.喷雾干燥:将上述9的配方混合物进行喷雾干燥,制备成微胶囊,对合生元进行第一重保护,保护其活性,提高稳定性。
11.压片:利用压片机对合生元微胶囊进行压片处理。
12.肠衣层包衣:将增塑剂在水中进行溶解后,添加肠包衣材料1-10%,利用包衣机对已经压片的合生元进行包衣,对合生元进行第二重保护。
本发明所用的增塑剂为邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸二甲酯(DMP)和邻苯二甲酸二丁酯(DBP)等其中的一种。所用的肠包衣材料为CAP、HPMCP、PVAP、褐藻胶、丙烯酸树脂等其中的一种。
本发明所具有的有益效果在于:本发明的合生元微生态制剂具有改善肠道菌群失调的症状,调节肠道微生态,促进机体健康的作用。
具体实施方式
在以下实例的帮助下,被发明的合生元微生态制剂的效果将会被更好的理解,这些实例旨在说明而非限制性的。
实例1:
合生元的各种组分比例:
20%糖液,2%菌泥,10%脱脂奶粉,5%阿拉伯胶,10%包衣剂。
合生元制备工艺:
1.酶解:将魔芋精粉以5%的比例加入内切型β甘露聚糖酶,55℃酶解8h。
2.分离:通过离心分离上述酶解液1,除去沉淀,获得酶解液2。
3.膜分离:采用截留量在3000-10000的滤膜对上述酶解液2进行膜分离,得到分子量低于10000的糖液。
4.浓缩:真空浓缩上述糖液3至原体积的1/10。
5.乙醇沉淀:向上述浓缩液4中加入无水乙醇,至终浓度为60%-90%。
6.分离:通过离心分离上述5的乙醇沉淀,获得上清液6。
7.浓缩:真空浓缩上述6的上清至原体积的1/10,得到浓缩液7,此时得到的低聚甘露糖的聚合度在2-7左右。
8.加入菌泥:向上述7的浓缩液中加入经过纯培养24h后得到的乳杆菌菌泥及相应的保护剂,此时菌泥中的活菌数不低于2.5×1011 CFU/g。
9.具体配方如下:上述7的低聚甘露糖浓缩液20%;经过纯培养的菌泥2%,其活菌数不低于2.5×1011 CFU/g;10%脱脂奶粉,5%阿拉伯胶,10%包衣剂,0.02%矫味剂。
10.喷雾干燥:将上述9的配方混合物进行喷雾干燥,制备成微胶囊,对合生元进行第一重保护,保护其活性,提高其稳定性。
11.压片:将上述10得到的微胶囊利用压片机进行压片。
12.肠衣层包衣:将增塑剂在水中进行溶解后,添加10%肠包衣材料,利用包衣机对已经压片的合生元进行包衣,对合生元进行第二重保护。
实例2:
合生元的各种组分比例:
10%糖液,2%菌泥,5%脱脂奶粉,0.5%阿拉伯胶,1%包衣剂。
1.酶解:将魔芋精粉以5%的比例加入内切型β甘露聚糖酶,55℃酶解8h。
2.分离:通过离心分离上述酶解液1,除去沉淀,获得酶解液2。
3.膜分离:采用截留量在3000-10000的滤膜对上述酶解液2进行膜分离,得到分子量低于10000的糖液。
4.浓缩:真空浓缩上述糖液3至原体积的1/10。
5.乙醇沉淀:向上述浓缩液4中加入无水乙醇,至终浓度为60%-90%。
6.分离:通过离心分离上述5的乙醇沉淀,获得上清液6。
7.浓缩:真空浓缩上述6的上清至原体积的1/10,得到浓缩液7,此时得到的低聚甘露糖的聚合度在2-7左右。
8.加入菌泥:向上述7的浓缩液中加入经过纯培养24h后得到的乳杆菌菌泥及相应的保护剂,此时菌泥中的活菌数不低于2.5×1011 CFU/g。
9.具体配方如下:上述7的低聚甘露糖浓缩液20%;经过纯培养的菌泥2%,其活菌数不低于2.5×1011 CFU/g;5%脱脂奶粉,0.5%阿拉伯胶,0.001%矫味剂。
10.喷雾干燥:将上述9的配方混合物进行喷雾干燥,制备成微胶囊,对合生元进行第一重保护,保护其活性,提高其稳定性。
11.压片:将上述10得到的微胶囊利用压片机进行压片。
12.肠衣层包衣:将增塑剂在水中进行溶解后,添加1%肠包衣材料,利用包衣机对已经压片的合生元进行包衣,对合生元进行第二重保护。
实例3:
合生元的各种组分比例:
15%糖液,3%菌泥,8%脱脂奶粉,0.5%阿拉伯胶,5%包衣剂。
1.酶解:将魔芋精粉以5%的比例加入内切型β甘露聚糖酶,55℃酶解8h。
2.分离:通过离心分离上述酶解液1,除去沉淀,获得酶解液2。
3.膜分离:采用截留量在3000-10000的滤膜对上述酶解液2进行膜分离,得到分子量低于10000的糖液。
4.浓缩:真空浓缩上述糖液3至原体积的1/10。
5.乙醇沉淀:向上述浓缩液4中加入无水乙醇,至终浓度为60%-90%。
6.分离:通过离心分离上述5的乙醇沉淀,获得上清液6。
7.浓缩:真空浓缩上述6的上清至原体积的1/10,得到浓缩液7,此时得到的低聚甘露糖的聚合度在2-7左右。
8.加入菌泥:向上述7的浓缩液中加入经过纯培养24h后得到的乳杆菌菌泥及相应的保护剂,此时菌泥中的活菌数不低于2.5×1011 CFU/g。
