CN105158515B - 一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于主要包括以下步骤：样品准备、样品脱水、样品干燥、样品腐蚀、样品粘台、样品镀膜。与现有技术相比，本发明具有扫描电镜样品结构完整，扫描电镜观察时木质部切面组织结构清晰，图像立体感强，利于开展梭梭木质部超微结构的观察和分析等特点。
Description
技术领域
本发明属于显微观察样品技术领域，涉及一种扫描电镜样品的制备方法，具体是一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法。
背景技术
梭梭为藜科梭梭属植物，灌木或小半乔木，以其为建群种的梭梭荒漠植被，在亚、非荒漠区有大面积分布，并形成水平地带性独特景观。梭梭具有超旱生、耐盐、耐风蚀的特性，在很多地区用作防风固沙造林树种，在荒漠植被恢复中起着重要作用。因此，开展梭梭形态和生理特征对荒漠环境的适应性研究，对于理解梭梭生物生态学习性，进而保护梭梭种群，充分发挥其生态防护作用尤其重要。木质部起着支撑、水分和养分运输的重要作用，其解剖结构特征常作为评价梭梭抗逆能力的重要手段。
传统的植物木质部扫描电镜样品制备时，采用木材切片机、单面刀片或滑走切片机等进行切取材料。但是，由于梭梭木质部材质坚硬，木材比重大于1；木材中含大量结晶体(可能为硅化物)，木材中两相邻生长带间的薄壁组织结合处尤其脆弱。在使用以上传统方法切取梭梭坚硬的木质部时，由于木质部组织结构紧密，且含大量结晶体，在切片时出现样品组织结构受到刀片的挤压发生变形，断面细胞的微细结构受到极大破坏，且极易破裂。制成的切片细胞结构出现变形和破损，最终影响样品扫描电镜图片的质量。
因此，一种具有扫描电镜样品结构完整，扫描电镜观察时木质部切面组织结构清晰，图像立体感强，利于开展梭梭木质部超微结构的观察和分析等特点的梭梭木质部扫描电镜样品制备方法被提出。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足而提供一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，通过脱水、干燥、硫酸浸泡、镀膜等工艺，制备的扫描电镜样品结构完整，扫描电镜观察时木质部切面组织结构清晰，图像立体感强，有利于开展梭梭木质部超微结构的观察和分析，对于评价梭梭木质部对荒漠恶劣环境的适应机理具有重要的实践意义。
一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于包含了以下步骤：
a、样品准备：将梭梭木质部切成1～2cm×1～2cm×1～3cm的块状体，自然干燥1个月打磨至表面光滑；
b、样品脱水：使用酒精进行梯度脱水3～10次，每次脱水时间为20～40min，每次脱水时酒精浓度为50～100％，且浓度依次增高；
c、样品干燥：采用液体CO2临界点干燥法进行干燥；
d、样品腐蚀：将样品放入98％浓硫酸浸泡5～15min；
e、样品粘台：在样品台上贴好镀碳导电胶布，把干燥好的样品修剪为3～8mm×3～8mm的平整小段，贴与导电胶布上；
f、样品镀膜：将粘好的样品用离子溅射镀膜仪电流15mA喷金200s，在样品表面均匀镀上一层厚度为10～50nm的金膜，得到扫描电镜样品，此时可在扫描电镜下观察。
上述b步骤中脱水次数为5～8次，脱水时间为25～35min，脱水时酒精浓度为60～100％，且浓度依次增高。
上述d步骤中浸泡时间为8～12分钟。
上述离子溅射镀膜仪使用型号为：日立E-1045。
与现有技术相比，本发明制备的扫描电镜样品结构完整，扫描电镜观察时木质部切面组织结构清晰，图像立体感强等特点。
附图说明
图1电镜观察本发明制作的样品纤维横截面。
图2电镜观察本发明制作的样品导管纹孔。
图3电镜观察本发明制作的样品薄壁组织中的结晶体。
具体实施方式
实施例1：一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于包含了以下步骤：
a、样品准备：将梭梭木质部切成1×1×1的块状体，自然干燥1个月打磨至表面光滑；
b、样品脱水：使用酒精进行梯度脱水3次，每次脱水时间为40min，每次脱水时酒精浓度依次为50％、60％、70％；
c、样品干燥：采用液体CO2临界点干燥法进行干燥；
d、样品腐蚀：将样品放入98％浓硫酸浸泡5min；
e、样品粘台：在样品台上贴好镀碳导电胶布，把干燥好的样品修剪为3mm×3mm的平整小段，贴与导电胶布上；
f、样品镀膜：将粘好的样品用离子溅射镀膜仪电流15mA喷金200s，在样品表面均匀镀上一层厚度为50nm的金膜，得到扫描电镜样品，此时可在扫描电镜下观察。
实施例2：一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于包含了以下步骤：
a、样品准备：将梭梭木质部切成2cm×2cm×3cm的块状体，自然干燥1个月打磨至表面光滑；
b、样品脱水：使用酒精进行梯度脱水10次，每次脱水时间为20min，每次脱水时酒精浓度依次为55％、57％、65％、67％、75％、80％、85％、90％、95％、100％；
c、样品干燥：采用液体CO2临界点干燥法进行干燥；
d、样品腐蚀：将样品放入98％浓硫酸浸泡15min；
e、样品粘台：在样品台上贴好镀碳导电胶布，把干燥好的样品修剪为8mm×8mm的平整小段，贴与导电胶布上；
f、样品镀膜：将粘好的样品用离子溅射镀膜仪电流15mA喷金200s，在样品表面均匀镀上一层厚度为10nm的金膜，得到扫描电镜样品，此时可在扫描电镜下观察。
实施例3：一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于包含了以下步骤：
a、样品准备：将梭梭木质部切成1cm×1cm×2cm的块状体，自然干燥1个月打磨至表面光滑；
b、样品脱水：使用酒精进行梯度脱水6次，每次脱水时间为20min，每次脱水时酒精浓度依次为51％、62％、71％、82％、91％、99％；
c、样品干燥：采用液体CO2临界点干燥法进行干燥；
d、样品腐蚀：将样品放入98％浓硫酸浸泡8min；
e、样品粘台：在样品台上贴好镀碳导电胶布，把干燥好的样品修剪为4mm×4mm的平整小段，贴与导电胶布上；
f、样品镀膜：将粘好的样品用离子溅射镀膜仪电流15mA喷金200s，在样品表面均匀镀上一层厚度为30nm的金膜，得到扫描电镜样品，此时可在扫描电镜下观察。
实施例4：一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于包含了以下步骤：
a、样品准备：将梭梭木质部切成2cm×2cm×3cm的块状体，自然干燥1个月打磨至表面光滑；
b、样品脱水：使用酒精进行梯度脱水10次，每次脱水时间为37min，每次脱水时酒精浓度依次为52％、53％、54％、56％、58％、59％、61％、63％、64％、66％；
c、样品干燥：采用液体CO2临界点干燥法进行干燥；
d、样品腐蚀：将样品放入98％浓硫酸浸泡10min；
e、样品粘台：在样品台上贴好镀碳导电胶布，把干燥好的样品修剪为7mm×7mm的平整小段，贴与导电胶布上；
f、样品镀膜：将粘好的样品用离子溅射镀膜仪电流15mA喷金200s，在样品表面均匀镀上一层厚度为15nm的金膜，得到扫描电镜样品，此时可在扫描电镜下观察。
实施例5：一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于包含了以下步骤：
a、样品准备：将梭梭木质部切成2cm×2cm×3cm的块状体，自然干燥1个月打磨至表面光滑；
b、样品脱水：使用酒精进行梯度脱水9次，每次脱水时间为25min，每次脱水时酒精浓度依次为68％、73％、78％、83％、88％、93％、94％、97％、98％；
c、样品干燥：采用液体CO2临界点干燥法进行干燥；
d、样品腐蚀：将样品放入98％浓硫酸浸泡13min；
e、样品粘台：在样品台上贴好镀碳导电胶布，把干燥好的样品修剪为3mm×3mm的平整小段，贴与导电胶布上；
f、样品镀膜：将粘好的样品用离子溅射镀膜仪电流15mA喷金200s，在样品表面均匀镀上一层厚度为48nm的金膜，得到扫描电镜样品，此时可在扫描电镜下观察。
实施例6：一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于包含了以下步骤：
a、样品准备：将梭梭木质部切成1×1×3cm的块状体，自然干燥1个月打磨至表面光滑；
b、样品脱水：使用酒精进行梯度脱水5次，每次脱水时间为28min，每次脱水时酒精浓度依次为55.5％、65.5％、75.5％、85.5％、95.5％；
c、样品干燥：采用液体CO2临界点干燥法进行干燥；
d、样品腐蚀：将样品放入98％浓硫酸浸泡7min；
e、样品粘台：在样品台上贴好镀碳导电胶布，把干燥好的样品修剪为5mm×5mm的平整小段，贴与导电胶布上；
f、样品镀膜：将粘好的样品用离子溅射镀膜仪电流15mA喷金200s，在样品表面均匀镀上一层厚度为45nm的金膜，得到扫描电镜样品，此时可在扫描电镜下观察。
实施例7：一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于包含了以下步骤：
a、样品准备：将梭梭木质部切成1cm×2cm×3cm的块状体，自然干燥1个月打磨至表面光滑；
b、样品脱水：使用酒精进行梯度脱水3次，每次脱水时间为40min，每次脱水时酒精浓度依次为69％、79％、89％；
c、样品干燥：采用液体CO2临界点干燥法进行干燥；
d、样品腐蚀：将样品放入98％浓硫酸浸泡6min；