9.具体配方如下:上述7的低聚甘露糖浓缩液20%;经过纯培养的菌泥2%,其活菌数不低于2.5×1011 CFU/g;8%脱脂奶粉,0.5%阿拉伯胶,0.01%矫味剂。
10.喷雾干燥:将上述9的配方混合物进行喷雾干燥,制备成微胶囊,对合生元进行第一重保护,保护其活性,提高其稳定性。
11.压片:将上述10得到的微胶囊利用压片机进行压片。
12.肠衣层包衣:将增塑剂在水中进行溶解后,添加5%肠包衣材料,利用包衣机对已经压片的合生元进行包衣,对合生元进行第二重保护。
实例4:发明的魔芋合生元具有改善肠道菌群失调和提高机体免疫的作用
BALB/c小鼠32只,雌性,鼠龄7周左右,体重20±2 g。小鼠自由饮水、采食,每3 d换一次垫料,一周的适应期后进行实验。小鼠随机分成4组,每组8只,其中对照组1组,模型组3组。对照组实验期间分别灌胃0.2 mL生理盐水。3模型组小鼠均连续灌胃抗生素(浓度125mg/mL,灌胃量0.2 mL)一周以建立菌群失调模型,处死1组模型小鼠,检测确保菌群失调模型建立。另外2组模型小鼠,分别为自然恢复组和合生元微生态制剂组,其中,对照组、自然恢复组灌胃0.2ml生理盐水,合生元组灌胃0.2ml合生元微生态制剂(浓度4 g/kg·d),15天后处死。
表1 实验小鼠免疫器官指数变化
指数 | 空白对照组 | 自然恢复组 | 合生元组 |
脾脏指数 | 4.58±0.19 | 4.23±0.28 | 4.68±0.37 |
胸腺指数 | 4.44±0.42 | 4.25±0.17 | 4.72±0.48 |
数据为平均值±标准差的形式,n=6
通过实验发现,肠靶向的魔芋合生元能够改善小鼠免疫器官指数,较自然恢复组效果好,基本能够达到正常水平。
表2 各组盲肠内容物的SCFA含量
乙酸 | 丙酸 | 丁酸 | 戊酸 | 总酸 | |
空白对照组 | 32.56±2.32<sup>ad</sup> | 7.39±2.03<sup>a</sup> | 27.15±4.98<sup>a</sup> | 1.04±0.29 | 68.15±6.58<sup>a</sup> |
模型组 | 12.02±0.42<sup>c</sup> | 0.00<sup>c</sup> | 4.25±1.22<sup>c</sup> | 0.00<sup>a</sup> | 16.27±0.79<sup>c</sup> |
合生元组 | 30.20±1.56<sup>ad</sup> | 14.89±2.51<sup>ab</sup> | 0.84±0.09<sup>c</sup> | 0.52±0.14 | 46.45±4.31<sup>ad</sup> |
数据为平均值±标准差的形式,n=6;a-e同一列中,凡有一个相同字母即为差异不显著(P>0.05),凡有不同字母即为差异显著(P<0.05),单位为μmol/g。
通过实验发现,肠靶向的魔芋合生元组的小鼠能够产生较多的短链脂肪酸(SCFA),与对照组基本没有差别,说明本发明的合生元产品能够有效的改善菌群失调现象,维护肠道稳态,改善肠道微生态。
Claims (1)
1.一种甘露寡糖合生元肠溶微胶囊的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)酶解:将魔芋精粉以1%-5%的浓度溶解,按照100-1000U/g魔芋精粉的添加量加入β甘露聚糖酶,30-70℃酶解2-12h,得到酶解液1;
(2)分离:通过离心分离上述酶解液1,除去沉淀,获得酶解液2;
(3)膜分离:采用截留量在3000-10000的滤膜对上述酶解液2进行膜分离,得到分子量低于10000的糖液3;
(4)浓缩:真空浓缩上述糖液3至原体积的1/5-1/10,得到浓缩液4;
(5)乙醇沉淀:向上述浓缩液4中加入无水乙醇,至乙醇终浓度为60%-90%;
(6)分离:通过离心分离上述步骤(5)的乙醇沉淀,获得上清液6;
(7)浓缩:真空浓缩上述上清液6的上清至原体积的1/5-1/10,得到浓缩液7,此时得到的低聚甘露糖的聚合度在2-7;
(8)加入菌泥:向上述浓缩液7中加入经过纯培养24h后得到的罗伊氏乳杆菌菌泥及保护剂,此时菌泥中的活菌数不低于2.5×1011CFU/g;
(9)具体配方如下:上述步骤(7)的低聚甘露糖浓缩液10%-20%;经过纯培养的罗伊氏乳杆菌菌泥2%-5%,其活菌数不低于2.5×1011CFU/g;灭菌的脱脂奶粉5%-10%;阿拉伯胶0.5%-5%;
(10)喷雾干燥:将上述步骤(9)的配方混合物进行喷雾干燥,制备成合生元微胶囊,对合生元进行第一重保护;
(11)压片:利用压片机对步骤(10)的合生元微胶囊进行压片处理;
(12)肠衣层包衣:将增塑剂在水中进行溶解后,添加肠包衣材料1-10%,利用包衣机对步骤(11)压片后的合生元进行包衣,对合生元进行第二重保护。
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