e、样品粘台：在样品台上贴好镀碳导电胶布，把干燥好的样品修剪为7mm×7mm的平整小段，贴与导电胶布上；
f、样品镀膜：将粘好的样品用离子溅射镀膜仪电流15mA喷金200s，在样品表面均匀镀上一层厚度为35nm的金膜，得到扫描电镜样品，此时可在扫描电镜下观察。
实施例8：一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于包含了以下步骤：
a、样品准备：将梭梭木质部切成1cm×1cm×1cm的块状体，自然干燥1个月打磨至表面光滑；
b、样品脱水：使用酒精进行梯度脱水7次，每次脱水时间为40min，每次脱水时酒精浓度依次为72％、74％、76％、77％、81％、84％、87％；
c、样品干燥：采用液体CO2临界点干燥法进行干燥；
d、样品腐蚀：将样品放入98％浓硫酸浸泡11min；
e、样品粘台：在样品台上贴好镀碳导电胶布，把干燥好的样品修剪为6mm×6mm的平整小段，贴与导电胶布上；
f、样品镀膜：将粘好的样品用离子溅射镀膜仪电流15mA喷金200s，在样品表面均匀镀上一层厚度为20nm的金膜，得到扫描电镜样品，此时可在扫描电镜下观察。
实施例9：一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于包含了以下步骤：
a、样品准备：将梭梭木质部切成2cm×2cm×2cm的块状体，自然干燥1个月打磨至表面光滑；
b、样品脱水：使用酒精进行梯度脱水8次，每次脱水时间为30min，每次脱水时酒精浓度依次为56.5％、76.5％、86％、86.5％、90.5％、91.5％、92％、92.5％；
c、样品干燥：采用液体CO2临界点干燥法进行干燥；
d、样品腐蚀：将样品放入98％浓硫酸浸泡14min；
e、样品粘台：在样品台上贴好镀碳导电胶布，把干燥好的样品修剪为8mm×8mm的平整小段，贴与导电胶布上；
f、样品镀膜：将粘好的样品用离子溅射镀膜仪电流15mA喷金200s，在样品表面均匀镀上一层厚度为40nm的金膜，得到扫描电镜样品，此时可在扫描电镜下观察。
实施例10：一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于包含了以下步骤：
a、样品准备：将梭梭木质部切成2cm×1cm×2cm的块状体，自然干燥1个月打磨至表面光滑；
b、样品脱水：使用酒精进行梯度脱水4次，每次脱水时间为35min，每次脱水时酒精浓度依次为68.5％、78.5％、88.5％、98.5％；
c、样品干燥：采用液体CO2临界点干燥法进行干燥；
d、样品腐蚀：将样品放入98％浓硫酸浸泡9min；
e、样品粘台：在样品台上贴好镀碳导电胶布，把干燥好的样品修剪为6mm×6mm的平整小段，贴与导电胶布上；
f、样品镀膜：将粘好的样品用离子溅射镀膜仪电流15mA喷金200s，在样品表面均匀镀上一层厚度为25nm的金膜，得到扫描电镜样品，此时可在扫描电镜下观察。
Claims (5)
1.一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于包含了以下步骤：
a、样品准备：将梭梭木质部切成1～2cm×1～2cm×1～3cm的块状体，自然干燥1个月打磨至表面光滑；
b、样品脱水：使用酒精进行梯度脱水3～10次，每次脱水时间为20～40min，每次脱水时酒精浓度为50～100％，且浓度依次增高；
c、样品干燥：采用液体CO2临界点干燥法进行干燥；
d、样品腐蚀：将样品放入98％浓硫酸浸泡5～15min；
e、样品粘台：在样品台上贴好镀碳导电胶布，把干燥好的样品修剪为3～8mm×3～8mm的平整小段，贴与导电胶布上；
f、样品镀膜：将粘好的样品用离子溅射镀膜仪电流15mA喷金200s，在样品表面均匀镀上一层厚度为10～50nm的金膜，得到扫描电镜样品，此时可在扫描电镜下观察。
2.根据权利要求1所述的一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于：上述b步骤中脱水次数为5～8次，脱水时间为25～35min，脱水时酒精浓度为60～100％，且浓度依次增高。
3.根据权利要求1或2所述的一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于：上述d步骤中浸泡时间为8～12分钟。
4.根据权利要求1或2所述的一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于：离子溅射镀膜仪使用型号为：日立E-1045。
5.根据权利要求3所述的一种梭梭木质部扫描电镜样品制备方法，其特征在于：离子溅射镀膜仪使用型号为：日立E-1045。
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